大鼠脊髓横断

大鼠脊髓横断及半横断模型的复制动物脊髓损伤模型既可用来研究脊髓损伤的病理生理学机制，又可用来筛选有助于脊髓损伤恢复的治疗措施。

损伤模型包括以下几类：①机械损伤；②电损伤；③激光损伤；④缺血性脊髓损伤以及化学损伤。

复制机械性脊髓损伤模型的关键点，是如何使脊髓损伤客观化、定量化，并具有较高的可重复性。

脊髓横断或半横断模型最常见，方法较为简便。

1、实验准备（1）动物：SD大鼠，体重180～220g。

（2）器械：大鼠固定木板1块医用酒精棉球若干5ml一次性注射器1支弯头手术剪1把（14#，备皮用）双面保险刀片1片尖端圆钝的细钢丝钩形探针1根（可用回形针自己制作，尖端尽量磨圆）手术显微镜1架（条件允许时）直尺1把缝线及缝针（3）试剂：3%戊巴比妥钠（30mg/kg），冰冻生理盐水，温热生理盐水2、实验步骤（1）观察大鼠在脊髓损伤前的行走行为，并用针刺其后肢脚趾，观察反应情况。

（2）选择体重180～220g的雌性大白鼠，经腹腔注射3%异戊巴比妥钠（30mg/kg）麻醉后，腹位固定于手术台上，剪除胸腰断背部毛发，于T5~T13中线切开皮肤，钝性分离浅筋膜，剪开棘突两侧筋膜及肌肉，于T8~T9进行椎板切除术。

