右旋龙脑促进姜黄素抑制A375黑色素瘤细胞增殖的研究
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姜黄素抗肿瘤作用的研究进展
王奕智;张宁
【期刊名称】《宝鸡文理学院学报(自然科学版)》
【年(卷),期】2015(0)1
【摘要】目的对姜黄素在肿瘤生长,增殖,转移等方面的抑制作用,即其抗肿瘤作用的研究进展进行综述,为深入进行研究和促进临床应用提供参考.方法参考国内外50余篇参考文献,对姜黄素在抗肿瘤作用方面研究进展进行概述和分析.结论应用癌细胞培养以及动物模型的方法,同时加入姜黄素作用,从调控细胞周期、诱导细胞凋亡、抑制癌细胞扩散和转移、减少炎性因子合成以及对多种肿瘤治疗手段的增效作用等方面进行了简要概述和分析研究.结论已有的研究结果表明,姜黄素能够在多方面起到抗肿瘤作用,是一种值得深入研究的抗肿瘤药物.
【总页数】7页(P41-47)
【作者】王奕智;张宁
【作者单位】中国医科大学七年制97期74班,辽宁沈阳110001;中国医科大学病理生理学教研室,辽宁沈阳110001
【正文语种】中文
【中图分类】R979.1;R285
【相关文献】
1.浅论对姜黄素抗肿瘤作用的研究进展 [J], 谭爱华;陈诗雅
2.姜黄素抗肿瘤作用机制的研究进展 [J], 黄果;王佑权;谭米多;谢海辉;李伟;刘国文
3.姜黄素抗肿瘤作用的研究进展 [J], 李子建;尤玥
4.姜黄素抗肿瘤作用基础与临床研究进展 [J], 李玉倩;李学军
5.姜黄素通过调控细胞凋亡相关信号通路发挥抗肿瘤作用的研究进展 [J], 刘智丹;吕美怡;吴发印
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右旋龙脑促进姜黄素类化合物抑制HepG2肝癌细胞增殖的分子机制研究随着社会的发展、人民生活水平的提高和健康意识的增强,加上由于营养比例和结构失衡导致的癌症发生率逐年上升,人们对饮食的需求已从量的满足转向对质的重视,希望通过合理的饮食结构安排,科学摄入营养成分,从而增强身体素质,预防和减少癌症的发生。
膳食植物中的天然活性物质由于其具有良好的清除自由基的抗氧化作用产生的抗肿瘤作用效应,因而,被誉为人类“第八大营养素”。
姜黄素类化合物(姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素)是从姜黄等天然植物中提取的一种多酚类化合物,常作为天然色素和调味品广泛应用于食品工业,研究表明,它具有广谱的抗肿瘤活性。
然而,存在于食品中的姜黄素类化合物被人体吸收后生物利用度较低,难以发挥应有的抗氧化和抗肿瘤等活性功效,极大限制了它们的应用范围及应用价值。
签于此,本文选取了在食品中作为食用香精的右旋龙脑(NB)作为吸收促进剂,考察其促进姜黄素类化合物抑制肿瘤细胞生长的影响,明确NB促进姜黄素类化合物抑制肿瘤细胞生长的分子机制。
该研究有望揭示NB促进姜黄素类化合物抗肿瘤的分子作用机制,为姜黄素类化合物与NB等天然营养因子的高效、精准利用提供理论基础,也为癌症等慢性疾病的饮食预防干预提供理论依据。
在研究中,主要选取Hep G2肝癌细胞作为研究对象,考察NB促进姜黄素类化合物抑制Hep G2肝癌细胞生长的影响并阐明其相关分子机制。
一、筛选NB和姜黄素类化合物联合处理的最佳配比及处理时间首先,采用MTT方法考察NB和姜黄素类化合物在不同浓度下单独作用不同时间对Hep G2细胞存活率的影响。
结果表明,随着姜黄素(Cur)的浓度和时间的增加,Hep G2细胞的存活率呈逐渐下降的趋势,说明,Cur抑制Hep G2细胞生长呈浓度和时间依赖性;而去甲氧基姜黄素(DCur)和双去甲氧基姜黄素(BDCur)只表现出浓度依赖性。
姜黄素类化合物的抗肿瘤效果依次为Cur>DCur>BDCur,表明,随着甲氧基数目的减少,姜黄素类化合物抗肿瘤效果降低。
姜黄素与肿瘤细胞作用的分子机制刘晓真;张宏颖【期刊名称】《大连医科大学学报》【年(卷),期】2008(30)5【摘要】姜黄素是从姜科植物姜黄中提取的一种多酚类色素,具有广泛的抗肿瘤作用.在美国姜黄素现在正作为一种新的抗癌剂,用于临床实验当中.虽然实验证明姜黄素能从多方面促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤的生长、转移.但姜黄素与肿瘤细胞作用的分子机制尚未完全阐明.近几年,越来越多的分子生物学技术、先进的分离分析技术等应用于姜黄素防治肿瘤的研究当中.结果表明,姜黄素可能通过直接作用于细胞、作用于相关蛋白、作用于相关基因及调节细胞间的信号传导通路等途径达到抗肿瘤的目的.