细菌染色技术总结
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细菌一般染色方法细菌染色是一种常用的实验技术,通过染色使细菌在显微镜下能够更清晰地观察和分析。
细菌染色通常分为简单染色、阴性染色和阳性染色三种方法。
一、简单染色方法:简单染色是最基础的细菌染色方法,主要是用一种染色剂来染色所有类型的细菌。
常用的染色剂有墨汁、甲基蓝、伊红等。
简单染色的步骤如下:1.取一片细菌涂片,将其干燥。
2.在涂片上滴加染色剂,覆盖整个片面。
3.将染色剂置于片上一分钟,用水冲洗。
4.用纸巾将涂片上的多余水份吸干。
5.镶片并观察。
简单染色可以使细菌呈现出斑点或条纹状,并能够区分一些基本形态和结构,但不能提供更多细菌信息。
二、阴性染色方法:阴性染色可使细菌显现为透明,而背景呈色的方法。
常用的阴性染色剂有阿里兹红、印度墨等。
阴性染色的步骤如下:1.将涂片上的细菌涂片均匀涂抹于载玻片上,使其成薄层。
2.滴加阴性染色剂到涂片上,使其均匀覆盖涂片表面。
3.用水冲洗染色液,并用纸巾擦干涂片。
4.镶片并观察。
阴性染色使背景呈色,使细菌透明,从而可以更清晰地观察其形态特征。
三、阳性染色方法:阳性染色可以使细菌显现为有色的圆点或杆状,常用的阳性染色剂有甲基蓝、伊红等。
阳性染色的步骤如下:1.将涂片上的细菌涂片均匀涂抹于载玻片上。
2.将染色剂滴加到涂片上,使其完全覆盖涂片。
3.置片5-10分钟,然后用水冲洗染色剂。
4.用纸巾将涂片上的多余水份吸干。
5.镶片并观察。
阳性染色可以染色细菌,使其呈现有色的形态,便于观察和鉴定。
此外,还有一些特殊染色方法,如革兰氏染色法、氢酒精酸快速染色法等。
革兰氏染色是一种经典的细菌染色方法,通过不同细菌细胞壁的染色性质来将其分为革兰阳性细菌和革兰阴性细菌。
该方法使用革兰紫染色剂和碘液,以及酒精和碳酸盐条件溶液进行染色处理。
氢酒精酸快速染色法是一种常用的快速染色方法,将细菌用甲基蓝染色液处理一段时间后,用酒精和酸性酒精进行洗涤和脱色,最后用伊红染色液着色。
这种方法可以快速地将细菌分为两种主要类型:革兰阳性细菌和革兰阴性细菌。
一、原理:1、革兰氏染色原理:通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色;而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色。
2、芽孢染色法的原理:芽孢又叫内生孢子(endosopre),是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体,通常呈圆形或椭圆形。
细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、芽孢在芽孢囊内的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依据之一。
芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理,用不同染料进行着色,使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。
芽孢壁厚、透性低,着色、脱色均较困难,因此,当先用弱碱性染料,如孔雀绿(malachite green)或碱性品红(basic fuchsin)在加热条件下进行染色时,此染料不仅可进入菌体,而且也可进入芽孢,进入菌体的染料可经水洗脱色,而进入芽孢的染料则难以透出,若再用复染液(如番红液)或衬托溶液(如黑色素溶液)处理,则菌体和芽孢易于区分。
用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红,在加热条件下染色,使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内,进入菌体的染料经水洗后被脱色,而芽孢一经着色难以被水洗脱,当用对比度大的复染剂染色后,芽孢仍保留初染剂的颜色,而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色,使芽孢和菌体更易于区分。
