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盐酸克伦特罗(瘦肉精)

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猪肉中“瘦肉精”盐酸克伦特罗残留危害及检测方法

猪肉中“瘦肉精”盐酸克伦特罗残留危害及检测方法

猪肉中“瘦肉精”盐酸克伦特罗残留危害及检测方法摘要:本文介绍了盐酸克伦特罗(瘦肉精)的性质、危害性以及主要的检测方法。

关键词:盐酸克伦特罗残留检测方法1 盐酸克伦特罗的性质盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CLB)俗称瘦肉精,又名氨哮素、克喘素,化学名为“4-氨基-α-[(叔丁基氨基)甲基]-3,5-二氯苄醇盐酸盐”,常温下为白色或微黄粉末状固体,熔点为170℃～176℃,极易溶于水、甲醇和乙醇,微溶于氯仿,不溶于苯,是一种β2一肾上腺素能激动剂。

20世纪70年代末,美国等发达国家进行了盐酸克伦特罗实用性开发研究工作。

80年代,由于盐酸克伦特罗能促进猪生长,提高瘦肉率,而被作为饲料添加剂广泛应用到猪的生产中。

但是近年来,因食用被盐酸克伦特罗污染的猪肉导致中毒事件屡有发生,且后果极其严重,引起了世界各国的高度重视,为了保证猪肉产品质量安全,保护人类健康,许多国家都禁止在食用动物源性的生产中使用盐酸克伦特罗[1]。

2 危害性2.1 对猪的影响在饲用初期会在短期内出现血压升高、血管扩张、呼吸加剧、体温上升等症状,并出现采食下降、行为动作失调、神经紧张不安甚至全身震颤等症状。

后期会使猪体内糖降解作用不足,导致猪肉品质下降,同时容易发生蹄损伤和跛行,大运动量或高温条件会造成死亡。

2.2 对人的影响人食用含残留盐酸克伦特罗猪肉后对肝、肾等内脏器官会产生毒害作用,出现心悸、头痛、目眩、恶心、呕吐、心率加快、肌肉振颤等症状,特别是对高血压、心脏病、甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更大,严重的可导致死亡。

3 国内外对盐酸克伦特罗的禁用规定由于盐酸克伦特罗对猪具有加强脂肪分解,促进蛋白质合成,实现动物营养再分配,提高胴体瘦肉率,加快猪的生长等作用,盐酸克伦特罗曾作为科研成果推广,从而使多起摄入残留“瘦肉精”的消费者中毒案件发生,严重的甚至导致了死亡。

就国内而言,自1998年以来,每年都有数起类似中毒事件发生。

今年双汇“瘦肉精”事件更是引起了广泛的关注。

肉原料肉中激素(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺)的测定

肉原料肉中激素(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺)的测定
(2)实验方法与步骤：遵照GB-T5009.192-2003.
备注：
1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。 也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定
2.本方法检出检出限：0.025ng～2. 5ng
2 瘦肉精的测定方法
备注 在检测实验室，确证和定量瘦肉精时，相对于气质联用，更
2 瘦肉精的测定方法
2.2瘦肉精的确证和定量——液相色谱串联质谱法
(1) 原理：试样中的残留物经酶解，用高氯酸调节PH值，沉淀蛋白质后离心， 上清液用异丙醇-丁酸丁酯提取，再用阳离子交换柱净化，液相色谱-串联 质谱法测定，内标法定量。 (2)实验方法与步骤：遵照GB-T22286-2008
备注：
1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。 也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定
1 瘦肉精知识概述
早在2002年，农业部、卫生部、国家食品药品监督管理局就 发布公告，明令禁止在饲料和动物饮用水中添加盐酸克仑特罗和 莱克多巴胺等7种 “瘦肉精”。
2008年，最高人民检察院、公安部规定新的刑事案件立案追 诉标准，对使用“瘦肉精”养殖生猪，以及宰杀、销售此类猪肉的， 将以生产、销售有毒、有害食品罪追究刑事责任。
2 瘦肉精的测定方法
2.1筛选是否含有瘦肉精——酶联免疫法（ELISA)
(2)实验方法与步骤：遵照GB-T5009.192-2003 如果采用快速检测卡，则根据检测卡 操作要求开展检测。
备注：
1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。 也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定
2.本方法检出检出限：0.004ng～0.054ng

