甘蓝型油菜下胚轴一步不定芽再生培养及遗传转化应用_廖志强

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甘蓝型黄籽油菜的再生能力研究

ｄｆｒｎｅｈｏｒｇｎｒｔｎｆｑｅｃＳＩｅｅｒｔｅｔＯｔｅｆａｅｅｄａｄｂｔｅｎｈｐｅｔｓｎｏｌｏｓｏｔｅｅｌ — ｉｅｅｃｓｉｓｏｔｅｅｅａｏｅｕｎｙ《Ｒ，ｔｅｐｓｐｓｅｎｅｅｙｏｏｌａｄｃｔｅｎｆｈｌｗｎｉｒ ’ ｗｌｈＷｙｏｒ）ｂｗｙｙｄｙｏ
油菜子叶的芽再生频率（平均８．９）９４％极显著地高于下胚轴（平均１．５）但其差异随品系而异，别是品系Ｄ５９％，特Ｈ３。３部分处理子叶芽再生频率为１（，０）而下胚轴芽再生频率却为０％关键词：甘蓝型黄籽油菜；下胚轴；子叶；芽再生频率
ｓｅｅｉｅｒｎｅｔａｅ．ＤｉｅｃｓｉＲｆｈｐｃｔｌｅｗｅｈｅｌｗ— ｎｌｃ —ｅｄｄｌｅｒｏｏｖｏｓＲＦｏｙｅｄｄｌｓｗｅｅｉｖｓｉｔｄｎｇｆｍｎｅｎＳＦｏｙｏｏｙｓｂｔｅｎｔｅｙｌｆｏａｄｂａｋｓｅｅｉｓｗｅｅｎｔｈｉｕ．Ｓｆｈ — ｎ
文献标识码：Ａ中图分类号：３．Ｓ６４３
ＳＵＹＯＥＥＥＡ１ＮＡＢＩＴＦＲＰＳＥ（ＲＳＩＡＮＰＳＬ）ＴＤＮＲＧＮＲＴ０ｌＩＹＯＡＥＥＤＢＡＳＣＡＵ．
ＧＵＹＡＮＧ —ｙｎ。ＬｉｉｇＴＡＮＧａｇ—ｌ－Ｚｈｎｉｎ’
。
ＹＩＪａ—ｍｉｇ。ＣＨＥＮ。ＩＪａ—ｎＮｉｎ ‘ ＬｉＬｉａ，

结球甘蓝不定芽诱导及遗传转化的影响因子

结球甘蓝不定芽诱导及遗传转化的影响因子王肖红;曾爱松;高兵;宋立晓;严继勇【期刊名称】《江苏农业学报》【年(卷),期】2013(029)004【总页数】3页(P918-920)【关键词】结球甘蓝;离体培养;不定芽;遗传转化;农杆菌【作者】王肖红;曾爱松;高兵;宋立晓;严继勇【作者单位】南京农业大学园艺学院,江苏南京210095;江苏省农业科学院蔬菜研究所,江苏南京210014;江苏省农业科学院蔬菜研究所,江苏南京210014;江苏省农业科学院蔬菜研究所,江苏南京210014;江苏省农业科学院蔬菜研究所,江苏南京210014;江苏省农业科学院蔬菜研究所,江苏南京210014【正文语种】中文【中图分类】S635.1结球甘蓝(Brassica oleracea L.var.capitata L.)作为中国的主要蔬菜之一，营养价值丰富，富含多种维生素和矿物质，并含有天然防癌和抗癌物质［1］。

通过农杆菌介导法将抗除草剂基因bar和耐盐基因StP5CS转入甘蓝植株中，获得抗除草剂及耐盐植株，具有重要的意义。

本试验在离体培养条件下对结球甘蓝高代自交系外植体植株再生及基因转化等方面进行研究，目的在于建立结球甘蓝的高效遗传转化系统，为获得具有耐盐的优良甘蓝品种奠定基础。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 试验材料甘蓝转化材料为高代纯合自交系G1、G2和G3，由江苏省农业科学院蔬菜研究所甘蓝课题组提供。

1.1.2 质粒和菌株植物重组质粒表达载体pcambia3301-Y800-StP5CS，由南京农业大学园艺学院朱月林教授提供。

1.1.3 培养基无菌苗的准备培养基为MS0。

不定芽诱导培养基为PM1(下胚轴)和PM2(具柄子叶)。

转化所用培养基共5种，分别为培养无菌苗的培养基(MS0)、预/共培养基(PM1、PM2)、选择培养基(SM1、SM2)、生根培养基(RM)、细菌培养基(YEP)，详见表1。

