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猪肉中“瘦肉精”盐酸克伦特罗残留危害及检测方法摘要:本文介绍了盐酸克伦特罗(瘦肉精)的性质、危害性以及主要的检测方法。
关键词:盐酸克伦特罗残留检测方法1 盐酸克伦特罗的性质盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CLB)俗称瘦肉精,又名氨哮素、克喘素,化学名为“4-氨基-α-[(叔丁基氨基)甲基]-3,5-二氯苄醇盐酸盐”,常温下为白色或微黄粉末状固体,熔点为170℃～176℃,极易溶于水、甲醇和乙醇,微溶于氯仿,不溶于苯,是一种β2一肾上腺素能激动剂。
20世纪70年代末,美国等发达国家进行了盐酸克伦特罗实用性开发研究工作。
80年代,由于盐酸克伦特罗能促进猪生长,提高瘦肉率,而被作为饲料添加剂广泛应用到猪的生产中。
但是近年来,因食用被盐酸克伦特罗污染的猪肉导致中毒事件屡有发生,且后果极其严重,引起了世界各国的高度重视,为了保证猪肉产品质量安全,保护人类健康,许多国家都禁止在食用动物源性的生产中使用盐酸克伦特罗[1]。
2 危害性2.1 对猪的影响在饲用初期会在短期内出现血压升高、血管扩张、呼吸加剧、体温上升等症状,并出现采食下降、行为动作失调、神经紧张不安甚至全身震颤等症状。
后期会使猪体内糖降解作用不足,导致猪肉品质下降,同时容易发生蹄损伤和跛行,大运动量或高温条件会造成死亡。
2.2 对人的影响人食用含残留盐酸克伦特罗猪肉后对肝、肾等内脏器官会产生毒害作用,出现心悸、头痛、目眩、恶心、呕吐、心率加快、肌肉振颤等症状,特别是对高血压、心脏病、甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更大,严重的可导致死亡。
3 国内外对盐酸克伦特罗的禁用规定由于盐酸克伦特罗对猪具有加强脂肪分解,促进蛋白质合成,实现动物营养再分配,提高胴体瘦肉率,加快猪的生长等作用,盐酸克伦特罗曾作为科研成果推广,从而使多起摄入残留“瘦肉精”的消费者中毒案件发生,严重的甚至导致了死亡。
就国内而言,自1998年以来,每年都有数起类似中毒事件发生。
今年双汇“瘦肉精”事件更是引起了广泛的关注。
瘦肉精的详解2011031270 白一帆摘要：盐酸克伦特罗是一种β-兴奋剂，20世纪80年代初，美国一家公司开始将其添加到饲料中，增加瘦肉率，但如果作为饲料添加剂，使用剂量是人用药剂量的10倍以上，才能达到提高瘦肉率的效果。
它用量大、使用的时间长、代谢慢，所以在屠宰前到上市，在猪体内的残留量都很大。
这个残留量通过食物进入人体，就使人体渐渐地中毒，积蓄中毒。
如果一次摄入量过大，就会产生异常生理反应的中毒现象，因此而被禁用。
国内养猪户不顾农业部的规定，为了使猪肉不长肥膘，在饲料中掺入瘦肉精。
猪食用后在代谢过程中促进蛋白质合成，加速脂肪的转化和分解，提高了猪肉的瘦肉率，因此称为瘦肉精。
有数种药物被称为瘦肉精，例如莱克多巴胺（Ractopamine）及克伦特罗（Clenbuterol）等。
在中国，通常所说的“瘦肉精”则是指克伦特罗。
它曾经作为药物用于治疗支气管哮喘，后由于其副作用太大而遭禁用。
其它这样类似药物还有沙丁胺醇（Salbutamol）和特布他林(Terbutaline)等，同样能起到“瘦肉”作用、却对人体健康危害过大，因而造成安全隐患。
它们也因而在全球遭到禁用。
关键词：瘦肉精，盐酸克伦特罗，检测，毒理，危害双汇旗下公司被央视3·15特别节目曝光。
央视报道，双汇宣称“十八道检验、十八个放心”，但猪肉不检测“瘦肉精”。
添加“瘦肉精”养殖的有毒生猪，顺利卖到双汇集团旗下公司。
据央视《每周质量报告》的3·15特别节目《“健美猪”真相》报道，养猪场采用违禁动物药品“瘦肉精”饲养，有毒猪肉流向了双汇。
济源双汇食品有限公司是河南双汇集团下属的分公司，以生猪屠宰加工为主，有自己的连锁店和加盟店，“十八道检验、十八个放心”的字样随处可见，但却不包括“瘦肉精”检测。
自双汇瘦肉精事件后，农业部表态称违法瘦肉精现象仍未禁绝。
最近又爆出市场一种新型瘦肉精——苯乙醇胺A悄然现身“苯乙醇胺A等同于瘦肉精。
综述盐酸克伦特罗的药理作用、在机体内的残留性及检测技术摘要：由瘦肉精引起的中毒事件屡见不鲜，而品种繁多的瘦肉精中盐酸克伦特罗是使用最普遍的一种，本文从盐酸克伦特罗的理化性质、药理作用、残留性、检测方法等方面详细介绍其对人体的危害，为我们更好的认识和抵制瘦肉精提供参考。
关键词：理化性质；药理作用；毒性；残留性；检测方法瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。
在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗，而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。
当它们以超过治疗剂量5-10倍的用量用于家畜饲养时，即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此曾被用作牛、羊、禽、猪等畜禽的促生长剂、饲料添加剂。
1. 盐酸克伦特罗的理化性质及药理作用1.1 理化性质中文名：瘦肉精；克伦特罗；学名：盐酸克伦特罗(Clenbuterol Hydrochloride)，又称氨哮素、克喘素氨双氯醇胺，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素，是一种平喘药。
