简易大鼠脊髓完全横断伤模型的建立

脊髓横断模型的详细步骤及方法随着对中枢神经损伤后可塑性的重新认识，越来越多的学者致力于脊髓损伤后神经再生的有关研究，进行了大量的动物试验，主要采用锐利的刀片选择性地将脊髓进行全横切、半横切、部分切断，或造成块状缺损，形成脊髓横断、半横断损伤或脊髓缺损。

使损伤部脊髓的运动和感觉传导通路的头端失去解剖连续性及生理上的联系，从而观察损伤轴突再生、突触重建，以及有关神经递质、神经营养因子、神经组织、细胞移植对这一过程的影响及作用。

横断模型是采用手术刀切断的方式使脊髓失去解剖连续性而造成的损伤。

可以分为全横断和半横断两种损伤模型。

在啮齿类动物如大鼠横断模型中可以选择切断某一特定的传导束进行离断。

如切断脊髓背外侧束以阻断红核脊髓束，观察损伤后同侧前肢运动功能的变化。

1.全横断损伤模型脊髓全横断损伤是脊髓损伤中严重的类型。

表现为脊髓的完全离断，一旦发生，损伤平面以下的所有运动及感觉功能随即丧失，还可能伴发自主神经功能障碍。

同时，由于脊髓连续性完全中断，损伤平面无残留神经纤维，损伤后脊髓溃变的面积较大，即使断端有神经纤维再生，也难以逾越损伤处，从而使完全性脊髓损伤后结构重建和功能恢复显得更为困难。

由此所导致的感觉、随意运动功能丧失或大小便功能障碍将伴随患者的一生。

为了确保脊髓完全被切断，有研究者用脊髓腹侧穿线的方法。

此类模型的共同优点是操作简便，创口清楚，出血少，继发反应轻，重复性好，损伤程度恒定，解剖定位准确，功能障碍容易确定，损伤彻底，可以摒除残留纤维再生对治疗结果观察评定的干扰；缺点是与临床实际损伤病例相差较大，重复性木高，难以保证动物模型的一致性。

有研究者认为脊髓横切的情况在人类脊髓损伤中很少见，由于脊髓本身的张力，切断的两头会分离，而在人类损伤的情况中，这样的裂隙几乎不会出现；其次要将脊髓切断必须打开硬脊膜，这将使得外源性细胞侵入脊髓损伤，从而明显改变损伤部位的内环境；且动物术后护理较难，死亡率非常高，得到整批数据较难。

大鼠脊髓横断及半横断模型的复制动物脊髓损伤模型既可用来研究脊髓损伤的病理生理学机制，又可用来筛选有助于脊髓损伤恢复的治疗措施。

损伤模型包括以下几类：①机械损伤；②电损伤；③激光损伤；④缺血性脊髓损伤以及化学损伤。

复制机械性脊髓损伤模型的关键点，是如何使脊髓损伤客观化、定量化，并具有较高的可重复性。

脊髓横断或半横断模型最常见，方法较为简便。

1、实验准备（1）动物：SD大鼠，体重180～220g。

（2）器械：大鼠固定木板1块医用酒精棉球若干5ml一次性注射器1支弯头手术剪1把（14#，备皮用）双面保险刀片1片尖端圆钝的细钢丝钩形探针1根（可用回形针自己制作，尖端尽量磨圆）手术显微镜1架（条件允许时）直尺1把缝线及缝针（3）试剂：3%戊巴比妥钠（30mg/kg），冰冻生理盐水，温热生理盐水2、实验步骤（1）观察大鼠在脊髓损伤前的行走行为，并用针刺其后肢脚趾，观察反应情况。

（2）选择体重180～220g的雌性大白鼠，经腹腔注射3%异戊巴比妥钠（30mg/kg）麻醉后，腹位固定于手术台上，剪除胸腰断背部毛发，于T5~T13中线切开皮肤，钝性分离浅筋膜，剪开棘突两侧筋膜及肌肉，于T8~T9进行椎板切除术。