3、荚膜染色法的原理:荚膜是包围在细菌细胞外面的一层粘液性物质,其主要成分是多糖类,不易染色,故常用衬托染色法,即将菌体和背景着色,而把不着色且透明的荚膜衬托出来。
细菌染色技术实验报告一、实验目的本实验旨在通过不同染色方法,对细菌进行染色,观察不同染色方法对细菌形态、结构的影响,掌握常用的细菌染色技术。
二、实验原理1.革兰氏染色:根据细胞壁结构的差异,将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
革兰氏阳性菌壁厚,含有大量的多糖和肽聚糖,易被紫晶染液染色;而革兰氏阴性菌壁薄,含有较少的多糖和肽聚糖,难以被紫晶染液染色。
因此,在进行革兰氏染色时,先用紫晶染液将细胞全部着紫色(1分钟),再用碘酒固定着色(1分钟),用酒精洗去过量的紫晶染液(10秒钟),最后用苏木精或伊红精着红色(30秒钟)。
2.抗酸杆菌染色:抗酸杆菌是一类特殊的革兰阴性菌,其细胞壁含有高度抵抗酸性染料的脂质物质——酸快染色素。
因此,抗酸杆菌染色需要使用专门的染色剂——浓硫酸和甲基绿。
3.荧光染色:荧光染色是一种常用于检测活细胞、细胞分布和数量的方法。
通过将荧光素标记到特定的细胞结构上,可以在荧光显微镜下直接观察到细胞形态、结构等信息。
三、实验步骤1.革兰氏染色(1)取一片无菌玻片,在上面滴一滴水。
(2)用无菌棒取少量培养液,均匀涂抹于玻片上。
(3)将玻片放置在火焰中加热至干燥。
(4)滴上紫晶染液,静置1分钟。
(5)用水冲洗干净,滴上碘酒固定着色,静置1分钟。
(6)用95%乙醇洗去过量的紫晶染液,持续10秒钟左右。
(7)再次用水冲洗干净,滴上苏木精或伊红精,静置30秒钟。
(8)用纸巾轻轻吸干水分,放置晾干后进行观察。
2.抗酸杆菌染色(1)取一片无菌玻片,在上面滴一滴水。
(2)用无菌棒取少量抗酸杆菌培养液,均匀涂抹于玻片上。
(3)将玻片放置在火焰中加热至干燥。
(4)滴上浓硫酸,静置1分钟。
(5)用水冲洗掉浓硫酸,滴上甲基绿染液,静置1分钟。
(6)再次用水冲洗干净,放置晾干后进行观察。
3.荧光染色(1)取一片无菌玻片,在上面滴一滴水。
(2)用无菌棒取少量荧光素标记的细胞培养液,均匀涂抹于玻片上。
(3)将玻片放置在火焰中加热至干燥。
细菌染色技术实验报告标题:细菌染色技术实验报告摘要:本实验旨在探索细菌染色技术的原理和操作方法,并通过实验观察、数据分析和结果讨论,深入理解该实验的意义和应用。
在实验过程中,我们采用了不同的染色方法,包括革兰染色法、伊红染色法和抗酸染色法,以便清晰地观察细菌样本的形态特征和结构组成。
通过对实验样本的显微观察和图像分析,我们成功地鉴定了不同类型的细菌,并对其特点和功能进行了综合分析。
本实验结果表明,细菌染色技术在微生物学研究和临床诊断中具有重要的应用价值。
引言:细菌染色技术是一种常用的微生物学实验方法,通过使用染色剂和适当的处理方法,使细菌在显微镜下能够被清晰地观察到。
细菌的染色对于鉴定不同种类的细菌、了解它们的形态特征和结构组成以及研究其功能和代谢机制至关重要。
在本实验中,我们将学习和应用三种常用的细菌染色方法:革兰染色法、伊红染色法和抗酸染色法。
材料与方法:1. 细菌培养物样品准备:从培养基中取出细菌样品,制备革兰染色、伊红染色和抗酸染色的实验样品。
2. 革兰染色法操作步骤:涂片制备、革兰染色试剂的使用、洗涤、显微观察和图像记录。
3. 伊红染色法操作步骤:涂片制备、伊红染色试剂的使用、洗涤、显微观察和图像记录。
4. 抗酸染色法操作步骤:涂片制备、抗酸染色试剂的使用、洗涤、显微观察和图像记录。
结果:1. 革兰染色实验结果:根据颜色反应,我们将细菌分为革兰阳性和革兰阴性。
- 革兰阳性细菌:具有厚的层状胞壁,显紫色或紫蓝色。
- 革兰阴性细菌:具有较薄的胞壁,显红色或粉红色。
2. 伊红染色实验结果:我们观察到细菌细胞周围形成了红色颜料,使细菌在显微镜下更易于观察。
3. 抗酸染色实验结果:通过抗酸染色,我们能够将细菌分为抗酸性和非抗酸性。
- 抗酸性细菌:在抗酸染色试剂下,细菌保持红色。
- 非抗酸性细菌:在抗酸染色试剂下,细菌显蓝色。
讨论与结论:在本次实验中,我们成功地应用了革兰染色、伊红染色和抗酸染色技术对细菌样品进行了染色和观察。
