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细胞学的常规制片方法(课堂PPT)

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细胞学教学课件PPT课件

细胞学教学课件PPT课件
第39页/共58页
一、良性病变脱落细胞 1、脱落的正常间皮细胞
间皮细胞被覆于胸膜、心包膜、腹
膜面，属于单层扁平上皮。
脱落的间皮细胞呈圆形或椭圆形，核 居中央或略偏位。多为单核，少数为双 核或多核，分散排列，无聚集现象。可 见正常核分裂象。
第40页/共58页
正常间皮细 胞
第41页/共58页
2、退化变性（退变）的间皮细胞
第28页/共58页
（二）柱状上皮
纤毛柱状上皮：圆锥形，顶宽有纤
毛，核位于中下部，可见12
个小核仁。
黏液柱状上皮：卵圆形、圆柱状， 胞
浆淡而透明，核位于中下部，
如细胞内含大量黏液时，核
被
第29页/共58页
纤毛柱状上皮
宫颈涂片黏液柱状上皮
第30页/共58页
核异质细胞(又称非典型增生细胞)
核异质细胞
第9页/共58页
细胞涂片方法：
涂抹法：用棉签或针头将标本单向、均匀地涂抹 于载玻片上。
拉片法：将一滴检材置于一张载玻片上，再用另 一张载玻片叠加其上并予轻压，再将该两张载 玻片朝反向拉动，从而获得两张涂片。
推片法：将一滴检材置于载玻片的右端，再用另 一张窄边光滑的载玻片作为推片，并以与滴液 载玻片成400夹角，自右向左均匀推动检液， 形成涂片。
第1页/共58页
二、细胞学检查的应用范围
细胞学标本的类型 1、自然脱落细胞 (脱落细胞)：
用于体腔积液，痰、尿、宫颈、阴道、乳头溢 液、前列腺等排出物的检查。 2、细针穿刺吸取细胞：
普通细针穿刺主要用于体表肿块的诊断， 如：甲状腺、皮肤肿物，肿大的淋巴结等。
活检切割针在B超、CT引导下穿刺深部内脏器 官，用于肿瘤的诊断（获取的组织主要用于切片， 液体用于涂片）。

脱落细胞学制片

脱落细胞学制片

• 离心后倒去上清液，将试管倒立在卫生纸上
• 吸出沉淀
• 涂片
• 立即固定
5X 未经处理的胸水
5X 处理后的胸水
但是，经过处理的胸腹水细胞多多少 少总有褪变，因此，不是血液太多，细 胞成份太少，一般不采用破红细胞法。
脱落细胞制片的关键
立即固定： 当细胞涂片完成后，
应立即放入95%酒精液体内固定，至 于固定液：如甲醇、酒精乙醚液等 效果无明显差异。细胞的褪变主要 原因不是固定液的种类，而是在制 片过程中空气的氧化过程---干燥。
脱落细胞学制片
浙江大学医学院附属第一医院 丁伟
痰
• 采集： 颗粒状痰、血丝、血痰、泡 沫痰、黄痰、铁锈痰 • 制片 拉片 • 固定 95%酒精 30-60分钟 • 染色 HE染色
固定、染色
1、放入95%酒精固定30-60分钟以上。 2、从固定液拿出后，不经水洗，立即放入 苏木素染色3-5分钟。（苏木素最好专用， 痰 涂片不能与胸腹水等涂片一同染色， 以防污染） 3、水洗。 4、1%盐酸酒精分化。
固定30分钟后，用尖头的硬签轻轻将沉淀物挑出
• 常规脱水
• 包埋
细胞团块切片外貌
细胞团块切片
细胞切片 CD3
细胞切片 CD45RO
细胞量少的话可以加入琼脂: （1）取底部沉淀样本，2000转/分，离心5分钟；如细胞 量少，可重复离心。 （2）吸干上清液，离心沉渣用10%中性福尔马林固定1小 时。 （3）吸出沉淀及少量固定液放于锥形离心管中。 （4）2000转/分离心15分钟，吸去上清液，轻轻斜置试管， 用吸水纸或棉签吸去多余的液体。 （5）滴加少许已经融化的琼脂，摇动试管使其充分混合， 并将试管放入冰箱冷藏20分钟，待混合液呈凝胶状。 （7）用尖头的硬签挑出锥形的琼脂块，切去多余的琼脂。 （8）放入脱水盒，用10%中性福尔马林液，固定2小时， 常规脱水程序内处理。

