血凝抑制试验
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血凝及血凝抑制试验的应用血凝现象是指血液由流动的液体状态变成不能流动的凝胶状态的过程。
这种现象在医学领域具有重要意义,可用于血液凝固机制的研究、血液疾病和血栓性疾病的检测和诊断等。
而血凝抑制试验则是一种通过检测血凝因子的抗凝活性,评估血液抗凝系统功能的一种方法。
血凝现象在医学中应用广泛。
血凝机制的研究可以帮助人们更好地了解血液凝固的生理过程,从而对止血和血栓性疾病的发病机制有更深入的认识。
血凝检测在医学诊断中具有重要价值,例如在手术前对患者的凝血功能进行评估,以避免手术中大出血的风险。
血液疾病如凝血障碍、血小板减少等以及血栓性疾病如心肌梗死、脑血栓等均可通过血凝检测进行诊断和病情监测。
血凝抑制试验是一种检测血凝因子抗凝活性的方法。
该方法的基本原理是当血液中存在某种物质(如抗体)时,会抑制血凝因子的活性,从而阻止血液凝固。
通过检测这种物质的含量,可以评估血液抗凝系统的功能。
血凝抑制试验在临床上应用广泛,可用于检测和诊断各种凝血性疾病和免疫系统疾病,如血友病、系统性红斑狼疮等。
血凝及血凝抑制试验在医学领域中具有广泛的应用价值。
对于医生来说,了解血凝现象和血凝抑制试验的原理和应用,可以更准确地诊断和治疗各种血液疾病和血栓性疾病。
随着科学技术的不断发展,血凝检测技术和方法的不断完善和提高,其在医学领域的应用也将越来越广泛和重要。
本文将探讨定向遗忘中提取抑制的机制,并分析其成功提取引起抑制的案例。
简要介绍定向遗忘和提取抑制的概念,然后介绍基础知识点,包括抑制遗忘和提取抑制的作用。
接下来,详细介绍定向遗忘中提取抑制的机制,最后分析一个实际案例,阐述该机制的成功应用。
当我们遇到一个新概念或事物时,通常需要对其进行记忆。
然而,记忆并不总是准确无误的,有时甚至会遗忘某些信息。
定向遗忘便是一种有目的地遗忘特定信息的记忆过程。
与此当我们试图回忆某些信息时,也会受到抑制的影响,导致信息无法成功提取。
提取抑制是一种自我保护机制,可以避免不必要的回忆,从而减轻大脑的负担。
血凝试验(HA)定义:某此病毒或病毒的血凝素,能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集,这种凝集红细胞的现象称为血凝(hemagglutination,HA),也称直接血凝反应,利用这种特性设计的试验称血凝试验(HA)血凝抑制试验(HI)定义:当病毒的悬液中先加入特异性抗体,且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素,则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。
这时红细胞的凝集现象就被抑制,称为红细胞凝集抑制(hemagglutination inhibiion,HI)反应,也称血凝抑制反应,利用这种特性设计的试验称血凝试验(HI) 。
原理:特异性抗体与相应病毒结合,使病毒失去凝集红细胞的能力,从而抑制血凝现象。
用于禽流感、新城疫等具有血凝性病毒的鉴定根据抗原与相应抗体的特异性中和反应原理,给未知病毒悬液中加入已知的抗禽流感病毒阳性血清或已知的抗新城疫病毒阳性血清,相应病毒便丧失了其凝集红细胞的能力。
因此,可利用从发病的鸡、鸭、鹅体内分离的病毒作HA和HI试验。
病毒悬液能凝集红细胞,并且能被已知的抗血清(阳性血清)所抑制,那么该病毒即是已知阳性血清相对应的病毒。
如用新城疫阳性血清完全抑制了未知病毒培养物的血凝性,那么,这个未知病毒培养物就是新城疫病毒;如果病毒悬液虽然能凝集鸡红细胞,但不能被鸡新城疫血清所抑制,说明不是鸡新城疫病毒,可能是其他有血凝性的病毒。