细菌染色技术(2010-11—22 22:29:46)目的要求初步掌握细菌涂片制作,单染色法及革兰染色法等染色技术。
实验内容1.细菌染色一般程序涂片干燥固定初染(媒染) 脱色复染(1)涂片临床标本或液体培养物可直接涂抹于洁净的载玻片上,固体培养的细菌先在玻璃片上滴一滴生理盐水,然后取菌少许在盐水中磨匀,呈轻度混浊.涂好的菌膜大小一般以1cm2左右为宜。
(2)干燥涂片最好在室温下自然干燥,或将标本面向上,置于酒精灯火焰高处慢慢烘干,切不可在火焰上烧干。
(3)固定细菌的固定常用火焰加热法,即将上述已干的涂片在火焰中迅速通过3~5次,温度以手能摸时热而不烫为度。
目的在于杀死细菌,凝固细胞质,改变细菌对染料的通透性。
(4)初染不同的染色方法,所用染液也不同.染液以覆盖菌膜为度。
(5) 媒染通过媒染可增加染料和被染物质的亲和力。
媒染剂还可用于固定之后,亦可含在固定液或染液中。
(6)脱色此步骤主要目的是观察细菌与染料间结合的稳定程度,作为鉴别染色之用。
(7) 复染细菌初染色被脱色后常以复染液复染,便于观察。
复染液的颜色与初染液有明显不同。
2.常用染料原液配制一般制备100ml纯酒精饱和溶液所需染料量:美兰2g~5g;结晶紫7g~14g;碱性复红3g~7g。
3.常用的染色方法(1) 单染色法即用一种染料染色的方法。
常用吕氏美兰或稀释石炭酸复红染液。
1)染液①吕氏美兰液美兰酒精饱和液30ml+0.01%KOH溶液70ml即成.②稀释石炭酸复红液碱性复红酒精饱和液10ml+5%石炭酸溶液90ml,然后用蒸馏水作10倍稀释即成。
2) 菌种大肠埃希菌普通斜面培养物。
3)染色方法于已做好的涂片上滴加吕氏美兰或稀释石炭酸复红染液,染色1min,以水冲洗至无颜色流下为止,自然干燥或以远火烘干后镜检。
4) 结果以美兰染色者菌体呈现兰色;以稀释石炭酸复红染色的菌体呈现红色.(2)革兰染色法1) 原理细菌被结晶紫着色后,再经媒染剂处理,染成深紫色或紫黑色。
细菌的简单染色实验报告细菌的简单染色实验报告细菌的简单染色和革兰氏染色实验细菌的简单染色和革兰氏染色实验实验目的1. 学习微生物涂片,染色的基本技术,掌握细菌的单染色方法及无菌操作技术。
、2. 巩固显微镜的使用方法。
基本原理1. 简单染色法:用单一染料对细菌进行染色的方法。
此法操作简单,适用于一般形态的观察。
在中性,碱性或酸性溶液中,细菌细胞通常带负电荷,所以用碱性染料进行染色。
碱性染料并不是碱,和其他染料一样是一种盐,电离时染料离子带正电,易于带负电荷的细菌结合而是细菌着色。
带正电的染料离子可使细菌细胞染成蓝色。
通常的碱性染料除了美蓝外,还有结晶紫,碱性复红,番红等。
细菌体积较小,较透明,如未经染色常不易识别,而经染色后与背景形成鲜明的对比,是易于在显微镜下观察。
2. 革兰氏染色法:将所有的细菌分成革兰氏阳性菌G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类,是细菌上最常用的鉴别染色法。
该染色法所以将细菌分为G+和G-菌,是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同决定的。
G-菌的细胞壁中含有较多易被乙酸溶解的类脂质,而且肽聚糖层较薄,交联度低,故用乙醇脱色时溶解了类脂质,增加了细胞壁的通透性,使染色的结晶紫和碘的复合物易于渗透,结果细菌被脱色,在经复红染色后就成了红色。
G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高,类脂质含量少,经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小,通透性降低,因此细菌仍保留初染时颜色。
革兰氏染色需要四种不同的溶液,碱性染料初染液,煤染剂,脱色剂和复染液。
碱性染料初染液的作用像在细菌的单染色法基本原理中所述的那样,而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫。
媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或付着力,即已某种方式帮助染料固定在细胞上,是不易脱落,碘是常用的媒染剂。