暴露脊髓，用温热生理盐水冲洗伤口。

（3）脊髓横断：将双面保险刀片打磨成适当的形状，尖端呈锐角，便于切断脊髓。

将一尖端圆钝的细钢丝钩形探针，沿硬脊膜外由椎管的一侧导致另一侧，轻轻提起脊髓，运用刀片往返运动（如锯木头般）切断脊髓。

此时，如脊髓完全横断，则探针可由脊髓断端取出。

用冰冻生理盐水反复冲洗伤口止血。

（4）脊髓半横断：将打磨好的尖端锐利的保险刀片沿脊髓中线（尽量避开脊髓中央动脉）垂直插入至椎管底，并向椎管一侧划开脊髓，重复一次，保证一侧脊髓完全横断。

用冰冻生理盐水反复冲洗。

（5）手术效果观察：在手术显微镜下观察伤口出血情况和脊髓断端损伤程度。

断端回缩，测量断端间隙，检查脊髓横断或半横断是否完全。

（1）脊髓损伤手术完成后，用细缝线缝合深层肌肉，逐层缝合伤口。

实验目的：1. 观察脊髓横切后的生理变化。

2. 研究脊髓横切对机体运动和感觉功能的影响。

3. 探讨脊髓横切在神经科学研究和临床治疗中的应用价值。

实验材料：1. 实验动物：成年大鼠（体重200-250g）。

2. 实验仪器：手术显微镜、手术器械、解剖显微镜、电子天平、电生理记录仪等。

3. 实验试剂：生理盐水、碘伏、酒精、10%福尔马林等。

实验方法：1. 实验动物处死后，打开胸腔，暴露心脏，用生理盐水心脏灌流。

2. 暴露脊髓，用手术显微镜观察脊髓横切位置。

3. 在脊髓横切位置上方和下方分别标记，并记录脊髓横切长度。

4. 分别记录脊髓横切前后的动物活动情况、体温、呼吸等生理指标。

5. 通过电生理记录仪观察脊髓横切前后神经传导功能的变化。

6. 将脊髓横切后的动物进行病理学检查，观察脊髓横切对脊髓组织的影响。

实验结果：1. 脊髓横切后，动物活动明显减少，表现出瘫痪状态。

2. 脊髓横切后，动物体温和呼吸基本稳定，无明显异常。

3. 电生理记录显示，脊髓横切后神经传导功能显著下降，部分神经传导完全消失。

4. 病理学检查发现，脊髓横切部位脊髓组织出现明显的病理改变，包括神经细胞变性、坏死等。

实验分析：1. 脊髓横切后，动物活动明显减少，表现出瘫痪状态，说明脊髓横切破坏了脊髓的完整性，导致神经传导功能受损。

2. 脊髓横切后，动物体温和呼吸基本稳定，说明脊髓横切对动物的生命体征影响较小。

3. 电生理记录显示，脊髓横切后神经传导功能显著下降，部分神经传导完全消失，进一步证实了脊髓横切对神经传导功能的影响。

4. 病理学检查发现，脊髓横切部位脊髓组织出现明显的病理改变，说明脊髓横切对脊髓组织造成了严重损伤。

结论：1. 脊髓横切实验成功模拟了脊髓损伤的病理过程，为研究脊髓损伤的机制和治疗方法提供了实验依据。

2. 脊髓横切实验表明，脊髓横切对神经传导功能有显著影响，可能导致瘫痪等严重后果。

3. 脊髓横切实验为神经科学研究和临床治疗提供了新的思路和方法。

第1篇一、实验目的1. 观察脊髓横切后的生理现象。

2. 了解脊髓横切对机体运动和感觉功能的影响。

3. 掌握脊髓横切实验的操作步骤。

二、实验原理脊髓是中枢神经系统的重要组成部分，具有传导神经冲动、调节运动和感觉的功能。

脊髓横切实验可以模拟脊髓损伤，观察脊髓横切后机体运动和感觉功能的改变，从而了解脊髓的生理功能。

三、实验材料1. 实验动物：小鼠（体重20-25g）2. 实验仪器：手术显微镜、手术刀、剪刀、镊子、缝针、缝线、生理盐水、酒精、碘伏等3. 实验试剂：0.9%氯化钠溶液、2%戊巴比妥钠溶液、2%碘伏溶液四、实验步骤1. 实验动物准备：选取健康小鼠，用2%戊巴比妥钠溶液进行麻醉，待动物完全麻醉后，固定于手术台上。

2. 背部皮肤消毒：用碘伏对实验动物背部皮肤进行消毒。

3. 背部皮肤切开：用手术刀在实验动物背部正中切开皮肤，长度约为2-3cm。

4. 分离肌肉组织：用剪刀剪开肌肉组织，暴露脊髓。

5. 脊髓横切：用手术刀在脊髓正中横切脊髓，注意避免损伤脊髓周围的神经和血管。

6. 缝合伤口：用缝针和缝线将皮肤和肌肉组织缝合，确保缝合牢固。

7. 观察脊髓横切后的生理现象：观察实验动物的运动和感觉功能改变，包括行走、肢体活动、疼痛反应等。

8. 实验动物恢复：待实验动物清醒后，观察其恢复情况。

五、实验结果与分析1. 脊髓横切后，实验动物的运动功能受到影响，表现为肢体活动不协调、步态不稳等。

2. 脊髓横切后，实验动物的感觉功能受到影响，表现为对疼痛反应减弱或消失。

3. 随着时间的推移，实验动物的运动和感觉功能逐渐恢复，但恢复程度因个体差异而异。

六、实验结论1. 脊髓横切实验可以模拟脊髓损伤，观察脊髓横切后机体运动和感觉功能的改变。

2. 脊髓横切对机体运动和感觉功能有显著影响，但具有可恢复性。

3. 脊髓横切实验为研究脊髓生理功能和损伤修复提供了实验依据。

七、实验讨论1. 脊髓横切实验中，实验动物的运动和感觉功能受到不同程度的影响，这与脊髓横切损伤的程度有关。

实验目的：通过脊髓半横断实验，观察和记录损伤对脊髓功能的影响，分析脊髓损伤后的神经传导障碍及其对肢体运动和感觉功能的影响。

实验材料：1. 实验动物（如大鼠）2. 微型手术器械3. 显微镜4. 神经生理记录仪5. 脱水和染色试剂6. 光学显微镜实验方法：1. 动物准备：选取健康成年大鼠，雌雄不限，体重约200-250克。