生猪“瘦肉精”检测存在的问题

生猪“瘦肉精”检测存在的问题
解决瘦肉精问题的根本途径最终还要通过科学的育种手段来改良生猪品种或者研发出高效对人体无毒无害的饲料添加剂等手段提高生猪的瘦肉率从而使瘦肉精失去滋生繁衍的土壤和空间
兽 医 卫 生
瘦 肉精 ， 学 名 盐酸 克伦 特罗 （ Ｃ ｌ ｅ ｎ ｂ ｕ ｔ ｅ ｒ ｏ １ ） ， 是 一种 平 喘
药。 该药物既不是兽药 ， 也不是饲料添加剂 ， 而是肾上腺素类 神经兴奋剂。将盐酸克伦特罗添加在牲畜饲料 中， 能增 加动 物 的瘦 肉量 、 减少饲 料使用 、 使 肉品提早上 市 、 降低 饲养 成
屠 宰环节 的“ 瘦 肉精 ” 检测 ， 是通过抽检 方式进行 ， 抽 检 比例
规定 只有 每批 次生猪数量 的 ５ ％，而在生 猪流通运输环节 ，
很 大 的漏 洞 。
并 没有强制规定要进行 “ 瘦肉精” 检测 。过低 的抽检 率 ， 存在
生猪 肉精 检测存在的问题
防控 “ 瘦 肉精” 相关 的业务知识 的普及宣传工作。 要对生猪养
２ ． １ 抽检 人员素质 问题
目前 ， 在生猪屠宰环节 ， “ 瘦 肉精 ”
检测基本采用快速检测卡。 这种方 法操作简单 、 快速 ， 一学就
会， 对检测人 员基本没什么技能水平要求。因此 ， 屠宰企业主
为 了减少 劳动力成本 ， 往往聘 用文化素 质相对较低 ， 法 律法 规 意识 比较淡薄 ， 且 年龄偏 大 的人 员负 责“ 瘦 肉精 ” 检测 工 作 。检测人员往往缺乏较强 的工作责任心 ， 在检测过程 中出
殖户 、生猪经销商及屠宰企业主加强相关法律法规的教育 ，
２ ． ３ 环境 等 因素影响检测效果 目前 日 常使用 的“ 瘦 肉精 ” 快速检测 卡 ， 在使用过程 中有很多 因素都可能影 响检测 结果 ； 当

盐酸克伦特罗

盐酸克伦特罗

对神经组织的作用, 克仑特罗可保护海马神经 组织对抗氨基酸2海人藻酸所致的兴奋性损伤, 这种 神经保护作用可使它成为一种治疗缺血性卒 中很有潜力的药物。
理化性质
白色或几乎白色的结晶性粉末，无臭，味略苦，熔点为174175.5摄氏度，易溶于水、乙醇、甲醇，微溶于氯仿、丙酮， 不溶于乙醚。由于本品化学性质稳定，加热到172℃时才分 解，因此一般加热方法不能将其破坏。 具有弱碱性（-NH2）， 本品作为药物，可选择性地作用于肾上腺素β2受体，是一种 强效激动剂，可引起交感神经兴奋，在治疗剂量下，具有松 弛气管平滑肌的作用，用于治疗哮喘；但若作为兽药或禽畜 饲料添加剂，则属于违禁药品 “瘦肉精”添加到猪饲料中， 造成猪的生理功能紊乱，可明显提高瘦肉率，但由于其顽固 残留在动物内脏和肌肉中；人食用了含有“瘦肉精”的猪肉， 就会出现心跳加快、心慌、四肢颤抖等症状。
盐酸克伦特罗
瘦肉精为盐酸克伦特罗，又称氨哮素、 克喘素，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素。 它化学式为C12H18CL2N2O结构式
盐酸克伦特罗的化学结构
OH C-CH2NHC(CH3)3
HCLCl NH2 NhomakorabeaCl
化学名
7-[2-甲基丙烷-2-亚氨基-甲基]-4-氨基3,5-二氯苯甲醇盐酸盐。 英文名 Clenbuterol; Spiropent; Planipart; NAB365；4-Amino-3,5-dichloro-alpha(((1,1dimethylethyl)amino)methyl)benzenemethan ol;
药理作用
1 克仑特罗的治疗作用 1） 对呼吸系统的作用。 克仑特罗为 B 2 受体激动剂, 其松 弛支气管平滑肌作用强而持久。其支气管扩张作用约为沙丁 胺醇的 100 倍, 故用药量极小。哮喘患者每次口服该药 30Lg 可明显增加每秒肺活量(FEV 110)和最大呼气流速(FEF ) , 降 低气道阻力。 该药尚能增加支气管纤毛运动和促进痰液排出, 这也有助于提高平喘疗效。 2） 对生殖系统的作用。 克仑特罗对子宫平滑肌有强烈的 舒张作用, 在具有先兆流产(28 周)的 26 例孕妇中, 由于其子 宫强度收缩, 胎儿危险率增加。当分别口服克仑特罗 40, 60, , 100Lg 后, 其中 20 例孕妇子宫舒张明显, 有 18 例妇女获得 38 周的妊娠期 。 3） 对泌尿系统的作用。 克仑特罗对对肌肉废用性萎缩有潜在治疗作用 。 尿道平滑肌有松弛作用。 Noguch i等报道, 口服克仑特罗20Lg, 1 日2 次, 连续服药 的患者给予克仑特罗 60Lg, 1 日 2 次连续用药 3 周, 结果表1 周, 可有效治疗前列腺切除术后引起的轻度至中度的压力 性尿失禁 。 4） 对骨髂肌的作用。 克仑特罗有抑制肌肉萎缩的作用。 姜 广良等报道, 因臂丛神经损伤而致肱二头肌完全失神经支配 明, 克仑特罗能有效防治失神经骨髂肌萎缩 ，M alt in 等研究 发现, 克仑特罗可提高矫形病人的相对肌肉力量, 因此被认为