脱色剂是被染色的细胞进行脱色,不同类型的细胞脱色反应不同,有的能被脱色,有的则不能,脱色剂常用95%的酒精。
复染液也是一种碱性染料,其颜色不同于初染剂,复染的目的是使被脱落的细胞染上不同于初染液的颜色,从而将细胞区分成G+和G-两大类群,常用的染色液是复红。
细菌的染色实验报告细菌的染色实验报告引言:细菌是一类微小的单细胞生物,它们广泛存在于自然界中的各个环境中,包括土壤、水体、空气等。
对于研究细菌的结构和功能,染色实验是一项重要的技术手段。
本实验旨在通过染色方法,观察和研究细菌的形态和结构,为进一步了解细菌的生物学特性提供基础数据。
材料与方法:1. 细菌培养物:从实验室中提供的细菌培养基中,选取一种细菌进行实验。
2. 染色试剂:我们选择了革兰染色和吉姆萨染色两种染色方法。
3. 实验器材:显微镜、玻璃载玻片、吸管、酒精灯、染色盒等。
实验步骤:1. 准备玻璃载玻片:用酒精清洗玻璃载玻片,使其表面无油污和杂质。
2. 取适量的细菌培养物:用吸管吸取一定量的细菌培养物,滴在玻璃载玻片上。
3. 固定细菌:将滴在玻璃载玻片上的细菌培养物,通过酒精灯加热固定,使其附着在玻璃载玻片上。
4. 进行革兰染色:将固定的细菌培养物滴上革兰染色试剂,静置片刻后用水冲洗。
5. 进行吉姆萨染色:将经过革兰染色的细菌培养物滴上吉姆萨染色试剂,静置片刻后用水冲洗。
6. 干燥与观察:将染色后的玻璃载玻片晾干,并放置在显微镜下观察。
结果与讨论:通过革兰染色和吉姆萨染色,我们成功地对细菌进行了染色,并观察到了不同的形态和结构。
在革兰染色中,我们发现染色后的细菌分为两类:革兰阳性细菌和革兰阴性细菌。
革兰阳性细菌在染色后呈现紫色或蓝紫色,而革兰阴性细菌则呈现红色或粉红色。
这是因为革兰阳性细菌具有较厚的细胞壁,能够保留革兰染色试剂,而革兰阴性细菌的细胞壁较薄,无法保留革兰染色试剂。
吉姆萨染色是一种常用的染色方法,它可以染色细菌的胞内结构,如细胞核和细胞质。
通过吉姆萨染色,我们可以观察到细菌的形态和排列方式。
例如,球菌呈现为圆形,链菌则呈现为链状排列。
细菌的染色实验不仅可以帮助我们观察和研究细菌的形态和结构,还可以为细菌的分类和鉴定提供依据。
通过观察细菌的染色特点,我们可以初步判断细菌的种类,并为后续的实验研究提供基础。
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告细菌是微生物中最常见的一类生物,它们广泛存在于自然界的各个角落,包括土壤、水体、空气等。
为了更好地了解细菌的形态和结构,科学家们开展了许多实验,其中包括细菌的简单染色和革兰氏染色。
一、细菌的简单染色实验细菌的简单染色是一种常用的染色方法,通过给细菌染色,可以使其在显微镜下更加清晰可见。
这种染色方法主要使用了一种叫做甲基蓝的染料。
在实验中,首先需要制备好细菌的涂片。
将一根无菌的钢丝棒蘸取一小滴细菌悬液,然后将其均匀地涂抹在玻璃片上。
待涂片干燥后,将其固定在火焰上加热的玻璃柱上,以使细菌附着在玻璃片上。
接下来,将制备好的涂片放入染色盒中,加入适量的甲基蓝染料,浸泡片刻。
然后,用蒸馏水轻轻冲洗涂片,直至水洗液不再有颜色流出。
最后,用纸巾轻轻吸干涂片上的水分,将其放入显微镜下观察。
在显微镜下观察,我们可以清楚地看到细菌的形态和结构。
不同种类的细菌可能会呈现出不同的形状,例如球状、杆状、螺旋状等。
通过简单染色,我们可以更好地观察和研究细菌的特征。
二、革兰氏染色实验革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法,它可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
这种染色方法主要使用了紫晶染料和碘酒。
在实验中,首先需要制备好细菌的涂片,方法与简单染色相同。
然后,将涂片放入染色盒中,加入适量的紫晶染料,浸泡片刻。
接着,用蒸馏水轻轻冲洗涂片,直至水洗液不再有颜色流出。
接下来,将碘酒滴在涂片上,使其浸润全片,然后用蒸馏水轻轻冲洗涂片。
随后,滴入乙醇或酒精醛溶液,使其浸润全片,然后用蒸馏水轻轻冲洗涂片。
最后,滴入蓝色染料,浸泡片刻后用蒸馏水冲洗涂片。