暴露脊髓，用温热生理盐水冲洗伤口。

（3）脊髓横断：将双面保险刀片打磨成适当的形状，尖端呈锐角，便于切断脊髓。

将一尖端圆钝的细钢丝钩形探针，沿硬脊膜外由椎管的一侧导致另一侧，轻轻提起脊髓，运用刀片往返运动（如锯木头般）切断脊髓。

此时，如脊髓完全横断，则探针可由脊髓断端取出。

用冰冻生理盐水反复冲洗伤口止血。

（4）脊髓半横断：将打磨好的尖端锐利的保险刀片沿脊髓中线（尽量避开脊髓中央动脉）垂直插入至椎管底，并向椎管一侧划开脊髓，重复一次，保证一侧脊髓完全横断。

用冰冻生理盐水反复冲洗。

（5）手术效果观察：在手术显微镜下观察伤口出血情况和脊髓断端损伤程度。

断端回缩，测量断端间隙，检查脊髓横断或半横断是否完全。

（1）脊髓损伤手术完成后，用细缝线缝合深层肌肉，逐层缝合伤口。

大鼠脊髓损伤模型构建脊髓损伤 ( spinal cord injury，SCI) 是一种致残率高、后果严重的中枢神经系统性损伤，给个人、家庭、社会带来了沉重的负担。