1.2 试验方法1.2.1 无菌苗的建立甘蓝种子经75%的酒精表面消毒1 min，14%的次氯酸钠灭菌14 min，无菌水冲洗5次，接种于MS固体培养基上，培养温度为(25±1)℃，16 h光照、8 h暗培养，光照度为 2000 lx。

甘蓝型黄籽油菜高油品系下胚轴再生体系研究

（ｙＬａｏａｏｙｏｌｎｎｔｃｎｏｅｕａｅｄｎ，ｈｕｏｒｌＫｅｂｒｔｒｆＰａｔＧｅｅｉｓａｄＭｌｃｌｒＢｒｅｉｇＺｏｋｕＮｏｍａｉｅｓｔ，ｈｕｏ６００，ｉａＵｎｖｒｉｙＺｏｋｕ４６０Ｃｈｎ）
（口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室，南周口４６０）周河６００
摘要：为获得甘蓝型油菜高含油量双低恢复系，成高含油量双低油菜杂交种，２个不同甘蓝型育以
黄籽油菜高油双低品系（ＧＹ１ＧＹ２下胚轴为外植体，用正交设计，究了预培养基中２４一Ｄ、）采研，
初步建立了甘蓝型油菜高油品系的下胚轴再生体系，高含油量油菜遗传转化奠定了基础。为关键词：蓝型油菜；籽油菜；高含油量；下胚轴；芽再生频率；生体系甘黄再
中图分类号：５５４￥６．
文献标志码：Ａ
河４ —８
ＪｕｎｌｏｎｎＡｇｉｕｒｌＳｉｎｅｏｒａｆＨｅａｒｃｈｕａｃｅｃｓ
甘蓝型黄籽油菜高油品系下胚轴再生体系研究
王俊生，小芳，光轩，成伟范谭李
ｆｃｉｇｓｏｏｅｎｒｔｏｒｑｕｎｙｗｅｅｉｖｅｔｇａｅｉｒｈｏｏｎｌｄｓｇｎｔｅｐｂｔｅｅｅｔｎｈｔｒｇｅｅａｉｎｆｅｅｃｒｎｓｉｔｄｕｓｎｇｏｔｇａｅｉｏｓｔｕｅｔｒｒ — ｇｎｅａｉｎｓｓｅｏｆｒｐｅｅｄｓｏｓａｌｓｉｏｅｒｔｏｙｔｍａｓｅｆｒｅｔｂｉｈｎｇｆｕｎｄｔｏｂａｎｎｇｒｎｓｎｉｒｓｏｒｒａｄａｉｎｏｆｏｔｉｉｔａｇｅｃｅｔｅｎ

甘蓝型油菜雄性不育基因转化体系的探索

甘蓝型油菜雄性不育基因转化体系的探索
万萌;王敬乔
【期刊名称】《西南农业学报》
【年(卷),期】1999(012)001
【摘要】用携带ＴＡ２９－Ｂａｒｎａｓｅ雄性不育基因的农杆菌转化“双低”花培油菜，获得了大量转基因植株。

用油菜的带柄子叶及下胚轴等外植体与携带载体质粒的农杆菌共培养后，将其转移到诱导愈伤组织及芽的培养基上培养，并同时进行卡那霉素的抗性筛选，２￣４周后，在子叶柄基部及愈伤组织上出现小丛芽，将其切下转入Ｂ５加卡那霉素的培养基中进一步筛选并生根，再将生根的正常绿色植株移栽于花盆中。

在五叶期，用５０ｍｇ／ｍｌ的卡那
【总页数】6页(P45-50)
【作者】万萌;王敬乔
【作者单位】云南省农科院生物技术研究所;云南省农科院生物技术研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S565.403.5
【相关文献】
1.甘蓝型油菜雄性不育基因BnaX.MS1.a的克隆及其amiRNA载体的构建 [J], 刘振林;柯丽萍;何海燕;陈锦清
2.农杆菌介导CSPs基因转化甘蓝型油菜转化体系的研究 [J], 谢琳;杨娟;代其林;张新;陈翠娜;张思维;王劲
3.甘蓝型油菜显性核雄性不育基因的AFLP标记鉴定 [J], 程勇;邹崇顺;李云昌;李桂
英;郑普英;张学昆;刘胜毅
4.甘蓝型油菜显性细胞核雄性不育基因的AFLP标记 [J], 陆光远;杨光圣;傅廷栋
5.甘蓝型油菜分子标记连锁图谱的构建及显性细胞核雄性不育基因的图谱定位 [J], 陆光远;杨光圣;傅廷栋
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甘蓝型油菜下胚轴原生质体培养再生植株

