组蛋白HIST1H2AC和HIST1H2BC基因在胰腺癌耐药细胞株中的表达
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胰腺特异性表达Hes1基因的构建及体外表达魏静;杨希祥;石宁宁;宋小凤;冯冲;潘登科;臧荣鑫【期刊名称】《西北民族大学学报(自然科学版)》【年(卷),期】2015(036)002【摘要】为了探究胰腺的发育机制,以及制备胰腺缺陷型的小型猪模型,构建了特异性表达载体,开展了相关载体构建及体外验证研究.本研究以小鼠PDX1启动子为特异性启动元件,构建胰腺特异性启动小鼠Hes1基因的表达载体PDX1-Hes1,载体转染MIN-6胰岛β细胞、猪耳成纤维细胞及猪肾细胞,培养48 h后,通过qRT-PCR、Western Blot检测.结果显示:Hes1在MIN-6胰岛β细胞中的RNA水平和蛋白水平均高效表达,而在非胰腺细胞猪耳成纤维细胞及猪肾细胞中均不表达.试验表明:胰岛特异性表达载体PDX1-Hes1的成功获得,为构建相关基因在胰腺中特异性表达的载体提供参考,为后续制备胰腺缺陷型的小型猪提供了条件.【总页数】5页(P16-20)【作者】魏静;杨希祥;石宁宁;宋小凤;冯冲;潘登科;臧荣鑫【作者单位】西北民族大学生命科学与工程学院,甘肃兰州730030;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193南京农业大学动物科技学院,江苏南京210095;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193;西北民族大学生命科学与工程学院,甘肃兰州730030;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193;西北民族大学生命科学与工程学院,甘肃兰州730030【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.人内皮细胞特异性分子-1表达载体的构建、体外表达及初步纯化 [J], 张素梅;王雪;胡若磊;朱华庆;熊江霞;周青;桂淑玉;汪渊2.猪胰岛素启动子序列分析及调控基因在胰腺组织特异性表达验证 [J], 胡炳俊;王超群;阮进学;辛磊磊;牟玉莲;杨述林;李奎3.奶牛溶菌酶基因(Lyz)乳腺特异性表达质粒构建与鉴定 [J], ZHANG Zhipeng;JIANG Jingyi;XIA Hailei;JI Dejun;LI Mingxun;YANG Zhangping4.人AFP启动子操控的跨膜型抗CD3单链抗体构建及其在AFP阳性肝癌细胞中特异性表达 [J], 祁麟; 熊梦裳; 林芳珍; 卢杨; 熊冬生; 张砚君; 范冬梅; 张晴5.EBV特异性CTL相关TCR Vα-pIRES-TCR Vβ重组质粒的构建及体外表达 [J], 吴秀丽;李扬秋;朱康儿;杨力建;陈少华;Piotr Grabarczyk;GrzegorzK.Przybylski;Christian A.Schmidt因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
基因组的监视器:组蛋白H2AX于琳;孙青;石彦明【期刊名称】《中国肿瘤生物治疗杂志》【年(卷),期】2006(13)2【摘要】组蛋白H2A变体H2AX在离其肽链C端4个氨基酸处存在一个高度保守的丝氨酸残基(Ser-139),DNA双链断裂(DSB)一经产生,该残基便能迅速被磷酸化,形成γ-H2AX。
γ-H2AX识别抗体是探测DSB存在的金标准;H2AX在细胞周期关卡中起重要作用,H2AX(?)细胞不能正确停止在G2期并进入有丝分裂期;H2AX的丧失不影响V(D)J重排,但有效的类型转换重组需要H2AX;H2AX还在细胞分裂中起重要作用。
总之,H2AX是基因组的监视器,DNA损伤一旦发生,H2AX 的磷酸化即会被启动,然后招募更多的修复因子共同修复DNA损伤;H2AX在抑制基因组不稳定和癌症放疗疗效预测方面具有一定的作用。
【总页数】3页(P156-158)【关键词】H2AX;DNA双链断裂;DNA修复;基因组不稳定;放射治疗【作者】于琳;孙青;石彦明【作者单位】泰山医学院研究生部;山东省千佛山医院病理科【正文语种】中文【中图分类】R730.4【相关文献】1.DNA修复蛋白磷酸化组蛋白H2AX在胃癌中的表达及其意义 [J], 杨小丽;吕文鑫;窦东伟;李萍;吴华2.基于流式细胞术的组蛋白γ-H2AX磷酸化检测方法的建立 [J], 黄鹏程;周长慧;李申宁;常艳3.利用原代肝细胞模型检测细胞内磷酸化组蛋白H2AX表达筛选遗传毒物的方法验证 [J], 孟涛;苗盼盼;纪玉青;牛勇;宾萍;戴宇飞;郑玉新4.组蛋白H2AX研究进展及其与肿瘤的关系 [J], 张艳君;李炳杰5.组蛋白H2AX与肿瘤关系研究进展 [J], 应小平;吴肖晓;方艳;王小平;郭兰生;赵延红;因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
组蛋白修饰与癌症表观遗传学组蛋白修饰是指对组蛋白分子进行修饰,从而影响基因的表达和细胞功能的一种生物学过程。
这一过程的发现和研究为了解人类疾病的发生和发展提供了重要线索。
尤其是在癌症表观遗传学中,组蛋白修饰被认为是一个重要的关键点。
人类胚胎发育和细胞分化的调控与组蛋白修饰息息相关,基因转录调节、DNA修复、染色体结构和维持等生命活动都与组蛋白修饰密切相关。
组蛋白是一种非常基础的蛋白质,与 DNA 紧密结合,构筑出染色体结构,从而对蛋白质和基因的调控起到重要作用。
组蛋白通过化学修饰,包括甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化等,可以影响其在染色质上的结构和特异性,从而影响基因的转录、复制和修复。
癌症细胞的产生与组蛋白修饰有密切关系。
癌症细胞的基因转录调节异常,导致了一系列基因的过度表达或者抑制,从而造成了细胞生长、增殖和转移的异常变化。