建立理想的动物模型是开展脊髓损伤相关研究的首要问题。

国内外已经建立了脊髓挫伤、压迫损伤、横断损伤、缺血损伤、牵张损伤和化学损伤等多种脊髓损伤动物模型。

目前常采用小型动物（大鼠、小鼠），这是由于其大多遗传背景明确，体内微生物可控制，其性状显著稳定，质量和规格也可任意选择，并且价格低廉，易于获得，便于管理。

Allen 于 1911 年采用重物坠落撞击动物脊髓背侧，复制出脊髓损伤模型，开创了脊髓损伤的标准化实验研究。

此后很多研究者在此基础上进行了许多改进。

皮质撞击装置、空气撞击装置等能精确控制撞击力度，具有很好的可重复性，但是费用很好，限制了推广应用范围。

采用重物自由下落打击在放置于大鼠脊髓表面的垫片上, 从而造出损伤模型。

模型的特点是:①模拟人类脊髓受损的过程, 临床相似度高。

②可以人为调整致伤的部位和范围。

③硬膜具有完整性, 保证无外源性成分侵入, 防止脑脊液外漏。

麻醉后，将大鼠背部至腰部的毛剔除干净。

将大鼠俯卧固定在手术板上。

用手从大鼠的肋骨向脊柱摸动，确定第十三胸椎（与第十三肋骨连接）的位置。

再沿脊柱棘突向前，确定第十胸椎的位置。

用碘伏消毒液对背部进行消毒。

以第十胸椎为中点，纵向切一道2-3cm的切口，切开皮肤，即可看到脊椎。

再次确定第十胸椎，用剪刀沿棘突将左右两侧的肌肉与棘突分离，直到看到椎板为止。

用缝针穿过分别左右两侧肌肉往两侧牵拉，暴露棘突和椎板。

用剪刀剪去棘突与棘突之间的肌肉，将第十棘突从第九和第十一棘突间游离出来。

可以明显看到脊柱的连接处，从连接处的小口将剪刀轻轻伸入，先向大鼠右侧方向，沿椎板向内深入，剪断椎板，相同操作剪断左侧椎板。

若是能顺利剪断椎板，则用镊子提住棘突稍一用力即可将棘突处的椎骨完整取下，暴露脊髓。

该过程是操作中最麻烦也最重要的过程，伸入剪刀时，千万不能伤到脊髓。

大鼠Allen's脊髓损伤模型的建立及评价熊春翔;宗少晖;曾高峰;韦波;赵玉玺【期刊名称】《广西医科大学学报》【年(卷),期】2011(028)002【摘要】目的:建立并评价大鼠Allen's脊髓损伤模型,为进一步研究脊髓损伤机制提供实验动物参考.方法:SD大鼠60只,体重230～270 g,随机分为空白组(20只),手术组(20只),功能评价组(20只).空白组不做任何处理,手术组和功能评价组都采用Allen's法致伤.功能评价组作手术前后的BBB功能评分和斜板试验,空白组与手术组作病理切片HE染色.结果:功能评价组术前斜板度数和BBB评分均高于术后(P<0.05).手术组术后1 d脊髓神经元发生退变和坏死.结论:本实验建立的大鼠Allen's脊髓损伤模型方法可靠,易于复制,可用于脊髓损伤的相关研究.【总页数】3页(P215-217)【作者】熊春翔;宗少晖;曾高峰;韦波;赵玉玺【作者单位】广西医科大学研究生学院;广西医科大学第一附属医院脊柱骨病外科,南宁,530021;广西医科大学公共卫生学院;广西医科大学公共卫生学院;广西医科大学研究生学院【正文语种】中文【中图分类】R744【相关文献】1.大鼠脊髓损伤模型建立及评价 [J], 高萍;史皓威;王海飞;杨骏艺;任立群;闫凤霞2.大鼠脊髓打击器研制及其制备的脊髓损伤模型稳定性评价 [J], 陈霄雷;林雷雷;邵璐斐;丁惠强;杜金龙;张佳林;锁志刚3.大鼠脊髓源性少突胶质前体细胞体外机械拉伸损伤模型的建立与评价 [J], 马祥;祁月红;卫建峰;李燕则;毕竞;吕磊;郭永清4.小鼠Allen’s脊髓损伤模型的建立及评价 [J], 赵军;权正学;刘渤;卢旻鹏;蒋电明;欧云生5.大鼠脊髓损伤模型建立及神经源性肠功能障碍的初步评价 [J], 韩芸峰;王振宇;于涛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

脊髓损伤是一种严重的神经系统疾病，其特点是神经传导功能的丧失。

脊髓损伤不仅给患者带来极大的痛苦，而且对其生活质量造成严重影响。

近年来，随着神经再生和再生医学的发展，脊髓损伤的修复研究取得了显著进展。

本研究旨在通过实验模拟老鼠脊髓损伤，探究脊髓损伤修复的机制和策略。

二、实验材料与方法1. 实验动物：选取健康成年雄性SD大鼠30只，体重200-250g，随机分为实验组与对照组，每组15只。

2. 实验分组：（1）实验组：模拟脊髓损伤，给予损伤修复干预；（2）对照组：模拟脊髓损伤，不给予损伤修复干预。

3. 实验步骤：（1）模拟脊髓损伤：采用脊髓损伤模型，将大鼠进行全身麻醉，暴露T10-T12脊髓，使用微细剪刀在脊髓中心造成损伤。

（2）损伤修复干预：实验组在损伤后24小时内给予神经生长因子（NGF）和神经节苷脂（GM1）的联合治疗，对照组给予等量的生理盐水。

（3）观察指标：观察两组大鼠的脊髓损伤修复情况，包括运动功能评分、脊髓损伤长度、神经传导速度等。

4. 数据分析：采用SPSS 22.0软件对实验数据进行分析，比较两组大鼠脊髓损伤修复情况。

三、实验结果1. 运动功能评分：实验组大鼠的运动功能评分显著高于对照组（P<0.05），表明神经生长因子和神经节苷脂的联合治疗能显著改善脊髓损伤后的运动功能。

2. 脊髓损伤长度：实验组大鼠的脊髓损伤长度显著短于对照组（P<0.05），表明神经生长因子和神经节苷脂的联合治疗能显著缩短脊髓损伤长度。

3. 神经传导速度：实验组大鼠的神经传导速度显著高于对照组（P<0.05），表明神经生长因子和神经节苷脂的联合治疗能显著提高脊髓损伤后的神经传导速度。

本研究通过模拟老鼠脊髓损伤，探讨了神经生长因子和神经节苷脂的联合治疗对脊髓损伤修复的影响。

结果表明，神经生长因子和神经节苷脂的联合治疗能显著改善脊髓损伤后的运动功能、缩短脊髓损伤长度和提高神经传导速度。

脊髓损伤修复是一个复杂的过程，涉及多种细胞、分子和信号通路。

大鼠脊髓全横断损伤模型的建立黄纯海;李学军;黄军;袁贤瑞【期刊名称】《国际神经病学神经外科学杂志》【年(卷),期】2008(35)2【摘要】目的建立一种实用、可靠的大鼠脊髓全横断损伤模型。