阿氏(Alsevers)液配制称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g,加蒸馏水至100mL,散热溶解后调pH值至6.1,69kPa 15min高压灭菌,4℃保存备用1%鸡红细胞液的制备2.1采血用注射器吸取阿氏液约1mL,取至少2只SPF鸡(如果没有SPF鸡,可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡),采血约2~4mL,与阿氏液混合,放入装10mL 阿氏液的离心管中混匀。
2.2 洗涤鸡红细胞将离心管中的血液经1500~1800 r/min 离心8分钟,弃上清液,沉淀物加入阿氏液,轻轻混合,再经1500~1800 r/min离心8分钟,用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜,再重复2次以上过程后,加入阿氏液20 mL,轻轻混合成红细胞悬液,4℃保存备用,不超过5天。
血凝抑制试验结果判断 [血凝血凝抑制试验说明书]鸡新城疫血凝与血凝抑制实验鸡新城疫血凝(ha)及血凝抑制(h1)试验基本原理:许多病毒表面具血凝素,具有凝集某些动物或人红细胞的特性,称为血凝现象,可用于鉴定病毒。
血凝现象可以被特异性抗体所抑制,称为血凝抑制现象,利用这种特性可进行血清学试验,称为血凝抑制试验。
器材及试剂:待检病毒:鸡新城疫病毒鸡胚尿囊液;待检血清:抗鸡新城疫病病毒阳性血清;生理盐水/pbs、1%鸡红细胞、96孔v形微量血凝板、加样器等。
实验步骤pbs的配制:1%鸡红细胞的配制:(一)血凝试验(ha)取96孔板,按以下步骤操作:1、第一排1-12孔各加生理盐水50ul,第二排1-12孔加生理盐水50ul为红细胞对照;2、吸50ul病毒液于第一排第1孔,混匀后取50ul至第2孔,依次稀释至第12孔,弃去50ul,各孔经倍比稀释后稀释度依次为2-1~2-12。
3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul,微型震荡器震荡2min混匀。
4、室温静置10-30分,观察结果(见下表)。
5、结果判定:红细胞对照组红细胞完全沉降,以试验排中能使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数,作为病毒的血凝价,即hi效价,用2n表示。
(二)四单位检测:(三)血凝抑制试验(hi)取一96孔板,按以下步骤操作:1、4个单位抗原的制备:按ha试验测出的病毒血凝价除以4即为4个单位血凝素的稀释度。
2、待检血清的稀释:第一、二、三排1-12孔各加生理盐水50ul,于第一排第1孔中加入50ul待检血清,反复吹吸3-5次混匀后,取50ul至第2孔混匀,吸取50ul至第3孔,依次稀释至第12孔,弃去50ul,经倍比稀释,血清的稀释倍数为21~212。
3、第一、二排1-12孔各加4个单位血凝素50ul,微量震荡器震荡2min混匀;4、室温静置20min;5、第一、二、三排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul,微量震荡器震荡2min混匀混匀。
hi 血凝抑制试验原理血凝抑制试验原理血液是人体内非常重要的液态组织,起着运输氧气、营养物质、代谢产物等多种生理功能。
为了维持正常的生理功能和防止出血,血液中含有一种重要的物质——血小板。
血小板在血液凝固中起着至关重要的作用,能够聚集在出血创面,形成血栓,阻止出血。
然而,当血液中某些异常物质增多或凝血酶活性异常时,会导致血小板过度聚集,进而影响血液凝固的正常过程。