在实验前禁食12小时，自由饮水。

2. 脊髓半横断操作：- 将大鼠麻醉后固定于手术台上。

- 沿背部正中线切开皮肤，暴露T10-T12脊髓节段。

- 在脊髓表面铺以消毒的手术膜，以保护脊髓表面。

- 在脊髓的中央用手术刀片进行半横断损伤，确保损伤深度不超过脊髓的全层。

3. 观察指标：- 损伤后立即观察损伤侧和对侧肢体运动和感觉功能的变化。

- 使用神经生理记录仪记录损伤前后脊髓的电生理活动。

4. 组织学观察：- 损伤后24小时，处死大鼠，取出损伤节段的脊髓。

- 进行脱水、透明化处理。

- 染色后，在光学显微镜下观察脊髓损伤的形态学变化。

实验结果：1. 行为学观察：- 损伤后，损伤侧肢体出现明显的运动障碍，表现为肢体无力、肌肉萎缩、关节活动受限等。

- 损伤侧肢体感觉功能减退，表现为触觉、痛觉和温度觉的减退或丧失。

2. 神经生理学观察：- 损伤后，脊髓的电生理活动出现明显异常，表现为兴奋性降低、动作电位幅度减小等。

3. 组织学观察：- 光学显微镜下可见损伤节段脊髓的神经元细胞核固缩、细胞质减少，部分神经元出现变性、坏死。

- 损伤节段脊髓的白质出现不同程度的脱髓鞘改变。

讨论：脊髓半横断实验结果表明，脊髓损伤会导致损伤侧肢体运动和感觉功能的障碍。

损伤后，脊髓的电生理活动和组织学结构发生改变，这可能是导致功能障碍的原因。

1. 神经传导障碍：脊髓半横断损伤导致损伤侧脊髓的神经元细胞和神经纤维受损，神经传导通路受阻，从而引起肢体运动和感觉功能的障碍。

2. 神经再生：脊髓损伤后，受损的神经元和神经纤维有可能发生再生。

大鼠脊髓全横断损伤模型的建立
刘锐;游思维;刘惠玲;沈学锋;赵宇;鞠躬
【期刊名称】《神经解剖学杂志》
【年(卷),期】2005(21)3
【摘要】目前用于脊髓全横断的动物模型,常遗有部分未损脊髓组织,局部脊髓损伤范围很大,尤其是破坏了的血运扩大了继发性变性,造成了复杂的局部病理变化,致使难以分析治疗性脊髓伤区内移植的疗效。

因此迫切需要一种还原论式的脊髓横断模型,本实验设计了一种切割辅以吸除的方法,可以在局部造成平均约0.6mm的清洁横断区,同时保存脊髓腹、背动脉及脊髓背静脉的大鼠脊髓横断模型,并用H.E.染色法、神经丝(NF)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的免疫组织化学方法及生物素化的葡萄糖胺(BDA)的追踪方法检验损伤区及其两侧脊髓的组织反应。

【总页数】6页(P263-268)
【关键词】大鼠;脊髓全横断损伤;动物模型;免疫组织化学
【作者】刘锐;游思维;刘惠玲;沈学锋;赵宇;鞠躬
【作者单位】第四军医大学神经生物学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R744;R-332
【相关文献】
1.大鼠脊髓T11段全横断损伤模型的建立及护理 [J], 蔚洪恩;王春芳;李鹏飞;李静;王晓霞;王晋丽;索耀君
2.大鼠脊髓全横断损伤后神经源性膀胱模型的建立及评估 [J], 元小红;贺丰;江泽辉;赵赫;叶超;伍绍明;于海川;李春根
3.脊髓全横断模型大鼠损伤区白细胞介素17的表达 [J], 马超;徐震;王卓强;邓诗源
4.脊髓全横断模型大鼠损伤区白细胞介素17的表达 [J], 马超;徐震;王卓强;邓诗源;
5.大鼠脊髓全横断损伤模型的建立 [J], 黄纯海;李学军;黄军;袁贤瑞
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大鼠完全性脊髓横断及坐骨神经损伤后运动终板变化作者：段强彭卫华1 樊继军席学礼陈磊【摘要】目的研究完全性脊髓横断及坐骨神经损伤后损伤平面以下乙酰胆碱酯酶(AChE)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide ，CGRP)在骨骼肌运动终板中的变化。

方法选取57只雌性大鼠，30只制作成完全性脊髓损伤及修复模型，24只制作成坐骨神经损伤模型，通过AchE组化染色、镀银染色和CGRP免疫组织化学法观察脊髓损伤和坐骨神经损伤后AChE、CGRP在运动终板分别1 w、1、3、6、12个月的改变。

