盐酸克伦特罗(瘦肉精)
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猪肉中“瘦肉精”盐酸克伦特罗残留危害及检测方法摘要:本文介绍了盐酸克伦特罗(瘦肉精)的性质、危害性以及主要的检测方法。
关键词:盐酸克伦特罗残留检测方法1 盐酸克伦特罗的性质盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CLB)俗称瘦肉精,又名氨哮素、克喘素,化学名为“4-氨基-α-[(叔丁基氨基)甲基]-3,5-二氯苄醇盐酸盐”,常温下为白色或微黄粉末状固体,熔点为170℃~176℃,极易溶于水、甲醇和乙醇,微溶于氯仿,不溶于苯,是一种β2一肾上腺素能激动剂。
20世纪70年代末,美国等发达国家进行了盐酸克伦特罗实用性开发研究工作。
80年代,由于盐酸克伦特罗能促进猪生长,提高瘦肉率,而被作为饲料添加剂广泛应用到猪的生产中。
但是近年来,因食用被盐酸克伦特罗污染的猪肉导致中毒事件屡有发生,且后果极其严重,引起了世界各国的高度重视,为了保证猪肉产品质量安全,保护人类健康,许多国家都禁止在食用动物源性的生产中使用盐酸克伦特罗[1]。
2 危害性2.1 对猪的影响在饲用初期会在短期内出现血压升高、血管扩张、呼吸加剧、体温上升等症状,并出现采食下降、行为动作失调、神经紧张不安甚至全身震颤等症状。
后期会使猪体内糖降解作用不足,导致猪肉品质下降,同时容易发生蹄损伤和跛行,大运动量或高温条件会造成死亡。
2.2 对人的影响人食用含残留盐酸克伦特罗猪肉后对肝、肾等内脏器官会产生毒害作用,出现心悸、头痛、目眩、恶心、呕吐、心率加快、肌肉振颤等症状,特别是对高血压、心脏病、甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更大,严重的可导致死亡。
3 国内外对盐酸克伦特罗的禁用规定由于盐酸克伦特罗对猪具有加强脂肪分解,促进蛋白质合成,实现动物营养再分配,提高胴体瘦肉率,加快猪的生长等作用,盐酸克伦特罗曾作为科研成果推广,从而使多起摄入残留“瘦肉精”的消费者中毒案件发生,严重的甚至导致了死亡。
就国内而言,自1998年以来,每年都有数起类似中毒事件发生。
今年双汇“瘦肉精”事件更是引起了广泛的关注。
38 食品安全导刊 2011年5月刊ANAlySIS & TEST 分析与检测□ 莱伯泰科有限公司 供稿盐酸克伦特罗是一种β-兴奋剂,猪食用该物质后可在代谢过程中促进体内蛋白质的合成,加速脂肪的转化和分解,从而提高猪肉的瘦肉率,因此其被称为“瘦肉精”。
瘦肉精由于使用量大、使用时间长,加之在猪体内代谢慢,所以其在猪体内的残留量很大。
如果这些残留的瘦肉精通过食物链进入人体,便可导致人体食物中毒,因此一直被禁用。
然而一些养猪户不顾相关部门的规定,在饲料中掺入大量瘦肉精,视人们的食用安全而不顾,严重扰乱了肉类食品市场的秩序,给人们的日常生活带来很大影响。
在这种情境之下,如何采用科学快速的方法对猪肉中的瘦肉精进行检测,实现有效监管成为亟待解决的问题。
对于猪肉中克伦特罗的检测而言,样品前处理显得尤为重要。
为此,本文介绍了一种快速准确的检测方案,该方案使用LabTech公司全自动固相萃取仪-定量浓缩系统进行样品前处理工作,样品经提取、初步净化后,全自动完成猪肉样品的固相萃取-洗脱液浓缩-溶剂置换过程,最终样品可直接用于液相检测,极大地简化了实验人员的工作步骤,液相色谱检测准确、样品测定平行性好、回收率高。
猪肉中克伦特罗的检测——猪肉中的瘦肉精检测整体解决方案仪器与试剂仪器:LabTech Prep Elite-VS全自动固相萃取-定量浓缩仪,LabTech LC600二元梯度高效液相色谱系统;试剂:乙酸乙酯、10%碳酸钠溶液、0.1mol/L的盐酸溶液、2.5mol/L氢氧化钠溶液、甲醇(色谱级)、4%氨水甲醇、去离子水。
实验方法样品前处理1.提取方法:将50g猪肉平均分成10份,准确进行称重。