细胞生物学：常规制片技术

细胞生物学：常规制片技术

Carnoy氏液
配方：纯酒精 60 ml；冰醋酸 10 ml；氯仿（三氯乙酸） 30ml。 此液渗透迅速。适用于一般 细胞学研究。固定后不经水洗， 即入95%酒精脱水或直接入纯酒 精，可缩短制片时间。
Zenker氏液
配方：升汞 5g；重铬酸钾 2.5g； 冰醋酸 5 ml；蒸馏水 100 ml。 为组织学、细胞学及病理学 常用的固定剂，多用于固定一般 组织。固定时间24小时，加热固 定可以加快渗透作用。固定后流 水冲洗12小时，并在以后的脱水 过程中除去汞盐沉淀。
注意事项
包埋时夹取组织的镊子，应随时烤热。 包埋操作要敏捷。 包埋后的蜡块应呈均质半透明状。 包埋恒温箱中的温度必须保持恒定。 若包埋后发现渗蜡不够，或包埋的不好， 可将蜡块熔化，重新渗蜡和包埋。

组织切片

切片机
制作组织切片标本必备的紧密仪器，可以 制出以微米为单位的薄切片。
种类 石蜡切片机 火棉胶切片机 冰冻恒温箱切片机

2.染色、脱水 （1） 苏木素染细胞核，5-30分钟。 （2） 自来水洗去浮色，流水冲洗20分钟。 （3） 1%盐酸酒精分色。 （4） 蒸馏水洗。 （5） 入1%伊红水溶液或酒精溶液复染110分钟。 （6 ） 按顺序经95%酒精I、II中脱水各1分 钟。 (7) 纯酒精I、II各2分钟。
1 3. 透明、封固 （1）1/2二甲苯1分钟。 （2）经二甲苯透明5分钟。 （3）加盖玻片封固。

透明剂的种类和使用方法
二甲苯 易挥发，无色透明液体，长期接触 对呼吸道粘膜有刺激作用。透明能力强，但易 使组织收缩、变脆，所以组织块在二甲苯中不 宜久留。
•
时间
二甲苯I、II各15-30分钟。
浸蜡和包埋

细胞学教学课件详解

细胞学教学课件详解

四、细胞学检查基本技术： （一）、细胞标本采集方法： １．肿瘤表面直接压片（印片）或刮片法：
宫颈、阴道、口腔、肛管、皮肤等
２．自然分泌液涂片：
痰液，前列腺液，乳头溢液等。
３．穿刺抽吸物涂片（粗针穿刺或细针穿刺） ４．体腔积液涂片。
穿刺抽液至少50ml以上，最好是200ml。
病变细胞采集器(一次性使用)
（一）阅片前了解病史注意结合临床表现 （二）阅片时认真、仔细、全面，防止遗漏， 有效标记阳性细胞。
细胞学诊断报告方式
（一）直接法 （二）分级法 改良巴氏五级分类法：ⅠⅡ Ⅲ Ⅳ Ⅴ （三）描述性诊断报告方式（TBS）
直接法细胞学诊断内容 应包括： 1、有无炎症或特异性炎症；
2、有无核异质细胞（轻、中、重）
3、有无恶性细胞
4、提出建议或提供参考意见（复查、
Hale Waihona Puke 随访、取活检）改良巴氏五级分类法 （多用于宫颈/阴道涂片）
Ⅰ级: 涂片内未见异常细胞(基本正常) Ⅱ级: 涂片内见异常细胞,但均为良性。 Ⅱa 轻度核异质细胞。 Ⅱb 中-重度核异质细胞,属癌前病变。 Ⅲ级: 可疑癌。须随访观察或复查。 Ⅳ级: 有癌细胞，但不典型，尚须证实。 Ⅴ级: 有癌细胞，形态典型。
宫 颈 外 、 内 基 底 细 胞
宫 颈 外 基 底 细 胞 和 炎 细 胞
宫 颈 外 基 底 细 胞 与 炎 细 胞
中层：上皮中部的棘细胞，有棘状 突起，体积较大,30-40um,卵 圆、菱形，胞浆丰富，核居 中，核浆比1：2-3。
中层 外基底层
表层
宫内膜腺细胞
各层上皮细胞
角化前细胞：角质层，梭形、多边 形，40-50um，胞浆丰 富，核小、居中、圆 形，核浆比1：3-5。