在显微镜下观察,我们可以看到细菌的染色效果。
革兰氏阳性菌会呈现紫色或蓝色,而革兰氏阴性菌则呈现红色或粉色。
这是因为革兰氏阳性菌的细胞壁含有较多的胆固醇,可以吸附紫晶染料和碘酒,而革兰氏阴性菌的细胞壁则较薄,无法吸附这些染料。
细菌的特殊染色法实验失败与心得以细菌的特殊染色法实验失败与心得为题,我将介绍一次我在实验室进行的细菌染色实验。
在这次实验中,我遇到了一些问题,但也从中得到了一些宝贵的经验和教训。
实验开始前,我准备了所需的材料和试剂,包括细菌培养物、染色剂、显微镜片等。
我选择了革兰氏染色法,这是一种常用的细菌染色方法,通过染色使细菌在显微镜下呈现出不同的颜色,从而方便观察和鉴定。
我准备了细菌培养物样品。
然后,我将细菌培养物涂抹在显微镜片上,并用火烧消毒。
接下来,我使用紫色染色剂将细菌培养物染色,让细菌呈现紫色。
然后,我用碘液对细菌进行固定,使染色效果更加稳定。
最后,我用酒精进行脱色处理,以去除多余的染色剂。
完成这些步骤后,我将显微镜片放在显微镜下观察。
然而,当我观察到显微镜下的细菌时,我发现染色效果并不理想。
细菌的颜色并不均匀,有些区域甚至没有染色。
我感到非常困惑和失望。
通过分析失败的原因,我得出了一些心得体会。
首先,可能是在染色过程中染色剂的浓度不够,导致细菌染色效果不佳。
其次,可能是在固定和脱色过程中的时间控制不准确,导致染色剂无法充分固定或脱色过度。
最后,可能是在细菌培养物涂抹过程中细菌分布不均匀,导致某些区域没有被染色。
为了解决这些问题,我决定进行改进。
首先,我将调整染色剂的浓度,确保在染色过程中细菌能够均匀地吸收染色剂。
其次,我会更加精确地控制固定和脱色的时间,确保染色剂能够充分固定在细菌上,同时去除多余的染色剂。
最后,我会在涂抹细菌培养物时更加仔细,确保细菌能够均匀地分布在显微镜片上。
经过改进后的细菌染色实验,我得到了更好的结果。
细菌的染色效果更加均匀,能够清晰地观察到不同类型的细菌。
这次实验失败虽然让我感到沮丧,但同时也让我更加深入地理解了细菌染色的原理和方法。
通过分析失败的原因并进行改进,我不仅解决了染色效果不佳的问题,还提高了自己的实验技巧和分析能力。
通过这次实验,我明白了实验中的失败并不可怕,关键是要从失败中吸取经验教训,并进行适当的改进。
细菌的简单染色实验报告
《细菌的简单染色实验报告》
在生物学实验室中,我们进行了一项关于细菌的简单染色实验。
通过这个实验,我们希望能够观察和了解细菌的形态特征,为进一步的研究和分析奠定基础。
首先,我们准备了一份细菌样本,并将其涂抹在玻片上。
接着,我们使用了一
种叫做墨汁的染色剂,将其滴在细菌样本上。
墨汁中的颜料分子能够与细菌细
胞壁中的化学物质发生作用,使细菌在显微镜下更加清晰可见。
在染色完成后,我们将玻片放置在显微镜下进行观察。
通过放大镜头,我们可
以清晰地看到细菌的形态和结构。
有些细菌呈现出圆形或椭圆形,而有些则呈
现出长条状或弯曲形态。
这些观察结果为我们提供了宝贵的信息,帮助我们更
好地了解细菌的特征和分类。
通过这个简单的染色实验,我们不仅能够观察到细菌的形态特征,还能够为后
续的细菌研究提供重要的参考。
细菌在自然界中起着重要的作用,它们不仅存
在于我们周围的环境中,还对人类健康和生态平衡产生着重要影响。
因此,对
细菌的研究和了解具有重要意义,而这个简单的染色实验为我们提供了一个很
好的起点。
通过这次实验,我们不仅增加了对细菌的认识,还学会了使用染色技术来观察
微生物。
这将为我们今后的学习和研究打下坚实的基础,也让我们更加深入地
了解微生物世界的奥秘。
希望通过我们的努力,能够为细菌研究领域的发展做
出一些贡献。
细菌染色法实验报告细菌染色法实验报告引言:细菌是一类微小的生物体,它们广泛存在于我们周围的环境中。
为了研究和了解细菌的结构和功能,科学家们发展出了各种方法和技术。
其中,细菌染色法是一种常用的实验方法,通过染色技术可以使细菌在显微镜下更加清晰可见,从而方便研究者进行观察和分析。
本实验旨在探究不同染色方法对细菌的影响,并通过实验结果来验证这些方法的可行性。
实验材料和方法:本实验使用的材料包括:细菌培养物、墨水、甲醇、碘酒、脱脂乳酪、显微镜玻片和镜盖片等。