取其中5份加入15mL乙酸乙酯、3mL10%碳酸钠溶液置于50mL离心管中,10000rpm下均质2min,6000rpm下离心2min,将上清液转入另一离心管中。
用15m L乙酸乙酯重复提取残渣,合并乙酸乙酯。
第1章盐酸克伦特罗的理化性质及其主要危害1.1 盐酸克伦特罗的理化性质盐酸克伦特罗又称“瘦肉精”,是一种从天然儿茶酚胺衍生合成的化合物,化学名称为羟甲叔丁肾上腺素分子式为C12 H19 C13 N20,相对分子质量为313.5,熔点为174 ~175.5 ℃,其制剂常用盐酸盐,又称为盐酸双氯醇胺氨双氯醇胺呈白色或类白色的结晶粉末状,熔点161℃,无臭,味苦,化学性质稳定,溶于水、乙醇,微溶于丙酮。
不溶于乙醚,加热到172 ℃才能分解,盐酸克伦特罗的化学结构稳定,在体内不会被破坏分解,能耐受100 ℃高温,126 ℃油煎5min才能破坏减半,常规烹调对盐酸克伦特罗残留起不到破坏作用。
1.2盐酸克伦特罗的主要危害对人的危害:人食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉及其制品后,会发生急性中毒通常表现为肌肉振颤、心慌、战栗、头疼、恶心、呕吐等症状,特别是原有心律失常的病例会引起心室早搏,ST段与T波幅压低,还可引起代谢紊乱,产生酮体,对糖尿病病人可发生酮中毒或酸中毒,对心律失常、高血压、青光眼、糖尿病、甲状腺功能亢进、前列腺肥大等疾病的患者更容易产生急性中毒症状,严重的可导致死亡,因食用猪肉中残留有盐酸克伦特罗的急性中毒病人,临床症状以交感神经系、统兴奋性增高为主要表现,并在患者血尿中检出较高含量的盐酸克伦特罗。
人食用残留有盐酸克伦特罗的畜产品后表现为肌肉兴奋性增强,有的人中毒后表现为肌肉震颤,重症者腓肠肌痉挛;同时引起心肌收缩加强,心率加快;对高血压患者危害更大,盐酸克伦特罗分解脂肪成游离脂肪酸进入血液,使血管壁弹性降低,引起血压升高,微循环血管膨胀,压迫刺激周围的神经,引起头痛头晕;引起人内脏横纹肌和平滑肌+兴奋性增强,表现为呕吐和腹泻。
盐酸克伦特罗中毒的患者群中,对患心、脑血管疾病、糖尿病、甲状腺机能亢进、青光眼、前列腺肥大者可造成威胁生命的恶果。
孕妇中毒又可导致癌变、胎儿致畸的严重危害性。
对动物的危害:虽然盐酸克伦特罗的毒性并不很强,小鼠、豚鼠静脉注射的半数致死量分别是每公斤体重27.6mg和12.6mg,但是由于它的半衰期长,在体内代谢慢,极易蓄积残留于动物体内。
猪肉中瘦肉精的检测高峰101279012摘 要鉴于盐酸克伦特罗(瘦肉精)在动物性食品中的残留对人体和国民经济造成了巨大的危害,本文介绍了动物肌肉组织中残留盐酸克伦特罗(瘦肉精) 的几种分析检测方法,并对未来的发展方向作了展望。
关键词:瘦肉精GC-MS HPLC ELISA1 引言瘦肉精是一类药物,而不是某一种特定的药物,任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。
在中国,通常所说的瘦肉精是指克伦特罗(Clenbuterol,CLB),而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。
当它们以超过治疗剂量5—10倍的用量用于家畜饲养时,即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积,能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率,因此,β—受体激动剂被大量非法用于畜牧生产,其中最常用的有克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等。
长期食用含有β—受体激动剂残留的食品将对人体健康产生极大的危害,可诱发和加重心率失常病人的病情,引起心室早搏,四肢、脸、颈部骨骼肌震颤;另外还能引起代谢紊乱,对糖尿病人可发生酸中毒或酮中毒。
[1]盐酸克伦特罗(Clenbuteerol,CLB) ,又名克喘素、氨哮素、双氯醇胺,俗名瘦肉精,化学名为α—[ (叔丁氨基) 甲基]—4—氨基—3,5—二氯苯甲醇盐酸盐,分子式为C12 H18Cl12N2O•HCl ,相对分子质量为313.65。