【总页数】4页(P465-468)【作者】刘晓真;张宏颖【作者单位】大连医科大学,形态学实验室,辽宁,大连,116044;大连医科大学,形态学实验室,辽宁,大连,116044;中国科学院,大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心,辽宁,大连,116023【正文语种】中文【中图分类】R286.91【相关文献】1.微生物转化法制备双脱甲氧基姜黄素糖苷化产物及其对HepG2肿瘤细胞的抑制作用 [J], 李锐;刘芳;李芸香;贾坤;张秀梅;徐伟;苏国龙;黄维维;罗静雯2.姜黄素具有抑制血管生成与诱导肿瘤细胞凋亡双重作用 [J], 丁志山;高承贤;陈铌铍;梁冰冰;袁巍;沃兴德3.姜黄素对大鼠慢性脑缺血诱发脑损伤的保护作用及分子机制研究 [J], 杨柳;张敏;贺曦;朱洁;王进平;孟涛4.姜黄素抗衰老作用及分子机制研究新进展 [J], 张萌;李潭;林韬;徐东辰;龚冬梅5.姜黄素对H2O2诱导血小板凋亡的抑制作用及分子机制 [J], 牙甫礼;XIN Yu;张春梅;陈彬林;李玮琪;马永洁因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
右旋龙脑促进姜黄素类化合物在HepG2细胞中吸收的效果研究罗晶晶1,陈建平2,黄滟波3,苏健裕1(1.华南理工大学轻工与食品学院,广东广州 510640)(2.广东海洋大学食品科技学院,广东湛江 524088)(3.制浆造纸工程国家重点实验室,广东广州 510640)摘要:本文运用Western blot技术来研究右旋龙脑对细胞膜上ABC转运蛋白ABCB1、ABCC1和ABCG2表达量的影响,并进一步运用流式细胞仪考察右旋龙脑对肝癌细胞HepG2细胞膜通透性的影响,探讨其可能作用的物理模型。
结果表明:右旋龙脑能够显著下调转运蛋白ABCB1、ABCC1和ABCG2的表达量,增加HepG2细胞的细胞膜通透性,从而提高姜黄素类化合物在HepG2细胞内的含量。
当用20 μg/mL NB前处理HepG2细胞12 h后再用20 μM Cur、40 μM DCur和40 μM BDCur分别处理24 h,细胞内ABCB1的蛋白表达量从0.7、0.9和0.7降低到0.4、0.6和0.5。
当用20 μg/mL NB前处理HepG2细胞12 h后再用40 μM BDCur处理24 h,细胞内ABCC1和ABCG2的蛋白表达量从1.0和0.7分别降低到0.5和0.3。
进一步的流式结果表明,右旋龙脑能够提高HepG2细胞的细胞膜通透性,当用20 μg/mL NB处理HepG2细胞12h后,细胞内YO-PRO-1的荧光强度从对照组的20.79升高到45.51,同时其荧光强度与NB呈浓度依赖性。
关键词:右旋龙脑;姜黄素类化合物;细胞膜通透性;物理模型文章篇号:1673-9078(2016)11-48-55 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2016.11.008 Effect of d-Borneol on Promoting the Absorption of Curcuminoids inHepG2 CellsLUO Jing-jing1, CHEN Jian-ping2, HUANG Y an-bo3, SU Jian-yu1(1.College of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China)(2. College of Food Science and Technology, Guangdong Ocean University, Zhanjiang 524088, China)(3. state key laboratory of pulp and paper engineering, Guangzhou 510640, China)Abstract: Western blotting was used to study the impact of d-borneol on the expression of ABC transporter proteins ABCB1, ABCC1, and ABCG2 in the cell membrane. Furthermore, flow cytometry was used to examine the impact of d-borneol on the membrane permeability of HepG2 cells, and a possible physical model for the action of d-borneol