组蛋白修饰通过影响基因转录的起始和终止,可以影响基因表达量和选择性,从而影响细胞周期和增殖。
例如,在许多癌症中,包括肝癌、结直肠癌和乳腺癌等,都发现了一些与乙酰化或甲基化相关的不正常基因表达。
这些基因的异常表达被认为是肿瘤细胞在癌症发生和发展过程中的一个关键因素。
组蛋白修饰与癌症治疗密切相关。
许多癌症治疗方法都需要涉及到组蛋白修饰的机制。
例如,组蛋白去乙酰化剂是常用的癌症治疗药物之一,用于控制肿瘤细胞的增殖和转移。
组蛋白去乙酰化剂可以通过调节基因转录,促进癌细胞向正常细胞分化,从而达到治疗癌症的效果。
另一方面,针对组蛋白修饰机制的药物还可以在某些癌症领域进行个体化治疗。
例如,临床上某些对组蛋白去乙酰化剂不敏感的肿瘤,可能更加敏感于其它组蛋白修饰药物的干预,从而实现癌症治疗的个体化。
结语:总之,组蛋白修饰在癌症表观遗传学中是一个非常重要的领域。
通过审视组蛋白修饰机制在癌症进程中扮演的重要作用,我们可以更好地了解肿瘤发生和进展的机制,研究和设计治疗药物,从而实现癌症的精准治疗。
组蛋白去乙酰化酶1 siRNA对HeLa细胞生长和凋亡的影响李娜;于世英【期刊名称】《华中科技大学学报(医学版)》【年(卷),期】2010(039)001【摘要】目的研究组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases-1,HDAC-1)siRNA对宫颈癌HeLa细胞HDAC-1蛋白表达、细胞生长和凋亡的影响.方法HDAC-1 siRNA沉默HDAC-1蛋白;Western blot技术检测HDAC-1蛋白;MTT 法和克隆形成实验检测细胞生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 HDAC-1 siRNA转染48 h可明显下调HeLa细胞HDAC-1蛋白表达;下调HDAC-1 表达明显降低HeLa细胞克隆形成率,抑制细胞增殖;下调HDAC-1诱导HeLa细胞凋亡.结论 HDAC-1 siRNA可能通过诱导凋亡抑制HeLa细胞生长.【总页数】4页(P47-49,58)【作者】李娜;于世英【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤中心,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤中心,武汉,430030【正文语种】中文【中图分类】R737.33【相关文献】1.组蛋白去乙酰化酶1 siRNA对人宫颈癌SiHa细胞增殖及凋亡的影响 [J], 邢静;吴维光;闫红亮;王筝;孙兆翎;唐雅娟2.RUNX2在宫颈鳞癌组织中的表达及其siRNA对Hela229细胞RUNX2表达及细胞增殖与凋亡的影响 [J], 张威;郭文涛;曾宪旭;班振英3.Rab1A siRNA对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制 [J], 段钊;公丕军;杜娟;付丽丽4.siRNA抑制X连锁凋亡抑制蛋白基因对人HeLa细胞凋亡及周期的影响 [J], 唐薇薇;郑洪;厉国慧;王琳琳5.miRNA-21siRNA对宫颈癌Hela细胞周期及细胞凋亡的影响 [J], 徐文莉;廖长征;罗艺;林燕华;张洪德因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
组蛋白HIST1H2AC和HIST1H2BC基因在胰腺癌耐药细胞株中的表达(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)【摘要】目的:研究组蛋白HIST1H2AC和HIST1H2BC在培美曲塞诱导的胰腺癌耐药细胞株Puta8988中的基因和蛋白表达水平,以明确HIST1H2AC和HIST1H2BC基因与胰腺癌耐药的关系。
方法:以两种剂量的培美曲塞诱导胰腺癌细胞株Puta8988,使其形成两个等级的获得性耐药细胞株Puta8988+、Puta8988++。
采用qRT PCR和Western blotting方法分别检测HIST1H2AC和HIST1H2BC在耐药细胞株及其亲本(对照)中的基因和蛋白表达水平。
结果:qRT PCR检测结果显示,组蛋白HIST1H2AC和HIST1H2BC基因在胰腺癌耐药株Puta8988+和Puta8988++中的表达水平显著上调(P0.05);Western blotting检测结果显示,组蛋白HIST1H2AC和HIST1H2BC在胰腺癌耐药株Puta8988+和Puta8988++中的蛋白表达水平也显著上调(P0.05)。
结论:胰腺癌细胞株经培美曲塞诱导后,其组蛋白HIST1H2AC 和HIST1H2BC在基因和蛋白表达水平上均出现上调,提示HIST1H2AC 和HIST1H2BC基因可能与耐药有关。
【关键词】 HIST1H2AC; HIST1H2BC; 胰腺癌; Puta8988; 培美曲塞;表达[Abstract] Objective: To investigate the expression of HIST1H2AC and HIST1H2BC genes in pancreatic cancer cell line Puta8988 treated with pemetrexed, and to verify the relationship between the genes and pemetrexed resistance. Methods: Pancreatic cancer cell line Puta8988 was treated with two doses of pemetrexed to get Puta8988+ and Puta8988++ with pemetrexed resistance, and the expression levels of HIST1H2AC and HIST1H2BC and their genes in