目前,检测瘦肉精残留常用的色谱技术有高效液相色谱(HPLC)、气相色谱—质谱联用法(GC—MS)、高效液相色谱—质谱联用法(HPLC—MS) 、毛细管电泳法(CE)等。
中国已将高效液相色谱法(HPLC)作为检测饲料中盐酸克伦特罗残留的半确证法,将GC—MS 法定为确证性方法,主要用于最后确认和仲裁。
对于动物性食品,GB/T 5009.192—2003 “动物性食品中克伦特罗残留量的测定”规定的第一法为气相色谱—质谱法,第二法为高效液相色谱法,第三法为酶联免疫法。
猪肉中瘦肉精的检测摘要鉴于盐酸克伦特罗(瘦肉精)在动物性食品中的残留对人体和国民经济造成了巨大的危害,本文介绍了动物肌肉组织中残留盐酸克伦特罗(瘦肉精) 的几种分析检测方法,并对未来的发展方向作了展望。
关键词:瘦肉精GC-MS HPLC ELISA1 引言瘦肉精是一类药物,而不是某一种特定的药物,任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。
在中国,通常所说的瘦肉精是指克伦特罗(Clenbuterol,CLB)【1】,而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。
当它们以超过治疗剂量5—10倍的用量用于家畜饲养时,即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积,能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率,因此,β—受体激动剂被大量非法用于畜牧生产,其中最常用的有克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等。
长期食用含有β—受体激动剂残留的食品将对人体健康产生极大的危害,可诱发和加重心率失常病人的病情,引起心室早搏,四肢、脸、颈部骨骼肌震颤;另外还能引起代谢紊乱,对糖尿病人可发生酸中毒或酮中毒【2】。
盐酸克伦特罗(Clenbuteerol,CLB) ,又名克喘素、氨哮素、双氯醇胺,俗名瘦肉精,化学名为α—[ (叔丁氨基) 甲基]—4—氨基—3,5—二氯苯甲醇盐酸盐,分子式为C12 H18Cl12N2O•HCl ,相对分子质量为313.65。
目前,检测瘦肉精残留常用的色谱技术有高效液相色谱(HPLC)、气相色谱—质谱联用法(GC—MS)、高效液相色谱—质谱联用法(HPLC—MS) 、毛细管电泳法(CE)等。
中国已将高效液相色谱法(HPLC)作为检测饲料中盐酸克伦特罗残留的半确证法,将GC—MS 法定为确证性方法,主要用于最后确认和仲裁。
对于动物性食品,GB/T 5009.192—2003 “动物性食品中克伦特罗残留量的测定”规定的第一法为气相色谱—质谱法,第二法为高效液相色谱法,第三法为酶联免疫法。
动物组织中盐酸克伦特罗(瘦肉精)测定的前处理过程主讲人:abc_1982活动时间:2011年4月11日——4月25日热烈欢迎abc_1982在极限色谱柱版面和大家一起讨论瘦肉精的前处理过程!前言:克伦特罗:学名盐酸克伦特罗;分子式:C12-H18-Cl2-N2-O白色或类白色的结晶粉末,无臭、味苦,熔点161℃,溶于水、乙醇,微溶于丙酮,不溶于乙醚。
是一种平喘药。
该药物既不是兽药,也不是饲料添加剂,而是肾上腺类神经兴奋剂。
“瘦肉精”的来历:在中国,通常所说的“瘦肉精”是指克伦特罗(它曾经作为药物用于治疗支气管哮喘,后由于其副作用太大而遭禁用),它可以增加动物的瘦肉量、减少饲料使用、使肉品提早上市、降低成本。
在上世纪90年代,国内错误的把其作为饲料添加剂使用在猪饲料中,因此叫做”瘦肉精”。
但随着其明显的副作用显现, 轻则导致心律不整,严重一点就会导致心脏病,国际上已经禁止其使用在饲料中.我国也于199 7年开始全面禁止使用。
无论什么样品的检测,其前处理的好坏直接影响到最后样品的检测结果。