该药物既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是肾上腺类神经兴奋剂。
相对分子量：313.7，分子式：C12-H18-Cl12-N2-O·HCl；图1盐酸克伦特罗结构式盐酸克伦特罗的外观与性状：白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦；熔点：174～175.5°C；溶解性：溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚[1]。
1.2 药理作用20世纪70年代中后期,克伦特罗作为一种伦特罗1000～3000 μg 具有促进新的、选择性的β肾上腺受体激动剂逐步应用于临床试验,它能够引起交感神经兴奋在治疗剂量下,强而持久地松弛支气管平滑肌,口服治疗剂量仅为30～40 μg/d, 对支气管哮喘和伴随有逆性气道梗塞的慢性支气管炎均有良好的效果,能较长时间地增加肺的最高呼气量(PEFR)，用药剂量仅为舒喘宁片的1%, 副作用和对心血管系统的作用不明显。
瘦肉精的性质特点及危害检测瘦肉精（Ractopamine），是一种被广泛用于家禽、猪和牛等畜禽养殖中的生长激素类药物。
它能够促进动物生长，提高肌肉的比例，增加肉类产量和肌肉的质量。
然而，瘦肉精的使用也引发了一系列的争议和风险，导致人们对其性质特点及危害进行深入研究和严格的监测。
一、瘦肉精的性质特点1. 化学性质：瘦肉精属于β-受体激动剂，化学名称为4-羟基-3-甲氧基苯丙酸苯丙胺盐酸盐。
它主要通过活化β2-肾上腺素能受体，刺激肌肉生长并抑制脂肪堆积。
2. 使用特点：瘦肉精在畜禽养殖过程中主要添加于饲料中，通过进食被动物摄入。
它能够促进肌肉生长，减少脂肪含量，提高肉类质量。
然而，合理使用剂量能够改善生产效益，但过量或滥用可能带来潜在的风险。
二、瘦肉精的危害1. 食品安全问题：瑞典有关瘦肉精的研究发现，摄入含有瘦肉精的肉类可能会对人体健康造成潜在风险，如心脏疾病、神经系统问题等。
尤其是某些人群（如孕妇、老年人、儿童）对于瘦肉精摄入可能更为敏感。
2. 法律法规限制：由于瘦肉精使用存在风险，许多国家和地区已经实施了严格的限制和监管措施，禁止或者严格限制将瘦肉精应用于食品生产。
这是为了保护公众的健康和维护食品安全。
三、瘦肉精的危害检测1. 检测方法：为了确保食品安全，各国相关机构开发出了不同的瘦肉精检测方法，包括高效液相色谱法（HPLC）、质谱联用技术（MS）、酶联免疫吸附试验（ELISA）等。
这些方法能够准确、快速地检测出瘦肉精的残留量。
2. 监测体系：为了保障瘦肉精的监测工作能够有效进行，各国建立了完善的瘦肉精残留监测体系。
这些体系包括监测网络的建立、制定标准和限值、加强对兽药生产和使用的监管等。
只有通过全面有效的监测，才能及时发现和控制瘦肉精的危害。
四、对瘦肉精使用的管理与控制1. 严禁滥用：各国要采取严格的管理措施，对瘦肉精的滥用进行监督和打击，加强兽药的生产、销售和使用环节的监管。
通过严禁滥用，可以减少瘦肉精对人体健康的危害。
瘦肉精对人体的危害（山东大学化学与化工学院2010级化学基地班耿轶峥 201000112008）一、选定课题的简要说明：近年来，被曝光的瘦肉精事件层出不穷。
从2006年全国各地的瘦肉精中毒事件到2011年双汇瘦肉精丑闻，猪肉尤其是瘦肉正在成为一个格外敏感的话题。
但是瘦肉精的主要成分到底是什么，它到底是怎样“瘦肉”的，它又是如何危害人体健康的，这些问题我们却不一定能回答的上来。
因而，只有充分了解瘦肉精，了解其给人体带来的危害，或许能避免瘦肉精中毒的惨剧。
瘦肉精其实是一类药物的总称。
从广义上来讲，任何能在给猪喂食后促进猪的脂肪率降低和瘦肉率提高的药物都可以被称为是瘦肉精。
在这些药物中，盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、硫酸沙丁胺醇、莱克多巴胺、盐酸多巴胺、西马特罗、硫酸特布他林是国家2008年1月9日《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》中禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种。
由于盐酸克伦特罗是作为瘦肉精最常见的药物，因而后文将用其代指瘦肉精。
二、信息检索说明：1 检索关键词：瘦肉精、盐酸克伦特罗、危害、人体规范主题词：瘦肉精、危害、人体2 检索工具和数据库：2．1 中国期刊全文数据库2．2 万方数据系统2．3 重庆维普中文科技期刊数据库3 检索过程简述：为了尽可能搜索全面，同时又尽量保持与课题内容联系紧密，检索方式采用“高级检索”或“在结果中检索”，并使用关键词进行检索。
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3．1 中国期刊全文数据库关键词：“瘦肉精”检索结果：511篇“瘦肉精”并且“危害”检索结果：21篇“瘦肉精”并且“危害”并且“人体”检索结果：3篇“盐酸克仑特罗”检索结果：44篇“盐酸克仑特罗”并且“危害”检索结果：1篇“盐酸克仑特罗”并且“危害”并且“人体”检索结果：0篇3．2 万方数据系统关键词：“瘦肉精”检索结果： 222篇“瘦肉精”并且“危害”检索结果：36篇“瘦肉精”并且“危害”并且“人体”检索结果：3篇“盐酸克伦特罗”检索结果：230篇“盐酸克伦特罗”并且“危害”检索结果：43篇“盐酸克伦特罗”并且“危害”并且“人体”检索结果：12篇3．3 重庆维普中文科技期刊数据库关键词：“瘦肉精”检索结果：1333篇“瘦肉精”并且“危害”检索结果：55篇“瘦肉精”并且“危害”并且“人体”检索结果：2篇“盐酸克伦特罗”检索结果：439篇“盐酸克伦特罗”并且“危害”检索结果：35篇“盐酸克伦特罗”并且“危害”并且“人体”检索结果：3篇通过对检索结果进行比较，在对瘦肉精的定义中，“瘦肉精”比“盐酸克伦特罗”作为关键词更为全面。