方法55只SD大鼠随机分为假手术组及脊髓全横断损伤组,横断组选择T12节段横断大鼠脊髓。

分别于术后24h、7d及21d取L2节段制成20μm冰冻切片行HE染色,并记录其后肢运动功能评分(BBB评分)。

结果脊髓全横断大鼠双下肢运动功能BBB评分在同一时间点之间相比明显低于假手术组,差别有统计学意义(P<0.01)。

而且,脊髓横断以下节段出现大量空泡,神经元数量明显减少,胶质细胞明显增生,以腹角为甚;全横断组腹角神经元计数与假手术组在同一时间点比较有明显差异(P<0.01)。

大鼠的30天存活率达72%。

结论本方法为一种稳定可靠,操作简单的大鼠脊髓全横断模型制作法。

【总页数】4页(P103-106)【关键词】大鼠;脊髓损伤;全横断;模型【作者】黄纯海;李学军;黄军;袁贤瑞【作者单位】中南大学湘雅医院神经外科【正文语种】中文【中图分类】R651.2;R651.15【相关文献】1.大鼠脊髓T11段全横断损伤模型的建立及护理 [J], 蔚洪恩;王春芳;李鹏飞;李静;王晓霞;王晋丽;索耀君2.大鼠脊髓全横断损伤后神经源性膀胱模型的建立及评估 [J], 元小红;贺丰;江泽辉;赵赫;叶超;伍绍明;于海川;李春根3.脊髓全横断模型大鼠损伤区白细胞介素17的表达 [J], 马超;徐震;王卓强;邓诗源4.脊髓全横断模型大鼠损伤区白细胞介素17的表达 [J], 马超;徐震;王卓强;邓诗源;5.大鼠脊髓全横断损伤模型的建立 [J], 刘锐;游思维;刘惠玲;沈学锋;赵宇;鞠躬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠脊髓损伤模型建立及评价[摘要] 脊髓损伤的治疗作为临床上的一大难题,建立良好的动物模型对于该项疾病的研究至关重要。

脊髓损伤的修复与再生成为研究重点,只有建立标准的、可重复性高的动物模型才能进行治疗方面的进一步研究。

本文旨在介绍大鼠脊髓损伤模型建立的方法,并对常用方法进行评价。

[关键词] 脊髓损伤模型建立引言脊髓损伤是目前临床上多发且致残率较高疾病,给患者家庭、社会带来沉重负担。

脊髓损伤患者生活质量明显低于正常人群[1]。

脊髓作为人体低级反射中枢,其损伤直接影响到人体各器官、组织的正常生理功能。

为此许多学者投入到了关于脊髓损伤的研究中,研究发现中枢神经损伤后仍具备一定的再生能力。

为了找寻更好的治疗方法,标准的、可重复性高的动物模型建立尤为重要。

近年来在脊髓损伤模型建立方面已有很大进展,在此回顾常用的脊髓损伤模型建立方法并进行相应评价。

Allen’s造模法早在1911年,Allen应用重物下落敲击的方法制备出脊髓损伤动物模型[2]。

实验过程中,可分别通过对重物重量、重物下落高度及损伤截断的调整而制作出不同程度、不同类型的损伤模型,由于该种方法具有最大限度的模拟现实损伤情况,不破坏硬脊膜以防止外源性物质进入脊髓内部形成干扰,避免手术过程中脊髓外露和脑脊液渗出等诸多优点[3],一直被沿用至今,但因该方法对于损伤程度、损伤位置等具有不定性,脊髓模型的严格标准性无法达到而存在着相应的不足。