为了测试凝血抑制的功能,研究者发展出了一种被称为“血凝抑制试验”的实验,用来测量凝血抑制的能力。
这项试验主要通过观察某种物质的影响,来判断血液凝固过程中的各个环节是否正常。
在这个实验中,通常使用的是血小板功能阻抑试剂和凝血酶激动剂,来模拟凝血抑制和激动的环节,进而观察它们对血小板聚集的影响。
血凝抑制试验的原理主要有以下几个方面:1. 血小板聚集抑制试验:在这一步中,需要测试某种物质对血小板的聚集抑制能力。
通常,使用ADP、胶原蛋白和花生四烯酸等物质来刺激血小板的聚集。
通过添加阻抑试剂如抗凝剂和抗血小板聚集试剂,观察其对血小板聚集的影响。
比如,阻抑剂能够调节血小板膜上的G蛋白激活,从而减少血小板聚集。
2. 凝血酶抑制试验:在这一步中,需要测试某种物质对凝血酶生成的抑制能力。
凝血酶是血液凝固过程中的一个重要环节,它能够促进血小板聚集和纤维蛋白生成,从而形成血栓。
但是,在一些疾病或药物作用下,凝血酶生成过程受到抑制,阻碍了正常的血液凝固。
因此,在血凝抑制试验中,需要观察某种物质对凝血酶生成的抑制作用。
通常,使用抗凝剂和抗凝酶来抑制凝血酶的生成,然后观察其对血凝过程的影响。
血凝抑制试验在临床医学中具有重要的意义。
通过进行这项实验,可以判断血液凝固功能的异常,为临床医生提供治疗方案的指导。
例如,对于一些血小板聚集功能异常的患者,可以通过观察抑制试剂对其血小板的作用,来确定诊断和治疗的方案。
同时,通过测试凝血酶的生成抑制情况,也可以判断某些患者的凝血功能是否正常,为临床治疗提供指导。
实验三血凝和血凝抑制实验一、实验目的与要求掌握血凝和血凝抑制实验操作及应用二、实验内容H5亚型猪流感抗体检测与分析三、实验步骤(一)血凝(HA)试验1、用微量移液枪在微量反应板的第一排1-12孔均加入50μLPBS,换枪头;2、吸取50μL抗原,加入第一孔,反复吹打5次混匀;3、从第一孔吸取50μL加入第二孔,吹打混匀吸取50μL加入第三孔,如此稀释至第11孔,从第11孔吸取50μL丢弃,第12孔作为红细胞对照;4、各孔均加入50μL0.5%鸡红细胞悬液(已充分摇匀);5、轻轻混匀,室温25℃静置20min观察结果;(二)血凝抑制(HI)试验1、血清样品处理:先加150μL胰酶溶液于300μL血清中,56℃水浴灭活30min 后冷却至室温;加900μL高碘酸钾,混合,室温孵育15min;加900μL丙三醇盐溶液,混合,室温孵育15min;加750μL生理盐水混合,4℃保存;2、根据HA试验中测定的HI抗原效价配制4单位抗原;3、在微量反应板第5-8排的2-11孔加入25μLPBS,第12孔加入50μLPBS;4、吸取50μL血清(编号为2-4血清、阳性血清、编号为1-4血清、阴性血清)加入第1孔,混匀后吸取25μL于第二孔,混匀后吸25μL于第三孔,依次稀释至第11孔,第11孔混匀后弃去25μL;5、各排前11孔均加入4单位抗原25μL,第12孔作为红细胞对照,室温下25℃静置30min;6、各孔均加入50μL0.5%的鸡红细胞悬液混匀,轻轻摇匀,室温下25℃静置30min。
四、实验结果及分析血凝(HA)试验,从第三个孔开始显示“滴泪”第一排为阳性对照第二排为阴性对照第三排,血清5-6第四排,血清6-6参考文献[1]GB/T 27535-2011,猪流感HI抗体检测方法[S].。
血凝抑制试验原理
血凝抑制试验是一种检测抗凝血功能的实验方法。
其原理是通过观察某种物质对血液凝固过程的影响,来判断该物质的抗凝血效果。
在血凝抑制试验中,首先从受试者的静脉或指尖采集一定量的新鲜全血。
然后将血液放入一种试验管中,加入适量的抗凝剂,如肝素或柠檬酸钠。
接下来,加入激动剂,如胶原或凝集素,以促使血液开始凝固。