瘦肉精的本质及毒性等一、“瘦肉精”的化学本质瘦肉精的化学名为盐酸克伦特罗。
它是一种人工合成的β-肾上腺素能兴奋剂，具有扩张支气管的作用，常用来防治哮喘、肺气肿等肺部疾病。
当其应用剂量达到治疗量的5~10倍时，又具有能量重分配作用，可使肌肉合成增加，脂肪沉积减少，因此俗称为“瘦肉精”。
在畜牧业生产中一些非法生产者将其作为一种生长促进剂添加到动物饲料中，用以改善胴体的品质，同时也造成食品中瘦肉精的残留。
所以，瘦肉精既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是严重危害畜牧业生产和人体健康的毒品。
该品为白色或类白色的结晶性粉末，无臭、味苦、易溶于水。
二、瘦肉精的毒性：1.急性中毒有心悸，面颈、四肢肌肉颤动，有手抖甚至不能站立，头晕，乏力，原有心律失常的患者更容易发生反应，心动过速，室性早搏，心电图示S-T 段压低与T波倒置。
2.原有交感神经功能亢进的患者，如有高血压、冠心病、甲状腺功能亢进者上述症状更易发生。
3.与糖皮质激素合用可引起低血钾，从而导致心律失常。
4.反复使用会产生耐受性，对支气管扩张作用减弱及持续时间缩短。
三、生猪食用“瘦肉精”后的表现：1、猪毛色光亮，皮肤红润，喜睡不愿动，吊肚，臀部肌肉丰满紧绷，脂肪薄，有经验的肉贩用手抓捏臀部肌肉的厚度，即可判别该猪是否食用瘦肉精。
有的猪背部肌肉丰满凹下成槽，驱赶时起身困难，气喘，个别跛行。
2、高温季节驱赶猪易发生应激反应，表现为猪行走困难，站立不稳，四肢发抖，全身肌肉震颤，并伴有呼吸困难，喘气急促，很快就会死亡。
3、一般在临上市前20天在饲料或饮水中临时添加喂食，在库存饲料中检测难以发现，如喂食超过20天，猪会出现站立不稳，肌肉震颤等迹象。
4、宰后胴体肌肉颜色深红，肌肉饱满、结实、不易渗出液体，皮薄，脂肪较少。
而未食用“瘦肉精”的猪肉相对色淡，脂肪较厚、肌肉切面容易渗出液体，由于肉贩误导，消费者不会区分的话，就很容易买到不健康的猪肉，一些不法肉贩为了自己的利益，要求农户喂食，否则压级压价，甚至不予收购，导致该毒品在生猪养殖环节中蔓延。
法律法规与行政执法盐酸克仑特罗及其残留毒性陆有飞广西生物制品厂530001S816.7中图分类号:文献标识码:B文章编号:1002-5235(2002)05-0036-02摘要:盐酸克仑特罗(俗称:瘦肉精)属B2受体兴奋剂,我国国家药典有收载,供人医临床使用,但畜牧生产上的非法使用造成在动物性食品中的残留超标,对消费者具有直接毒性作用,危及人类健康。
本文对盐酸克仑特罗的药理作用及其非法使用造成的残留毒性进行了综述,供广大畜牧工作者参考。
关键词:盐酸克仑特罗残留毒性最近几年,人吃了含有盐酸克仑特罗的肉品出现中毒的事件时有发生,2001年11月发生在广东河源市的一例已成为国人谈论的焦点。
我国5药品管理法6及其配套规章明确规定禁止非法生产盐酸克仑特罗,任何单位和个人不得将这种药出售给非医疗机构和个人;5饲料和饲料添加剂管理条例6中也规定严禁在饲料和饲料添加剂中添加盐酸克仑特罗等激素类药物。
因此,政府在建立并健全相应监督体系的同时,还要求广大畜牧工作者强化职业道德,从改善人民生活质量方面着想,不非法使用违禁药物。
因此,我们了解盐酸克仑特罗有着重要的现实意义。
1盐酸克仑特罗的结构与理化性质1.1分子式分子量分子式:C12H18Cl2N2O#H Cl分子量:3131661.2理化性质本品为白色或几乎白色的结晶性粉末,无臭,味微苦。
在水或乙醇中溶解,在氯仿或丙酮中微溶,在乙醚中不溶,熔点为172~176e。
2药理作用盐酸克仑特罗作为强效选择性B2受体激动剂,其松弛支气管平滑肌作用强而持久,使支气管舒张,通气改善,子宫平滑肌也表现舒张、松弛。
还较强的影响体内物质代谢作用,降低脂肪生成和促进脂肪分解,促进蛋白质的合成,使降解减少;还能促进胰岛素的释放,使糖原分解增加,因此表现为血中游离脂肪酸、乳酸和葡萄糖浓度增加。
3药动学本品内服后吸收快,并有累积现象,猪的吸收半衰期为0122小时。
犊牛内服5微克/千克,20分钟后血浆浓度不断增加,2)7小时达到峰值,一天2次连续使用,第一天的血浆浓度为015纳克/毫升,第三天为017纳克/毫升,第21天为111纳克/毫升。
瘦肉精又名克伦特罗；盐酸克伦特罗；盐酸双氯醇胺；克喘素；氨哮素；氨必妥；氨双氯喘通；氨双氯醇胺。
毒理：能激动β－2受体，对心脏有兴奋作用，对支气管平滑肌有较强而持久的扩张作用。
口服后较易经胃肠道吸收。
临床表现1. 急性中毒有心悸，面颈、四肢肌肉颤抖，头晕、乏力。
心动过速，室性早博，心电图示S-T段压低与T波倒置。
2. 原有交感神经功能亢进的患者，如有高血压、冠心病、甲状腺功能亢进者上述症状更易发生。
3. 与糖皮质激素合用可引起低血钾，从而导致心律失常。
4. 反复使用会产生耐受性，对支气管扩张作用减弱及持续时间缩短。
急救治疗1. 口服后即洗胃、输液，促使毒物排出。