甘蓝型油菜下胚轴原生质体培养再生植株胡张华;郎春秀;刘智宏;黄锐之;吴关庭;陈笑芸;陈锦清【期刊名称】《浙江农业学报》【年(卷),期】2002(014)005【摘要】油菜是重要的油料作物，我国的油菜种植面积和油菜籽产量均居世界首位。

提高油菜籽粒含油量是育种的主要目标之一。

我们利用拥有自主知识产权的反义PEP(phosphoenolpyruvate carboxylse）技术获得了超高含油量油菜＾[1]。

将超高含油量特性与油菜杂种优势结合是使超高油油菜尽快应用于生产，实现产业化生产的重要途径。

而超高含油量不育系的选育是杂种优势利用的前提之一。

通过不对称体细胞杂交能“一步法”快速选育不育系＾[2]。

为此，建立重演性好、再生额率高的原生质体培养系统十分必要。

甘蓝型油菜原生质体的培养已有一些成功的报道＾[3-6]，但愈伤组织分化频率都不高。

本文以甘蓝型油菜下胚轴为材料，通过琼脂糖包埋法，建立了原生质体高频分裂及植株再生体系，为通过不对称体细胞杂交快速选育超高含油量不育系提供一些科学依据。

【总页数】3页(P278-280)【作者】胡张华;郎春秀;刘智宏;黄锐之;吴关庭;陈笑芸;陈锦清【作者单位】浙江省农业科学院原子能利用研究所,浙江,杭州,310021;浙江省农业科学院原子能利用研究所,浙江,杭州,310021;浙江省农业科学院原子能利用研究所,浙江,杭州,310021;浙江省农业科学院原子能利用研究所,浙江,杭州,310021;浙江省农业科学院原子能利用研究所,浙江,杭州,310021;浙江省农业科学院原子能利用研究所,浙江,杭州,310021;浙江省农业科学院原子能利用研究所,浙江,杭州,310021【正文语种】中文【中图分类】S565.4【相关文献】1.结球甘蓝下胚轴原生质体培养再生植株体系的优化研究 [J], 李贵;李必元;王五宏;岳智臣;钟新民;侯喜林2.结球白菜下胚轴原生质体培养及其体细胞胚植株再生 [J], 刘凡;赵泓;秦帆3.青花菜和甘蓝下胚轴原生质体培养再生植株 [J], 钟仲贤;李贤4.菜心下胚轴原生质体培养和植株再生 [J], 张兰英;李耿光5.不结球白菜OguCMS下胚轴原生质体培养再生植株 [J], 侯喜林;曹寿椿;佘建明;蔡小宁;陆维忠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

油菜子叶和下胚轴再生体系及其遗传转化的研究进展

文章编号:1001-4829(2006)01-0152-07 收稿日期:2005-09-29 基金项目:贵州省攻关项目作者简介:黄先群(1958-),女,研究员,主要从事作物生物技术研究。

油菜子叶和下胚轴再生体系及其遗传转化的研究进展黄先群(贵州省农科院重点实验室,贵州省农科院生物技术研究所,贵州贵阳　550006)摘　要:对油菜子叶和下胚轴快繁体系及其遗传转化的研究进展进行了概述,并从基因型、激素及添加物、外植体状态、预培养和共培养、抗生素筛选等方面讨论了影响子叶和下胚轴快繁体系及其转化的因素。