随着研究的推进,相继出现了一些Allen’s造模法的改良方法。

1 将打击头置于硬膜上,打击头与重物连接,并用重锤线调节引导玻管后进行敲击[4]。

敲击过程中,由于引导玻管及重锤线的调节大大增加了中午落下时位置的准确度。

但是也有其不足之处。

首先打击头提前置于硬膜上,会造成脊髓实验预想之外的充血损伤;再者,打击头与重物相连接,之间的连接线会影响重物落于打击头的位置,从而出现偏差,易造成不同角度偏瘫;除此之外,此装置在敲击完成时不易做到迅速挪走重物,从而造成脊髓的进一步压迫性损伤。

大鼠脊髓损伤模型构建大鼠脊髓损伤模型是研究脊髓损伤发生机制和治疗方法的重要工具。

建立有效的模型可以帮助研究人员深入了解脊髓损伤的病理生理过程，并为新的治疗方法的开发提供依据。

本文将介绍大鼠脊髓损伤模型的构建方法。

大鼠是常用的实验动物之一，其解剖结构与人类相似，且容易获取和饲养，因此被广泛应用于脊髓损伤的研究中。

大鼠脊髓损伤模型的构建涉及到手术操作和评估指标两个方面。

首先，进行手术操作是构建大鼠脊髓损伤模型的第一步。

操作前需要准备好所需的器械和材料，包括手术器械、麻醉药物、抗生素、止血药物等。

手术操作的步骤如下：1. 麻醉：将大鼠置于适当的麻醉装置中，使用合适的剂量的麻醉药物（如异氟醚）进行麻醉。

2. 暴露脊柱：在麻醉后，用适当的切口暴露大鼠的脊柱。

可以根据需要选择颈椎、胸椎或腰椎进行操作。

3. 脊髓损伤：通过钝性击打、压迫、挤压或利用脊髓牵拉装置等方式对脊髓进行损伤。

可以根据实验需要确定损伤的程度和方式。

4. 恢复和闭合：在损伤后，给予适量的药物进行止血，并进行伤口的缝合和消毒。

完成手术后，需要对大鼠进行恢复和护理，确保其能尽快恢复活动能力。

常见的护理措施包括监测和记录大鼠的行为活动、饮食和体重等指标，给予适当的抗生素预防感染等。

其次，评估指标是判断脊髓损伤模型的有效性和严重程度的重要依据。

常见的评估指标包括行为学测试、电生理测试和组织学观察等。

1. 行为学测试：通过观察大鼠的行为活动来评估其运动功能的恢复情况。

常用的行为学测试方法包括BBB评分系统（Basso, Beattie, Bresnahan Locomotor Rating Scale）、投掷测试（grid-walking test）等。