同时,加入需要测试的抗凝物质。
血液开始凝固时,血小板会聚集并黏附在血管内壁上,最终形成血凝块。
然而,如果所加入的抗凝物质具有抗血凝的效果,它会阻止血小板的聚集和凝血因子的活化,从而抑制了血凝块的形成。
观察试管内的血液变化,若血液凝聚程度较低或完全没有凝结,则说明所测试的物质具有良好的抗凝效果。
相反,如果血液凝聚程度较高,则说明该物质对血凝过程没有明显的抑制作用。
血凝抑制试验广泛应用于临床诊断和药物研发领域。
通过检测不同物质对血液凝固的影响,可以评估患者的凝血功能,判断其是否存在凝血系统的异常。
同时,该试验也为开发新型抗凝药物和评估其抗凝效果提供了重要的参考依据。
血凝血抑实验操作方法
血凝血抑实验是用于检测血液中凝血系统的功能活性以及血管壁退行性变的一
种实验方法。
以下是一般的血凝血抑实验的操作方法:
1. 准备实验材料:新鲜的血液样本(采集静脉全血,使用无抗凝剂采血管),离心管,血小板计数管,玻璃片,25ml量瓶,10ml吸管,实验药物(如凝血因子和抗凝剂),计时器等。
2. 静脉全血采血:无菌条件下,采用无抗凝剂采血管从肘静脉采集血液样本。
要确保血液样本无抗凝剂,否则可能会影响实验结果。
3. 离心采血管:将静脉全血样本转移到离心管中,进行离心,用离心管分离血浆和红细胞。
4. 准备血浆:将离心后的上清液(血浆)转移到另一个离心管中,避免污染。
5. 凝血时间测定:取一份血浆加入25ml量瓶中,并在37水浴中预热。
同时,另取一份新鲜全血作为对照。
用吸管将凝血药物垂直加入含血浆的25ml量瓶中,计时器计时,观察血浆的凝固时间。
6. 凝固酶测定:将凝血酶加入血浆中,搅拌均匀后,记录酶加入后的凝固时间。
7. 抗凝物质测定:分别加入抗凝物质(如肝素)到血浆中,搅拌均匀后,记录凝固时间。
8. 结果分析:根据实验结果,可判断凝血系统的功能活性以及抗凝系统的功能活性。
较长的凝血时间可能暗示凝血系统功能较差,而较短的凝血时间可能暗示凝血系统功能较好。
需要注意的是,血凝血抑实验是一种较为复杂的实验,需要在严格的实验条件下进行,并且实验药物的使用应遵循安全操作规范。
此外,实验结果需要结合临床病史和其他检查结果进行综合判断。
血凝抑制试验判定标准《血凝抑制试验判定标准大揭秘》嘿,朋友们!你们知道吗?在医学这个神奇的领域里,就如同超级英雄要有自己的超能力准则一样,血凝抑制试验也有它至关重要的判定标准!这可不得了啊,如果不搞清楚这些标准,那简直就像是在医学的迷宫里乱转,找不到正确的方向!所以啊,赶紧跟着我一起来揭开这神秘的面纱吧!一、“清晰界限:阳性与阴性的楚汉河界”哇塞,在这个小标题下呀,我们可以说“阳性和阴性可不是能随便混淆的呀,它们就像是楚汉两边,界限分明得很呐!”血凝抑制试验中,阳性和阴性的判定可是关键中的关键。
阳性意味着存在相应的抗体或抗原,就像找到了宝藏的线索;而阴性则表示没有发现目标,可不能稀里糊涂地搞错啦!比如说,如果我们检测某种病毒的抗体,阳性结果可能就提示我们曾经感染过或者已经有了免疫力,阴性则可能需要进一步排查。
就好像在一场侦探游戏中,阳性是找到关键证据,阴性则是还需要继续努力寻找线索呢!二、“稀释倍数的魔法:恰到好处的平衡”嘿呀,这稀释倍数可真是个神奇的东西啊,简直就是魔法一般的存在!“稀释倍数就像是走钢丝,要找到那个刚刚好的平衡点,不然可就掉下去啦!”在血凝抑制试验中,稀释倍数的选择非常重要。
如果稀释倍数太低,可能会导致结果不准确,就像给魔法施加了过多的力量,一下子就失控了;而如果稀释倍数太高,又可能会错过重要的信息,如同魔法太微弱,根本发挥不出作用。
举个例子,当我们检测血清中的抗体时,需要根据具体情况选择合适的稀释倍数,这样才能准确地判断出抗体的水平。