而对时下大家较为关注的“瘦肉精”问题,已经严重的影响到了大家的日常生活。
对于瘦肉精检测的方法有酶联免疫吸附法(ELISA )、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)三种,目前使用GC-MS较多,因为其检测限低,但这些方法的前处理过程是一样的。
因此,今天我们将重点和大家一起分享“瘦肉精”检测的前处理过程。
一.适用范围适用于动物肌肉和肝脏中盐酸克伦特罗药物检测的前处理过程。
二.处理过程1.提取1.1 将5g动物组织、15 mL乙酸乙酯、3 mL10%碳酸钠溶液置于50 mL离心管中,10000 rpm均质2 min。
6000 rpm下离心2 min,将上清液转至另一离心管中。
用15 mL乙酸乙酯重复提取一次,合并提取液。
1.2 向乙酸乙酯提取液中加入5 mL 0.1 mol/L的盐酸溶液,涡动1 min,然后再6000 rpm下离心1 min,收集下层水相。
美猪为什么要用瘦肉精,瘦肉精对人体有哪些危害
美国使用的瘦肉精是莱克多巴胺,毒性较低,在人体内容易分解排泄,而我国使用的瘦肉精是克伦特罗,毒性较大。
美国是肉类生产和出口大国,但美国人吃肉一般以牛肉为主,而中国的主食肉类是猪肉。
美国为规模化养殖,通常都是整批出售,容易管理,而且在出栏前15天,养殖户会停止饲喂瘦肉精,保证瘦肉精在限定标准以下。
一、美猪为什么要用瘦肉精
1、美国使用的瘦肉精是莱克多巴胺,毒性较低,在人体内容易分解排泄,而我国使用的瘦肉精是克伦特罗,毒性较大(全球禁用)。
2、美国是一个肉类生产和出口大国,但是美国人吃肉一般以牛肉为主,而中国的主食肉类是猪肉。
3、美国养殖猪为规模化养殖,养殖的猪通常都是整批出售,容易管理,而且在出栏前的15天左右,养殖户会停止饲喂瘦肉精,这样在检测的时候,猪肉的的瘦肉精基本已经代谢完毕,残余量也就不会超过限定标准。
4、美国人不太喜欢吃猪的内脏,而瘦肉精主要在猪的内脏中代
谢,累积。
二、瘦肉精对人体有哪些危害
1、瘦肉精定义
(1)任何能够抑制动物体内脂肪的生成,促进瘦肉的生长的物质都可以叫做瘦肉精(苯乙醇胺类化合物)。
(2)常见的瘦肉精有盐酸克仑特罗、西马特罗、马布特罗、西布特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、硫酸沙丁胺醇、盐酸多巴胺、盐酸氯丙那林、硫酸特布他林等。
2、瘦肉精危害
(1)瘦肉精急性中毒时,主要表现为心悸,面颈、四肢肌肉颤动,手指震颤,足有沉感甚至无法站立,头痛、头晕、恶心、呕吐、乏力,脸部潮红,皮肤过敏性红色丘疹。
如果原本就有高血压、冠心病、甲状腺功能亢进的患者更容易出现上述症状。
(2)长期食用盐酸克伦特罗有可能会导致染色体畸变,诱发恶性肿瘤。
盐酸克仑特罗的药物分析盐酸克仑特罗79k 生科院临床药学二班王菲125010222 盐酸克伦特罗又称“瘦肉精”,是一种平喘药。
该药物药理作用为β2肾上腺素受体激动药。
克伦特罗在家畜和人体内吸收好,而且与其它β-兴奋剂相比,它的生物利用度高,以至食用了含有克伦特罗的猪肉出现中毒。
(一)结构与性质1.结构分子式与分子量: C12H18C12N2O·HCl 313.652.物理性质外观与性状:白色或类白色的结晶粉末,无臭、味苦。
熔点:174~175.5°C分子量:313.7溶解性:溶于水、乙醇,微溶于丙酮、三氯甲烷,不溶于乙醚3.化学性质(1)具有旋光性具有手性碳原子,具有光学活性。
(2)盐酸克伦特罗属于中度蓄积性药物,在动物组织内的蓄积与其剂量和给药持续时间有关,其残留量随停药期的延长逐渐下降。
大量试验已证明盐酸克伦特罗在动物体内的残留主要集中在眼睛、毛发、肺、肝、肾及肌肉和脂肪组织。
其中眼睛的视网膜和脉络膜、毛发中残留最高,是因为其消除最慢;其次是肺、肝和肾;肌肉组织和脂肪组织中的残留情况大致相当,约为肝脏中的1/5。
克伦特罗在肺、肝脏中的残留普遍高于肾脏,且残留时间较长。