Puta8988, Puta8988+ and Puta8988++ were detected by qRT PCR and Western blotting respectively. Results: Results detected by qRT PCR showed that expression levels of HIST1H2AC and HIST1H2BC genes were significantly up regulated in Puta8988+ and Puta8988++(P0.05). Results detected by Western blotting showed that expression levels of HIST1H2AC and HIST1H2BC were also significantly up regulated in those cell lines with pemetrexed resistance(P0.05). Conclusion: Expressions of HIST1H2AC and HIST1H2BC and their genes in pancreatic cancer cell line Puta8988 treated with pemetrexed are significantly up regulated, which implies that these genes possibly plays a role in pemetrexed resistance of pancreatic cancer cell lines.[Key words] HIST1H2AC; HIST1H2BC; pancreatic cancer; Puta8988; pemetrexed; expression胰腺癌起病隐匿,手术切除率低,对传统放化疗不敏感,死亡发病比达98%,5年生存率6%[1-2],是威胁人类健康的“隐秘杀手”。
胰腺癌患者血清外泌体酪氨酸蛋白激酶受体EphA2蛋白表达变化及其意义魏倩,李泽,冯红蕾天津医科大学肿瘤医院/国家肿瘤临床医学研究中心/天津市肿瘤防治重点实验室/天津市恶性肿瘤临床医学研究中心,天津300060摘要:目的观察胰腺癌患者血清外泌体酪氨酸蛋白激酶受体EphA2蛋白表达变化,并探讨其临床意义。
方法选取胰腺癌患者105例(胰腺癌组)、同期体检健康者70例(健康组),采用酶联免疫法检测两组血清外泌体EphA2蛋白。
以胰腺癌患者血清外泌体EphA2蛋白表达水平中位数为临界值,将105例胰腺癌患者分为EphA2蛋白高表达者、EphA2蛋白低表达者,分析血清外泌体EphA2蛋白表达水平与胰腺癌患者临床病理参数的关系。
以胰腺癌患者血清外泌体EphA2蛋白表达水平中位数为临界值,将随访资料完整的胰腺癌患者分为EphA2蛋白高表达组、EphA2蛋白低表达组,采用Kaplan-Meier生存分析法分析血清外泌体EphA2蛋白表达水平与胰腺癌患者预后的关系。
结果胰腺癌组、健康组血清外泌体EphA2蛋白表达水平分别为(1956±216)ng/L、(474±51)ng/L,两组相比,P<0.05。
血清外泌体EphA2蛋白表达水平与胰腺癌TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),与患者的性别、年龄、吸烟史、酗酒史无关(P均>0.05)。
EphA2蛋白高表达组3年生存率为14.9%,EphA2蛋白低表达组3年生存率为37.7%,两组相比,P<0.05。
结论胰腺癌患者血清外泌体EphA2蛋白表达水平升高,与胰腺癌TNM分期、淋巴结转移有关;血清外泌体EphA2蛋白高表达的胰腺癌患者3年生存率低于低表达者。
关键词:酪氨酸蛋白激酶受体EphA2;外泌体;胰腺肿瘤;胰腺癌doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2021.09.008中图分类号:R735.9文献标志码:A文章编号:1002-266X(2021)09-0031-04Expression changes of Exo-EphA2in pancreatic cancer and its clinic significanceWEI Qian,LI Ze,FENG HongleiTianjin Medical University Cancer Institute and Hospital,Tianjin300060,ChinaAbstract:Objective To observe the expression changes of serum exosomal erythropoietin-producing hepatocellular receptor A2(Exo-EphA2)in the pancreatic cancer(PC)patients and to explore its clinic significance.Methods The levels of serum Exo-EphA2in105pancreatic cancer patients and70healthy controls were assessed by ELISA.By taking the median level of serum Exo-EphA2protein expression in PC patients as the critical value,we divided105PC patients into the high Exo-EphA2expression group and low Exo-EphA2expression group.The relationship between serum Exo-EphA2levels and clinicpathological characteristics was analyzed.Base on the median