7[1].2.2_克隆技术

2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体【作业】一、选择题1.关于动物细胞融合的说法，不正确的是()A．动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程B．动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞C．常用的诱导动物细胞融合的因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电激、紫外线照射D．细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能解题分析A项为动物细胞融合的含义；B项是融合后细胞的特点；C项中紫外线照射常用于人工诱变，可诱发基因突变，而不是诱导细胞融合的因素，常用的诱导动物细胞融合的物理因素是离心、振动和电激；D项为动物细胞融合的意义。

答案 C2.动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是()A．诱导融合的方法完全相同B．所用的技术手段完全相同C．所采用的原理完全相同D．都能形成杂种细胞解题分析两种细胞工程所用的技术手段不完全相同，植物体细胞杂交时要先去除细胞壁后诱导原生质体融合，而动物细胞融合时，要先使细胞分散后再诱导细胞融合，B错误；诱导的方法，除动物细胞的融合常用灭活的病毒作诱导剂外，其他的二者基本相同，A错误；二者采用的原理不同，动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性，最终形成的是杂交细胞，植物体细胞杂交还用到细胞的全能性，最终形成杂种植株，C错误。

答案 D3.动物细胞融合属于动物细胞工程的技术手段之一，下列有关动物细胞融合的叙述正确的是()A．动物细胞融合产生的细胞称为重组细胞B．融合后形成的细胞为单核或多核细胞C．常用的诱导融合的生物诱导剂是聚乙二醇、灭活的病毒等D．也称细胞杂交，可由两个或多个动物细胞结合成一个细胞答案 D解析动物细胞融合产生的细胞称为杂交细胞，核移植产生的细胞称为重组细胞，A错误；融合后形成具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，B错误；诱导动物细胞融合的生物诱导剂是灭活的病毒，聚乙二醇属于化学诱导剂，C错误；动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，D正确。

贴壁细胞培养1.细胞凋亡的检测：2.细胞增殖抑制：一、克隆形成抑制试验克隆形成实验是测定单个细胞增殖能力的有效方法之一，其基本原理是单个细胞在体外持续增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为克隆（集落），这时的每个克隆可含50个以上的细胞，大小在0.3-1.0 mm之间。

通过克隆形成实验，可对单个细胞的增殖潜力做出作定量分析，了解细胞的增殖力和对生存环境的适应性。

这种方法常用于抗癌药物敏感性实验、肿瘤放射生物学实验等。

常见的有平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验。

平板克隆形成实验本法适用于贴壁生长的细胞，包括培养的肿瘤细胞和正常细胞。

1.用品：含15 %新生牛血清的RPMI-1640培养液（15 ml/组，16组）、PBS、0.25%胰酶、甲醇：冰醋酸、细胞染色液（吉姆萨、甲基绿、刘氏染液）、相机12孔板（6孔板），EP管，滴管。

小瓶。

5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil, 5-FU）注射液（江苏南通精华制药有限公司），用无菌生理盐水配制成100 μg/ mL溶液，使用前稀释至所需浓度。

16支，EP管分装，每支1ml。

2.操作：第一天：上午8:10，下午2:30①.制备细胞悬液：取对数生长期结肠癌SW620细胞，用0.25%胰酶消化并吹打成单个细胞，含15%血清的RPMI-1640培养液倍比稀释到所需的体积，使细胞密度为3×102个/mL，接种于12孔板，1000 μL/孔。

（可用滴管）PBS过一遍，加消化液1ml。

弃消化液（可用滴管），10 %培养液2ml（枪）冲洗细胞，再用枪吸出0.5ml，至另一个小瓶，加3ml 10 %培养液，mix，（摇15次，吹打15次），取100ul到EP管，mix10次，取10ul，准确记数。