结果脊髓损伤后1 w、1个月AChE组织化学显示与正常运动终板相比无明显变化(P>0.05)。

至3、6、12个月与正常相比有统计学差异(P<0.05);但12个月与6个月相比无统计学差异。

脊髓损伤后3个月时，CGRP免疫染色阳性部分与正常组相比有明显统计学差异(P<0.01)。

至6、12个月CGRP免疫阳性染色部位与正常相比有统计学意义(P<0.05)。

而坐骨神经损伤后AChE 含量下降，终板退变，CGRP含量明显降低甚至消失，镀银染色未发现改变。

结论脊髓损伤后功能相关蛋白含量下降，终板发生退变，退变程度明显较周围神经损伤后轻，这对于改善损伤脊髓功能后恢复运动功能提供了可能。

【关键词】运动终板;乙酰胆碱酯酶;降钙素基因相关肽;脊髓损伤;坐骨神经运动终板是运动神经元末梢与肌纤维连接的特化结构，损伤后其运动功能的恢复要依赖于运动终板结构的保存、再生、重建及其正常生理功能的恢复。

运动终板的病理变化和功能与选择的治疗方法、治疗效果的评价存在着密切的关系。

目前对于神经系统损伤后尤其是脊髓损伤后损伤平面以下联系效应器(骨骼肌)的神经乃至运动终板发生怎样的变化及变化程度文献报道亦有差异〔1，2〕，本研究采用组织化学、免疫组化等方法研究脊髓及坐骨神经损伤后乙酰胆碱酯酶(AChE)、降钙素基因相关肽(CGRP)在骨骼肌运动终板中的变化，探讨脊髓损伤后损伤平面以下骨骼肌的功能情况，为改善损伤后脊髓功能的研究奠定基础。

脊髓全横断模型大鼠损伤区白细胞介素17的表达马超1，徐震2，王卓强2，邓诗源11徐州医学院江苏省麻醉学重点实验室，江苏省麻醉与镇痛应用技术重点实验室，江苏省徐州市221000；2解放军第309医院麻醉科，北京市100091Interleukin-17 expression in the injured site of a rat model of complete spinal cord transectionMa Chao1, Xu Zhen2, Wang Zhuo-qiang2, Deng Shi-yuan11Key Laboratory of Anesthesiology, Xuzhou Medical College, Jiangsu Key Laboratory of Anesthesia and Analgesia Applied Technology, Xuzhou 221000, Jiangsu Province, China; 2Department of Anesthesiology, the 309 Hospital of Chinese PLA, Beijing 100091, China摘要背景：现阶段，针对已知的炎性递质的干预措施对于减轻脊髓继发损伤的效果局限。

白细胞介素17是重要的促炎性细胞因子，在中枢神经系统疾病发病机制中的作用正逐渐受到关注。

目的：观察急性脊髓损伤模型大鼠白细胞介素17 mRNA和蛋白表达的变化规律。

方法：健康雄性SD大鼠随机分为2组：模型组制作大鼠脊髓完全横断模型，假手术组仅剪开硬脊膜而不伤及脊髓实质。

开放后测定肢运动功能评分观察急性脊髓损伤对大鼠运动功能的影响，苏木精-伊红染色观察脊髓损伤后不同时间点组织病理学改变，实时荧光定量PCR、Western blot分别检测各组大鼠脊髓损伤后不同时间点白细胞介素17 mRNA和蛋白水平表达变化。

结果与结论：开放后肢运动功能评分结果：假手术组大鼠BBB评分均为20-21分，脊髓损伤1，2 d大鼠BBB评分均为0分，损伤后7 d BBB评分为0-3分(P < 0.05)。

大鼠脊髓全横断损伤模型的建立黄纯海;李学军;黄军;袁贤瑞【期刊名称】《国际神经病学神经外科学杂志》【年(卷),期】2008(35)2【摘要】目的建立一种实用、可靠的大鼠脊髓全横断损伤模型。

方法55只SD大鼠随机分为假手术组及脊髓全横断损伤组,横断组选择T12节段横断大鼠脊髓。

分别于术后24h、7d及21d取L2节段制成20μm冰冻切片行HE染色,并记录其后肢运动功能评分(BBB评分)。

结果脊髓全横断大鼠双下肢运动功能BBB评分在同一时间点之间相比明显低于假手术组,差别有统计学意义(P<0.01)。

而且,脊髓横断以下节段出现大量空泡,神经元数量明显减少,胶质细胞明显增生,以腹角为甚;全横断组腹角神经元计数与假手术组在同一时间点比较有明显差异(P<0.01)。