(二)鉴别检查1.鉴别方法(1)取本品约20mg,加水1ml溶解后,加20%硫酸制高锰酸钾的饱和溶液5ml,振摇数分钟,再加草酸适量,振摇使溶液褪色并澄清,加水5ml后,加2,4-二硝基苯肼的高氯酸溶液(取2,4-二硝基苯肼1.2g,加30%高氯酸溶液50ml 使溶解),有沉淀析出。
(2)取本品,加0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml中含30μg的溶液,照紫外-可见分光光度法测定,在243nm与296nm的波长处有最大吸收。
(3)本品显芳香第一胺类的鉴别反应在酸性条件下,与亚硝酸钠反应生成重氮盐。
(4)本品的水溶液显氯化物的鉴别反应取本品约20mg,精密称定,照氧瓶燃烧法进行有机破坏,用0.4%氢氧化钠溶液10ml为吸收液,俟生成的烟雾完全吸人吸收液后,继续振摇5分钟,再放置数分钟后,用水少量冲洗瓶塞及铂丝,加稀硝酸5ml,精密加硝酸银滴定液(0.02mol/L)15ml,再加硝基苯3ml,强力振摇后,加硫酸铁铵指示液2ml,用硫氰酸铵滴定液(0.02mol/L)滴定,并将滴定的结果用空白试验校正。
盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡说明书【产品名称】产品名称:盐酸克伦特罗快速检测卡(胶体金法)英文名称:Clenbuterol Rapid Test Card(Colloidal Gold)【产品简介】盐酸克伦特罗(瘦肉精主要成分)是为提高猪肉瘦肉率而使用的兴奋剂药物,在动物可食性组织中蓄积,危害食用者的健康,我国已经禁止用其做动物饲料添加剂。
本产品用于快速检测猪肉和其他肉类肌肉组织中盐酸克伦特罗残留,检测过程只需20分钟,适用于家庭、超市、食堂、食品企业及检测机构快速筛查。
【产品组成】盐酸克伦特罗快速检测卡(5条);200μL刻度吸管(5支);提取瓶(内含盐酸克伦特罗提取液0.5mL,5瓶);小勺(1个)。
【检测原理】本产品采用了竞争抑制免疫层析的原理。
【检测限】本产品检测方法对肌肉组织中盐酸克伦特罗的检出限为5 μg/kg。
【使用方法】1、取一小块瘦肉,用刀切成碎肉,用小勺将碎肉装入提取液的瓶盖内,高度与瓶盖相平(约2.0g)。
2、将瓶盖量取的碎肉转移到提取瓶内,盖紧瓶盖后振荡,使碎肉与提取液充分混匀,放入盛有热水(>80℃)的容器中热水浴10分钟后取出,冷却至室温。
3、从包装袋中取出检测卡,平放在桌面,用吸管从提取瓶中吸取肉品提取液,垂直滴加2-3滴于加样孔(S孔)中。
4、室温环境计时5分钟,对照结果判断示意图判定检测结果,其他时间判定无效。
【结果判断】阴性(-):C线和T线都显色,表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于检出限。
阳性(+):C线显色,T线不显色,表示样品中盐酸克伦特罗浓度等于或高于检出限。
无效:C线未出现,表明操作过程不正确或检测卡已失效。
在此情况下,应再次仔细阅读说明书,并用新的检测卡重新测试。
【注意事项】1、请按照使用方法进行测试,检测卡打开包装后1小时内使用,检测前将检测卡恢复至室温。
2、尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面,检测时避免阳光直射。
3、本检测卡为一次性产品,请勿重复使用。
臭名昭著的瘦肉精原来是被他引进中国的“瘦肉精”是美国发明,由浙江大学许梓荣引进中国的,上海农昊生物技术杨再教授说。
盐酸克伦特罗即“瘦肉精”是1980年代初期,由美国Cyanamid公司研制的,它可以促进动物生长,能够起到营养再分配的作用,促进动物机体的蛋白质合成和肌肉组织生长,减少脂肪尤其是皮下脂肪的沉积,欧美等国将其广泛用于畜禽养殖。
广泛使用之后就在欧美国家引发一系列中毒事件:1989年10月至1990年7月西班牙35人中毒,1992年该国北部地区又出现232人中毒。
1990年秋季,法国8个家庭22人中毒。
意大利和美国亦因使用而出现过中毒事件,现在美国已经禁止使用盐酸克伦特罗。