2. 在心电图监测及电解质测定下，使用保护心脏药物如6－二磷酸果糖（FD P）及β－1受体阻滞剂倍他乐克。
预防方法1. 控制源头，加强法规的宣传，禁止在饲料中掺入瘦肉精。
2. 加强对上市猪肉的检验。
3. 购买猪肉的消费者，如果发现猪肉肉色较深、肉质鲜艳，后臀肌肉饱满突出，脂肪非常薄，这种猪肉则可能使用过“瘦肉精”。
检测方法GB/T 5009.192-2003 动物性食品中克伦特罗残留量的瘦肉精测定气相色谱-质谱法（GC-MS）GC-MS法优点是把色谱高效快速的分离效果和质谱高灵敏度的定性分析有机合起来，能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且具更高的检测极限。
Fente C. A等用GC-MS法检测牛毛中CLB的残留，最低检测限为5ng/g[6]；Pteer Batioens应用气相色谱－串联质谱法(GC-MS-MS)对牛、羊、猪组织中的CLB含量进行检测，最低检测限为2ng/g[7]；刘琪等用GC-MS法（EI离子源）检测猪尿中的CLB，检测限为0.5ng/mL；VanRhijin等用三甲基硅基或2-二甲基硅基吗啉衍生物检测尿提取物中的CLB，衍生物用电脉冲方式或化学离子化方式扫描，会产生更高的灵敏度。
另外，GC-MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低。
盐酸克伦特罗
盐酸克伦特罗，商品名称为咳喘素、舒喘宁、瘦肉精，成品为白色或类白色晶体粉状，无嗅、味微苦，是一种人工合成的选择性β-肾上腺素受体兴奋剂。
盐酸克伦特罗既不是兽药，也不属于饲料添加剂，是一种名副其实的激素类物质。
由于盐酸克伦特罗添加于饲料中饲喂猪可疑显著提高瘦肉率，促进肌肉的生长，从20世纪80年代国外开始使用，我国从90年代后期开始在猪饲料中添加，它的添加给经营者带来巨大的利润，但是由于其在畜产品中的残留，给广大消费者也造成了极大危害。
2、盐酸克伦特罗的危害
盐酸克伦特罗的理化性质和作用特点，决定了其一旦饲用，难以代谢排出，会大量蓄积在动物体内，维持较高的残留量。
2.1盐酸克伦特罗的易残留性
盐酸克伦特罗的饲用特点：少量短期难以见效，大量长期应用会出现畜产品残留的问题。
在家畜生产中使用的有效剂量一般是哮喘剂量的5-10倍，有较强的药性，溶解代谢率低，不易大量代谢排出，残留量较高。
盐酸克伦特罗化学性质稳定，一般高温难以分解，作为一类激素，通过腺体深入到组织细胞膜内发挥作用，难以代谢清除。
2.2盐酸克伦特罗对人畜的危害
盐酸克伦特罗的应用对动物有害，盐酸克伦特罗在动物血管系统中发生作用，使气管扩张，影响肌肉蛋白质代谢、脂肪代谢及肝脏中的糖代谢，严重影响动物正常的生长发育。
人食用含有盐酸克伦特罗
残留的肉，可引起血压升高、血管扩张、心跳加快、呼吸加剧，产生恶心、呕吐、头晕、乏力和肌肉颤抖甚至不能站立等现象，给患者的精神、健康及正常生活造成严重危害。
肉类研究盐酸克伦特罗的残留与食品安全董昕�王娟（长春市产品质量监督检验院）肉和脏器中残留的“瘦肉精”毒性破坏。
�盐酸克伦特罗残留对人体健康的危害摘键要：十年来�食品动物生产使用违禁药物“瘦肉精”——盐酸克仑特罗已受到了社会各个层面的广泛关注�食品安全越来越 受到人们的重视。
本文阐述了盐酸克伦 特罗在机体内的分解代谢、残留和对人 畜的危害。
长期或超标、滥用盐酸克伦特罗，特别是抗生素及激素作为饲料添加剂，其危害不仅降低了动 物产品的品质，造成重大经济损失，更为严重的是 危害人体健康，影响生命质量。
关键词：盐酸克伦特罗；残留；食品安全��食物中毒如果动物性食品中的盐酸克伦特罗残留严重 ，人体一次摄入的量过大，就会引起急性中 毒反应。
如��年�月，香港居民因食用了内 地供应的猪内脏，造成�人中毒。
��年�月 ���������������������� ������������������������� �日和�日，浙江省杭州、嘉兴、金华等地的大 量市民，因食用了含盐酸克伦特罗的猪肉而引 ����������������������� 发的食物中毒事件。
还有，��年西班牙有� 个家庭的成员因吃了含大量的盐酸克伦特罗的 ����������������������������牛肝而发生了集体食物中毒。
��年�月�日上海市民多人因食含有盐酸克伦特罗的猪肉民以食为天，吃饭是天下第一大事，是人类生存、发展和健康之首。
随着社会经济的发展，人们 生活、生产和环境中外源性化学物质的日益增多 和公众健康意识的提高，食品污染问题层出不穷， 食品安全越来越受到人们的重视。
��年�月� 集体中毒。
药物残留的危害绝大多数是通过长期接触或在体内逐渐蓄积而造成的。
��对胃肠道菌群的影响在正常情况下，人体的肠道所寄生的细菌多 数为非致病性菌群或条件性致病菌群，少数属于 致病菌。
这些菌群在相互抵抗下维持着平衡，构成 人体内外的微生态环境。
摘要盐酸克伦特罗酶联免疫反应适用于尿样、组织和饲料等样品中克伦特罗残留的量检测，是一项筛查盐酸克伦特罗残留的新技术。
克伦特罗作为一种主要的β- 兴奋剂应用于畜禽肉制品生产中, 用以提高肌肉和脂肪的比例并加快生长速度。
由于克伦特罗可作为肌肉舒缓剂用于人类疾病治疗, 在畜禽中过量残留可能会对消费者造成危害, 为此, 被禁止在食品生产中应用。
由于该检测方法技术性强，对试验环境要求特殊，因此影响ELISA检测质量的因素有很多，如试剂因素、标本因素和操作因素等。