最新实验11生物显微制片技术PPT课件

最新实验11生物显微制片技术PPT课件
• 固定：用化学药液浸渍切成小块的新鲜材料，迅 速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细 胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化， 尽可能保持其活体时的结构。此外固定还有使组 织硬化作用，助染作用。此外还有物理方法如干 燥、高热和低温骤冷等方法固定。
• 洗涤与脱水：
• 洗涤：固定后的组织材料需除去留在组织内的固 定液及其结晶沉淀，以免影响以后的染色效果。多 以流水冲洗。
4.2 石蜡切片法（根、茎、叶）
• 显微观察，便于器官的立体重构。 • 硬质材料可用滑走切片机，一般可用手摇切片机。 • 程序：取材（0.5-1cm3）→固定（卡诺、FAA，2-24h，
材料有空气的需抽气） →洗涤（70%乙醇2次） →脱水 （80 % 、90、100、100%乙醇各0.5h）→透明（乙醇+ 二甲苯等量混合15min，二甲苯0.5h 2次）→透蜡（二甲 苯+石蜡各半35-37 ℃,0.5-48h ，石蜡56-60 ℃,0.5-1h 2 次）→包埋（凝30min）→切片（8μm，水面展开）→贴 片（涂粘片剂，滴水1滴）→展片（40-45℃）→烘干 （37 ℃，24h ）。
4 植物组织制片技术实例
4.1 徒手切片 重要的是切下一小片平而薄的组织，而不是切下完整的组织
片； 左手持材料或夹持物（莴苣茎、胡萝卜根、泡沫塑料等），
右手平稳持刀（刀片或手术刀），用臂力不用腕力； 刀刃平置经削平的平面上，轻轻压住刀片，以均匀的力量平
稳的动作，从刀刃的右侧斜向左侧切削，不可挤压材料或 拉锯式切割； 材料切面上和刀刃上保持有水，以免材料干枯； 切片可简易染色1-2min，0.1%亚甲基蓝，0.5%中性红，1% 番红（木质化细胞壁及核染成红色）I2-KI溶液（淀粉粒 蓝色，核呈黄色）