关键词:油菜;子叶;下胚轴;再生体系;生物技术;遗传转化中图分类号:S63413 文献标识码:AAdvances of regeneration in vitro system of cotyledonand hypocotyl and their genetic transform in rapeHUAN G Xian 2qun(The K ey Laboratory ,Guizhou Academy of Agricultural Sciences ,Institute of Biotechnology ,Guizhou Academy of Agricultural Sciences ,Guizhou Guiyang 550006,China )Abstract :The research progress of regeneration in vitro system of cotyledon and hypocotyls and their genetic transform of rape is summarized in this paper 1The factors affecting rapid propagation of cotyledon and hypocotyls and their transform are discussed on varietal genotypes ,hormones and additives ,physiological state of explants ,pre 2culture ,conjunct culture ,and antibiotic selection etc 1K ey w ords :rape ;cotyledon ;hypocotyls ;regeneration system ;biotechnology ;genetic transform 自1986年Mathews 等首先将N PTI 基因利用根癌农杆菌介导法转入芥菜型油菜中后,油菜基因转化的研究取得了长足进展。

盐胁迫下甘蓝型油菜发芽期下胚轴和根长的全基因组关联分析

盐胁迫下甘蓝型油菜发芽期下胚轴和根长的全基因组关联分析张蕊;邓文亚;杨柳;王亚萍;肖芳枝;禾健;卢坤【期刊名称】《中国农业科学》【年(卷),期】2017(050)001【摘要】[目的]解析甘蓝型油菜发芽期根和下胚轴发育及耐盐性的调控位点,筛选油菜耐盐性相关的候选基因,可为油菜耐盐性改良提供依据.[方法]以317份具有代表性的甘蓝型油菜自交系为材料,在正常生长和盐胁迫条件下进行沙培鉴定,利用芸薹属60K SNP芯片和全基因组关联分析鉴定正常生长与盐胁迫下甘蓝型油菜发芽期根和下胚轴长度显著关联的SNP,并确定其连锁不平衡区间.通过区间内基因的功能注释及盐胁迫下油菜幼苗根和叶片转录组差异表达基因筛选连锁不平衡区间内的重要候选基因,并以实时荧光定量PCR分析候选基因的组织特异性和盐胁迫诱导表达模式,提高候选基因筛选的准确性.[结果]正常生长和盐胁迫下甘蓝型油菜发芽期下胚轴和根长在不同材料间变异较大,频次分布表明目标性状均为数量性状,受多基因调控.全基因组关联分析模型比较表明,MLM+P+K模型为最优模型.以此模型对目标性状进行全基因组关联分析,检测到45个显著关联SNP,其中40个与下胚轴长度显著关联,5个与根长显著关联,单个SNP解释的表型变异分别为9.12%—14.46%和7.67%—8.93%.重复检测的显著相关SNP中,值得注意的是C04染色体的rs8970,同时与4个性状显著关联,表型贡献率为7.67%—12.35%,是唯一在下胚轴长和根长间重复检测到的显著关联SNP.11个重要关联SNP中有6个位于10—442 kb的连锁不平衡区块中.转录组分析表明,11个连锁不平衡区间共包含447个基因,其中15个受盐胁迫诱导表达.转录组和基因功能注释综合分析表明,BnaSRO1、BnaPAGR2、BnaNPH3、BnaMYB124、BnaSAM-Mtase、BnaBIN2、BnaUMAMIT11、BnaEXPA7、BnaRPT3、BnaEF-hand和BnaF3H 很可能为各自区间的候选基因.实时荧光定量PCR结果证实除BnaNPH3外,其他基因均在根或下胚轴中受盐胁迫诱导上调表达.组织特异性分析还发现BnaUMAMIT11、BnaPAGR2和BnaEXPA7主要在萌发的根和下胚轴中特异表达,BnaRPT3、BnaBIN2和BnaMYB124虽然呈组成型表达,但在萌发阶段的下胚轴中表达量最高,证实这些基因很可能参与油菜发芽期根和下胚轴生长发育及耐盐性的调节.[结论]全基因组关联分析共鉴定出45个控制油菜发芽期根和下胚轴发育及耐盐性的显著关联SNP.连锁不平衡、转录组和基因功能注释综合分析初步鉴定出11个重要候选基因.【总页数】13页(P15-27)【作者】张蕊;邓文亚;杨柳;王亚萍;肖芳枝;禾健;卢坤【作者单位】西南大学农学与生物科技学院,重庆 400715;西南大学农学与生物科技学院,重庆 400715;西南大学农学与生物科技学院,重庆 400715;西南大学农学与生物科技学院,重庆 400715;西南大学神农班,重庆 400715;西南大学神农班,重庆400715;西南大学农学与生物科技学院,重庆 400715【正文语种】中文【相关文献】1.砷胁迫下甘蓝型油菜苗期根、下胚轴和鲜重的全基因组关联分析 [J], 曲存民;李加纳;王瑞;马国强;朱美晨;黄小虎;贾乐东;王书贤;赵会彦;徐新福;卢坤2.甘蓝型油菜苗期下胚轴长、根长与成熟期主要农艺性状及品质性状的相关性分析[J], 鲁丹丹; 李保全; 安素妨; 侯锦娜3.锌胁迫下甘蓝型油菜发芽期下胚轴长的全基因组关联分析 [J], 魏丽娟;唐章林;卢坤;李加纳;曲存民;申树林;黄小虎;马国强;王曦彤;杨怡玲;李洹东;王书贤;朱美晨4.PEG 6000模拟干旱胁迫下甘蓝型油菜芽期及苗期抗旱指标筛选 [J], 刘翔;李浩东;王茸茸;黄镇;徐爱遐;左凯峰;许伟;郭娜;秦梦凡;徐宇;马宁;李青青;张淼5.绿豆下胚轴正反插条件下无机盐和蔗糖对下胚轴不定根发生的影响 [J], 胡江琴;王利琳;庞基良;梁海曼因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