试剂的质量固然是影响检测结果准确性的关键因素,然而检测人员的操作是否规范合理对ELISA检测结果的影响也不可忽视。
本论文就ELISA法检测猪的肝脏中盐酸克伦特罗含量以及试剂的选择、温育条件、洗涤次数、准确加样、显色时间等多个操作因素对检测结果产生的影响进行了分析并针对性的提出了相应的控制对策，从而为养殖者和政府监督管理部门提供了更准确快速的检测盐酸克伦特罗残留的方法。
关键词：酶联免疫；检测；盐酸克伦特罗；关键控制因素摘要应该改为：本论文就ELISA法检测猪的肝脏中盐酸克伦特罗含量以及试剂的选择、温育条件、洗涤次数、准确加样、显色时间等多个操作因素对检测结果产生的影响进行分析，针对性的提出了相应的控制对策，从而为养殖者和政府监督管理部门提供了更准确快速的检测盐酸克伦特罗残留的方法。
试验结果表明，、、、、、、AbstractClenbuterol hydrochloride enzyme-linked immune response is applicable to urine, fodder and other groups and the amount of clenbuterol residues in the sample testing, clenbuterol hydrochloride residue is a screening of the new technology. Clenbuterol, as a main beta stimulants used in products production, to increase the proportion of muscle and fat and speed up the growth. Because of clenbuterol can be used as a muscle relieving agent in human disease treatment, in livestock and poultry excessive residues may cause harm to consumers, therefore, have been banned in food production in the application. Because the test method of technical and special requirement to the test environment, so that the influencing factors on the quality of the ELISA detection has a lot of, such as reagents, specimen and operating factors. Reagent is the quality of the key factors influencing the accuracy of the test results, however, check whether the operation of the personnel specification is reasonable on the result of ELISA detection also cannot be ignored. This thesis just ELISA method to detect clenbuterol hydrochloride content in pig's liver, as well as the choice of reagent, temperature condition, washing frequency, accurate sample and chromogenic time multiple operating factors on the impact of test results are analyzed and put forward the corresponding control countermeasures, which provides the farmers and the government supervision and regulation department more accurate rapid detection of clenbuterol hydrochloride residue method.Key words:enzyme-linked immune；Detection；Clenbuterol hydrochloride；The key control factors一、引言1.1 文献综述盐酸克伦特罗酶联免疫反应测试盒适用于尿样、组织和饲料等样品中克伦特罗残留的量检测。
盐酸克仑特罗的药物分析盐酸克仑特罗79k 生科院临床药学二班王菲125010222 盐酸克伦特罗又称“瘦肉精”，是一种平喘药。
该药物药理作用为β2肾上腺素受体激动药。
克伦特罗在家畜和人体内吸收好，而且与其它β-兴奋剂相比，它的生物利用度高，以至食用了含有克伦特罗的猪肉出现中毒。
(一)结构与性质1.结构分子式与分子量: C12H18C12N2O·HCl 313.652.物理性质外观与性状：白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦。
熔点：174～175.5°C分子量：313.7溶解性：溶于水、乙醇，微溶于丙酮、三氯甲烷，不溶于乙醚3.化学性质（1）具有旋光性具有手性碳原子，具有光学活性。