猪肉中克伦特罗的检测

猪肉中克伦特罗的检测

38 食品安全导刊 2011年5月刊ANAlySIS & TEST 分析与检测□ 莱伯泰科有限公司 供稿盐酸克伦特罗是一种β-兴奋剂，猪食用该物质后可在代谢过程中促进体内蛋白质的合成，加速脂肪的转化和分解，从而提高猪肉的瘦肉率，因此其被称为“瘦肉精”。

瘦肉精由于使用量大、使用时间长，加之在猪体内代谢慢，所以其在猪体内的残留量很大。

如果这些残留的瘦肉精通过食物链进入人体，便可导致人体食物中毒，因此一直被禁用。

然而一些养猪户不顾相关部门的规定，在饲料中掺入大量瘦肉精，视人们的食用安全而不顾，严重扰乱了肉类食品市场的秩序，给人们的日常生活带来很大影响。

在这种情境之下，如何采用科学快速的方法对猪肉中的瘦肉精进行检测，实现有效监管成为亟待解决的问题。

对于猪肉中克伦特罗的检测而言，样品前处理显得尤为重要。

为此，本文介绍了一种快速准确的检测方案，该方案使用LabTech公司全自动固相萃取仪-定量浓缩系统进行样品前处理工作，样品经提取、初步净化后，全自动完成猪肉样品的固相萃取-洗脱液浓缩-溶剂置换过程，最终样品可直接用于液相检测，极大地简化了实验人员的工作步骤，液相色谱检测准确、样品测定平行性好、回收率高。

猪肉中克伦特罗的检测——猪肉中的瘦肉精检测整体解决方案仪器与试剂仪器：LabTech Prep Elite-VS全自动固相萃取-定量浓缩仪，LabTech LC600二元梯度高效液相色谱系统；试剂：乙酸乙酯、10%碳酸钠溶液、0.1mol/L的盐酸溶液、2.5mol/L氢氧化钠溶液、甲醇（色谱级）、4%氨水甲醇、去离子水。

实验方法样品前处理1.提取方法：将50g猪肉平均分成10份，准确进行称重。

取其中5份加入15mL乙酸乙酯、3mL10%碳酸钠溶液置于50mL离心管中，10000rpm下均质2min，6000rpm下离心2min，将上清液转入另一离心管中。