细胞学的常规制片方法

细胞学的常规制片方法
2．细针穿刺细胞用外径0.6mm-0.9mm细针头，10ml左右的一次性
空针管，做体表肿块穿刺，吸取少量细胞作涂片；内脏肿块穿刺应在B 超、X线或CT引导下，由放射科医师或其他临床科医师施行
(二)细胞学制片方法
• 制片的目的是将采集的细胞成分均匀置于载玻片上，以便镜下检 查。因此，涂片要求：
• 1、细胞涂布均匀，分布在载玻片一侧2/3范围内，其余l/3留作贴 标签；
拉片法
• 拉片法常选小滴状标本，置于两张载玻片之间，稍 加压力反向拉开，即成两张厚薄均匀的涂片。拉片 法制片可适用于痰、胸腹水和穿刺细胞标本。
推片法
• 推片法为血液科常用的涂片方法，即选一个边缘光 滑的载玻片做推片，并使推片与载玻片之间成40° 左右的夹角，将载玻片上的细胞标本匀速推动，做 成细胞涂片。常用于穿刺细胞和体液标本。应注意： 因癌细胞体积较大，常位于细胞涂膜的尾部，因此 推片时不要将尾部推出片外。
细胞学的制片方法与应用 范围
细胞学检查包括：标本采集、涂片、固定、 染色、封片、阅片等过程，其中细胞学制片
是诊断细胞学的基础。
细胞学标本采集的原则应尽量减少受检者的 痛苦，取得其合作；尽可能使方法简便、快 速，并能获取丰及时。
(一)细胞学标本类型
• 细胞学标本分脱落细胞和细针穿刺细胞两大类。
1．脱落细胞是指正常或病理情况下，自然脱落下 来的细胞，随分泌物、排泄物排除体外。恶性肿瘤的组织 细胞之间粘合力下降，加上常有出血坏死等情况，致使肿 瘤细胞更易脱落。这是脱落细胞学用以临床诊断的理论依 据。如痰液、尿液细胞学检查，可分别查到呼吸道、泌尿 道肿瘤细胞，子宫颈刮片可查见宫颈恶性瘤细胞。
• 2、涂片时，勿用力挤压或摩擦，防止细胞由于挤压损伤或变形； • 3、做好标记，刻写编码，防止错号。

(精品医学)液基薄层细胞制片技术培训PPT演示课件

(精品医学)液基薄层细胞制片技术培训PPT演示课件

最新临床处理指南，请参照2011NCCP宫颈癌筛查指 南。
.
影响制片效果的因素及操作要点
符合TBS系统的满意的制片其评价标准为：
★ 玻片有标识； ★ 涂片上有足够量的形态保持良好的鳞状上皮细胞（50000 个以上），细胞覆盖面积不得少于30%； ★ 包含有移行区成分（5个以上的宫颈内膜腺上皮细胞或鳞 状上皮化生细胞至少有两团）； ★ 涂片上至少有75%以上的细胞能观察清楚。
.
TBS报告系统的解读
（4）上皮细胞的异常改变 ①鳞状上皮细胞异常 结果为ASC-US（不能明确诊断意义的非典型鳞状上皮细胞）， 建议3－6个月后重复 TCT检查。 结果为ASC-H（非典型鳞状上皮细胞不排除高度鳞状上皮内 病变），应在阴道镜下行组织活检以及HPV检测。 结果为LSIL（低度鳞状上皮内病变，包括CINⅠ），建议3－ 6个月后重复TCT检查。复查阳性者，尤其对HPV阳性者， 应在阴道镜下行组织活检，以及HPV检测。复查结果阴性 者，则每年定期进行TCT复查。 结果为HSIL（高度磷状上皮内病变, 包括CINⅡ、CINⅢ、原 位癌、鳞癌），应在阴道镜下行组织活 检以及HPV检测。
.
影响制片效果的因素及操作要点
如图所示，从左数起，第1瓶和第2瓶为血性标本， 含中量粘液，粘度较大；第3瓶为黄色，原因为使用了药 物，第四瓶浅黄色，为粘液偏多，第5瓶本色透明，粘液 少。 1 取样后隔夜后制片更好，不得少于20min。 2 在粘液偏多的标本瓶内加入1ml清洗液1，血性标 本不需要针对红细胞作任何处理，所有标本在振荡器上强 烈震荡10min，或者涡旋振荡器上震荡（但应注意有效震 荡，观察瓶内溶液，应呈高速漩涡状态）20s。标本量较 少时，可直接用手强力振摇数次即可。 3 上机前剔除不能被打散的蛋清样粘液团和未被打 散的大块固态粘液团