其实早在1997年国内供应香港的活猪中检出“瘦肉精”,给中国外贸企业带来重大损失后,中国农业部就发文禁止在饲料中添加“瘦肉精”;2001年中国农业部又规定:“瘦肉精”在任何肉食动物中不得检出。
中国“瘦肉精”的始作俑者是浙江大学动物科学院的许梓荣(当时是称浙江农业大学),他于1987年去了美国弗吉尼亚大学当访问学者,回国之后许写的一篇关于“瘦肉精”的论文,被列为国家科委“八五”攻关项目。
另外一篇许梓荣为第二作者的论文得出结论:在饲粮中添加15mg/kg盐酸克伦特罗“效果最佳”。
而有研究人员推测得出:当食物中盐酸克伦特罗含量达0.2mg/kg时,食用者便有可能出现中毒临床症状,食用生猪的猪内脏(猪肺或猪肝)比猪肉更易中毒,甚至仅喝猪肺汤或猪肝汤都可能导致中毒。
许梓荣说,早在1992年猪场做实验时,发现吃了“瘦肉精”饲料的猪爬着站不起来,然而后来发表的论文却没有提及此副作用。
许梓荣解释:如果在论文中介绍了“瘦肉精”的副作用,我们的论文发不了。
实际上,其时许梓荣已经知道美国禁用β-兴奋剂(即“瘦肉精”-- 盐酸克伦特罗,β-兴奋剂的一种)。
但他拿到了课题,也并未向国内透露美国已经禁用一事,随后还获了奖。
许梓荣现在还感到很冤枉,由于“被指搞过(β-)兴奋剂”,最终无缘成为中国工程院院士。
综述盐酸克伦特罗的药理作用、在机体内的残留性及检测技术摘要:由瘦肉精引起的中毒事件屡见不鲜,而品种繁多的瘦肉精中盐酸克伦特罗是使用最普遍的一种,本文从盐酸克伦特罗的理化性质、药理作用、残留性、检测方法等方面详细介绍其对人体的危害,为我们更好的认识和抵制瘦肉精提供参考。
关键词:理化性质;药理作用;毒性;残留性;检测方法瘦肉精是一类药物,而不是某一种特定的药物,任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。
在中国,通常所说的瘦肉精是指克伦特罗,而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。
当它们以超过治疗剂量5-10倍的用量用于家畜饲养时,即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积,能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率,因此曾被用作牛、羊、禽、猪等畜禽的促生长剂、饲料添加剂。
1. 盐酸克伦特罗的理化性质及药理作用1.1 理化性质中文名:瘦肉精;克伦特罗;学名:盐酸克伦特罗(Clenbuterol Hydrochloride),又称氨哮素、克喘素氨双氯醇胺,化学名称为羟甲叔丁肾上腺素,是一种平喘药。
该药物既不是兽药,也不是饲料添加剂,而是肾上腺类神经兴奋剂。
相对分子量:313.7,分子式:C12-H18-Cl12-N2-O·HCl;图1盐酸克伦特罗结构式盐酸克伦特罗的外观与性状:白色或类白色的结晶粉末,无臭、味苦;熔点:174~175.5°C;溶解性:溶于水、乙醇,微溶于丙酮,不溶于乙醚[1]。
1.2 药理作用20世纪70年代中后期,克伦特罗作为一种伦特罗1000~3000 μg 具有促进新的、选择性的β肾上腺受体激动剂逐步应用于临床试验,它能够引起交感神经兴奋在治疗剂量下,强而持久地松弛支气管平滑肌,口服治疗剂量仅为30~40 μg/d, 对支气管哮喘和伴随有逆性气道梗塞的慢性支气管炎均有良好的效果,能较长时间地增加肺的最高呼气量(PEFR),用药剂量仅为舒喘宁片的1%, 副作用和对心血管系统的作用不明显。
克伦特罗可作为支气扩张剂治疗慢性梗塞性肺部疾病,用吸入法给药,有效剂量可低至12ug;口服效果是特布他林的170倍,对心率和血压的影响不明显。
克伦特罗进入机体后, 与广泛分布于呼吸道效应细胞膜上的β2受体结合,导致受体构型改变,激活腺苷酸环化酶,催化细胞内ATP转化为cAMP,后者激活cAMP依赖性蛋白激酶,促使胞浆中游离钙浓度下降钾通道开放引起平滑肌松弛而缓解喘息等症状除松弛支气管平滑肌外克伦特罗也激活β2肾上腺受体克伦特罗能增加神经生长因子的表达而起到保护神经系统的作用,也能防止大鼠诱导性肝细胞凋亡。