就像是在调制一杯魔法药水,多一点或少一点都不行哦!三、“重复性的坚守:稳定的基石”哇哦,重复性这个家伙可太重要啦!“重复性就像是盖房子的基石,必须稳稳当当的,不然房子可就要塌啦!”血凝抑制试验的结果需要具有良好的重复性,这是保证结果可靠的关键。
不能这次是这样,下次又变了个样,那可不行!就好像我们每天走同一条路,如果今天路在这里,明天路又跑到别的地方去了,那岂不是要迷路啦!所以,在进行试验时,要严格按照标准操作,确保每次的结果都能保持一致。
血凝抑制实验报告10篇血凝抑制实验报告11 阿氏(Alsevers)液配制称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g,加蒸馏水至100mL,散热溶解后调pH值至6.1,69kPa 15min高压灭菌,4℃保存备用。
(3.8%枸橼酸钠(3.8g枸橼酸钠,100ml超纯水),101 kPa,20min高压灭菌,4℃保存备用,保存期1个月)。
2 10%和1%鸡红细胞液的制备2.1采血用注射器吸取阿氏液约1mL(3.8%枸橼酸钠),取至少2只SPF鸡(如果没有SPF鸡,可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡),采血约2~4mL,与阿氏液混合(3.8%枸橼酸钠),放入装10mL 阿氏液(生理盐水)的离心管中混匀。
2.2 洗涤鸡红细胞将离心管中的血液经1500~1800 r/min 离心8分钟,弃上清液,沉淀物加入阿氏液(生理盐水),轻轻混合,再经1500~1800 r/min 离心8分钟,用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜,再重复2次以上过程后,加入阿氏液20 mL(生理盐水),轻轻混合成红细胞悬液,4℃保存备用,不超过5天。
2.3 10%鸡红细胞悬液取阿氏液保存不超过5天的红细胞,在锥形刻度离心管中离心1500~1800 r/min 8分钟,弃去上清液,准确观察刻度离心管中红细胞体积(mL),加入9倍体积(mL)的生理盐水,用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞混合均匀。
(此步可省略,直接配制1%红细胞)2.4 1%鸡红细胞液取混合均匀的10%鸡红细胞悬液1 mL,加入9 mL生理盐水,混合均匀即可。
(根据检测血清的数量,估算一下需要的1%鸡红细胞量,可按0.3ml/每份血清)3 抗原血凝效价测定(HA试验,微量法)3.1 在微量反应板的1孔~12孔均加入25μl PBS(生理盐水),换滴头。
3.2吸取25μl抗原加入第l孔,混匀。
3.3从第1孔吸取25μl,病毒液加入第2孔,混匀后吸取25μl加入第3孔,如此进行倍比稀释至第11孔,从第11孔吸取25μl 弃之,换滴头。
血凝抑制实验报告【导语】实验报告是把实验的目的、方法、过程、结果等记录下来,经过整理,写成的书面汇报。
以下是文库小编整理的血凝抑制实验报告,供大家借鉴!【篇一】血凝抑制实验报告禽流感血凝和血凝抑制试验可用于血清中抗体水平的监测,也可用于判断未使用疫苗群体的感染状态等。
该试验是目前世界卫生组织和国际动物健康组织进行全球流感监测所普遍采用的方法,而且因其具有经济、快速、可靠、操作简便、能够处理大量的样品,并能在短时间内报告禽流感抗体水平等优点,已经成为当前基层兽医实验室禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。
但因该试验受人为操作影响较大,经常因操作不规范、不严谨等造成结果偏差大、重复性差等问题,现根据几年来的工作经验对该试验过程中应注意的事项做一探讨。