was investigated. The results showed that d-borneol significantly downregulated the expression levels of the transport proteins ABCB1, ABCC1, and ABCG2, and increased HepG2 cell membrane permeability, thus improving the absorption of curcuminoids. When HepG2 cells were pretreated with 20 μg/mL d-borneol for 12 h, followed by 24-h treatment using 20 μM curcumin (Cur), 40 μM demethoxycurcumin (DCur), and 40 μM bisdemethoxycurcumin (BDCur), respectively, the expression levels of ABCB1 in cells reduced from 0.7, 0.9, and 0.7 to 0.4, 0.6, and 0.5, respectively. When HepG2 cells were pretreated with 20 μg/mL d-borneol for 12 h, followed by 24-h treatment using 40 μM BDCur, the expression levels of ABCC1 and ABCG2 in the cells were reduced from 1.0 to 0.7 and from 0.5 to 0.3, respectively. Further flow cytometric analysis indicated that d-borneol could improve the membrane permeability of the HepG2 cell. When HepG2 cells were pretreated with 20 μg/mL d-borneol for 12 h, the fluorescence intensity of YO-PRO-1 in the cells increased from 20.79 (control group) to 45.51, and the fluorescence intensity was positively correlated with the concentration of d-borneol.Key words: d-borneol; curcuminoids; membrane permeability; physical mode收稿日期:2015-12-11基金项目:广东省自然科学基金面上项目(2014A030313265);广东省扬帆计划项目(201312H05);广东省科技计划项目(2015A020209020,2015A020209036);华南理工大学中央高校基本科研业务费资助。
姜黄素抑制C6胶质瘤细胞增殖\诱导其凋亡的分子机制杨正钦【期刊名称】《中国药理通讯》【年(卷),期】2006(023)004【摘要】PTEN基因是近年来发现的、继P53之后又一重要的抑癌基因,其突变率在胶质细胞瘤中约占40%。
姜黄素(Cureumin)是否可以通过诱导野生型PTEN基因的表达而抑制脑胶质瘤细胞增殖和/或促进其凋亡,目前国内外尚无报道。
目的观察Cureumin是否上调胶质瘤细胞野生型PTEN基因的表达而抑制脑胶质瘤细胞增殖和/或促进其凋亡并探讨其分子机制。
方法采用大鼠胶质瘤细胞株(C6细胞):MTT观察Curcumin对C6细胞存活增殖的影响;通过荧光标记的BrdU抗体,品微镜下观察Curcumin对C6细胞分裂增殖的影响;碘化丙啶(propldium iodide,PI)经流式细胞仪测定Curcumin对C6细胞周期的阻滞;用荧光染料AnnexinV—PE和7-AAD借助于流式细胞仪观察Curcumin对C6细胞早期凋亡的影响;DCFDA荧光探针检测Curcumin诱导的细胞内活性氧的产生;【总页数】2页(P31-32)【作者】杨正钦【作者单位】郑州大学药学院【正文语种】中文【中图分类】R730.264【相关文献】1.中药抑制C6胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡的概况 [J], 戴超颖;陈培丰2.