实验步骤如下:1. 准备细菌培养物:在无菌条件下,将细菌培养物接种于含有适宜营养物的琼脂平板上,并在恒温培养箱中培养一定时间。
2. 制备细菌染色液:将适量的墨水加入甲醇中,制成墨水染色液;将适量的碘酒加入脱脂乳酪中,制成碘酒染色液。
3. 取一片细菌培养物:用无菌的显微镜玻片将细菌培养物刮取一小部分,均匀涂抹于玻片上。
4. 染色处理:将涂有细菌培养物的玻片分别浸入墨水染色液和碘酒染色液中,时间约为1分钟。
5. 清洗和观察:用蒸馏水轻轻冲洗染色后的玻片,然后将玻片放置在显微镜下观察。
实验结果和讨论:经过染色处理后,我们观察到不同的细菌染色方法在显微镜下呈现出不同的效果。
1. 墨水染色法:墨水染色法是一种简单而常用的染色方法,它能够使细菌在显微镜下呈现出深蓝色或黑色。
通过墨水染色,我们可以清晰地观察到细菌的形态和排列方式。
然而,墨水染色法对于细菌的染色效果并不均匀,有些细菌可能会出现染色不均匀或过度染色的情况。
2. 碘酒染色法:碘酒染色法是一种常用的细菌染色方法,它能够使细菌在显微镜下呈现出棕色或深黄色。
通过碘酒染色,我们可以清晰地观察到细菌的细胞壁和胞内结构。
与墨水染色法相比,碘酒染色法对于不同类型的细菌有更好的染色效果,能够更好地显示细菌的形态和结构。
通过以上实验结果,我们可以得出以下结论:1. 细菌染色法对于细菌的观察和研究具有重要意义,不同的染色方法可以提供不同的信息。
细菌的染色方法范文细菌染色是一种常见的实验方法,用于从复杂的细菌群体中提取有关其结构、形态和一些特定性质的信息。
它是微生物学研究中不可或缺的工具。
本文将介绍常见的细菌染色方法,包括简单染色、差异染色和特殊染色。
1.简单染色简单染色是最基本的细菌染色方法,使用一种染色剂将细菌细胞全部染色。
最常用的染色剂是碘蓝和甲基蓝。
染色方法如下:(1)将细菌涂片固定在玻片上,可以使用热固定法或化学固定法。
(2)在涂片上滴加碘蓝或甲基蓝溶液,让其渗透细菌细胞。
(3)用水冲洗玻片以去除多余的染色剂。
(4)用纸巾将玻片上的水分吸干。
(5)在显微镜下观察染色的细菌。
2.差异染色差异染色是通过使用多种染色剂及/或特定条件,使不同种类或部分细菌以不同颜色呈现。
主要的差异染色方法有革兰氏染色和酸性忍受染色。
(1)革兰氏染色革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法,主要用于将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
染色方法如下:-将细菌涂片固定在玻片上。
-滴加革兰氏紫素,让其渗透细菌细胞。
-用碘液固定染色,形成染色颗粒。
-用乙醚或酒精去除多余的染色剂。
-滴加脱色剂,使革兰氏阴性细菌脱色,而革兰氏阳性细菌保持染色。
-用水冲洗玻片以去除脱色剂。
-在显微镜下观察染色的细菌。
(2)酸性忍受染色酸性忍受染色是一种特殊的染色方法,适用于具有特殊的抗酸性结构的细菌,如结核菌和其他抗酸杆菌。
染色方法如下:-将细菌涂片固定在玻片上。
-滴加浓硫酸,让其固定和脱水细菌。
-滴加酸性忍受染色液,让其渗透细菌细胞。
-冲洗玻片以去除多余的染色液。
-在显微镜下观察染色的细菌。
3.特殊染色特殊染色方法主要用于染色细菌的特定部分或结构,以使其更清晰可见。
一些常见的特殊染色包括荧光染色、胞外多糖染色和内孢子染色。
(1)荧光染色荧光染色是一种利用荧光染料如荧光素和荧光素同系物染色细菌的方法。
这种染色方法可以给细菌标记上特定的荧光标记物,以在显微镜下观察细菌。
荧光染色是现代生物学和医学研究中常用的方法之一(2)胞外多糖染色胞外多糖染色是一种常见的细菌染色方法,用于染色细菌细胞表面的胞外多糖。
细菌的特殊染色技术——芽孢、荚膜和鞭毛染色一.目的要求:学习掌握芽孢、荚膜和鞭毛染色原理和方法。
二.原理:芽孢染色法是根据细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理,用不同的染料进行染色,使芽孢和菌体呈不同颜色而便于区别。
芽孢壁厚、透性低,着色、脱色均较困难,当用弱碱性染料孔雀绿在加热的情况下进行染色时,此染料可以进入菌体及芽孢使其着色,而进入芽孢的染料则难以透出。
若再复染(蕃红液),则菌体呈红色而芽孢呈绿色。