一、血凝试验操作程序1、取96孔90°V形酶标板,用微量移液器在第一至第五排的1~12孔每孔加25μLPBS液。
2、吸取25μL标准禽流感抗原加入到第一排第1孔中充分混匀。
3、从第1孔吸取25μL混匀后的抗原液加到第2孔中,混匀后吸取25μL 加入到第3孔中,依次进行倍比稀释至第二排最后一孔即第24孔,最后弃去25μL。
第三排孔至第四排孔同上操作。
4、依次向第一至第五排孔的每孔中加入25μL1%的鸡红细胞悬液。
5、将酶标板置于微量振荡器上振荡10秒,室温(20-25℃)静置30min 观察结果(如果环境温度太高,可置4℃环境下)。
6、结果判定:将板作45°倾斜,观察红细胞是否呈泪滴状流淌。
以完全凝集(不流淌)的抗原或病毒稀释倍数为1个血凝单位(HAU)二、血凝抑制试验操作程序1、根据血凝试验结果配制4HAU抗原。
(即1HAU抗原除以4)2、取96孔V形酶标板,用移液器在第1~12孔各加入25μLPBS。
3、在第1孔加入25μL被检血清,充分混匀后移出25μL加至第2孔,依次类推,倍比稀释至第12孔,弃去25μL。
4、按以上步骤加入阳性血清和阴性血清(各做两份),作对照孔。
血凝抑制实验报告三篇(经典版)编制人:__________________审核人:__________________审批人:__________________编制单位:__________________编制时间:____年____月____日序言下载提示:该文档是本店铺精心编制而成的,希望大家下载后,能够帮助大家解决实际问题。
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影响禽流感血凝抑制试验因素的分析
及解决方法
摘要:在试验过程中,存在很多的因素会直接影响禽流感血凝抑制试验,从而导致试验结果不正确等现象出现,
禽流感病毒能够与鸡红细胞发生凝集现象,这种红细胞凝集现象可被特异性免疫血清所抑制,即红细胞凝集抑制实验(HI)。
基层工作中常用于新城疫、禽流感等免疫抗体的检测,辅助诊断病毒性疾病等,此方法操作简便、快速、准确、实用,但在实践中也常常由于某些因素的影响,从而使试验结果不精确,有时甚至无法判定结果。
1血凝试验原理和方法
血凝(直接血凝)反应(HA):利用病毒或病毒的血凝素,能选择性凝集动物红细胞及病毒浓度与红细胞凝集程度呈正相关的特性,采集敏感的动物红细胞配制成1%红细胞悬液与待测定的病毒液在微量血凝板上进行红细胞凝集实验,根据红细胞的凝集程度间接测定病毒中的病毒浓度。
方法是用鸡红细胞与标准抗原作用,检测出标准抗原血凝单位,为血凝抑制试验作准备。
2影响血凝试验的主要因素
2.1被检血清腐败变性
被检血清腐败变性严重影响免疫抗体检测。
因此,血样采集后要及时分离血清,分离后及时测定或放臵在4℃冰箱内保存,要力求新鲜,如暂时不测定可冷冻保存。
血清使用前要充分摇匀。
2.2不同来源、不同浓度的红细胞
不同来源、不同浓度的红细胞会使结果差异很大,所以红细胞来源一定要相同。
一般需要3只或3只以上公鸡来提供红细胞,将3只以上公鸡红细胞混合在一起。
也可由1只公鸡来提供红细胞,但必须经多次试验证明是可行的。
有抗体鸡提供的红细胞需要更多次数洗涤。
但要注意有时不同的公鸡提供的红细胞对禽流感H5亚型抗体测定,效价差异很大。
不同浓度的红细胞对抗体测定也有影响。
2.3病毒悬液和红细胞悬液在使用前没有摇匀
病毒悬液和红细胞悬液如没有摇匀,加入时浓度高低不一,会人为造成误差。
因此抗原和红细胞使用前一定要摇匀,保证每一孔中加入的浓度准确一致。
2.4 4个血凝单位(HAU)抗原配制不准确