甘蓝型油菜下胚轴一步不定芽再生培养及遗传转化应用

ＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．ａｓｅｘｐｌａｎｔｓ，ｎｄａａｄｊｕｓｔｅｄｓｏｍｅｅｌｅｍｅｎｔｓｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅｏｆｒａｐｅｓｅｅｄｓｕｃｈａｓｈｏｒｍｏｎｅ
ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓｏｆ６－ＢＡｎｄａＮＡＡ，ＡｇＮＯ３ａｎｄｓｅｅｄｌｉｎｇａｇｅ，ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｏｎｅ－ｓｔｅｐｓｈｏｏｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ．Ｔｈｅ
Ｏｎｅ — ｓｔｅｐＳｈｏｏｔＲｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎＣｕｌｔｕｒｅＥｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｆｒｏｍＨｙｐｏｃｏｔｙｌｏｆＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．ａｎｄＡｐｐｌｉｅｄｔｏＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，ｇｕａａｃｙ２Ｏ１Ｉ＠ａｌｉｙｔｍ．ｃｏｎｒＤＯＩ：１０．１３２７１／ｊ．ｍｐｂ．０１３．０００７９３
பைடு நூலகம்
ＡｂｓｔｒａｃｔＩｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｗｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄａｏｎｅ — ｓｔｅｐｓｈｏｏｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄｔｒｎｓａｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｕｓｉｎｇｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓ

以甘蓝型油菜下胚轴为外植体获得悬浮细胞系的方法及其应用[发明专利]

专利名称：以甘蓝型油菜下胚轴为外植体获得悬浮细胞系的方法及其应用
专利类型：发明专利
发明人：徐芳森,周婷,华营鹏,丁广大,石磊
申请号：CN201610986021.4
申请日：20161109
公开号：CN108064687A
公开日：
20180525
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于植物细胞培养技术领域。

具体涉及以甘蓝型油菜下胚轴为外植体获得悬浮细胞系的方法及其应用。

本发明以甘蓝型油菜无菌下胚轴为外植体，通过胚性愈伤组织的诱导，悬浮细胞的培养等步骤建立了甘蓝型油菜悬浮细胞系，并利用该体系研究比较了必需微量营养元素正常和缺乏条件下悬浮细胞的形态和活性差异。

本发明所制备的甘蓝型油菜悬浮细胞活性高，形态稳定均一，培养周期短，不受季节、气候等自然环境因素的限制，可用于甘蓝型油菜单细胞水平上细胞发育、以及在非生物胁迫下细胞生长、形态形貌、养分跨膜转运、生理生化代谢和基因表达等方面的研究与应用。

申请人：华中农业大学
地址：430070 湖北省武汉市洪山区狮子山街1号
国籍：CN
代理机构：武汉宇晨专利事务所
代理人：张红兵
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“甘蓝雄性不育系育种技术体系的建立与新品种选育”获中华农业科技一等奖

“甘蓝雄性不育系育种技术体系的建立与新品种选育”获中华
农业科技一等奖
中国农业科学院蔬菜花卉研究所
【期刊名称】《中国蔬菜》
【年(卷),期】2014(000)001
【摘要】由中国农业科学院蔬菜花卉研究所方智远研究员主持完成的“甘蓝雄性不育系育种技术体系的建立与新品种选育”，荣获农业部2012～2013年度中华农业科技一等奖。