大鼠的30天存活率达72%。

结论本方法为一种稳定可靠,操作简单的大鼠脊髓全横断模型制作法。

【总页数】4页(P103-106)【关键词】大鼠;脊髓损伤;全横断;模型【作者】黄纯海;李学军;黄军;袁贤瑞【作者单位】中南大学湘雅医院神经外科【正文语种】中文【中图分类】R651.2;R651.15【相关文献】1.大鼠脊髓T11段全横断损伤模型的建立及护理 [J], 蔚洪恩;王春芳;李鹏飞;李静;王晓霞;王晋丽;索耀君2.大鼠脊髓全横断损伤后神经源性膀胱模型的建立及评估 [J], 元小红;贺丰;江泽辉;赵赫;叶超;伍绍明;于海川;李春根3.脊髓全横断模型大鼠损伤区白细胞介素17的表达 [J], 马超;徐震;王卓强;邓诗源4.脊髓全横断模型大鼠损伤区白细胞介素17的表达 [J], 马超;徐震;王卓强;邓诗源;5.大鼠脊髓全横断损伤模型的建立 [J], 刘锐;游思维;刘惠玲;沈学锋;赵宇;鞠躬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

周时后肢３个关节均可见轻微到广泛的活动，ＢＢＢ评分为（５．１４±０．８０）分，其中１只大鼠ＢＢＢ评分达７分。

２．３大鼠脊髓损伤组织学变化建模后４周时，对照组大鼠脊髓硬脊膜光滑、完整，表面无瘢痕、粘连。

挫伤组及横断组可见损伤区脊髓变细，硬脊膜表面不光滑，瘢痕形成。

镜下见对照组大鼠ＨＥ染色可见白质内神经纤维沿脊髓纵轴方向排列有序，灰质细胞分布均匀、排列紧密，灰白质界限清晰，细胞分布均匀，纤维排列有序（图１）。

ＮＦ２００免疫组化可见沿脊髓纵轴方向排列有序的呈棕黄色的阳性神经纤维（图２）。

挫伤组大鼠ＨＥ染色可见脊髓组织部分坏死崩解造成的组织碎片、碎屑，灰白质界限不清，白质内神经纤维排列紊乱，可见较大空洞形成（图３）。

ＮＦ２００免疫组织化学染色脊髓腹侧面可见沿纵轴方向排列的呈棕黄色的阳性神经纤维，但在坏死、瘢痕区未见明显阳性纤维（图４）。

横断组脊髓断端几乎完全被瘢痕填充，连接脊髓断端（图５），瘢痕内无再生神经纤维（图６）。

裹ｌ３组大鼠后肢运动ＢＢＢ评分法观察结果（分．ｚ士ｓ）注：分组对大鼠后肢功能ＢＢＢ评分的影响有统计学意义（Ｆ＝９０．６２０．Ｐ＝０．０００）｝且评分时间与分组有交互作用（Ｆ＝１６．８５４，Ｐ＝０．０００），３组两两比较差异均具有统计学意义（Ｐｚ０．０００）圈１对照组脊髓纵切（ＨＥＸ４０）圈２对照组脊髓纵切（ＮＦ２００×４０）圈３挫伤组脊髓纵切（ＨＥ×４０）田４挫伤组脊髓纵切（ＮＦ２００×４０）圈５横断组脊髓纵切（ＨＥ×４０）图６横断组脊髓纵切（ＮＦ２００Ｘ４０）３讨论理想的ＳＣＩ模型应具备以下三方面条件：（１）临床相似性，即制作的ＳＣＩ模型应与临床相近似，尽量接近人类的情况；（２）可调控性，即可根据实际需要调整损伤强度，复制出不同损伤程度的ＳＣＩ模型；（３）可操作性与可重复性，即对ＳＣＩ模型制作的各关键步骤客观化、定量化，使其可信度高、可实施性强，能反映客观问题［２］。