最新第二章 常规制片技术1幻灯片课件

最新第二章 常规制片技术1幻灯片课件

第一季度目标完成率排名 (一)
省份
宁夏 黑龙江
新疆 吉林 湖南 河北 江苏 深圳 山东 安徽 甘肃 浙江 河南 辽宁 陕西
目标
3520 20000 7000 11760 7350 12100 12350 8200 9510 5900 2850 6980 11600 21050 10850
完成
4460 24410 7400 11710 7300 11560 11460 7535 8480 5050 2400 5790 9600 17055 8350
一季度各区各机型销量
10000 8000 6000 4000 2000
0 华东 华北 东北 华南 西北 西南
880 9G 9T 390
9G
第一季度9G各区提货比例
西北 12% 华南 14%
西南 5%
东北 31%
华东 11%
华北 27%
华东 华北 东北 华南 西北 西南
9G全国各区本仓库存比例
西8北% 西10南%
完成率
126.70% 122.05% 105.71% 99.57% 99.32% 95.54% 92.79% 91.89% 89.17% 85.59% 84.21% 82.95% 82.76% 81.02% 76.96%
名次
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
第一季度目标完成率排名 (二)
• 脱水时应注意： (1)每向后转移前，须先将组织块上的液体用吸水 纸吸干，以免影响后续乙醇的浓度;
（2）在高浓度或无水乙醇中，每级停留的时间不宜 太长，否则可使组织收缩变脆，影响切片；
（3）如需过夜，应停留在70%乙醇中，也可长期保 存，可防止因时间倒不开而影响后续步骤。

制片、染色及显微观察课件

制片、染色及显微观察课件
掌握染料的性质和浓度
不同染料具有不同的性质和浓度要求，需根据实际情况进行调整。
注意染色温度和时间
染色温度和时间对染色效果有影响，需根据染料和实验要求进行控制。
03
显微观察技巧
显微镜的种类与选择
光学显微镜
选择依据
利用可见光和光学透镜放大物体，主 要用于生物学和医学领域。按用途可 分为普通光学显微镜、荧光显微镜、 相差显微镜等。
根据观察需求选择合适的显微镜，如 观察细胞结构可选择光学显微镜，观 察超微结构可选择电子显微镜。
电子显微镜
利用电子束代替可见光，通过电磁透 镜放大物体，主要用于观察超微结构。 按原理可分为透射电子显微镜和扫描 电子显微镜。
显微观察的基本步骤与技巧
制片
染色
调焦与对光
观察与记录
技巧
将待观察样品制备成适 合观察的薄片或切片， 如血液涂片、组织切片 等。制片过程中需注意 保持样品新鲜、无污染 ，切片厚度适中。
制片、染色及显微观察课 件
• 制片技术简介 • 染色技术详解 • 显微观察技巧 • 制片染色一体化技术 • 实际操作演示
01
制片技术简介
制片技术的定义与重要性
定义
制片技术是指通过一系列处理， 将生物或无生命样本制成可以在 显微镜下观察的薄片或切片的过 程。
重要性
制片技术是生物学、医学、农业 等领域研究的基础，对于观察细 胞结构、组织形态、微生物特性 等方面具有重要意义。
涂片制作
讲解如何将待观察的标本涂抹在载玻片上，并保证其均匀、平整，以便后续染 色和观察。
染色技术操作演示
常用染色方法
介绍几种常见的染色方法，如HE染色、Masson染色等，以及它们在制片过程中 的作用和效果。

液基薄层细胞制片系统培训课件

液基薄层细胞制片系统培训课件

制片示意图
巴氏染色过程



95%乙醇固定5-10分钟 苏木素染色3分钟，水洗 盐酸分化2、3下，水洗 过3个95%乙醇 桔黄染色30秒，水洗 过3个95%乙醇 EA50染色7分钟，水洗 过三个95%乙醇，过一个无水乙醇 晾干或者风机吹干 中性树脂封片
薄层液基细胞检测系统硬件需求
液基细胞消费市场组成