用15m L乙酸乙酯重复提取残渣，合并乙酸乙酯。

瘦肉精的简介

瘦肉精的简介

1.口服后即洗胃、输液，促 口服后即洗胃、输液， 口服后即洗胃 使毒物排出。 使毒物排出。 2.在心电图监测及电解质 在心电图监测及电解质 测定下， 测定下，使用保护心脏药物如 6-二磷酸果糖 二磷酸果糖(FDP)及β1-受体 二磷酸果糖 及 受体 阻滞剂倍他乐克。 阻滞剂倍他乐克。
Hale Waihona Puke 1、尽量到正规超市、肉菜市场购买猪肉，不买路 、尽量到正规超市、肉菜市场购买猪肉， 边摊等流动肉贩的猪肉。 边摊等流动肉贩的猪肉。买肉时一定要看清猪肉上 是否盖有检疫、检验印章。 是否盖有检疫、检验印章。 2、鉴别猪肉是否含有“瘦肉精”有一个最简单方 、鉴别猪肉是否含有“瘦肉精” 法，那就是看猪肉是否具有脂肪（猪油），如该猪 那就是看猪肉是否具有脂肪（猪油），如该猪 ）， 肉在皮下就是瘦肉，则该猪肉就存在含有“ 肉在皮下就是瘦肉，则该猪肉就存在含有“瘦肉精 ” 的可能。 的可能。 3、由于“瘦肉精”往往是残留在内脏中，因此要 、由于“瘦肉精”往往是残留在内脏中， 慎食猪肝、猪肺、猪肾等猪内脏。 慎食猪肝、猪肺、猪肾等猪内脏。
瘦肉精又出现了新品种—— 瘦肉精又出现了新品种
苯乙醇胺A 苯乙醇胺 曝光 湖南省岳阳市政府2011年7月23日透露，当 湖南省岳阳市政府 年 月 日透露， 日透露 地畜牧水产和公安部门联手， 地畜牧水产和公安部门联手，成功破获销售全国 首例瘦肉精新品种案件。目前， 首例瘦肉精新品种案件。目前，这批违禁饲料已 被全部封存。 被全部封存。瘦肉精新品种与以往类似事件不同 的是， 的是，这次竟从饲料中检测出以前从未出现过的 苯乙醇胺A。 苯乙醇胺 。 这种瘦肉精新品种惊现市场 瘦肉精新品种再次敲响中国食 品安全警钟。 品安全警钟。
这些症状如心慌、 这些症状如心慌、肌肉震 头痛以及脸部潮红等。 颤、头痛以及脸部潮红等。对 一般人来说不会有太大问题， 一般人来说不会有太大问题， 但是对心率失常、高血压、 但是对心率失常、高血压、青 光眼、糖尿病、 光眼、糖尿病、甲状腺机能亢 进等疾病的患者有较大危害。 进等疾病的患者有较大危害。

瘦肉精盐酸克伦特罗的理化性质及其主要危害

第1章盐酸克伦特罗的理化性质及其主要危害1.1 盐酸克伦特罗的理化性质盐酸克伦特罗又称“瘦肉精”，是一种从天然儿茶酚胺衍生合成的化合物，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素分子式为C12 H19 C13 N20，相对分子质量为313．5，熔点为174 ～175.5 ℃，其制剂常用盐酸盐，又称为盐酸双氯醇胺氨双氯醇胺呈白色或类白色的结晶粉末状，熔点161℃，无臭，味苦，化学性质稳定，溶于水、乙醇，微溶于丙酮。

不溶于乙醚，加热到172 ℃才能分解，盐酸克伦特罗的化学结构稳定，在体内不会被破坏分解，能耐受100 ℃高温，126 ℃油煎5min才能破坏减半，常规烹调对盐酸克伦特罗残留起不到破坏作用。

1.2盐酸克伦特罗的主要危害对人的危害：人食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉及其制品后，会发生急性中毒通常表现为肌肉振颤、心慌、战栗、头疼、恶心、呕吐等症状，特别是原有心律失常的病例会引起心室早搏，ST段与T波幅压低，还可引起代谢紊乱，产生酮体，对糖尿病病人可发生酮中毒或酸中毒，对心律失常、高血压、青光眼、糖尿病、甲状腺功能亢进、前列腺肥大等疾病的患者更容易产生急性中毒症状，严重的可导致死亡，因食用猪肉中残留有盐酸克伦特罗的急性中毒病人，临床症状以交感神经系、统兴奋性增高为主要表现，并在患者血尿中检出较高含量的盐酸克伦特罗。

人食用残留有盐酸克伦特罗的畜产品后表现为肌肉兴奋性增强，有的人中毒后表现为肌肉震颤，重症者腓肠肌痉挛；同时引起心肌收缩加强，心率加快；对高血压患者危害更大，盐酸克伦特罗分解脂肪成游离脂肪酸进入血液，使血管壁弹性降低，引起血压升高，微循环血管膨胀，压迫刺激周围的神经，引起头痛头晕；引起人内脏横纹肌和平滑肌+兴奋性增强，表现为呕吐和腹泻。

盐酸克伦特罗中毒的患者群中，对患心、脑血管疾病、糖尿病、甲状腺机能亢进、青光眼、前列腺肥大者可造成威胁生命的恶果。

孕妇中毒又可导致癌变、胎儿致畸的严重危害性。

对动物的危害:虽然盐酸克伦特罗的毒性并不很强，小鼠、豚鼠静脉注射的半数致死量分别是每公斤体重27.6mg和12.6mg，但是由于它的半衰期长，在体内代谢慢，极易蓄积残留于动物体内。