丹参酮ⅡA对C6胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用 [J], 邓惠;罗焕敏;黄丰;高勤;章佩芬3.氯化三乙基锡抑制大鼠C6胶质瘤细胞增殖并诱导凋亡 [J], 张适;张悦;崔亚楠;李志超4.蛋白酶体抑制剂MG-132对体外C6胶质瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用 [J], 于天浩;葛鹏飞;罗毅男;徐松柏;李淑湘;金鑫5.鲜壁虎提取物抑制C6胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡的研究 [J], 谢爽;王学美;谢东泽因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
姜黄素及其衍生物抑制肿瘤作用的实验研究目的:研究姜黄素及其衍生物的体外抗肿瘤活性。
方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测姜黄素及其衍生物对多种肿瘤细胞生长的抑制作用。
结果:体外抗肿瘤活性研究表明,姜黄素及其衍生物对Sw480、HL260、HepG2、MGC-803等多种人肿瘤细胞均有生长抑制作用,IC50范围为10.52~19.51 μg/mL。
结论:姜黄素及其衍生物体外具有较强的抗肿瘤作用。
标签:姜黄素及其衍生物;抗肿瘤活性;细胞实验姜黄素,又名姜黄色素(Curcumin,Cur)是从姜科植物姜黄(Curcuma Longa L.)提出出来的酚性有效单体化合物,具有抗肿瘤[1-3]、抗炎和抗氧化[4]、抗抑郁[5]等药理作用。
其中抗癌作用是姜黄素的主要药理活性之一,Cur在肿瘤治疗方面的作用越来越引起重视。
姜黄素抗瘤谱广、价格低廉、使用安全,有重要的经济价值和广泛的药理作用,正被逐步运用于口腔、乳房、皮肤、结直肠和膀胱等器官癌症的临床试点研究。
本实验主要以人结肠癌细胞株SW480、人白血病细胞系HL260 、肝癌细胞系HepG2和人胃癌细胞系MGC-803为靶细胞,对姜黄素及其衍生物进行体外抗肿瘤作用进行研究,报道如下。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 药品与试剂姜黄素、二氢姜黄素、双去氧基姜黄素和去甲氧基姜黄素(成都曼思特生物科技有限公司),纯度99%;二甲基亚砜(国药集团化学试剂有限公司,T20081103);RPMI 1640培养基、DMEM培养基及新生牛血清(美国Gibco公司)。
1.1.2 主要仪器体积分数为0.05的CO2饱和湿度孵育箱(美国Thermo Forma公司);倒置显微镜(日本Olympus公司),Bio-Rad680型酶标仪(美国Bio-Rad公司)。
1.1.3 细胞株人结肠癌细胞株SW480、人白血病细胞系HL260、肝癌细胞系HepG2和人胃癌细胞系MGC-803均来源于中科院上海细胞库。
姜黄素抑制HeLa细胞诱导的血管内皮细胞增殖作用及其机制研究郑伟;高振华;吴丽娜;杨向红【期刊名称】《中华肿瘤防治杂志》【年(卷),期】2008(15)14【摘要】目的:研究姜黄素对HeLa细胞诱导的血管内皮细胞增殖的抑制作用及其机制。
方法:采用台盼蓝排染法计数人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞,MTT法测定不同浓度姜黄素对ECV304细胞和HeLa细胞诱导的ECV304细胞增殖的抑制;采用RT-PCR和Western blot检测40μmol/L姜黄素作用于HeLa细胞诱导的血管内皮细胞4、8、16和24h后,血管内皮生长因子(VEGF)及其受体VEGFR2(KDR)基因及蛋白的表达。
结果:姜黄素直接作用于ECV304细胞,其细胞计数较对照组显著减少(P<0.05),并呈浓度依赖性。
MTT法测得不同浓度姜黄素作用后,可产生显著的细胞增殖抑制作用,48h体外半数抑制浓度(IC50)值为(38.4±0.031)μmol/L。
随着姜黄素浓度的增加,其对ECV304细胞和HeLa细胞诱导的ECV304细胞的增殖有明显的抑制作用,P值分别为0.0000和0.0001。
姜黄素作用于HeLa细胞诱导的血管内皮细胞4、8、16和24h后,能明显下调VEGF与KDR的mRNA和蛋白表达。
结论:姜黄素能直接抑制血管内皮细胞的增殖,对HeLa细胞诱导的血管内皮细胞的增殖也有抑制作用。
此作用可能是通过抑制VEGF及其受体KDR的mRNA 和蛋白表达来实现的。