level of serum Exo-EphA2protein expression in PC patients,100PC patients with complete clinical data were divided into the high Exo-EphA2expression group and low Exo-EphA2expression group.Kaplan-Meier test was used to analyze the relationship between serum Exo-EphA2and patients’prognosis.Results The levels of serum Exo-EphA2in PC and healthy controls were(1956±216)and(474±51)ng/L,respectively;serum Exo-EphA2level was significantly higher in PC patients than in healthy controls (P<0.05).The expression level of serum Exo-EphA2was related to TNM stage and lymph node metastasis(both P<0.05),but not to gender,age,smoking or drinking(all P>0.05).The3-year survival rate was14.9%in the high Exo-EphA2expression group and37.7%in the low Exo-EphA2expression group,with statistically significant difference(P<0.05).Conclusion The expression of serum Exo-EphA2increases significantly in the PC patients,which is relatedwith TNM stage and lymph node metastasis;the3-year survival rate of patients with high expression of Exo-EphA2is lower than that of patients with low expression of Exo-EphA2.Key words:erythropoietin-producing hepatocellular receptor A2;exosomes;pancreatic neoplasms;pancreatic carcinoma基金项目:国家自然科学基金资助项目(81702996)。
组蛋白H2A衍生抗菌肽的重组表达及活性分析【摘要】:目前,由于食品生产、农业生产和医药卫生等领域中抗生素的广泛使用,造成病原菌耐药性的提高以及抗生素残留等诸多危及人类健康的问题。
因此,目前人们急需寻找一种高效、广谱、安全的新型抗菌剂替代传统抗生素。
由于抗菌肽独特的抗菌机制,不易使病原菌产生耐药性,具有广谱的抗菌活性等优点,它在治疗学领域,畜牧业,食品防腐剂等己被用来作为新一代的抗微生物剂。
已报道的抗菌肽超过2000种,这些抗菌肽携带净正电荷并且大多数倾向于形成两亲的α-螺旋结构。
组蛋白衍生的抗菌肽(histone-derivedantimicrobialpeptides,)是组蛋白在某种机制作用下被降解、修饰和分泌出的一种小分子多肽。
基于HDAPs具有体外抗菌活性,本研究在对四膜虫及人类组蛋白H2A分析的基础上,通过基因工程技术,构建四膜虫及人类组蛋白H2A 衍生的抗菌肽的高效融合表达载体,在大肠杆菌表达系统成功实现四膜虫组蛋白H2A衍生抗菌肽(Tetrahymenathermophilahistone-derivedantimicrobialpeptides,ThAP)和人类蛋白H2A衍生抗菌肽(Humanhistone-derivedantimicrobialpeptides,HhAP)的重组表达,对重组蛋白的抑菌活性进行研究,实验结果如下:(1)ThAP和HhAP基因的设计合成根据四膜虫及人类组蛋白H2A序列,设计H2A衍生的HDAPs:ThAP和HhAP肽序列,利用大肠杆菌偏爱密码子表,合成在大肠杆菌中高效表达的组蛋白衍生物抗菌肽基因片段ThAP和HhAP,并构建于克隆载体pUC57上(2)ThAP和HhAP生物信息学分析通过抗菌肽数据库网站及SOPMA程序在线分析了ThAP和HhAP氨基酸残基的分子量大小、净电荷数、两亲性、等电点、二级结构及三级结构等,预测结果显示:ThAP和HhAP蛋白质分子量分别为2.15KD.2.22KD:ThAP主要由α螺旋结构组成,占57.89%,HhAP主要由α螺旋(43%)和无规卷曲结构(38%)组成。
hMLH1基因对人卵巢癌耐药细胞株顺铂敏感性的研
究的开题报告
研究背景:
卵巢癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,常用的治疗方法包括手术和化疗。
然而,化疗常常耐药,导致治疗失败和复发。
顺铂是一种常用的化疗药物,但其耐药性仍然是卵巢癌治疗的主要难题。
近年来的研究表明,hMLH1基因可能与卵巢癌的耐药性有关。
研究目的:
本研究旨在探究hMLH1基因对人卵巢癌耐药细胞株顺铂敏感性的影响,了解其机制,为提高卵巢癌化疗的有效性提供实验依据。
研究方法:
1.建立人卵巢癌耐药细胞株模型;
2.采用RNAi技术抑制hMLH1基因表达;
3.使用MTT法检测顺铂对细胞的抑制作用;
4.采用Western blot和实时荧光定量PCR技术检测hMLH1基因的表达变化及下游信号通路的相关因子表达变化。
预期结果:
1.建立人卵巢癌耐药细胞株模型;
2.抑制hMLH1基因表达后细胞对顺铂敏感度增加;
3.发现hMLH1基因抑制对下游信号通路有显著影响;