（2）盐酸克伦特罗属于中度蓄积性药物，在动物组织内的蓄积与其剂量和给药持续时间有关，其残留量随停药期的延长逐渐下降。
大量试验已证明盐酸克伦特罗在动物体内的残留主要集中在眼睛、毛发、肺、肝、肾及肌肉和脂肪组织。
其中眼睛的视网膜和脉络膜、毛发中残留最高，是因为其消除最慢；其次是肺、肝和肾；肌肉组织和脂肪组织中的残留情况大致相当，约为肝脏中的1/5。
克伦特罗在肺、肝脏中的残留普遍高于肾脏，且残留时间较长。
（二）鉴别检查1.鉴别方法（1）取本品约20mg，加水1ml溶解后，加20%硫酸制高锰酸钾的饱和溶液5ml，振摇数分钟，再加草酸适量，振摇使溶液褪色并澄清，加水5ml后，加2，4-二硝基苯肼的高氯酸溶液（取2，4-二硝基苯肼1.2g，加30%高氯酸溶液50ml 使溶解），有沉淀析出。
（2）取本品，加0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml中含30μg的溶液，照紫外-可见分光光度法测定，在243nm与296nm的波长处有最大吸收。
（3）本品显芳香第一胺类的鉴别反应在酸性条件下，与亚硝酸钠反应生成重氮盐。
（4）本品的水溶液显氯化物的鉴别反应取本品约20mg，精密称定，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用0.4%氢氧化钠溶液10ml为吸收液，俟生成的烟雾完全吸人吸收液后，继续振摇5分钟，再放置数分钟后，用水少量冲洗瓶塞及铂丝，加稀硝酸5ml，精密加硝酸银滴定液（0.02mol/L）15ml，再加硝基苯3ml，强力振摇后，加硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰酸铵滴定液（0.02mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。
瘦肉精介绍及吃了添加瘦肉精的猪肉对人有什么危害?瘦肉精；克伦特罗；学名盐酸克伦特罗；分子式：C12-H18-Cl2-N2-O白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦，熔点161℃，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。
瘦肉精”学名盐酸克伦特罗，该药可以增加蛋白质的合成，添加在生猪饲料中可以使猪的肥肉明显减少，瘦肉增加。
“瘦肉精”是一种平喘药，又称氨哮素、克喘素。
一般来说，饲料中添加适量烟酸克伦特罗后，可使饲料转化率、生长速度、酮体瘦肉率提高10%以上。
所以有人干脆就称它为“瘦肉精”。
它既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是肾上腺类神经兴奋剂，实际上是一种激素，一种严重危害畜牧业健康发展和畜产品安全的“毒品”。
“瘦肉精”进入体内后具有分布快、消除慢的特点，其化学性质稳定，烹调时难以破坏它的毒性。
“瘦肉精”毒性较强，用药过多或无病用药会出现肌肉震颤、心慌、战栗、头痛、恶心、呕吐等不良反应，尤其对高血压、心脏病、甲亢、前列腺肥大等患者，其危险性更为严重。
长期使用，有可能导致染色体畸变，会诱发恶性肿瘤。
猪在吃了“瘦肉精”后，其毒性主要积蓄在猪肝、猪肺等处。
人在吃了烧熟的猪肝、猪肺后，会出现中毒症状。
养殖户之所以用“瘦肉精”，是因为“瘦肉精”可以为他们带来更大的利润。
一般来说，养殖一头瘦肉型的猪从畜种到成猪，其成本要比养殖一头普通型的猪高出许多，仅购买两种猪的花费与相对长的养殖期就使得不少养殖户无法承受。
用“瘦肉精”把一头普通猪催变成瘦肉型猪，前后只要10-20天左右的时间，成本仅8块钱，净利却高达22块钱，利润率为275%，且吃了药的猪毛色光亮，臀部肌肉饱满发达，生猪卖相非常抢眼;屠宰后的猪肉由于瘦肉精的蓄积，色泽鲜红诱人十分抢手，为消费者所青睐。
“瘦肉精”的危害极大，消费者在购买猪肉时一定要加倍小心。
购买时一定要看清该猪肉是否有卫生检疫证。
鉴别猪肉是否含有“瘦肉精”的最简单方法是看该猪肉是否具有脂肪(猪油)，如果发现猪肉的皮下就是瘦肉，那么，这种猪肉就存在含有“瘦肉精”的可能。
┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊装┊┊┊┊┊订┊┊┊┊┊线┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊第1章盐酸克伦特罗的理化性质及其主要危害1.1 盐酸克伦特罗的理化性质盐酸克伦特罗又称“瘦肉精”，是一种从天然儿茶酚胺衍生合成的化合物，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素分子式为C12 H19 C13 N20，相对分子质量为313．5，熔点为174 ～175.5 ℃，其制剂常用盐酸盐，又称为盐酸双氯醇胺氨双氯醇胺呈白色或类白色的结晶粉末状，熔点161℃，无臭，味苦，化学性质稳定，溶于水、乙醇，微溶于丙酮。
不溶于乙醚，加热到172 ℃才能分解，盐酸克伦特罗的化学结构稳定，在体内不会被破坏分解，能耐受100 ℃高温，126 ℃油煎5min才能破坏减半，常规烹调对盐酸克伦特罗残留起不到破坏作用。