此外,克伦特罗可能具有治疗过敏性炎症的作用并可以在抑制失神经肌萎缩的同时不影响或很少影响正常肌肉和心脏,促进神经修复后肌肉功能的恢复等多种生理功能[2]。
2. 盐酸克伦特罗的毒性20 世纪80年代初人们发现在肉用动物生产中每天使用克伦特罗1000~3000ug具有促进肌肉发育和脂肪分解的作用,可明显提高饲料的利用率和瘦肉率,具有能量重分配的作用。
其机理是高剂量克伦特罗通过作用于骨骼肌的β-2肾上腺受体,引起肌肉中环磷酸腺苷和乳酸浓度的快速升高,肌糖元浓度下降,加快肌肉蛋白质的合成速度长期连续使用能增加肌肉体积、增加体重。
对心肌和后肢肌肉影响最明显,使左心室比目鱼肌和深浅腓肠肌肌纤维显著性增大。
但在猪等肉用牲畜中投喂克伦特罗,即使是屠宰前停药肝肺中仍可检出较高浓度的克伦特罗。
肉中的克伦特罗可使人体出现多种毒副作用,导致体内聚胺浓度升高而继发心脏肥大。
一次性摄入克伦特罗的量过大,可迅速造成心率过速,对原有心律失常的病人更易发生心脏反应,严重时可出现心肌梗死。
同时,由于激活Na+ - K +- ATP 酶, 使K +进入细胞内引起血钾降低, 从而导致心律失常.克伦特罗通过增加肌糖原的分解,引起血乳酸丙酮酸升高并可出现酮体。
容易引起糖尿病人代谢紊乱,导致酮症酸中毒或乳酸中毒。
大鼠毒理试验表明,使用2000 μg/kg-d的高剂量克伦特罗,可极大地降低体内牛磺酸的贮备,使肌纤维受损。
此外,克伦特罗对生殖系统的影响可表现为降低子宫重量、增强子宫和阴道黏膜上皮细胞的分泌功能[3]。
盐酸克伦特罗在胃肠道吸收快,15~20min即起作用,2~3h 血浆浓度达峰值,一般健康人食用20ug药效会有所表现,5~10倍的摄人量则会导致中毒,症状为:心率加速,脸色潮红,胸闷,心悸,头痛,发热,寒战,盐酸克伦特罗激动人体骨骼肌β2-受体后,引起人体四肢、面、颈部骨骼肌震颤。
心律失常的人,心脏反应明显,引起心室早搏,ST段与T波幅压低交感神经功能亢进的人,如高血压、青光眼、糠尿病、前列腺肥大、甲状腺机能亢进等患者更易产牛急性中毒症状。
盐酸克伦特罗长时间亚治疗剂量摄入,激索残留逐渐蓄积引起慢性毒性作用可使人体产生低敏感现象,即支气管扩张作用明显减弱,作用持续时间缩短,使得哮喘发生率和发病程度增高,同时还可引起内分泌紊乱,导致血液中乳酸丙酮酸浓度升高,糖尿病人可能因此并发酸中毒。
有的学者认为盐酸克伦特罗有致癌作用,但还需要积累数据,目前还未见盐酸克伦特罗致突变、致癌的报道[4]。
3. 盐酸克伦特罗残留分布规律图2 盐酸克伦特罗在组织中残留分布盐酸克伦特罗在肌肉、肝脏、肾脏以及血浆中的残留量(图2)进行分析比较,结果显示,在同一浓度的饲料添加剂中,盐酸克伦特罗在猪体内残留量大小顺序为肝脏>肾脏>肌肉>血浆,而且,随着添加浓度的增加,在组织中的残留量也随即增加,两者之间呈正比关系[5]。
4.盐酸克伦特罗的检测方法4.1感官检验猪屠宰后,可以从肉的颜色和品质上来判断是否含有盐酸克伦特罗,如果肉色泽鲜红,松软,后臀肌饱满突出,脂肪层非常薄,胴体两侧腹股沟脂肪层内毛细血管分布密集,甚至充血,就可怀疑这样的猪肉里含有盐酸克伦特罗[6]。
4.2色谱检测4.2.1高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)具有检测精确度高、假阳性率低的特点,检测盐酸克伦特罗残留的最低检测限为1~15 μg/kg,国内已将高效液相色谱法作为检测盐酸克伦特罗残留的半确证性方法。
赵榕等[7](2000)运用反相高效液相色谱法测定猪肝中的盐酸克伦特罗,在243 nm的检测波长下,用waters-alliance 高效液相色谱系统进行检测,流动相为甲醇和磷酸二氢钠水溶液(35+65),最后再根据保留时间R值初步定性,扫描光谱进一步确证,根据试样峰高或峰面积与标准峰高或峰面积较进行定量。
当试样取样量为2.0 g时,该法的最低检出浓度为0.25mg/kg。