倍比稀释根据上述浓度，（吸出1ml，至EP管，原来小瓶的液体，滴管吸走（不要），EP 管中的1ml细胞再一次吸到小瓶中（枪），用枪加2 ml的10 %培养液。

OCCUPATION163职 业计算机局域网如何实现PXE网络克隆文/李明祥一、工具包含的文件Tftpd32.exe：DHCP服务器和TFTP服务器软件，放置于网络克隆的服务器上，用于给网络克隆的客户端分配IP地址和传送启动文件。

GhostSrv8.2.exe：GHOST服务器端软件，用于网络克隆的备份和恢复。

网吧专用网络克隆使用说明.doc：使用说明文件。

二、工具系统运行的环境第一，要有良好的网络环境，网线、交换机无故障。

第二，网络克隆服务器可以是网络内的任何一台计算机，系统可以是Windows XP/2000/20003。

GHOST备份文件放在这台电脑上。

第三，客户机一定支持PXE启动，可以是带PXE启动ROM的主板网卡，也可以是带PXE启动的独立网卡，不需要软驱、光驱、U盘启动。

三、工具使用的软件工具以RAR压缩包（MSI.rar）的形式提供，要解压缩到准备用作网络克隆服务器上，如图1所示。

１．ｔｆｔｐｄ３２．ｅｘｅ这是DHCP服务器和FTP服务器软件。

DHCP服务器负责给客户端分配IP地址。

FTP服务器负责向用户端传送启动文件和GHOST软件。

２．ＧｈｏｓｔＳｒｖ．ｅｘｅ这是GHOST服务器端软件，负责向客户端传送映像文件。

３．ｍｓｉ．ｐｘｅ微星PXE启动菜单。

４．ｍｓｉ．ｓｙｓ微星客户端启动文件和GHOST软件包。

四、使用工具网络克隆的步骤第一步：配置服务器端的IP地址、子网掩码、网关；第二步：启动tfptd32，设置DHCP服务器；第三步：启动G h o s t S r v ，设置G H O S T 映像文件路径、GHOST模式等第四步；客户端开机设置BIOS；第五步：PXE网络启动客户端；第六步：回应GHOST提示，开始GHOST。

五、网络克隆的步骤详解１．配置服务器端的ＩＰ地址、子网掩码、网关每组网络克隆的客户机和服务器最好是在同一台交换机内，并且该交换机要与主交换机断开，检验作为服务器的电脑是否配置I P 地址等项。

胞 株
传代10-50代左右，增长缓慢以 至于完全停止，部分细胞核型可 能发生变化（遗传物质可能改变）40-50代细胞 继续传代培养少部分细胞获得 不死性，细胞突变，遗传物质 已经改变，等同于癌细胞。无限传代细 来自 系4、动物细胞培养条件
无菌、无毒的环境
离体培养的细胞对微生物和 有毒物质没有防御能力。 保证细胞顺利 的生长增殖
胰蛋白酶处理 单个细胞
细胞培养
动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础
增殖能力强，分裂旺盛，分化程 度低，容易培养
动物组织细胞间隙中含 胚胎或幼龄动物器官组织 有一定量的蛋白质，将 取出组织 细胞网络起来形成具有 一定弹性和韧性的组织 剪碎 分散成细胞悬浮液利于培养 胰蛋白酶处理 和器官。
单个细胞 细胞悬液
2、下列属于动物细胞工程中的工具是 （ C） A．限制性内切酶 B．DNA连接酶 C．胰蛋白酶 D．果胶酶
3、下列属于动物细胞培养与植物组织培养 主要区别的是 A A.培养基成分不同 B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行 C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能 D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能 培养成植株
人耳鼠
在京展出的数天，尽管门票高达20元，但还是有将近20 万人，心甘情愿地掏钱一睹“人耳鼠”的风采。
人耳鼠的出现，透露了怎样的信息？
一、动物细胞培养
发展历史:
20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的 细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他 细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈 的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harrison) 从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝 固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周， 并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不 仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织 培养的先河。此后，在许多科学家的不懈努力下，动 物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。