4.初步探讨hMLH1基因在卵巢癌耐药性中的作用及可能的机制。
意义:
本研究有望为探索卵巢癌耐药性机制提供新思路,为卵巢癌化疗提供新的治疗靶点和方法。
ARHI基因与HuR蛋白在胰腺癌PANC-1细胞中的表达杨红;胡珊珊;阮戈冲;杨晓鸥;钱家鸣【摘要】目的观察ARHI基因转染胰腺癌PANC-1细胞后对HuR蛋白的影响.方法采用脂质体法将表达ARHI基因的质粒pLNCX2-ARHI-EGFP和空载体pLNCX2-EGFP转染胰腺癌PANC-1细胞,细胞分为3组:实验组(pLNCX2-ARHI-EGFP)、空载体转染组(pLNCX2-EGFP)和PANC-1细胞空白对照组,用G418筛选稳定转染的细胞株;采用PCR和Western blot方法检测ARHI基因表达,采用Western blot方法检测HuR蛋白表达.结果稳定转染ARHI基因组可检测到ARHI基因mRNA和蛋白的表达.根据图像灰度计算蛋白条带相对表达量,稳定转染ARHI基因组HuR蛋白表达(0.2226±0.0644)较空载体对照转染组(0.4063±0.0925,P=0.029)和PANC-1细胞空白对照组(0.4178±0.1319,P=0.022)显著降低.结论 ARHI基因可以导致胰腺癌细胞株中HuR蛋白表达降低.【期刊名称】《协和医学杂志》【年(卷),期】2017(008)001【总页数】4页(P39-42)【关键词】胰腺癌;ARHI基因;HuR【作者】杨红;胡珊珊;阮戈冲;杨晓鸥;钱家鸣【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院消化内科,北京100730;中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院消化内科,北京100730;中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院消化内科,北京100730;中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院消化内科,北京100730;中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院消化内科,北京100730【正文语种】中文【中图分类】R34ARHI基因是母源性印迹基因,属于Ras超家族成员之一,其编码的蛋白在人类多种正常组织中如卵巢、乳腺和胰腺中表达,但在乳腺癌、卵巢癌和胰腺癌中却存在表达下调[1]。
胰腺癌细胞中CHI3L1低表达对肿瘤生长的抑制作用及其机制贺龙梅;王晓倩;屈洁;张宁;王晓琴;马运峰【期刊名称】《山西医科大学学报》【年(卷),期】2022(53)5【摘要】目的探讨壳多糖酶3样蛋白1(chitinase-3-like-protein-1,CHI3L1)的表达对胰腺癌细胞的生物学行为和肿瘤生长的影响及可能的机制。
方法人胰腺癌细胞株PANC-1分为两组,分别感染抑制CHI3L1表达的shRNA慢病毒获得PANC-1/shRNA-CHI3L1(实验组),或感染空载对照病毒获得PANC-1/vector(对照组);划痕愈合实验观察抑制CHI3L1蛋白表达对胰腺癌细胞PANC-1迁移能力的影响;通过Western blot检测两组感染细胞中CHI3L1、细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)、B淋巴细胞瘤-2关联基因X(Bcl-2-associated X,Bax)蛋白的表达水平。
分别接种PANC-1/shRNA-CHI3L1(实验组)和PANC-1/vector(对照组)肿瘤细胞于裸鼠皮下,每3 d测量肿瘤大小,并计算存活率。
结果与对照组相比,实验组PANC-1细胞株中CHI3L1的表达明显降低(P<0.001);实验组PANC-1细胞迁移能力显著下降(P<0.0001),PANC-1细胞中的ERK、NF-κB及其磷酸化水平也明显降低(P<0.01),而Bax的表达显著升高(P<0.0001)。
沉默了CHI3L1基因后,实验组小鼠肿瘤生长速度减缓,生存时间明显延长,且与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论胰腺癌细胞中CHI3L1的表达下调,抑制了胰腺肿瘤的生长。
【总页数】5页(P543-547)【作者】贺龙梅;王晓倩;屈洁;张宁;王晓琴;马运峰【作者单位】陕西省中医医院检验科;西安交通大学第一附属医院检验科;西安交通大学基础医学院病原生物学与免疫学系【正文语种】中文【中图分类】R735.9【相关文献】1.胰岛素样生长因子-1受体在人胰腺癌细胞中的表达和意义2.Slit/Robo信号通路在胰腺癌细胞中的表达及其对胰腺癌细胞生长的影响3.酪酪肽对胰腺癌细胞生长的抑制作用及Y受体在胰腺癌细胞的表达4.敲低ALKBH3对膀胱癌细胞生长、迁移与肿瘤血管生成的抑制作用及其机制因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
HIF-1α及耐药蛋白在胰腺癌中的表达及相关性分析孙晶;曹俊;江弢;张放;黄陈;裘正军【期刊名称】《世界华人消化杂志》【年(卷),期】2007(15)23【摘要】目的:探讨HIF-1α及耐药相关指标P糖蛋白(P-Gp),凋亡相关Bcl-2家族成员Bcl-X_L及Bax在人胰腺癌组织中表达的相关性.方法:免疫组化法检测手术切除的胰腺癌组织34例中HIF-1α、P-Gp、Bcl-X_L、Bax蛋白表达.结果:34例胰腺癌标本中有26例(76.5%)HIF- 1α,28例(82.4%)P-Gp,30例(88.2%)Bcl-X_L,26例(76.5%)Bax表达阳性.HIF-1α和P-Gp、Bcl-X_L、Bax蛋白表达呈正相关(r=0.471,P= 0.005;r=0.443,P=0.009;r=0.510,P=0.002).