1.2盐酸克伦特罗的主要危害对人的危害：人食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉及其制品后，会发生急性中毒通常表现为肌肉振颤、心慌、战栗、头疼、恶心、呕吐等症状，特别是原有心律失常的病例会引起心室早搏，ST段与T波幅压低，还可引起代谢紊乱，产生酮体，对糖尿病病人可发生酮中毒或酸中毒，对心律失常、高血压、青光眼、糖尿病、甲状腺功能亢进、前列腺肥大等疾病的患者更容易产生急性中毒症状，严重的可导致死亡，因食用猪肉中残留有盐酸克伦特罗的急性中毒病人，临床症状以交感神经系、统兴奋性增高为主要表现，并在患者血尿中检出较高含量的盐酸克伦特罗。
人食用残留有盐酸克伦特罗的畜产品后表现为肌肉兴奋性增强，有的人中毒后表现为肌肉震颤，重症者腓肠肌痉挛；同时引起心肌收缩加强，心率加快；对高血压患者危害更大，盐酸克伦特罗分解脂肪成游离脂肪酸进入血液，使血管壁弹性降低，引起血压升高，微循环血管膨胀，压迫刺激周围的神经，引起头痛头晕；引起人内脏横纹肌和平滑肌+兴奋性增强，表现为呕吐和腹泻。
盐酸克伦特罗中毒的患者群中，对患心、脑血管疾病、糖尿病、甲状腺机能亢进、青光眼、前列腺肥大者可造成威胁生命的恶果。
孕妇中毒又可导致癌变、胎儿致畸的严重危害性。
对动物的危害:虽然盐酸克伦特罗的毒性并不很强，小鼠、豚鼠静脉注射的半数┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊装┊┊┊┊┊订┊┊┊┊┊线┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊致死量分别是每公斤体重27.6mg和12.6mg，但是由于它的半衰期长，在体内代谢慢，极易蓄积残留于动物体内。
在动物肝脏中盐酸克伦特罗平均浓度可达45mg/kg，因而极有可能通过食物链使人体中毒而对健康构成威胁。
盐酸克伦特罗的短期毒性以心肌损伤为主要特征，染毒的小鼠心肌纤维排列紊乱，部分肌纤维断裂，心血管扩张和血管周隙增大。
心肌细胞横纹模糊，颗粒变性等盐酸克伦特罗可使大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力显著降低，丙二醛含量明显升高，破坏机体氧化与抗氧化的动态平衡，并对胸腺和脾脏等免疫器官产生不同程度的病理损伤。
┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊装┊┊┊┊┊订┊┊┊┊┊线┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊第2章盐酸克伦特罗主要检测方法的研究进展2.1高效液相色谱法（HPLC）β-肾上腺素能激动剂分子可与C18或C8固定相分子相互作用，所以反相柱常应用于HPLC技术中检测β-激动剂类物质。
HPLC适合测定热不稳定和强极性的β-激动剂及其代谢产物，而且可以与柱前提取、纯化及柱后荧光衍生化反应和质谱（MS）等系统联用，容易实现分析过程的自动化。
运用反相高效液相色谱法测定猪肝中的盐酸克伦特罗，在243nm的检测波长下，用waters-alliance高效液相色谱系统进行检测[1]，流动相为甲醇和磷酸二氢钠水溶液（35+65），最后再根据保留时间 RT 值初步定性，扫描光谱进一步确证，根据试样峰高或峰面积与标准峰高或峰面积比较进行定量。
当试样取样量为2.0 g时，该法的最低检出浓度为0.25 mg/kg 。
将样品匀浆后用盐酸溶液超声加热提取，再用异丙醇、乙酸乙醋（40∶60）萃取，有机相浓缩后，用弱阳离子交换柱进行分离用乙醉-氨（98∶2）溶液洗脱，洗脱液以流动相（甲醇和0.01mol/LKCl溶液以45：55的比例配合）定容后，用美国Agilent1100 高效液相色谱仪系列进行检测，检测限达0.5μg/kg 。
运用高效液相色谱法测定猪组织中盐酸克伦特罗残留量[2]，采用了Dianon sil C18 200×4.6mm 的色谱柱，流动相为 0.01 mol/L NaH2PO4 ：甲醇（67∶33），二极管阵列检测器，检测波长为243nm采用外标法，以保留时间定性，并以盐酸克伦特罗的特征紫外吸收光谱对照样品的扫描光谱进行确认，然后根据样品峰面积计算盐酸克伦特罗含量。
还有人先用C18二氧化硅硅胶柱净化，用HPLC分离，再结合HPLC/ELISA 检测、确证。
目前，中国已将HPLC法作为检测盐酸克伦特罗残留的半确证性方法，最低检测限范围为1~15ng/g，其优点是检测精确度高，而且假阳性率低；缺点是检测过程繁琐、检测时间长，需贵重仪器、难于操作、费用昂贵。
近年来，液质联用技术也被用来检测瘦肉精，这种方法的准确度较高，检测灵敏度也高。
2.2 气相色谱-质谱法（GC-MS）┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊装┊┊┊┊┊订┊┊┊┊┊线┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊GC-MS法能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且具有较高的灵敏度。
用GC-MS法检测牛毛中盐酸克伦特罗的残留[3]，最低检测限为5ng/g。
GC-MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低。
GC-MS法的缺点同HPLC相似。
2.3免疫分析法（IA）免疫分析法都有固定的试剂盒，因此检测结果便于把握。
检测灵敏度高。
检测限可达到0.5ng/ml甚至更低。