观察荚膜通常采用负染色法,即将菌体染色后,再使背景着色,从而把荚膜衬托出来。
观察鞭毛是采用在染色的同时将染料堆积在鞭毛上使它加粗的方法。
细菌只有在个体发育到一定的时期才具有鞭毛,一般在多次移种之后,在其旺盛生长阶段染色。
三.实验材料:1.菌种:巨大芽孢杆菌(B.megaterium):营养琼脂斜面培养20hs产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes):肉汁等斜面培养20hs普通变形杆菌(Proteus vulgaris):营养琼脂斜面培养18hs2.染料:(1)芽孢染色用7.6%饱和孔雀绿液、0.5%蕃红液(或石炭酸复红液和吕氏美蓝液)(2)荚膜染色用刚果红、明胶水溶液,吕氏美蓝液等。
(3)鞭毛染色用硝酸银染色液(A、B液);或Leifson染色液(A、B、C液)3.其它:显微镜、载波片、接种环、酒精灯、香柏油、二甲苯、无菌水、1%盐酸、电炉、墨汁、20%CuSO4、95%乙醇、擦镜纸等。
四.实验方法与步骤:(一)芽孢染色:介绍两种常用的方法1. 孔雀绿染色法:取一干净载片按无菌法取巨大芽孢杆菌菌体少许制成涂片,风干固定后,在涂菌处滴加法7.6%的孔雀绿饱和水溶液,染色10分钟后,用水冲洗,再用0.5%蕃红花红液染色彩1分钟,水洗,风干后镜检。
芽孢被染成绿色,营养体呈红色。
2.石炭酸复红染色法:在一支小试管(10*100mm)中,滴入3—4滴蒸溜水,用接种环取巨大芽孢杆菌于水中,充分搅匀,使菌体分散,制成较浓的菌悬液。
细菌染色技术一、细菌的革兰染色法革兰染色法(Gram stain)是细菌学上最经典的、使用最广泛的一种染色方法.由丹麦细菌学家革兰(Christian Gram)于1883年创立.细菌染色后,不仅可以观看其形态,而且可依据染色结果将细菌分为两大类,即革兰阳性菌(G+菌)和革兰阴性菌(G-菌).1、原理:(1)G+菌细胞壁结构致密(肽聚糖层厚),且脂质含量少,乙醇不易渗入脱色;G-菌细胞壁结构疏松(肽聚糖层薄),且脂质含量多,乙醇溶解脂质后易渗入细胞而脱色.(2)G+菌菌体含有大量核糖核酸镁盐,可与碘、结晶紫坚固结合,使已着色的细菌不被乙醇脱色.G-菌菌体内核糖核酸镁盐含量小,易被乙醇脱色.(3)G+菌等电点比G-菌低,在同一pH条件下阳性菌比阴性菌所带阴电荷要多,故与带正电荷的碱性染料(结晶紫)结合坚固,不易被乙醇脱色.2、应用革兰染色法的实际应用意义有三:(1)根据革兰染色法可把细菌分为G+和G-两大类;(2)G+菌和G-菌的致病性不同,所致疾病各异;(3)对G+和G-菌,选择不同抗菌物治疗.3、材料(1)葡萄球菌和大肠埃希菌培育18~24h后的混合菌液.(2)兰染色液:结晶紫染液、碘液、95%酒精、稀释复红或沙黄染液.(3)载玻片、接种环、酒精灯、吸水纸、显微镜等.4、方法标本片制备(1)载玻片预备:取一张清洁载玻片,用蜡笔在其背面画出二个有肯定间隔、直径约1~2cm的涂抹范围,用数字或符号做好标记. (2)涂片:将接种环在火焰上烧灼灭菌,冷却后取菌液直接涂布在标记的涂抹范围内.接种环在火焰上烧灼灭菌.(3)干燥:涂片最好在室温下自然干燥,或将标本面对上,置于离酒精灯火焰约半尺高处缓慢烘干,切不行放在火焰上烧干.(4)固定:将干燥后的涂片用片夹夹住,使涂抹面对上缓慢通过火焰3次,然后自然冷却.固定即可杀死细菌,并使细菌固着于玻片上,以免染色时脱落;又可使细菌蛋白凝固,而易着色.革兰染色法:(1)初染:在固定好并冷却了的涂片上滴加结晶紫染液1~2滴,作用1min后,用细水流从玻片的一端把游离的染液洗去.(2)媒染:滴加卢戈(Lugol)碘液数滴,作用1min后水洗.碘液是媒染剂,使结晶紫染液与细菌结合更坚固.(3)脱色:滴加95%酒精数滴,轻轻晃动玻片,使玻片上流下的酒精液无紫色为止(约需0.5~1min),流水冲洗.(4)复染:滴加稀释复红(或沙黄)染液数滴,作用1min后流水冲洗.最终用吸水纸印干标本片或自然干燥后,玻片上滴加香柏油,用油镜观看.5、结果G+菌染成紫色;G-菌染成红色.6、影响因素⑴操作因素:涂片太厚或太薄,菌体分散不匀称,可影响染色结果.固定时避开菌体过份受热.脱色时间要依据涂片厚薄敏捷把握.⑵细菌因素:不同时间培育物,革兰染色结果有差异,如葡萄球菌幼龄菌染成紫色.