【总页数】1页(P23-23)
【作者】中国农业科学院蔬菜花卉研究所
【作者单位】中国农业科学院蔬菜花卉研究所
【正文语种】中文
【相关文献】
1.甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴高频再生体系的建立 [J], 白延红;谭永军;陈耀锋;秦静远;李春莲;任慧莉;郭东伟
2.《蜂王浆优质高效生产和质量安全评价新技术及其应用》成果获中华农业科技奖一等奖 [J], 薛晓锋
3.“桑蚕资源食药用价值挖掘与高值化加工关键技术研发”获2019年度神农中华农业科技一等奖 [J], 廖森泰
4.“甘蓝雄性不育系育种技术体系的建立与新品种选育”获中华农业科技一等奖[J],
5.荣获2007年度农业部神农中华农业科技奖一等奖项目黄瓜育种技术创新与优质专用新品种选育 [J],
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自 Kartha 等(1974)首次从甘蓝型油菜的茎切段诱导出不定芽以来，国内外研究机构已经相继从甘蓝型油菜的叶片、子叶、下胚轴、茎段、花序轴、根和薄层细胞等部位获得了再生植株。其中，下胚轴由于具有分化频率较高、取材方便、不受季节限制和易被农杆菌感染等优点而成为再生和遗传转化首选的外植体。经过多年的研究，国内外已有大量关于甘蓝型油菜下胚轴再生体系的报道，一般来说是先将除去子
主要分为甘蓝型、白菜型和芥菜型三种，目前中国栽并将其应用于油菜的遗传转化工作中，为缩短油菜
种的油菜品种主要为甘蓝型油菜。随着现代分子生转化周期及提高油菜转化效率创造条件。物学技术的发展，利用转基因等生物技术加速油菜育
种及其基因功能的研究具有重要意义(官春云, 2002)。 1 结果与分析
植物遗传转化方法主要有农杆菌介导法、花粉管通道法、基因枪法、显微注射法、PEG 介导法、激光微刺穿孔法等方法，其中农杆菌介导法为最普遍使用的方法。尽管利用根癌农杆菌将外源基因导入甘蓝型油菜中已有一定报道，但除极少数品种如春油菜品
以下胚轴为外植体的遗传转化，均采用二步培养再
生方法(林呐等, 2012; Liu et al., 2012)。由于二步再生
培养操作较繁琐，且芽再生频率不高(王艳等, 2005; 白延红等, 2008)，使得目前油菜转化工作量较大，转化效率较低。尤其是二步再生培养芽诱导周期较长，一般需要 2~3 周时间(王艳等, 2005; 白延红等, 2008)，而经过农杆菌侵染后的愈伤组织抗性芽的诱导筛选更是需要长达 3 个月时间(林呐等, 2012)。因此，建立快速简便的甘蓝型油菜再生技术体系，并在此基础上建立油菜遗传转化体系，简化转化过程，缩短转化周期，提高转化效率，显得非常必要。
1 Oil Crops Institute, Hunan Agricultural University, Changsha, 410128; 2 Yichun Institute of Agricultural Science, Yichun, 336000 * Corresponding author, guancy2011@ DOI: 10.13271/j.mpb.013.000793
叶节的下胚轴切成约 1 cm 长数个片段，放入含 6－BA
和 2,4－D 等激素的预培养基中预培养数天诱导产生
愈伤组织，然后再将生成愈伤组织的外植体转入添
加 6－BA 和 NAA 等激素的分化培养基中诱导不定芽
再生的二步培养法(杨晓凤等, 2009; Maheshwari et al.,
2011; 刘国红等, 2012; 杨长友等, 2013)。目前油菜在
分子植物育种，2015 年，第 13 卷，第 4 期，第 793－799 页 Molecular Plant Breeding, 2015, Vol.13, No.4, 793－799
研究报告 Research Report
甘蓝型油菜下胚轴一步不定芽再生培养及遗传转化应用
廖志强 1,2 邬贤梦 1 孙娟 1 官春云 1*
Abstract In this study, we established a one-step shoot regeneration and transformation system using hypocotyls of Brassica napus as explants. We used hypocotyls including part of cotyledonary node from Zhongshuang 11 of Brassica napus L. as explants, and adjusted some elements influencing tissue culture of rapeseed such as hormone combinations of 6－BA and NAA, AgNO3 and seedling age, to establish one-step shoot regeneration system. The content of this system is that hypocotyls including part of cotyledonary node from five day seedlings were cultured in the MS media supplemented with 4 mg/L 6－BA, the shoots from the cultured explants were regenerated after