政府出资，宣传和福利性检测 单位福利性妇女体检 妇女自身健康需求性体检 医院就诊妇科病人检测
市场巨大
液基细胞检查一次的收费标准
天津190元、深圳200元、青海180元、重庆 120元、湖北160元、四川208元、浙江120元、 安徽180元、山西128元、陕西160元、福建 180元、海南150元、湖南178元、济南200元
四、制片 （1）组装涂片器，取出涂片器底托，将玻片正面朝上插 入底托内，将双耳离心管置于防脱载玻片上，同时沿 顺时针方向慢慢旋转双耳离心管，使双耳慢慢卡入底 托内，使双耳离心管底部与防脱载玻片密封。把标本 混悬液置入涂片器中。（混悬液浑浊的加入一半，混 悬液比较清澈的全部加入）。 （2）将载入标本混悬液的涂片器对称的放入液基薄层细 胞制片机内的吊篮中。 （3）制片完成后，取出涂片器，弃掉涂片器中的液体， 旋出双耳离心管，把载玻片抽出，固定染色镜检。
标本混匀器


标本混匀器是一种新型的混匀仪 器，它具有如下特点： 混匀速度快，液体呈旋涡状，能 将粘附在一次性无菌宫颈采样器 上的细胞全部洗脱在细胞保存液 中； 体积小、功率大、耗电省、操作 方便等优点； 不需搅拌和磁力搅拌，所以细胞 保存液不受外界污染和磁场影响。
百博液基薄层细胞处理试剂盒


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• 细胞学标本分脱落细胞和细针穿刺细胞两大类。
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1．脱落细胞是指正常或病理情况下，自然脱 落下来的细胞，随分泌物、排泄物排除体外。恶性 肿瘤的组织细胞之间粘合力下降，加上常有出血坏 死等情况，致使肿瘤细胞更易脱落。这是脱落细胞 学用以临床诊断的理论依据。如痰液、尿液细胞学 检查，可分别查到呼吸道、泌尿道肿瘤细胞，子宫 颈刮片可查见宫颈恶性瘤细胞。
• 2．细针穿刺细胞用外径0.6mm-0.9mm细针头，10ml 左右的一次性空针管，做体表肿块穿刺，吸取少量细胞
作涂片；内脏肿块穿刺应在B超、X线或CT引导下，由放 射科医师或其他临床科医师施行
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(二)细胞学制片方法
• 制片的目的是将采集的细胞成分均匀置于载玻片上，以便镜下检 查。因此，涂片要求：
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印片法
• 印片法取玻片上，称印片法。
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拉片法
• 拉片法常选小滴状标本，置于两张载玻片之间，稍 加压力反向拉开，即成两张厚薄均匀的涂片。拉片 法制片可适用于痰、胸腹水和穿刺细胞标本。
8
推片法
• 推片法为血液科常用的涂片方法，即选一个边缘光 滑的载玻片做推片，并使推片与载玻片之间成40° 左右的夹角，将载玻片上的细胞标本匀速推动，做 成细胞涂片。常用于穿刺细胞和体液标本。应注意： 因癌细胞体积较大，常位于细胞涂膜的尾部，因此 推片时不要将尾部推出片外。
细胞学的制片方法与应用范围
1
细胞学检查包括：标本采集、涂片、固定、 染色、封片、阅片等过程，其中细胞学制片 是诊断细胞学的基础。
细胞学标本采集的原则应尽量减少受检者的 痛苦，取得其合作；尽可能使方法简便、快 速，并能获取丰富的细胞成分；还应尽量保
持标本新鲜，避免污染，制作及时。
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(一)细胞学标本类型
• 1、细胞涂布均匀，分布在载玻片一侧2/3范围内，其余l/3留作贴 标签；
• 2、涂片时，勿用力挤压或摩擦，防止细胞由于挤压损伤或变形； • 3、做好标记，刻写编码，防止错号。
5
细胞学制片的方法很多，常用的方法是
• 1、涂抹法 • 2、拉片法 • 3、推片法 • 4、印片法
6
涂抹法
• 涂抹法为细胞学标本最常用的方法，常用棉签棒、针头 或吸管将标本均匀涂抹于载玻片上，应注意：涂片动作 应轻柔利索，沿一个方向，一次涂抹而成，不能来回转 圈和往返涂抹。