苗虹等[8](2001)将样品匀浆后用盐酸溶液超声加热提取,再用异丙醇:乙酸乙醋(40∶60)萃取,有机相浓缩后,用弱阳离子交换柱进行分离用乙醉-氨(98∶2)溶液洗脱,洗脱液以流动相(甲醇和0.01 mol/L KCl溶液以45∶55的比例配合)定容后,用美国Agilent1100 高效液相色谱仪系列进行检测,检测限达0.5g/kg。
蔡玉枝等[9](2002)运用高效液相色谱法测定猪组织中盐酸克伦特罗残留量,采用了Dianon sil C18 200×4.6 mm 的色谱柱,流动相为0.01 mol/L NaH2PO4:甲醇(67∶33),二极管阵列检测器,检测波长为243 nm。
采用外标法,以保留时间定性,并以盐酸克伦特罗的特征紫外吸收光谱对照样品的扫描光谱进行确认,然后根据样品峰面积计算盐酸克伦特罗含量。
还有人先用C18二氧化硅硅胶柱净化,用HPLC分离,再结合HPLC/ELISA检测、确证[10-12]。
高效液相色谱的缺点是检测过程烦琐、检测时间长,需贵重仪器、难于操作、价格昂贵。
4.2.2 气象色谱 - 质谱法气相色谱-质谱联用法(GC/MS)可以在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性定量分析,且具有较高的灵敏度,是检测盐酸克伦特罗残留的常用的方法之一。
气相色谱-质谱联用法可用于饲料、血液、组织中盐酸克伦特罗的分析,检测限为0.5μg/kg。
与高效液相色谱法相比,检测灵敏度更高,假阳性率更低。
因此,中国、欧盟及美国等国家将气相色谱-质谱联用法定为检测盐酸克伦特罗的确证性方法。
吴银良等[13](2006)建立了同时测定动物肝组织中盐酸克伦特罗和盐酸莱克多巴胺残留量的固相萃取-气相色谱-质谱分析方法,并且盐酸克伦特罗和盐酸莱克多巴胺的检出限分别为0.30μg/kg和1.00μg/kg。
王红等[14](2007)也简化了方法,测定了动物肝脏组织中的盐酸克伦特罗。
本方法所需设备昂贵,操作繁琐,分析检测前要对分子上羟基、氨基等极性基团衍生化,难以作为常规方法应用,不能进行现场检测。
4.3 酶联免疫吸附法(ELISA )4.3.1 酶联免疫分析目前,检测盐酸克伦特罗较高效的免疫分析技术是酶联免疫吸附测定法(ELISA)。
该方法检测下限一般1.0μg/L(尿样)、0.5μg/kg(组织)。
使用该法,酶联免疫吸附测定法检测限尿液为0.3~1.0 ng/mL,组织为0.2~1.0 ng/mg。
国内外有许多检测试剂盒,但质量不一。
酶联免疫吸附测定法作为盐酸克伦特罗残留量的筛选方法具有操作简便、准确、投资小、成本低、速度快、灵敏度高、仪器设备简单等优点,适合对活体动物作大批量样品的快速分析;缺点是仍不能实现现场检测,且该法检测结果假阳性率较高,尤其当样品中含有抗生素或磺胺类药物时,会使假阳性率进一步提高[15]。
4.3.2放射免疫分析技术Ropitar和Zimmer首次报道用于β-2肾上腺素能激动剂的放射免疫测定程序和动物组织中盐酸克伦特罗的药理学研究。
Delahaut等[16]描述了建立更为特异的放射免疫方法,其中抗盐酸克伦特罗的抗体对其他β-2肾上腺素能激动剂的交叉反应小于10%,最低检测限可达到0.5 ng/g。
目前国外已生产出测定盐酸克伦特罗的试剂盒产品,还建立了类似放射免疫分析法的放射受体分析法,这是用受体代替抗体结合盐酸克伦特罗,检测限可达到2.4 ng/g。
放射免疫分析技术虽然具有特异性强、灵敏度高、操作简便、快速、易标准化、技术成熟等优点。
但仪器价格昂贵和必须使用放射性同位素作为标记物,存在着辐射防护及防止污染的问题,且试剂盒使用时间短,而且每次操作都要做标准曲线,可测量范围相对较窄,难以实现操作及测量的自动化等。
4.4 滴金免疫技术原理通过盐酸克伦特罗CL(或莱克多巴胺RAC)与CL-BSA(盐酸克伦特罗-牛血清白蛋白)偶联物(或RAC-BSA)竞争结合抗CL(或RAC)单克隆抗体-胶体金复合物,使试纸上反应线颜色变化,以判定样品中CL(或RAC)的含量。