4个HAU抗原要现用现配,混悬液要混匀,配好的抗原室温下放臵不得超过4个小时,不可反复冻融。
为防止4个HAU抗原配制不准确.在作HI试验前必须做4单位抗原校正。
用微量移液器向反应板的第二孔至第五孔加生理盐水各25微升,第一孔不加。
用微量移液器吸取4单位抗原25微升分别加入第一孔、第二孔中,从第二孔开始挤压4-6次混合,然后吸出25微升至第3孔,依次倍比稀释到第4孔,弃去25微升,第五空为对照空。
用微量移液器再吸取1%红细胞悬液依次加入1-5孔,每孔25微升。
于微量振荡器上振荡1分钟。
室温静臵20-30分钟后观察结果。
若第一、二、三孔为完全凝集,第四孔红细胞为50%沉淀,第五孔为对照完全沉淀,如果出现以上结果,表明所配4单位抗原准确,校正成立。
否则,需重新测定抗原效价,重新配制4个HAU抗原,并作4单位抗原校正,直至结果准确。
2.5 适量配制4单位抗原和1﹪红细胞
配制好的4单位抗原在2-8℃保存条件下,3天内效价基本无变化,1﹪红细胞在2-8℃保存条件下,3天内不会发生溶血。
超过3天,4单位抗原和1﹪红细胞会因自身效价降低和溶血而影响实验结果。
因此,每次实验前要根据待测样品数量计算一下本次实验需要多少的4单位抗原和1﹪红细胞,适当配臵,避免因多配而引起浪费。
2.6温度
温度对实验结果也有影响,一般要求在室温25-37℃进行实验,当温度过高,超过37℃以上时,会使反应结果解脱加快,易发生病毒解离,这样,反而阻止反应;当实验温度低于4℃时红细胞有时会发生自凝现象。
2.7微量血凝板的清洁
微量血凝板的清洁度对试验结果有很大的影响。
微量血凝板清洁的正确程序为首先用自来水反复冲洗,然后于1%-2%的稀盐酸中浸泡24h以上,再用自来水反复冲洗2-3次,最后经蒸馏水浸泡24h后37℃烘干备用。
3常见结果现象分析
3.1对照孔凝集现象
3.1.1盐类凝集:所谓盐类凝集即稀释液中氯化钠达至一定高浓度时,即使没有血清抗体也能发生凝集反应。
3.1.2当生理盐水被细菌污染时也可出现对照孔凝集。
3.1.3血清变质或受细菌污染时也可以出现对照孔凝集。
3.2.全部凝集
3.2.1 当红细胞受细菌污染或保存时间过长可出现此现象。
3.2.2 抗原滴加时出现失误,工作抗原效价过高。
3.2.3生理盐水受细菌污染或其它因素。
3.3红细胞全部下滑
3.3.1当配制抗原时,配制工作抗原效价过低,不足以凝集鸡红细胞。
3.3.2加样时所有孔全部加成生理盐水亦出现全部下滑现象。
4 HA-HI试验操作中应注意的问题
4.1可根据待检样品的多少和操作者的熟练程度来选定移液器。
血凝抑制试验中最常见的是跳孔现象(如第3孔和第5孔均出现血凝抑制,而第4孔却出现凝集),使结果无法判定。
微量法的特点是节省抗原,测样多,如用多头移液器可同时检测几个血样,但要求操作者认真熟练,否则会有一定误差。
4.2在微量法中移液工具的准确度直接影响试验结果。
若移液枪使用不当对试验结果有较大影响,应用这种器具前每次都应校准吸液量并将刻度固定好,注意把每个吸头安装牢固密封,操作时手压下的力度均匀,否则移液量偏差,造成结果不准确。
4.2.1移液枪下压时有二个阻力位臵,压下时第一个即为标准刻度的量值,再加力压的第二个阻力位臵为放液时用的位臵。
因此,不要在吸取时将移液枪重力压入第二个阻力位臵,特别是在V型孔中稀释时,有时重压有时轻压,使试验用液吸入不准造成试验结果不准确。
现在都使用多头微量移液器代替单道移液器进行实验操作,以提高工作效率,但应用这种器具前每次都应校准吸液量并将刻度固定好。
注意把每个吸头安装牢固密封,操作时手压下的力度均匀,否则移液量偏差,造成结果不准确
4.2.2移液枪在96孔V型板的试验使用中,不要紧靠V孔底部,可能会影响液体正常吸入,造成试验液量偏少。