【总页数】4页(P1064-1067)【关键词】姜黄素;HeLa细胞;内皮生长因子;受体;细胞表面;逆转录聚合酶链反应【作者】郑伟;高振华;吴丽娜;杨向红【作者单位】中国医科大学附属第二临床学院肿瘤科;中国医科大学附属第二临床学院病理科【正文语种】中文【中图分类】R73-3【相关文献】1.姜黄素对子宫颈癌HeLa细胞增殖抑制作用及其机制的研究 [J], 王菁鹏;林青2.小鼠endostatin抑制血管内皮细胞增殖的作用机制研究 [J], 范磊;上官学芬;张剑宁;高大宽;屈延3.siRNA沉默Rac1表达促进增生期血管瘤内皮细胞内质网应激和抑制细胞增殖的作用与机制研究 [J], 马从乾;王雅;王娜;杨柯;陈德才4.姜黄素抑制纤维蛋白肽诱导血管内皮细胞炎症反应的作用机制 [J], 赵晶;徐守竹;刘香柠;马萌萌;屈伸;乔海法5.氧化苦参碱抑制肝癌细胞诱导血管内皮细胞增殖作用的研究 [J], 王兵;王国俊;蔡雄;张大昕;姚阳因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
姜黄素抑制宫颈癌HeLa细胞增殖的机制余俚瑶;张庆华【期刊名称】《肿瘤防治研究》【年(卷),期】2011(38)8【摘要】目的探讨姜黄素抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖的内在机制。
方法用不同浓度的姜黄素作用HeLa细胞,在作用的不同时间内用MTT法测定姜黄素对HeLa 细胞抑制增殖的效应;RT-PCR法检测P53 mRNA的表达;Western blot法检测乙酰化组蛋白H3、乙酰化P53以及P53蛋白的表达。
结果姜黄素对HeLa细胞增殖有明显抑制作用,不仅有剂量依赖性,还存在明显的时间依赖性;而且姜黄素能明显上调HeLa细胞内组蛋白H3的乙酰化水平,促进P53的乙酰化、P53基因mRNA 及相应蛋白的表达。
结论姜黄素通过上调组蛋白H3乙酰化水平,促进肿瘤抑制因子P53的活化与表达来抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖。
姜黄素具有去乙酰化酶抑制剂作用,有望开发用于治疗宫颈癌。
【总页数】4页(P899-902)【关键词】姜黄素;组蛋白H3;P53蛋白;HeLa细胞【作者】余俚瑶;张庆华【作者单位】武汉市中心医院妇产科【正文语种】中文【中图分类】R711.74;R737.33【相关文献】1.姜黄素对子宫颈癌HeLa细胞增殖抑制作用及其机制的研究 [J], 王菁鹏;林青2.姜黄素对人宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用 [J], 陈昌明;刘慧芳;曹雪姣;李新莉;辛毅;张翠丽3.姜黄素联合多西他赛对宫颈癌hela细胞的增殖抑制及凋亡作用的研究 [J], 钟琳琳;邹平安;娄俊;王超;胡爱民4.姜黄素通过Notch途径抑制人宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖 [J], 夏美慧;谷爽;孙际童;刘爱民5.姜黄素抑制HeLa细胞诱导的血管内皮细胞增殖作用及其机制研究 [J], 郑伟;高振华;吴丽娜;杨向红因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
右旋龙脑促进姜黄素抑制A375黑色素瘤细胞增殖的研究吴萍1,陈建平2,李琳1,苏健裕1,曾峰3(1.华南理工大学轻工与食品学院,广东广州 510640)(2.广东海洋大学食品科技学院,广东湛江 524088)(3.江西吉安宇峰天然植物香料有限公司,江西吉安 343000)摘要:本文运用MTT实验考察姜黄素和右旋龙脑分别在单独作用和联合作用时对黑色素瘤细胞A375存活率的影响,并进一步运用流式细胞术分析右旋龙脑联合姜黄素抑制黑色素瘤细胞A375增殖的原因。
结果表明,姜黄素单独作用对A375细胞增殖有显著的抑制效应,而右旋龙脑单独作用对A375细胞增殖没有表现出明显的抑制作用。
当用40 μg/mL右旋龙脑预处理3 h,再与20 μmol/L姜黄素联合作用A375细胞72 h后,其细胞存活率达到最低为10.93%,这比20 μmol/L姜黄素单独处理时细胞的存活率降低了18.27%。
进一步的流式结果表明,相比单独姜黄素处理,右旋龙脑与姜黄素联合处理后能明显提高SubG1峰和G2/M比例,右旋龙脑(40 μg/mL)与姜黄素(20 μmol/L)联合作用黑色素瘤细胞A375后,其SubG1和G2/M的含量分别从对照组的2.0%和16.4%升高到16.8%和40.1%,表明右旋龙脑与姜黄素主要是通过诱导细胞凋亡和G2/M阻滞来抑制黑色素瘤细胞A375 增殖。