猪肉中瘦肉精的检测

猪肉中瘦肉精的检测高峰101279012摘　要鉴于盐酸克伦特罗(瘦肉精)在动物性食品中的残留对人体和国民经济造成了巨大的危害，本文介绍了动物肌肉组织中残留盐酸克伦特罗(瘦肉精) 的几种分析检测方法，并对未来的发展方向作了展望。

关键词：瘦肉精GC-MS HPLC ELISA1 引言瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。

在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗(Clenbuterol，CLB)，而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。

当它们以超过治疗剂量5—10倍的用量用于家畜饲养时，即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此，β—受体激动剂被大量非法用于畜牧生产，其中最常用的有克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等。

长期食用含有β—受体激动剂残留的食品将对人体健康产生极大的危害，可诱发和加重心率失常病人的病情，引起心室早搏，四肢、脸、颈部骨骼肌震颤；另外还能引起代谢紊乱，对糖尿病人可发生酸中毒或酮中毒。

[1]盐酸克伦特罗(Clenbuteerol，CLB) ，又名克喘素、氨哮素、双氯醇胺，俗名瘦肉精，化学名为α—[ (叔丁氨基) 甲基]—4—氨基—3，5—二氯苯甲醇盐酸盐，分子式为C12 H18Cl12N2O•HCl ，相对分子质量为313.65。

目前，检测瘦肉精残留常用的色谱技术有高效液相色谱(HPLC)、气相色谱—质谱联用法(GC—MS)、高效液相色谱—质谱联用法(HPLC—MS) 、毛细管电泳法(CE)等。

中国已将高效液相色谱法（HPLC）作为检测饲料中盐酸克伦特罗残留的半确证法，将GC—MS 法定为确证性方法，主要用于最后确认和仲裁。

对于动物性食品，GB/T 5009.192—2003 “动物性食品中克伦特罗残留量的测定”规定的第一法为气相色谱—质谱法，第二法为高效液相色谱法，第三法为酶联免疫法。

猪肉中瘦肉精的检测

猪肉中瘦肉精的检测摘要鉴于盐酸克伦特罗(瘦肉精)在动物性食品中的残留对人体和国民经济造成了巨大的危害，本文介绍了动物肌肉组织中残留盐酸克伦特罗(瘦肉精) 的几种分析检测方法，并对未来的发展方向作了展望。

关键词：瘦肉精GC-MS HPLC ELISA1 引言瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。

在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗(Clenbuterol，CLB)【1】，而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。

当它们以超过治疗剂量5—10倍的用量用于家畜饲养时，即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此，β—受体激动剂被大量非法用于畜牧生产，其中最常用的有克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等。

长期食用含有β—受体激动剂残留的食品将对人体健康产生极大的危害，可诱发和加重心率失常病人的病情，引起心室早搏，四肢、脸、颈部骨骼肌震颤；另外还能引起代谢紊乱，对糖尿病人可发生酸中毒或酮中毒【2】。

盐酸克伦特罗(Clenbuteerol，CLB) ，又名克喘素、氨哮素、双氯醇胺，俗名瘦肉精，化学名为α—[ (叔丁氨基) 甲基]—4—氨基—3，5—二氯苯甲醇盐酸盐，分子式为C12 H18Cl12N2O•HCl ，相对分子质量为313.65。

目前，检测瘦肉精残留常用的色谱技术有高效液相色谱(HPLC)、气相色谱—质谱联用法(GC—MS)、高效液相色谱—质谱联用法(HPLC—MS) 、毛细管电泳法(CE)等。

中国已将高效液相色谱法（HPLC）作为检测饲料中盐酸克伦特罗残留的半确证法，将GC—MS 法定为确证性方法，主要用于最后确认和仲裁。

对于动物性食品，GB/T 5009.192—2003 “动物性食品中克伦特罗残留量的测定”规定的第一法为气相色谱—质谱法，第二法为高效液相色谱法，第三法为酶联免疫法。

动物组织中盐酸克伦特罗

动物组织中盐酸克伦特罗（瘦肉精）测定的前处理过程主讲人：abc_1982活动时间：2011年4月11日——4月25日热烈欢迎abc_1982在极限色谱柱版面和大家一起讨论瘦肉精的前处理过程！前言：克伦特罗：学名盐酸克伦特罗；分子式：C12-H18-Cl2-N2-O白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦，熔点161℃，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。

是一种平喘药。

该药物既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是肾上腺类神经兴奋剂。

“瘦肉精”的来历：在中国，通常所说的“瘦肉精”是指克伦特罗(它曾经作为药物用于治疗支气管哮喘，后由于其副作用太大而遭禁用),它可以增加动物的瘦肉量、减少饲料使用、使肉品提早上市、降低成本。