关于成年大鼠4种脊髓全横断方法的比较【关键词】脊髓切断术关键词: 脊髓切断术;神经纤维;空洞;轴突再生;大鼠摘要:目的比较成年大鼠4种脊髓全横断方法对后肢运动功能及脊髓组织学的影响. 方法 32只成年SD大鼠分为A，B，C和D4组，每组8只，分别以4种不同方法全横切T9脊髓.A组以尖刀片自左向右横行一次性切断脊髓;B组将尖刀片自脊髓背部中线处垂直插入并分别向两侧缓慢细心切断脊髓;C组将一丝线穿过脊髓腹侧硬膜外腔，以长刃显微剪一次性完全横断脊髓，并将丝线由断端间隙中拉出;D 组以尖刀片自脊髓背侧至腹侧分层快速划断脊髓，再抬起脊髓两断端以验证横断的完全性.术后1h肉眼观察脊髓形态变化，8wk时评估截瘫后肢自发性运动功能恢复后，处死动物，取脊髓损伤节段，行连续矢状冰冻切片，小鼠抗神经丝抗体免疫组化染色，光镜下观察有无神经纤维的残留或再生，以及空洞及瘢痕的形成. 结果A，B两组术后脊髓肿胀、外翻，8wk时分别有50%，38%的动物出现程度不等的功能恢复，镜下可见成束残留纤维和大量空洞.C，D两组术后脊髓外观良好，8wk时无功能恢复和残留纤维，但有少量神经丝免疫反应再生纤维.与D组相比，C组断端间隙较大且空洞较多. 结论经作者创新的D组方法，横断完全、损伤较小，为简便易行、效果可靠的脊髓全横断手术方法.Keywords:cordotomy;nerve fibers;cavities;axonal regen-eration;ratAbstract:AIM To compare the effects of four spinal cord transecting methods on spontaneous motor recovery in para-plegic hindlimbs and histological changes within the spinal cord in adult rats.METHODSThirty-two adult male SD rats were pided into Groups A，B，C and D（n=8for each group，which received one of the four methods of spinal cord transection at T9）.In Group A，the spinal cord was tran-sected with a sharp blade along the inner wall of the vertebral channel.The blade in Group B，however，was vertically in-serted through the cord at midline and guided to slowly and carefully cut the bilateral halves of the cord separately.In Group C，the cord was cut with a pair of long-edge microscis-sors，and the completeness of the transection wasverified by guiding a surgical suture through the ventral extradural space before and pulling the suture out through the gap betweenthe2stumps of the transected cord.The cord of Group D an-imals was dissected with a sharp blade in quick gashes，and complete transection was checked by uplifting one of the stumps.The appearance of the exposed spinal cord was ob-served with naked eyes1h after the surgery，and thelocomo-tor recovery of the hindlimbs was evaluated with the BBB rat-ing scale at8wk after surgery before sacrificing all animals.The damaged spinal cord segments were sectioned sagittally，prepared for anti-neurofilement immunostaining，and ob-served under a light microscope for any possible remaining and regenerating nerve fibers as well as the formation of cavi-tation and scars.RESULTS Spinal cord edema andectropi-on could be encountered1h after the surgery，and50%and38%animals showed different degrees of locomotor recovery and corresponding remaining nerve fibers with many scars and cavities8wk following the surgery in Groups A and B.As for Groups C and D animals，a better appearance of the cord without much edema and ectropion was observedat1h and no locomotor recovery could be revealed at8wk.A few neurofilament-positive regenerating，but not remaining，fibers were observed within the lesion site.Group C animals had a wider gap between the two stumps of the transected spinal cord and more cavities in the injured spinal segments than those animals in Group D.CONCLUSION The authors’innovated transecting method in Group D is easy and reliable because of its properties of the completeness of tran-section and relatively milder injury to the spinal cord.0 引言脊髓全横断是脊髓损伤修复研究的重要模型，但国际上目前尚无公认、统一的全横断模型，而不同的横断方法可直接影响横断的完全性、脊髓损伤的程度及修复的效果［1］ .