结论:在胰腺癌组织中HIF-1α、P-Gp、Bcl- X_L、Bax蛋白存在高表达;HIF-1α与P-Gp、Bcl- X_L、Bax的蛋白表达呈正相关,提示HIF-1α可能通过上调耐药相关蛋白P-Gp、Bcl-X_L及Bax蛋白表达在胰腺癌耐药机制中起重要作用.【总页数】4页(P2503-2506)【关键词】胰腺癌;缺氧诱导因子-1α;化疗耐药;多药耐药基因;凋亡【作者】孙晶;曹俊;江弢;张放;黄陈;裘正军【作者单位】上海交通大学附属第一人民医院普外科【正文语种】中文【中图分类】R651.2【相关文献】1.肝癌组织中HIF-1α蛋白的表达与多药耐药蛋白相关性研究 [J], 郭晓东;李志伟;杨美;余灵祥;郭超楠;熊璐2.非小细胞肺癌中HIF-1α蛋白的表达与多药耐药蛋白相关性的研究 [J], 夏曙;于世英;袁响林;付向宁3.口腔癌组织中HIF-1α的表达及其与肿瘤耐药蛋白表达关系的研究 [J], 王霞;吴淑华;王培源;朱玉红;刘伟4.耐药相关蛋白P糖蛋白、多药耐药相关蛋白及谷胱甘肽S转移酶π在胰腺癌中的表达及其意义 [J], 常新忠;王涛;王占民5.HIF-1α和EMT相关蛋白在胰腺癌组织中的表达及临床意义 [J], 朱光辉;岑刚;黄陈;张志华;冯正中;吕秀红;裘正军因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
组蛋白去乙酰化酶1在人肺癌组织中的表达黄宏;张珍祥;徐永健【期刊名称】《华中科技大学学报(医学版)》【年(卷),期】2003(032)006【摘要】目的探讨原发性肺癌组织中组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)的表达及临床意义.方法采用免疫组织化学法和原位杂交法,分别测定28例肺癌组织及其癌旁肺组织中HDAC1表达.结果在28例肺癌组织中HDAC1的蛋白质和mRNA的A值分别为0.21±0.02,0.18±0.03,而其癌旁肺组织中HDAC1的蛋白质和mRNA的A 值分别为0.16±0.02,0.11±0.01,两者相比差异均有显著性意义,P<0.05.结论HDAC1在肺癌组织中呈过表达.【总页数】3页(P622-624)【作者】黄宏;张珍祥;徐永健【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科,武汉,430030【正文语种】中文【中图分类】R734.2【相关文献】1.组蛋白去乙酰化酶1在人上皮性卵巢癌组织中的表达 [J], 贾妍;邹颖刚;陈军;黄冰玉;崔满华2.组蛋白去乙酰化酶1在人肾癌、膀胱癌和前列腺癌组织中的表达及临床意义 [J], 李曾;廖洪;谭政;毛顿;吴毅;肖英明3.人类肺癌组织中COX-2的表达及其与K-ras和Mcl-1表达的关系 [J], 宋文静;王新允;郑宏伟4.BRCA1和人线粒体转录终止因子3在非小细胞肺癌组织中的表达情况 [J], 杨天真;杨军;邱瑞成;王春梅5.人非小细胞肺癌组织中Survivin的表达及与caspase-3和p21^(WAF1)表达的意义 [J], 潘琦;陈福春;陈洪雷;张玉霞;杨飞;夏东;刘铭球因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
苦参碱对胰腺癌吉西他滨耐药细胞化疗敏感性的影响郭晨博;毛玉宁;张贺;张彩勤;张延英;汪永锋;师长宏【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2022(30)8【摘要】目的探索苦参碱在胰腺癌吉西他滨(GEM)耐药中的作用,以期为恢复胰腺癌化疗敏感性提供新的治疗手段。
方法选择胰腺癌细胞系AsPC-1,使用吉西他滨诱导构建胰腺癌吉西他滨耐药细胞株AsPC-1-GEM,通过CCK-8实验测试其耐药性,检测细胞活力分析苦参碱对胰腺癌吉西他滨耐药细胞株的作用;进一步通过RT-PCR和Western Blot检测耐药前后多药耐药蛋白2(ABCG2)的表达变化以及苦参碱对ABCG2的影响;利用裸鼠建立胰腺癌吉西他滨耐药细胞系异种移植模型,观察使用苦参碱治疗后肿瘤体积的变化;通过免疫组化检测苦参碱对ABCG2表达的影响。
结果耐药细胞AsPC-1-GEM中ABCG2表达增高(P<0.01),苦参碱可有效降低耐药细胞ABCG2的表达(P<0.01),提高胰腺癌吉西他滨耐药细胞的敏感性(P<0.01)。
体内实验进一步验证了苦参碱治疗可降低ABCG2的表达(P<0.01),并减缓肿瘤生长(P<0.01)。
结论苦参碱通过降低ABCG2的表达,提高胰腺癌吉西他滨耐药细胞株的敏感性。
【总页数】8页(P1042-1049)【作者】郭晨博;毛玉宁;张贺;张彩勤;张延英;汪永锋;师长宏【作者单位】甘肃中医药大学;空军军医大学实验动物中心【正文语种】中文【中图分类】Q95-33【相关文献】1.TLR-9在胰腺癌细胞化疗中对吉西他滨耐药性的影响2.苦参碱对胰腺癌吉西他滨耐药及Aurora-A表达的影响3.苦参碱对结肠癌耐药细胞化疗药物敏感性及自噬水平的影响4.下调AFAP-1L2表达对人胰腺癌细胞吉西他滨化疗敏感性的影响5.长链非编码RNA MALAT1对耐吉西他滨胰腺癌细胞化疗敏感性的影响因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