在上世纪90年代,国内错误的把其作为饲料添加剂使用在猪饲料中,因此叫做”瘦肉精”。

但随着其明显的副作用显现, 轻则导致心律不整，严重一点就会导致心脏病,国际上已经禁止其使用在饲料中.我国也于199 7年开始全面禁止使用。

无论什么样品的检测，其前处理的好坏直接影响到最后样品的检测结果。

而对时下大家较为关注的“瘦肉精”问题，已经严重的影响到了大家的日常生活。

对于瘦肉精检测的方法有酶联免疫吸附法（ELISA ）、高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱-质谱法（GC-MS）三种，目前使用GC-MS较多，因为其检测限低，但这些方法的前处理过程是一样的。

因此，今天我们将重点和大家一起分享“瘦肉精”检测的前处理过程。

一.适用范围适用于动物肌肉和肝脏中盐酸克伦特罗药物检测的前处理过程。

二.处理过程1.提取1.1 将5g动物组织、15 mL乙酸乙酯、3 mL10%碳酸钠溶液置于50 mL离心管中，10000 rpm均质2 min。

6000 rpm下离心2 min，将上清液转至另一离心管中。

用15 mL乙酸乙酯重复提取一次，合并提取液。

1.2 向乙酸乙酯提取液中加入5 mL 0.1 mol/L的盐酸溶液，涡动1 min，然后再6000 rpm下离心1 min，收集下层水相。

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综述盐酸克伦特罗的药理作用、在机体内的残留性及检测技术摘要：由瘦肉精引起的中毒事件屡见不鲜，而品种繁多的瘦肉精中盐酸克伦特罗是使用最普遍的一种，本文从盐酸克伦特罗的理化性质、药理作用、残留性、检测方法等方面详细介绍其对人体的危害，为我们更好的认识和抵制瘦肉精提供参考。

关键词：理化性质；药理作用；毒性；残留性；检测方法瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。

在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗，而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。

当它们以超过治疗剂量5-10倍的用量用于家畜饲养时，即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此曾被用作牛、羊、禽、猪等畜禽的促生长剂、饲料添加剂。

1. 盐酸克伦特罗的理化性质及药理作用1.1 理化性质中文名：瘦肉精；克伦特罗；学名：盐酸克伦特罗(Clenbuterol Hydrochloride)，又称氨哮素、克喘素氨双氯醇胺，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素，是一种平喘药。

该药物既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是肾上腺类神经兴奋剂。

相对分子量：313.7，分子式：C12-H18-Cl12-N2-O·HCl；图1盐酸克伦特罗结构式盐酸克伦特罗的外观与性状：白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦；熔点：174～175.5°C；溶解性：溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚[1]。

1.2 药理作用20世纪70年代中后期,克伦特罗作为一种伦特罗1000～3000 μg 具有促进新的、选择性的β肾上腺受体激动剂逐步应用于临床试验,它能够引起交感神经兴奋在治疗剂量下,强而持久地松弛支气管平滑肌,口服治疗剂量仅为30～40 μg/d, 对支气管哮喘和伴随有逆性气道梗塞的慢性支气管炎均有良好的效果,能较长时间地增加肺的最高呼气量(PEFR)，用药剂量仅为舒喘宁片的1%, 副作用和对心血管系统的作用不明显。

克伦特罗可作为支气扩张剂治疗慢性梗塞性肺部疾病,用吸入法给药,有效剂量可低至12ug；口服效果是特布他林的170倍，对心率和血压的影响不明显。

克伦特罗进入机体后, 与广泛分布于呼吸道效应细胞膜上的β2受体结合,导致受体构型改变,激活腺苷酸环化酶,催化细胞内ATP转化为cAMP,后者激活cAMP依赖性蛋白激酶,促使胞浆中游离钙浓度下降钾通道开放引起平滑肌松弛而缓解喘息等症状除松弛支气管平滑肌外克伦特罗也激活β2肾上腺受体克伦特罗能增加神经生长因子的表达而起到保护神经系统的作用,也能防止大鼠诱导性肝细胞凋亡。

此外,克伦特罗可能具有治疗过敏性炎症的作用并可以在抑制失神经肌萎缩的同时不影响或很少影响正常肌肉和心脏,促进神经修复后肌肉功能的恢复等多种生理功能[2]。

2. 盐酸克伦特罗的毒性20 世纪80年代初人们发现在肉用动物生产中每天使用克伦特罗1000～3000ug具有促进肌肉发育和脂肪分解的作用,可明显提高饲料的利用率和瘦肉率,具有能量重分配的作用。