five day culture later with the 100% frequency of shoot regeneration. Based on the above shoot regeneration system, a transformation experiment was carried out and a BnTFL1 RNAi vector constructed from pFGC5941 vector was transformed into Zhongshuang 11 successfully. In the whole transformation procedures, it takes only 5 days for inducing buds, and it spends 30 days to screen resistant buds by using PPT, which shorten 60 days of traditional transformation (90 days). The whole transformation period from seeding to getting rooted resistant seedlings should span about 70 days that saves 60 days compared to traditional transformation period. Therefore, this new transformation method obviously shortened transformation period, simplified transformation process and improved transformation efficiency. Keywords Rapeseed, Hypocotyl, Cotyledonary node, One-step shoot regeneration, Transformation
继续增加 6－BA 的浓度，再生不定芽的数量随之减少。 NAA 对不定芽和不定根的再生均产生影响，当培养基中不含 NAA 时，下胚轴切口处不产生不定根；当培养基中添加 NAA 时，下胚轴下方切口处开始再生出不定根，且随着 NAA 浓度的增加，再生不定根外植体数量也随之增加。与此同时，在含较高浓度 NAA 的培养基中再生不定芽数量较少，表明较高浓度 NAA 抑制不定芽的再生。根据表 1 的统计结果， A4-1 培养基平均诱导出 8.0±1.85 个不定芽，数量最多，且不产生不定根，为最佳培养基。
1 湖南农业大学油料作物研究所, 长沙, 410128; 2 江西省宜春市农业科学研究所, 宜春, 336000 * 通讯作者, guancy2011@
摘要本研究建立了以甘蓝型油菜下胚轴为外植体的一步不定芽再生培养和遗传转化体系。首先，以甘蓝型油菜中双 11 号含部分子叶节的下胚轴为外植体，从 6－BA 和 NAA 配比、AgNO3 以及无菌苗苗龄等方面对影响油菜组织培养的因素进行了研究，建立了甘蓝型油菜快速高频一步不定芽再生培养技术体系。该技术体系为，切取 5 d 苗龄含部分子叶节的下胚轴置于添加 4 mg/L 6－BA 的 MS 基本培养基中培养，5 d 再生出不定芽，再生频率为 100%。在此基础上，进行了甘蓝型油菜的遗传转化，成功地将用 pFGC5941 双元载体构建的 BnTFL1 基因干扰载体转入中双 11 号中。整个转化过程中，芽的诱导生成只需 5 d，接着完成抗性芽的 PPT 筛选需要 30 d，整个转化周期从播种到得到生根抗性苗仅需大约 70 d，而传统转化方法抗性芽的诱导筛选需要 90 d，整个转化周期需要 130 d 左右，大大缩短了转化周期，简化了转化过程，提高了转化效率。关键词油菜, 下胚轴, 子叶节, 一步再生培养, 遗传转化
植物幼苗的子叶节含大量活性较强的分生组织
图 1 不同浓度 6－BA 和 NAA 诱导不定芽再生注: 第一行从左至右依次为: A1-1, A1-2, A1-3, A1-4; 第二行从左至右依次为: A2-1, A2-2, A2-3, A2-4; 第三行从左至右依次为: A3-1, A3-2, A3-3, A3-4; 第四行从左至右依次为: A4-1, A4-2, A4-3, A4-4; 第五行从左至右依次为: A5-1, A5-2, A5-3, A5-4, A5-5 Figure 1 Shoot regeneration induced with different concentrations of 6－BA and NAA Note: From left to right in the first line is A1-1, A1-2, A1-3, A1-4; In the second line is A2-1, A2-2, A2-3, A2-4; In the third line is A3-1, A3-2, A3-3, A3-4; In the forth line is A4-1, A4-2, A4-3, A4-4; In the fifth line is A5-1, A5-2, A5-3, A5-4, A5-5
One-step Shoot Regeneration Culture Established from Hypocotyl of Brassica napus L. and Applied to Transformation