胰腺癌组织中c-erbB-2、nm23-H1癌基因及PCNA的表达及意义刘江伟;李开宗;窦科峰;王映梅【期刊名称】《西北国防医学杂志》【年(卷),期】2002(023)004【摘要】目的:研究胰腺癌组织中c-erbB-2、nm23-H1及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达与生物学行为之间的关系.方法:用免疫组织化学方法(SABC)对39例胰腺导管癌c-erbB-2,nm23-H1基因和PCNA的表达进行检测.结果:39例胰腺导管癌中c-erbB-2,nm23-H1基因蛋白的表达率、PCNA增殖指数分别为46.15%、66.67%、27.5±16.4;c-erbB-2,nm23-H1与组织学分级有关(P<0.05),而与临床分期关系不大(P>0.05);PCNA增殖指数与组织学分级和临床分期有关(P<0.01);c-erbB-2,nm23-H1,PCNA均与淋巴结转移呈正相关.结论:c-erbB-2, nm23-H1, PCNA是反映胰腺癌生物学行为和预后的重要指标.【总页数】3页(P254-256)【作者】刘江伟;李开宗;窦科峰;王映梅【作者单位】第四军医大学西京医院肝胆外科,陕西,西安,710032;第四军医大学西京医院肝胆外科,陕西,西安,710032;第四军医大学西京医院肝胆外科,陕西,西安,710032;西京医院病理科【正文语种】中文【中图分类】R735.9【相关文献】1.C-erbB-2癌基因蛋白、EGFR、TGF-β1在胰腺癌组织中的表达及意义 [J], 张琍;袁世珍2.原癌基因C-erbB-2蛋白和PCNA在乳腺导管浸润癌中的表达及意义 [J], 王丽萍;张元德;张俊格;陈东;陈爱军;王晓明;申丽娟3.胰腺癌组织中C-erbB-2、P53及PCNA的表达及临床意义 [J], 卫文俊;石欣;高乃荣;杨林;程张军;汤永辉4.胰腺癌组织PCNA和c-erbB-2, nm23-H1癌基因的表达 [J], 刘江伟;李开宗5.胰腺癌组织中c-erbB-2及PCNA的表达及其临床意义 [J], 刘江伟;李开宗因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
组蛋白HIST1H2AC和HIST1H2BC基因在胰腺癌耐药细胞株中的表达(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)【摘要】目的:研究组蛋白HIST1H2AC和HIST1H2BC在培美曲塞诱导的胰腺癌耐药细胞株Puta8988中的基因和蛋白表达水平,以明确HIST1H2AC和HIST1H2BC基因与胰腺癌耐药的关系。
方法:以两种剂量的培美曲塞诱导胰腺癌细胞株Puta8988,使其形成两个等级的获得性耐药细胞株Puta8988+、Puta8988++。
采用qRT PCR和Western blotting方法分别检测HIST1H2AC和HIST1H2BC在耐药细胞株及其亲本(对照)中的基因和蛋白表达水平。
结果:qRT PCR检测结果显示,组蛋白HIST1H2AC和HIST1H2BC基因在胰腺癌耐药株Puta8988+和Puta8988++中的表达水平显著上调(P0.05);Western blotting检测结果显示,组蛋白HIST1H2AC和HIST1H2BC在胰腺癌耐药株Puta8988+和Puta8988++中的蛋白表达水平也显著上调(P0.05)。
结论:胰腺癌细胞株经培美曲塞诱导后,其组蛋白HIST1H2AC 和HIST1H2BC在基因和蛋白表达水平上均出现上调,提示HIST1H2AC 和HIST1H2BC基因可能与耐药有关。
【关键词】 HIST1H2AC; HIST1H2BC; 胰腺癌; Puta8988; 培美曲塞;表达[Abstract] Objective: To investigate the expression of HIST1H2AC and HIST1H2BC genes in pancreatic cancer cell line Puta8988 treated with pemetrexed, and to verify the relationship between the genes and pemetrexed resistance. Methods: Pancreatic cancer cell line Puta8988 was treated with two doses of pemetrexed to get Puta8988+ and Puta8988++ with pemetrexed resistance, and the expression levels of HIST1H2AC and HIST1H2BC and their genes in Puta8988, Puta8988+ and Puta8988++ were detected by qRT PCR and Western blotting respectively. Results: Results detected by qRT PCR showed that expression levels of HIST1H2AC and HIST1H2BC genes were significantly up regulated in Puta8988+ and Puta8988++(P0.05). Results detected by Western blotting showed that expression levels of HIST1H2AC and HIST1H2BC were also significantly up regulated in those cell lines with pemetrexed resistance(P0.05). Conclusion: Expressions of HIST1H2AC and HIST1H2BC and their genes in pancreatic cancer cell line Puta8988 treated with pemetrexed are significantly up regulated, which implies that these genes possibly plays a role in pemetrexed resistance of pancreatic cancer cell lines.[Key words] HIST1H2AC; HIST1H2BC; pancreatic cancer; Puta8988; pemetrexed; expression胰腺癌起病隐匿,手术切除率低,对传统放化疗不敏感,死亡发病比达98%,5年生存率6%[1-2],是威胁人类健康的“隐秘杀手”。