而且样品前处理简单或不需要前处理，成本低，一次可以检测数百份饲料样品或十余份肝脏、肉品及尿样等。
有放射免疫分析法（RIA）和酶联免疫吸附测定法（ELISA）。
但此类方法的缺点是仍不能实现现场检测，假阳性率高。
2.3.1 酶联免疫分析目前，检测盐酸克伦特罗较高效的免疫分析技术是酶联免疫吸附测定法（ELISA）[4]。
该方法检测下限一般为1.0 μg/L（尿样）、0.5 μg/kg（组织）。
使用该法，酶联免疫吸附测定法检测限尿液为0.3～1.0 ng/mL，组织为0.2～1.0 ng/mg。
国内外有许多检测试剂盒，但质量不一。
酶联免疫吸附测定法作为盐酸克伦特罗残留量的筛选方法具有操作简便、准确、投资小、成本低速度快、灵敏度高、仪器设备简单等优点，适合对活体动物作大批量样品的快速分析；缺点是仍不能实现现场检测且该法检测结果假阳性率较高，尤其当样品中含有抗生素或磺胺类药物时，会使假阳性率进一步提高。
2.3.2 放射免疫分析技术用于β-2 肾上腺素能激动剂的放射免疫测定程序和动物组织中盐酸克伦特罗的药理学研究。
建立更为特异的放射免疫方法，其中抗盐酸克伦特罗的抗体对其他β-2 肾上腺素能激动剂的交叉反应小于 10%，最低检测限可达到0.5ng/g。
目前国外已生产出测定盐酸克伦特罗的试剂盒产品，还建立了类似放射免疫分析法的放射受体分析法，这是用受体代替抗体结合盐酸克伦特罗，检测限可达到2.4 ng/g。
放射免疫分析技术虽然具有特异性强、灵敏度高、操作简便、快速、易标准化、技术成熟等优点。
┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊装┊┊┊┊┊订┊┊┊┊┊线┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊但仪器价格昂贵和必须使用放射性同位素作为标记物，存在着辐射防护及防止污染的问题，且试剂盒使用时间短，而且每次操作都要做标准曲线，可测量范围相对较窄，难以实现操作及测量的自动化等。
2.3.3滴金免疫技术原理通过盐酸克伦特罗 CL（或莱克多巴胺 RAC）与 CL-BSA（盐酸克伦特罗-牛血清白蛋白）偶联物（或RAC-BSA）竞争结合抗CL（或RAC单克隆抗体-胶体金复合物，使试纸上反应线颜色变化，以判定样品中C或RAC）的含量。
当检样中CL（或RAC）浓度低于最低检测水平时，胶体金中的抗CL（或RAC）单抗-胶体金复合物与T线上的CL-BSA偶联物（或RAC-BSA）结合，T 线呈色与C线相近：当检样中CL（或RAC）浓度大于5 ng/mL 时，抗 CL（或 RAC）单抗 -胶体金复合物与CL（或 RAC）结合T 线显色比C线浅或完全看不到线，且CL（或RAC）浓度越高T线显色越浅从而作出判定。
滴金免疫技术具有简便易行、快速、试剂安全、特异性高、可单份测定、不需要特殊仪器和设备等优点，且金标试剂比酶试剂更稳定，冷冻干燥后可长期保存，便于常规应用。
2.3.4时间分辨荧光免疫分析技术时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）是一种新型的超微量的非放射性标记免疫分析技术，它以镧系元素为标记物。
时间分辨荧光免疫分析技术集酶标记免疫分析和放射免疫分析等优点于一身，且克服了酶标记物的不稳定性、化学发光仅能一次发光且易受环境干扰和电化学发光的非直接标记等缺点，降低了非特异性信号，达到了极高的信噪比，大大地超过了放射性同位素所能达到的灵敏度，且还具有标记物制备方便、储存时间长、无放射性污染、检测重复性好、操作流程短、标准曲线范围宽、不受样品自然荧光干扰、应用范围广泛等优点。
因此，越来越受到人们的关注。
目前，国内外应用于盐酸克伦特罗检测的时间分辨荧光免疫分析技术的报道还较少，随着技术的越来越成熟，其应用将更广泛。
如果研制成检测盐酸克伦特罗的时间分辨荧光免疫分析技术试纸条，将可对盐酸克伦特罗的残留进行现场检测。
┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊装┊┊┊┊┊订┊┊┊┊┊线┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊2.4 生物传感技术（Biosensor，BS）将生物技术与微电子技术相结合，利用生物体内抗原、抗体专一性结合而导致电化学变化设计成免疫生物传感器。
将 CL（或 RAC）抗体微型化膜固定于换能器（工作电极）表面，测定时在待测样品溶液中加入已知浓度的酶标激素,CL（或 RAC）与标记抗原竞争性地结合电极上的抗体，使经洗涤后的电极与底物溶液接触，标记酶催化底物发生相应的化学变化，转变为电信号输出，输出显示和数据处理系统将信息进行数据处理和输出，直接显示测得 CL（或RAC）的含量。
国外已有用生物传感器技术检测CLB 残留的资料报道 , 如 Pizzariello Andrea 应用分子印迹聚合膜（MIP）作为分子识别系统，选择固相基质复合电极（SBMCE）作为换能器，微分脉冲电压电流表（DPV）作为输出显示装置检测牛肝脏中 CLB 残留，结果此方法特异性强，与其他同类物质交叉反应低，缺点是反应时间较长，灵敏度还有待于提高。
目前酶免疫传感器的灵敏度达 0.01μg/kg，而且可在几分钟之内完成检测全过程。
目前研制成功的检测盐酸克伦特罗的酶免疫传感器，检测限为 0.3μg/kg，可在10min内完成检测全过程，且传感器体积小（15cm×7cm×2cm），便于携带和实现现场检测。