关键词:姜黄素;右旋龙脑;抗增殖;联合作用文章篇号:1673-9078(2016)6-7-12 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2016.6.002 Potentiation of the Inhibitory Effect of Curcumin on A375 Melanoma CellProliferation by D-borneolWU Ping1, CHEN Jian-ping2, LI Lin1, SU Jian-yu1, ZENG Feng3(1.College of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China)(2.College of Food Science and Technology, Guangdong Ocean University, Zhanjiang 524088, China)(3.Ji’an Y u Feng Natural Species CO., L TD., Ji’an 343000, China)Abstract: An MTT assay was performed to investigate the effects of curcumin and d-borneol, alone or in combination, on the viability of A375 melanoma cells. The mechanism underlying the inhibitory effect of these compounds on melanoma A375 cell proliferation was determined by flow cytometry. The results indicated that curcumin alone could significantly inhibit A375 cell proliferation; however, d-borneol alone did not exhibit any obvious inhibitory effect on proliferation. When melanoma A375 cells were pretreated with 40 μg/mL d-borneol for three hours and then treated with 20 μmol/L curcumin for 72 hours, the lowest cell-viability rate (10.93%) was observed, which was 18.27% lower than the proliferation of cells treated with curcumin alone. Further, flow cytometric analysis indicated that compared with curcumin-alone treatment, a combination of curcumin and d-borneol could significantly increase sub-G1 peaks and G2/M phase ratios. When melanoma A375 cells were treated with a combination of d-borneol (40 μg/mL) and c urcumin (20 μmol/L), the populations of SubG1 and G2/M increased to 16.8% and 40.1%, respectively, compared with 2.0% and 16.4% in the control group. These observations indicate that curcumin combined with d-borneol inhibits A375 cell proliferation by inducing apoptosis and G2/M cell cycle arrest.Key words: curcumin; d-borneol; anti-proliferative; combined effects收稿日期:2015-06-10基金项目:广东省自然科学基金面上项目(2014A030313265);广东省扬帆计划项目(201312H05);省部产学研结合项目(2013B020311009,2010A011200019,2011B010600029);华南理工大学中央高校基本科研业务费(2015ZZ050);广东省2015年度省公益研究与能力建设专项资金项目(2015A020209020)资助作者简介:吴萍(1992-),女,硕士研究生,研究方向为糖类物质及其药物制备与生物利用通讯作者:苏健裕(1979-),男,博士,副研究员,研究方向为糖类物质及其药物制备与生物利用78癌症为一类慢性非传染性疾病,越来越受到公众 的重视。