近年来的研究表明,辅助化疗有比传统化疗更好的疗效,已被认为是与手术治疗同样重要的治疗方法。
与此同时,多种针对胰腺癌的靶向药物也在不断被发现。
然而,耐药现象的存在仍然是导致辅助化疗效果欠佳或失败的主要原因。
揭示胰腺癌化疗的耐药机制,建立更有效的化疗方法已成为国内外研究的重点[3];而从分子生物学的层面来研究和寻找耐药基因,然后给予必要的干预,以提高辅助化疗疗效的研究已成为当前最为关注的热点[4]。
已有的研究表明,胰腺癌耐药性与MDR1(multidrug resistance1)、MRP(multidrug resistance associated protein gene)、LRP(lung resis 2 tance protein)、Bcl2(B cell lym phoma/leuke2)以及P53等基因有关,而这些基因的一个共同特点是与其他癌症的耐药性也有关[5]。
这就提示我们可以借鉴其他癌症发现的耐药基因研究胰腺癌的耐药机制。
有报道指出,组蛋白HIST1H2AC(Histone 1,H2ac)和HIST1H2BC(Histone 1,H2bc)基因与乳腺癌耐药性密切相关[6]。
然而,它们是否在胰腺癌耐药细胞株中表达至今很少有报道。
本实验针对胰腺癌耐药细胞株中HIST1H2AC和HIST1H2BC在基因和蛋白水平上的表达情况开展研究,以探讨它们与胰腺癌耐药的关系及其可能的分子机制,为研发对抗和逆转耐药的新方法提供新的靶点。
1 材料与方法1.1 材料人胰腺癌细胞株:采用由东南大学中心实验室保存的人胰腺癌细胞株Puta8988。
主要试剂:DMEM高糖培养基、胰蛋白酶为美国GIBCO 公司产品,胎牛血清为杭州四季青公司产品,TRIZOL细胞裂解液为美国Invitrogen公司产品,培美曲塞(pemetrexed)为法国礼来公司产品,HIST1H2AC单克隆抗体和HIST1H2BC多克隆抗体为美国Abnova 公司产品,二抗(羊抗小鼠 IgG HRP)为南京凯基生物公司,PDVF膜为美国PALL公司产品,PCR引物由南京凯基生物公司合成。
主要仪器:北京泰克生物技术有限公司Realtime PCR Master Mix(SYBR Green),日本Nikon公司倒置相差显微镜,美国BECKMAN公司高速冷冻离心机,美国Bio Rad公司电泳仪等。
1.2 方法1.2.1 细胞培养胰腺癌细胞株Puta8988,以1/2 IC50浓度的培美曲塞作耐药诱导,形成耐药细胞株Puta8988+。
将培美曲塞浓度增加1倍再次作耐药诱导,形成耐药细胞株Puta8988++。
Puta8988+、Puta8988++培养在含10%胎牛血清的DMEM培养基中,37 ℃、5%CO2条件下培养,隔天换液,细胞长满单层后用2.5 g·L-1胰蛋白酶消化传代。
1.2.2 实时荧光逆转录聚合酶链反应(qRT PCR) 细胞总RNA提取按照Trizol试剂盒说明进行。
逆转录合成cDNA的反应总体积为20 μl,RT的反应条件是:37 ℃温育30 min后,升温至65 ℃加热5 min,然后4 ℃冷却5 min,瞬时离心。
先在37 ℃保温1 h,然后70 ℃保温15 min。
反应产物行下一步扩增或-20 ℃保存。
根据Gene Bank中HIST1H2AC、HIST1H2BC的cDNA序列用Primer 5.0设计特异性扩增引物,见表1。
采用25 μl总反应体系:2×RTmix 12.5 μl;模板(cDNA稀释10倍) 1 μl;引物5 pmol·μl-1 mix 1 μl;双蒸水10.5 μl扩增条件:95 ℃ 5 min,94 ℃ 15 s、表1 PCR所用的引物序列及扩增产物大小60 ℃ 30 s,45个循环。
一个样本做3个复孔,在96孔板中上样定量检测。
1.2.3 Western blotting 分别从培养好的细胞株提取细胞总蛋白进行定量,细胞总蛋白量为70 μg,将3组细胞的蛋白质常规PAGE 凝胶电泳并转移至PVDF膜,用5%脱脂奶粉封闭液中室温封闭1 h后加入封闭液和一抗HIST1H2AC抗体(1∶500),HIST1H2BC抗体(1∶500)。
在4 ℃下摇床摇荡孵育过夜。
PBST漂洗滤膜4次,每次10 min。
将膜与HRP结合的二抗(辣根过氧化酶标记抗体, 二抗用封闭液稀释1∶5 000)室温下摇荡孵育1 h,然后用PBST充分洗膜,漂洗4次,每次10 min。
暗室中迅速将膜蛋白贴在X线胶片上曝光,直至出现最佳条带。
1.3 统计学处理实验数据以±s表示,采用Prism软件包分析,组间比较用t检验,P0.05为差异有统计学意义。
2 结果2.1 qRT PCR检测HIST1H2AC和HIST1H2BC基因在不同耐药处理胰腺癌细胞株中的表达水平以目标基因拷贝数与βactin拷贝数之比乘以100为HIST1H2AC和HIST1H2BC基因在不同耐药处理胰腺癌细胞株Puta8988中的相对表达水平,实时荧光PCR检测结果(图1)表明,1/2 IC50浓度培美曲塞诱导的耐药细胞株Puta8988+,其HIST1H2AC基因的相对表达水平调高,由其亲本Puta8988(对照)的0.340±0.070提高到1.577±0.276,上升幅度达 4.64倍。
如果培美曲塞的浓度加倍,Puta8988++中HIST1H2AC基因的相对表达水平进一步提高,达2.000±0.185,是对照的 5.88倍,各处理间的差异均达到显著水平(P0.05)。
HIST1H2BC基因在上述耐药细胞株及其亲本中的表达水平也有同样的趋势,但就其相对表达量而言,要比HIST1H2AC的低,在Puta8988、Puta8988+、Puta8988++中分別为0.027±0.003、0.153±0.023和0.623±0.048,在Puta8988+、Puta8988++中HIST1H2BC 的mRNA相对表达水平分别比对照(Puta8988)调高5.67倍和23.07倍,各处理间的差异也达到了显著水平(P0.05)。