影响血氨测定试剂盒检测结果一致性的原因探讨_诸兴桂

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术,应用流式细胞术的原理检测细胞,大大提高了对异常形态血细胞的筛选能力。

本组实验提示,Sy smex XT-1800i血液分析仪白细胞五分类结果与人工显微镜分类结果比较,无论有无报警信息提示,除嗜碱性粒细胞的分类相关性较差外,其他4项(中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞)分类的相关性都比较好,与文献报道相符[3]。

本组实验在93份未检出异常细胞的标本中,仪器提示有核红细胞的报警信号16次,均为重度贫血标本,镜检未见有核红细胞。

仪器提示原始/异形淋巴细胞有52次,镜检有26份标本可见大淋巴细胞,5例急性淋巴细胞白血病,均未见原始/异形淋巴细胞,这可能是由于大淋巴细胞与异形淋巴细胞的体积、颗粒及染色质有部分相似,仪器在细胞的鉴别程度上存在较大困难;仪器提示原始细胞/未成熟颗粒18例,其中肾移植后10例,急性淋巴细胞白血病8例,均未见原始细胞/未成熟颗粒;17份提示有原始细胞或未成熟颗粒而镜检阴性的标本有待进一步探讨。

本研究表明,Sy smex XT-1800i血液分析仪具有性能良好、简便、快捷、精密等优点,对于异常细胞的检测有较高的检出率,可以大大减轻检验工作者的劳动强度,但对于是何种异常细胞仪器则不能完全分辨出来,同时还存在一定的假阳性率。

因此笔者认为,只要仪器出现异常细胞的报警信息都应进行手工涂片、染色镜检,以便能够确认异常报警信息的可靠性及为何种异常细胞,为临床提供更为准确的信息。

参考文献1刘斌,潘秀芳,王玉丰.Sysmex sf-3000血液分析仪白细胞分类两种虚假提示及解决方法[J].检验医学与临床,2007, 4(1):75-76.2叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京:东南大学出版社,2006.11.3李志方.Sysmex XT-1800i血液分析仪对形态异常细胞报警的评价[J].中国热带医学,2006,6(7):1323.(收稿日期:2007-12-22)临床研究影响血氨测定试剂盒检测结果一致性的原因探讨诸兴桂(重庆市荣昌县人民医院检验科402460)=摘要>目的探讨导致常用血氨检测试剂盒检测结果不一致的原因。

方法分别用北京利德曼和英国朗道试剂盒配套的氨校准品和自配氨标准液校准仪器后,各测定20份血浆血氨浓度,采用配对t检验分析比较各组氨测定值的差异;通过稳定性试验观察氨标准液的稳定性。

结果用试剂盒配套标准品校准的测定结果为:北京利德曼(8.82?1.87)mo l/L,英国朗道(33.84?12.00)mo l/L,两组结果比较差异有统计学意义(P<0.01)。

用自配氨标准液对两种试剂盒校准的测定结果为:北京利德曼(37.84?7.43)mol/L,英国朗道(43.30?8.30)mo l/L,两组结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。

氨标准液稳定性试验显示,氨标准液在放置过程中氨会自动逸出,24h降低率可达45.8%。

结论北京利德曼和英国朗道血氨试剂盒测定结果不一致,其原因是校准液不统一所致,可通过使用同一标准品校准加以解决。

=关键词>血氨;标准品;试剂盒,诊断中图分类号:R446.112;R916.3文献标志码:A文章编号:1672-9455(2008)07-415-02血氨测定是诊断及治疗肝性脑病的重要指标,测定结果不准确可能对临床诊断及治疗造成误导。

由于目前血氨的测定尚未建立标准体系,不同实验室间的测定结果差异仍然很大[1],没有理想的质控品,检测结果偏移难以发现,批间、天间测定结果难以保持一致。

因此,标准品的稳定性和准确性是保证血氨测定结果准确可靠的重要因素。

笔者在日常工作中发现血氨测定结果稳定性差,采用不同厂家试剂盒测定结果差异也很大。

为了解造成血氨测定结果不稳定和不同厂家血氨试剂盒测定结果差异过大的原因,本文对血氨标准液的稳定性及其对测定结果的影响进行了探讨,现报道如下。

1材料与方法1.1仪器日立7020全自动生化分析仪。

1.2试剂1.2.1血氨测定试剂盒北京利德曼(L eadman)生化技术有限公司生产的血氨测定试剂盒(批号:607051)和英国朗道(R AN DO X)实验诊断有限公司生产的血氨测定试剂盒(批号:A M1015)。

1.2.2氨标准液为试剂盒配套的氨标准液和自配氨标准液。

自配氨标准液按文献[2]介绍方法配制,用分析天平精确称取硫酸铵6.60mg溶于无氨蒸馏水中,并稀释至100mL,即为1.0mmo l/L氨标准液;将1.0mmo l/L氨标准液用蒸馏水稀释10倍,即为100L mo l/L的氨标准溶液。

1.3样本采用肝素抗凝真空管抽取静脉血2mL,立即分离血浆,及时上机测定。

为保证测定结果不受标本性状的影响,不采集溶血、黄疸和脂血标本的数据。

1.4测定参数设置严格按照试剂盒说明书规定,在日立7020全自动生化分析仪上分别设定北京利德曼和英国朗道血氨测定参数[3]。

2结果2.1两种试剂盒测定结果分别用北京利德曼和英国朗道两种试剂盒配套标准品校准仪器后,测定20份血浆标本。

结果北京利德曼为(8.82? 1.87)mo l/L,英国朗道为(33.84?12.00)mo l/L,两种试剂盒间测定结果经配对t检验分析,差异有统计学意义(P<0.01)。