其机理是高剂量克伦特罗通过作用于骨骼肌的β-2肾上腺受体,引起肌肉中环磷酸腺苷和乳酸浓度的快速升高,肌糖元浓度下降,加快肌肉蛋白质的合成速度长期连续使用能增加肌肉体积、增加体重。

对心肌和后肢肌肉影响最明显,使左心室比目鱼肌和深浅腓肠肌肌纤维显著性增大。

但在猪等肉用牲畜中投喂克伦特罗,即使是屠宰前停药肝肺中仍可检出较高浓度的克伦特罗。

肉中的克伦特罗可使人体出现多种毒副作用,导致体内聚胺浓度升高而继发心脏肥大。

一次性摄入克伦特罗的量过大,可迅速造成心率过速,对原有心律失常的病人更易发生心脏反应，严重时可出现心肌梗死。

同时,由于激活Na+ - K +- ATP 酶, 使K +进入细胞内引起血钾降低, 从而导致心律失常.克伦特罗通过增加肌糖原的分解,引起血乳酸丙酮酸升高并可出现酮体。

容易引起糖尿病人代谢紊乱,导致酮症酸中毒或乳酸中毒。

大鼠毒理试验表明，使用2000 μg/kg-d的高剂量克伦特罗,可极大地降低体内牛磺酸的贮备,使肌纤维受损。

此外，克伦特罗对生殖系统的影响可表现为降低子宫重量、增强子宫和阴道黏膜上皮细胞的分泌功能[3]。

盐酸克伦特罗在胃肠道吸收快,15～20min即起作用,2～3h 血浆浓度达峰值,一般健康人食用20ug药效会有所表现,5～10倍的摄人量则会导致中毒，症状为:心率加速,脸色潮红,胸闷,心悸,头痛,发热,寒战,盐酸克伦特罗激动人体骨骼肌β2-受体后,引起人体四肢、面、颈部骨骼肌震颤。

心律失常的人，心脏反应明显,引起心室早搏,ST段与T波幅压低交感神经功能亢进的人,如高血压、青光眼、糠尿病、前列腺肥大、甲状腺机能亢进等患者更易产牛急性中毒症状。

盐酸克伦特罗长时间亚治疗剂量摄入,激索残留逐渐蓄积引起慢性毒性作用可使人体产生低敏感现象,即支气管扩张作用明显减弱,作用持续时间缩短,使得哮喘发生率和发病程度增高,同时还可引起内分泌紊乱,导致血液中乳酸丙酮酸浓度升高，糖尿病人可能因此并发酸中毒。

有的学者认为盐酸克伦特罗有致癌作用，但还需要积累数据，目前还未见盐酸克伦特罗致突变、致癌的报道[4]。

3. 盐酸克伦特罗残留分布规律图2 盐酸克伦特罗在组织中残留分布盐酸克伦特罗在肌肉、肝脏、肾脏以及血浆中的残留量（图2）进行分析比较，结果显示，在同一浓度的饲料添加剂中，盐酸克伦特罗在猪体内残留量大小顺序为肝脏>肾脏>肌肉>血浆，而且，随着添加浓度的增加，在组织中的残留量也随即增加，两者之间呈正比关系[5]。

4.盐酸克伦特罗的检测方法4.1感官检验猪屠宰后，可以从肉的颜色和品质上来判断是否含有盐酸克伦特罗，如果肉色泽鲜红，松软，后臀肌饱满突出，脂肪层非常薄，胴体两侧腹股沟脂肪层内毛细血管分布密集，甚至充血，就可怀疑这样的猪肉里含有盐酸克伦特罗[6]。

4.2色谱检测4.2.1高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）具有检测精确度高、假阳性率低的特点，检测盐酸克伦特罗残留的最低检测限为1～15 μg/kg，国内已将高效液相色谱法作为检测盐酸克伦特罗残留的半确证性方法。

赵榕等[7]（2000）运用反相高效液相色谱法测定猪肝中的盐酸克伦特罗，在243 nm的检测波长下，用waters-alliance 高效液相色谱系统进行检测，流动相为甲醇和磷酸二氢钠水溶液（35+65），最后再根据保留时间R值初步定性，扫描光谱进一步确证，根据试样峰高或峰面积与标准峰高或峰面积较进行定量。