2. 电生理测试：通过记录大鼠的电生理信号来评估脊髓功能的恢复情况。

常用的电生理测试方法包括脊柱诱发电位（SSEP）和脊髓运动诱发电位（MEP）等。

3. 组织学观察：通过对损伤区域的组织学切片进行染色和观察，来评估脊髓组织的损伤程度和修复情况。

大鼠脊髓横断模型的建立及米诺环素对胶质纤维酸性蛋白表达的影响陈萌;马泉;郑小影;赵淑敏;孔祥玉【期刊名称】《解剖学杂志》【年(卷),期】2014(037)003【摘要】目的:观察米诺环素干预对脊髓横断大鼠行为功能和横断部位胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响.方法:雄性Wistar大鼠随机分为3组,假手术组、模型组和米诺环素预处理组.米诺环素预处理组大鼠术前腹腔注射米诺环素(90 mg/kg).各组大鼠于术后1、7、14、21d应用Molt斜板试验和BBB评分方法对大鼠后肢行为功能进行评价.第22天将所有实验大鼠处死后取损伤段脊髓,H-E染色观察其病理变化、免疫组织化学检测GFAP的表达.结果:术后第1天模型组和米诺环素预处理组大鼠Molt斜板障碍率无明显差别,BBB运动功能评分也无明显差别;而米诺环素预处理组术后第7天到第21天Molt斜板障碍率较模型组有明显下降,且BBB 运动功能评分明显高于模型组.H-E染色显示,模型组大鼠有明显的病理变化,而米诺环素预处理组可改善损伤脊髓的病理形态.免疫组织化学显色显示,与模型组相比,米诺环素预处理组GFAP阳性细胞数减少,差异具有统计学意义.结论:米诺环素预处理可有效抑制脊髓横断大鼠神经胶质细胞的过度增殖,有利于神经功能的恢复.【总页数】4页(P352-355)【作者】陈萌;马泉;郑小影;赵淑敏;孔祥玉【作者单位】承德医学院脊髓损伤与修复研究室,承德067000;承德医学院脊髓损伤与修复研究室,承德067000;承德医学院脊髓损伤与修复研究室,承德067000;承德医学院脊髓损伤与修复研究室,承德067000;承德医学院脊髓损伤与修复研究室,承德067000【正文语种】中文【相关文献】1.米诺环素预处理对脊髓横断大鼠不同时间胶质纤维酸性蛋白表达变化和超微结构的影响 [J], 陈萌;王永为;刘胜;孔祥玉;赵淑敏2.大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后GAP-43 mRNA的表达 [J], 赵凡;杨有庚;王江3.预防使用米诺环素对胸段脊髓全横断大鼠运动功能恢复的影响 [J], 陈萌;赵淑敏;马泉;郑小影;孔祥玉4.天麻素对脊髓损伤模型大鼠神经功能恢复和胶质纤维酸性蛋白表达的影响 [J], 肖雪飞;李娟娟;黄辉;张翔;黄鹞;李经辉;余化霖5.天麻素对脊髓损伤模型大鼠神经功能恢复和胶质纤维酸性蛋白表达的影响 [J], 肖雪飞;李娟娟;黄辉;张翔;黄鹞;李经辉;余化霖;;;;;;;;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后功能恢复的研究赵凡;杨有庚;王江【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2006(010)011【摘要】目的建立有效、可靠的完全脊髓横断动物模型,探讨多个完整胚胎脊髓移植联合脑源性神经营养因子(BDNF)对脊髓完全横断损伤的修复作用.方法将Wistar雌性大鼠分为正常对照组,手术组A组(单纯横断)、B组(横断+BDMF)、C 组(横断+移植)、D组(横断+移植+BDNF).手术显微镜直视下切除大鼠脊髓3-4 mm,镜下观察确保完全离断,取3-4个完整胚胎脊髓同时移植.B组及D组应用微型泵定时定量泵入BDNF溶液(2 mg/ml).术后1-6周进行功能锻炼及行为学分析.结果术后A组、B组后肢运动功能未恢复;术后3 W,C组及D组开始恢复后肢运动功能,术后6 W出现协调踏步动作.术后1,2 W,C组与D组CBS行为学评分无显著性差异(P＞0.05),术后3 W、4W,CBS评分差异有显著性(P＜0.01).结论本实验成功的建立了大鼠完全脊髓横断模型.多个完整胚胎脊髓组织移植解决了脊髓完全离断情况下所需移植物总量较大的问题,联合应用BDNF,对脊髓损伤修复效果更为理想.【总页数】4页(P1287-1290)【作者】赵凡;杨有庚;王江【作者单位】吉林大学第二医院,骨科,吉林,长春130041;吉林大学第二医院,骨科,吉林,长春130041;青岛市万杰医院,骨科【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.大鼠完全脊髓横断动物模型的建立及完整胚胎脊髓移植后GAP-43 mRNA的表达 [J], 赵凡;杨有庚;王江2.胚胎脊髓移植联合神经生长因子对大鼠脊髓完全横断修复的作用 [J], 赵凡;吴胜林;杨有庚;郑德志3.胚胎脊髓移植联合应用MK-801促进大鼠脊髓损伤后功能恢复 [J], 张强;廖维宏;王正国;伍亚民;陈恒胜4.神经营养因子修饰胚胎脊髓神经干细胞移植后脊髓损伤大鼠的功能恢复和损伤局部基因表达 [J], 解锦鼎;王龙;杨印东;俞春雷;栗昭生;安宁5.CD34^+细胞移植后脊髓全横断大鼠脊髓功能恢复的形态学及行为学观察 [J], 程昊钰;何明生;王廷华;张洪钿;王方方;刘鲲;黄桂琴;胡艳丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。