我们探索、改良、创新并比较了4种不同的横断方法，试图建立一种简便易行、横断完全、损伤较轻的脊髓全横断模型.1 材料和方法1.1 材料成年雄性SD大鼠32只，体质量200～250g（第四军医大学实验动物中心提供），随机分为A，B，C和D4组，每组8只.1.2 方法戊巴比妥钠（50mg・kg-1 ）ip麻醉动物，纵行切开背部皮肤，钝性分离皮下和肌肉组织，咬除T9～10棘突并去除椎板至横突根部，暴露T10～11节段脊髓，纵行剪开硬脊膜后，分别以4种不同方法横断各组动物脊髓.A组:用锋利尖刀片自左向右紧贴椎管内骨壁横向切断脊髓，并沿两断端间隙反复切割;B组:将尖刀片自脊髓背部中线处垂直插入至腹侧椎管内骨壁，然后分别切断两侧脊髓组织，沿两断端间隙反复切割;C组:首先以特制微型引导器将一段5号丝线自右向左穿过脊髓腹侧硬膜外腔，轻牵丝线提起脊髓，以长刃显微手术剪一次性完全横行剪断脊髓，将丝线由脊髓断端间隙中拉出确认脊髓完全横断;D组:以尖刀片自脊髓左侧迅速轻划至中线处，划开软脊膜及部分脊髓组织.再在同一平面由右侧快速轻划至中线，沿这一切口以同样方法依次分层切断脊髓，最后抬起脊髓两断端，确认脊髓完全横断.各组动物均在术后1h观察脊髓外观的变化，之后逐层缝合肌肉、皮下组织和皮肤.所有手术和观察均在手术显微镜下完成.术后8h内im甲基强的松龙40mg，2wk内im青霉素（16万U・d-1 ）并po呋喃坦啶水溶液（500g・L-1 ），每日早晚2次按摩膀胱排尿，隔日悬吊鼠尾以减轻截瘫后肢的受压、水肿及皮肤擦伤.于术后8wk观察、记录动物于平面场地上的爬行，以一种新的用Basso，Beattie和Bresnahan三人姓氏首写字母命名的BBB体系［2］评估后肢运动功能的变化.小于4分为无运动功能恢复，正常运动功能则为21分.较其他既往常用的评估方法，这一体系可更为敏感地反映脊髓损伤后后肢运动功能恢复的轻微变化.运动功能评估后立即过量麻醉处死动物，40g・L-1 多聚甲醛常规灌注固定，取脊髓损伤区多个节段，连续矢状冰冻切片（厚14μm）.小鼠抗神经丝抗体（Sigma公司，1∶2000）免疫组化染色，Olympus BX60显微镜下观察.2 结果A组脊髓明显肿胀，切口不整、外翻，断端间隙较大，对合差;B组动物脊髓轻微肿胀，背侧切口不整、外翻，两断端间隙较小，对合尚可;C组脊髓无明显肿胀，切口最为平整、边缘无外翻，对合良好，但断端间隙较大（1.5～2.0mm）;D组脊髓无明显肿胀，切口较整齐、断端间隙小（<1.0mm），对合最佳.2.1 肢运动功能截瘫后A组编号为1，2，4和7的4只动物有运动功能恢复，BBB评分为5，11，8和6，其余4只BBB评分<4，无运动功能恢复.B组3只动物（编号为3，5和7）后肢出现不同程度的自发性运动功能恢复，BBB评分为5，7和10，另5只动物仅有后肢关节轻微反射运动，BBB评分<4，无运动功能恢复.C，D两组动物均无运动功能恢复，BBB评分<4（Tab1）.表1 实验鼠术后8wk BBB最高评分略2.2 形态学变化 4组动物脊髓损伤区正常结构遭破坏，形成范围、形态各异的瘢痕组织，两侧脊髓实质内散布大小、数量不一的空洞及点状或串珠状神经丝免疫反应溃变纤维，并与散在其间和损伤区内少量长度与生长方向不同、纤细柔软的神经丝免疫反应新生纤维形成鲜明对照.A，B组脊髓损伤区瘢痕组织不规则，A组空洞形成的严重程度甚于B组.有后肢运动功能恢复的动物，其脊髓腹侧或腹外侧均可见数量不等、成束的神经丝免疫反应纵行纤维（Fig1，2）.C，D两组损伤区横行瘢痕组织将脊髓组织完全隔断，未见神经丝免疫反应残留纤维，C组空洞形成程度明显轻于A，B组（Fig3）.D组脊髓两断端吻合佳，瘢痕组织增生轻，空洞形成不明显（Fig4）.图1 －图4 略3 讨论我们尝试以不同方式全横断脊髓，旨在找出最大限度减小脊髓原发性及继发性损伤的最佳手术方法.A和B两组缓慢的切割方法仍对柔软的脊髓造成明显的挤压伤，使脊髓受到较大的扰动，加重了原发性和继发性损伤，尤以A组为甚.C组脊髓断端最为平整，术后短期内亦未见明显肿胀.但采用特制的微型引导器由硬膜外穿丝线时，常引起脊髓周围血管丛较多的出血，并可能对脊髓腹侧造成撞击伤.另外，以长刃显微剪一次性横行剪断脊髓时，脊髓有较为明显的挤压变形，极有可能造成脊髓更为严重的继发性损害，因为损伤区及其周围形成大量空洞和瘢痕的形态学表现，确实与术后1h肉眼观察征象极不相称.D组采用锋利刀片快速分层横断方法，术后1h观脊髓断端虽不如C组整齐，但脊髓同样无明显肿胀，且断端间隙甚小，吻合满意.镜下观察也是4组中最为满意的.由于椎管内壁粗糙不平，虽经刀片反复切割仍易造成脊髓腹侧或（和）腹外侧组织的漏切，且难以在术中获知脊髓是否被完全切断，于是A和B两组分别有50%，40%的动物出现不同程度的神经纤维残留和运动功能恢复.残留神经纤维导致运动功能恢复的原因在于神经元的自我调整和轴突出芽，促进了脊髓内局部神经环路的解剖学塑形及其与上下行通路的突触联系［3］ .C和D两组在术中足以证实横断的彻底性，无须连续切片证明.由于C 组在以微型引导器穿线时易致出血及腹侧脊髓损伤，因而D组应为损伤最小的可靠方法.尽管Tatsushi等发现锐利的切割可减轻新生大鼠的延髓水肿，并使切断的锥体束纤维获得满意再生.本实验虽明显减轻了D组成年大鼠的脊髓损伤，却并未在再生纤维的形态和数量上取得优于其他组的结果，成年哺乳动物的再生神经纤维难以逾越损伤造成的瘢痕和空洞.因此，必须求助于其他手段诱导再生纤维通过损伤区，恢复已遭破坏的神经联系［4］ .参考文献［1］Tatsushi I，Saburo K，Kaoru K.Spontaneous regeneration of the pyramidal tract after transection in young rats ［J］.Neurosci Lett，1998;247:151-154.［2］Basso DM，Beattle MS，Bresnahan JC.A sensitive and reliable locomotor rating scale for open field testing in rats ［J］.J Neu-rotrauma，1995;12（1）:1-21.［3］Zhang Z，Guth L，Steward O.Mechanisms of motor recovery after subtotal spinal cord injury ［J］.Exp Neurol，1998;149:221-264.［4］Li Y，Field PM，Raisman G.Repair of adult rat corticospinal tract by transplants of olfactory ensheathing cells ［J］.Science，1997;227:2000-2002.。