据世界卫生组织统计,2010年时,全球新增癌症患者超过1240万,其中,死亡人数高达760余万;预计到2020年,全球每年新发癌症病例将高达1500万。
而黑色素瘤相比其他肿瘤细胞,具有较强的侵袭、转移能力,其患者平均生存期仅6~9个月[1]。
近几年随着人们健康意识的增强,希望通过安排合理饮食结构,科学摄入与营养成分,从而预防癌症的发生。
其中天然植物中的天然活性物质由于其具有良好的抗肿瘤作用效应,因而,在日常食品中被添加其中,从而起到抗肿瘤的功效。
姜黄素(Curcumin, Cur )是一种酸性多酚类物质(结构式如图1a 所示),是一种常用的食品用着色剂,广泛应用于咖喱中,因其具有广泛的药理作用,如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等,并且毒副作用低、安全性高,成为近年来研究的热点[2]。
然而姜黄素溶解度低、稳定性差,从而大大降低了其生物利用度,因此需要研究出一种方法能使姜黄素在小剂量情况下便能发挥最大的生物活性[3]。
右旋龙脑(Natural borneol, NB )(结构式如图1b 所示)作为一种食用香料或较高价值的医用材料,广泛应用于食品和药品工业[4]。
右旋龙脑具有很强的渗透能力,能改善细胞层的细胞膜磷脂分子排列,明显疏松细胞连接,抑制细胞膜P-糖蛋白(P-glycoprotein )功能,增强细胞膜流动性,影响磷脂双分子细胞膜的通透性,以促进细胞间隙转运药物通过细胞层[5]。
因此,本文旨在利用天然植物资源中富含的能够促进人体有健康的天然产物,右旋龙脑与姜黄素联合用药作用于A375黑色素瘤细胞,不仅促进了姜黄素抑制肿瘤的效果,而且推动了现代医药与食品的紧密结合,从而大大拓展了右旋龙脑的应用范围。
图1 姜黄素(a )和右旋龙脑(b )的结构Fig.1 Chemical structures of curcumin (a) and d-borneol (b)1 材料与方法 1.1 材料与试剂姜黄素(curcumin )标准品,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT )分析纯和碘化丙锭(PI )分析纯均购自Sigma 公司;右旋龙脑(NB )标准品购自广东嘉应制药股份有限公司;DMEM, 胎牛血清,青霉素和链霉素均购于美国Hyclone 公司;人黑色素瘤A375细胞购自美国A TCC 公司。
1.2 仪器与设备BP301S 电子天平,德国Sartorius 公司;VERSAmax 酶标仪,美国Molecular Devices 公司;TS100倒置显微镜,日本Nikon 公司;Epics-XL 流式细胞仪,美国Beckman Coulter 公司。
1.3 细胞培养A375复苏后培养在含10%胎牛血清,100 U/mL 青霉素和50 U/mL 链霉素的DMEM 完全培养基中。
细胞置于培养箱中培养(37 ℃,5% CO 2),根据细胞的生长状态传代,取对数生长期细胞用于以下的各个实验。
1.4 MTT 测定细胞存活率[7]将A375、L02细胞接种于96孔培养板,置于培养箱中(37 ℃,5% CO 2)培养24 h 后,加入不同浓度的姜黄素和右旋龙脑分别进行单独处理和联合处理72 h 。
然后,往培养板加入MTT (5 mg/mL )20 μL/孔,37 ℃孵育4 h 后弃上清,加入DMSO 150 μL/孔,振荡10 min ,紫色结晶物充分溶解后,在570 nm 处用酶标仪(Specta Max 250)测定各孔吸光度值[5]。
以对照组吸光值为100%,计算药物处理组细胞存活率,同时作图求得半数抑制浓度(IC 50)。
1.5 流式细胞仪检测其细胞凋亡情况[8]A375细胞接种到到6 cm 培养皿,预培养24 h 后,加入不同浓度的右旋龙脑和姜黄素分别进行单独处理和联合处理72 h 后,去掉培养液,0.25%胰蛋白酶消化细胞,培养液吹打后收集,1500 r/min 离心5 min ,倒掉上清,加入1 mL 预冷的70%乙醇,-20 ℃固定放置过夜;次日,离心(1600 r/min ,5 min )收集细胞,PBS 洗2次,加PI 工作液500 µL ,避光染色15 min 。