2.2自配氨标准液校准后测定结果用自配氨标准液对利德曼和朗道两种试剂盒进行校准,测定20份血浆标本。

结果利德曼为(37.84?7.43)mol/L,朗道为(43.30?8.30)mo l/L。

两种试剂盒间测定结果经配对t检验分析,差异无统计学意义(P>0.05)。

2.3氨标准液稳定性试验观察将1.0mmol/L氨溶液稀释成50、100、200、400L mo l/L。

于0、2、24h用利德曼氨测定试剂分别测定反应吸光度变化率v A340/min,平行测定3次,取均值,结果见表1。

结果显示,氨标准液在放置过程中浓度会自然降低,高浓度氨标准液降低达到45.8%。

表1氨标准液稳定性试验结果(v A340/min)氨标准液(L mol/L)0h2h24h500.120.11(8.3%)*0.08(33.3%)*1000.230.21(8.7%)*0.15(34.8%)*2000.470.39(17.0%)*0.29(38.3%)*4000.960.76(20.8%)*0.52(45.8%)*注:括号内为与0h氨标准液吸光度变化率比较,v A340/min降低百分率;*表示与0h v A340/min比较,P<0.05。

3讨论血氨主要是在肝脏内转变成尿素后由肾脏排出体外,少部分合成谷氨酰胺等重新被利用。

当重症肝病,门静脉、肝静脉短路,代谢障碍,肝功能严重受损时,氨不能从循环中清除,血氨增高。

高血氨易通过血脑屏障引起肝性脑病(肝昏迷)[4]。

血氨的测定有助于肝昏迷患者的监测和处理;血氨的动态监测还可作为判断和估测重症肝炎、肝硬化、肝癌及肝性脑病严重程度和预后判断的指标;对小儿代谢性脑损伤的诊断或筛查具有价值。

随着自动生化分析仪的普及使用,目前临床实验室多采用谷氨酸脱氢酶法测定血氨浓度,并都直接采用试剂生产厂家提供的氨试剂盒测定[3]。

由于各生产厂家所采用的工具酶来源不同和试剂配方不同,因而产品质量也不尽相同。

本试验结果表明,北京利德曼生化技术有限公司和英国朗道实验诊断有限公司生产的血氨测定试剂盒的检测结果有明显差异,其结果不具有可比性,表现为北京利德曼氨试剂盒测定结果偏低。

通过用同一氨标准溶液校准后,两试剂盒测定结果基本一致,经统计学分析,两组结果差异无统计学意义(P>0.05)。

氨标准液稳定性试验结果表明,氨标准液在放置过程中不稳定,放置2 h,含氨50L mol/L的标准液下降8.3%,400L mo l/L氨标准液下降20.8%;放置24h后,含氨50L mo l/L的标准液下降33.3%,400L mo l/L氨标准液下降45.8%。

说明氨标准液在放置过程中氨会自动逸出,其逸出速度与所含氨浓度呈正比,即氨含量越高,下降率越大。

本文结果提示,氨标准液宜采用低浓度,同时强调注意密封,开盖后的氨标准液放置2h后所含氨量即降低,不能再用于校准。

如继续使用,将导致测定结果偏高。

本文结果还提示,在氨测定过程中应注意氨测定标本的采集与保存。

一般情况下都强调注意防止标本氨污染和含氮物质分解对氨测定结果的影响,忽视了标本中氨自动逸出造成氨测定结果的降低。

因此,测定氨的标本应密封并立即分离血浆,及时测定。

由于各生产厂家试剂盒测定结果的差异,给临床诊断和疗效观察带来极大的不便,严重者可导致误诊。

用自配氨标准液可以解决这一问题,但日常工作中要求每个实验室自配氨标准液也不现实,由于各实验室计量器具的差异也难以做到结果一致。

为解决此问题,国际临床化学协会先后提出两种解决方法:一是推荐统一的测定方法;二是用校准品对各系统进行统一校准[5],即使用统一的标准液。

但目前尚无统一标准液或统一方法,各实验室在开展氨测定前,必须仔细对试剂盒进行方法学评价,确定本实验室参考范围。

一旦选定试剂盒后,不要任意更改试剂生产厂家,以免造成测定结果的严重偏差,给临床造成诊疗错误。

参考文献1张丽华,崇雨田,庄鹏,等.血氨对亚临床肝性脑病的影响[J].实用医学杂志,2003,19(4):376-377.2叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京:东南大学出版社,2006.460.3王凤学,安邦权.临床生物化学自动分析操作规程[M].北京:人民军医出版社,2006.185.4周新,涂植光.临床生物化学和生物化学检验[M].第3版.北京:人民卫生出版社,2006.244.5Gerbaut L,M acart M.Is standa rdizat ion mor e impo rtant than methods by using patient specimen co rr elations to as-sig n ca librat or v alues[J].A r ch Patho l Lab M ed,1993,117(4):412.(收稿日期:2008-01-24)5中国医药指南6杂志征稿启事5中国医药指南6杂志是由国家卫生部主管,中国医学基金会主办,重庆市卫生信息中心协办,半月刊。

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