大鼠脊髓全横断后运动皮层、脊髓和骨骼肌中
BDNF的表达变化的开题报告
研究背景：
运动皮层、脊髓和骨骼肌之间紧密联系形成了神经-肌肉系统，共同完成运动功能。

BDNF是神经营养因子家族的重要成员，和神经元的生长和再生、突触可塑性等过程密切相关。

在大鼠脊髓损伤后，BDNF的表达呈现一定的变化，但是在全横断后运动皮层、脊髓和骨骼肌中BDNF的表达变化并未得到深入的研究。

因此，本研究旨在探究大鼠脊髓全横断后运动皮层、脊髓和骨骼肌中BDNF的表达变化，为神经-肌肉系统的重建提供参考。

研究方法：
选取16只SD大鼠，随机分成对照组和实验组各8只。

实验组大鼠进行全横断手术，对照组大鼠进行假手术。

术后2周，采集运动皮层、脊髓和骨骼肌的组织样本，通过RT-PCR和免疫荧光染色检测BDNF的表达水平。

预期结果：
实验组大鼠的运动皮层、脊髓和骨骼肌中BDNF的表达水平预计会发生变化，与对照组大鼠有明显差异。

预期研究结果将为大鼠全横断后神经-肌肉系统的重建提供初步证据，并为其他相关研究提供借鉴。