当试样取样量为2.0 g时，该法的最低检出浓度为0.25mg/kg。

苗虹等[8]（2001）将样品匀浆后用盐酸溶液超声加热提取，再用异丙醇:乙酸乙醋（40∶60）萃取，有机相浓缩后，用弱阳离子交换柱进行分离用乙醉-氨（98∶2）溶液洗脱，洗脱液以流动相（甲醇和0.01 mol/L KCl溶液以45∶55的比例配合）定容后，用美国Agilent1100 高效液相色谱仪系列进行检测，检测限达0.5g/kg。

蔡玉枝等[9]（2002）运用高效液相色谱法测定猪组织中盐酸克伦特罗残留量，采用了Dianon sil C18 200×4.6 mm 的色谱柱，流动相为0.01 mol/L NaH2PO4：甲醇（67∶33）,二极管阵列检测器，检测波长为243 nm。

采用外标法，以保留时间定性，并以盐酸克伦特罗的特征紫外吸收光谱对照样品的扫描光谱进行确认，然后根据样品峰面积计算盐酸克伦特罗含量。

还有人先用C18二氧化硅硅胶柱净化，用HPLC分离，再结合HPLC/ELISA检测、确证[10-12]。

高效液相色谱的缺点是检测过程烦琐、检测时间长,需贵重仪器、难于操作、价格昂贵。

4.2.2 气象色谱 - 质谱法气相色谱-质谱联用法（GC/MS）可以在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性定量分析，且具有较高的灵敏度，是检测盐酸克伦特罗残留的常用的方法之一。

气相色谱-质谱联用法可用于饲料、血液、组织中盐酸克伦特罗的分析，检测限为0.5μg/kg。

与高效液相色谱法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低。

因此，中国、欧盟及美国等国家将气相色谱-质谱联用法定为检测盐酸克伦特罗的确证性方法。

吴银良等[13]（2006）建立了同时测定动物肝组织中盐酸克伦特罗和盐酸莱克多巴胺残留量的固相萃取-气相色谱-质谱分析方法，并且盐酸克伦特罗和盐酸莱克多巴胺的检出限分别为0.30μg/kg和1.00μg/kg。

王红等[14]（2007）也简化了方法，测定了动物肝脏组织中的盐酸克伦特罗。

本方法所需设备昂贵，操作繁琐，分析检测前要对分子上羟基、氨基等极性基团衍生化，难以作为常规方法应用，不能进行现场检测。

4.3 酶联免疫吸附法（ELISA ）4.3.1 酶联免疫分析目前，检测盐酸克伦特罗较高效的免疫分析技术是酶联免疫吸附测定法（ELISA）。

该方法检测下限一般1.0μg/L（尿样）、0.5μg/kg（组织）。

使用该法，酶联免疫吸附测定法检测限尿液为0.3～1.0 ng/mL，组织为0.2～1.0 ng/mg。

国内外有许多检测试剂盒，但质量不一。

酶联免疫吸附测定法作为盐酸克伦特罗残留量的筛选方法具有操作简便、准确、投资小、成本低、速度快、灵敏度高、仪器设备简单等优点，适合对活体动物作大批量样品的快速分析；缺点是仍不能实现现场检测，且该法检测结果假阳性率较高，尤其当样品中含有抗生素或磺胺类药物时，会使假阳性率进一步提高[15]。

4.3.2放射免疫分析技术Ropitar和Zimmer首次报道用于β-2肾上腺素能激动剂的放射免疫测定程序和动物组织中盐酸克伦特罗的药理学研究。

Delahaut等[16]描述了建立更为特异的放射免疫方法，其中抗盐酸克伦特罗的抗体对其他β-2肾上腺素能激动剂的交叉反应小于10%，最低检测限可达到0.5 ng/g。

目前国外已生产出测定盐酸克伦特罗的试剂盒产品，还建立了类似放射免疫分析法的放射受体分析法，这是用受体代替抗体结合盐酸克伦特罗，检测限可达到2.4 ng/g。

放射免疫分析技术虽然具有特异性强、灵敏度高、操作简便、快速、易标准化、技术成熟等优点。

但仪器价格昂贵和必须使用放射性同位素作为标记物，存在着辐射防护及防止污染的问题，且试剂盒使用时间短，而且每次操作都要做标准曲线，可测量范围相对较窄，难以实现操作及测量的自动化等。

4.4 滴金免疫技术原理通过盐酸克伦特罗CL（或莱克多巴胺RAC）与CL-BSA（盐酸克伦特罗-牛血清白蛋白）偶联物（或RAC-BSA）竞争结合抗CL（或RAC）单克隆抗体-胶体金复合物，使试纸上反应线颜色变化，以判定样品中CL（或RAC）的含量。