而老龄菌被染成红色.细菌染色时最好用18~24h的细菌培育物.⑶染液因素:全部染色液应防止水分蒸发而影响浓度,特殊是卢戈碘液久存或受光作用后易失去媒染作用.脱色酒精以95%浓度为宜,若瓶密封不良或涂片上积水过多,可使酒精浓度下降而减弱其脱色力量.二、细菌荚膜染色法(Hiss法)1、原理与应用细菌荚膜是细菌细胞壁外面的一层粘液性物质.其对染料的亲和力弱,不易着色,通常采纳负染色法染色,即使菌体和背景着色而荚膜不着色.因此在菌体四周呈一透亮圈.由于荚膜含水量在90%以上,染色时一般不用热固定,以防荚膜皱缩变形.荚膜染色法用于有荚膜细菌如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、炭疽芽胞杆菌及产气荚膜梭菌的鉴定.2、材料⑴荚膜菌液⑵结晶紫酒精饱和液5ml,加蒸馏水95ml 混合液.200g/L⑶硫酸铜水溶液.3、方法将荚膜菌涂片,在空气中自然干燥,不需加热固定.滴加结晶紫染色液,在火焰上微微加热,使玻片上染液冒蒸汽为止,不要水洗,再用200g/L 硫酸铜水溶液冲洗染液,切勿用流水冲洗.用吸水纸吸干后油镜观看.4、结果细菌菌体呈紫色,荚膜呈淡紫色或无色.三、细菌鞭毛染色法1、原理与应用细菌鞭毛为细菌的运动器官.其形态瘦长,直径约10~20nm,需用电子显微镜才能观看到.若用特别染色使鞭毛增粗并着色,则在一般光学显微镜下也可观看到.鞭毛染色方法许多,但原理基本类似,即在染色前先经媒染剂处理,使鞭毛增粗,然后再进行染色.2、材料(1)变形杆菌6~8h血琼脂平板培育物.(2)染色液.A液:200g/L钾明矾液(加温溶解)20ml,50g/L石炭酸液50ml,200g/L鞣酸液(加温溶解)20ml.B液:复红酒精饱和液.取A液9份和B液1份混合后马上过滤.滤液放置6h后,使用最佳. (3)蒸馏水管3、方法(1)细菌标本制备:取变形杆菌血琼脂平板培育物,认真从菌膜伸展最远处挑取菌少许,轻轻放入蒸馏水管中,经数min使其自行分散,再3725℃~30min.(2)涂片:取上述菌液一接种环,轻轻滴于载玻片上,使成薄膜.涂抹时接种环随水滴移动,切勿与玻片相磨,以免鞭毛脱落.(3)染色:涂片自然干燥(勿用火焰固定)后,加染色液作用1~2min ,水洗、吸干、镜检.4、结果鞭毛呈淡红色,菌体呈红色.四、细菌芽胞染色法1、原理与应用芽胞具有高度的折光性,外膜致密,渗透性低,故一般染色法不易使其着色,芽胞染色法是依据芽胞既难以着色,而一旦着色又难以脱色的特点设计的.全部芽胞染色法都基于同一个原则:采纳着色力强的染料,并加热以促进标本着色,然后使菌体脱色,而芽胞上的染料仍保留,经复染后,菌体和芽胞呈现不同的颜色.2、材料(1)破伤风梭菌48~72h培育物(2)石炭酸复红液、碱性美兰液、95%酒精3、方法(1)将破伤风梭菌培育物涂片,自然干燥,火焰固定,滴加石炭酸复红液,并加温至产生蒸汽(不行煮沸)约5min,防止染液干枯,随时补充,待载玻片冷却后,水洗.(2)用95%酒精脱色2min,水洗.(3)滴加美兰染液复染30sec,水洗,待干,镜检.4、结果芽胞呈红色,菌体呈蓝色.五、抗酸染色法1、原理与应用结核分枝杆菌对苯胺染料一般不易着色,若加温或延长染色时间使其着色后,再用3%盐酸酒精处理也不易脱色,经此染色后,结核分枝杆菌及其他分枝杆菌呈红色,而非抗酸菌和细胞杂质等呈蓝色.2、材料(1)结核病人痰(2)抗酸染色液(3)玻片、片夹、滤纸片、竹签、空平皿、污物盆.3、方法(1)取干净的竹签沾取痰中血丝或脓性痰,在清洁无油脂玻片上涂开.涂抹区约拇指盖大.用过的竹签放到空平皿内待高压灭菌.(2)涂片自然干燥后,用片夹挟住玻片一端,通过火焰固定.(3)涂抹面用滤纸片盖上,然后往滤纸片上滴加石炭酸复红染液,使滤纸片完全被染液浸湿,持玻片在小火上加温片刻然后离开火焰,此时可见到玻片上冒出蒸气.待蒸气消逝后再加温,如此反复3~4次,约5min,加温时随时添加染液勿使纸片干枯.(4)玻片冷却后,用接种环挑去滤纸扔到污物盆内,流水冲洗玻片.(5)滴加3%盐酸酒精脱色,至涂抹匀称部位基本没有红色再脱下为止,水洗.(6)滴加吕氏美蓝染液30sec,水洗.(7)吸干、镜检.4、溶液配制萋-尼(Zichl-Neelsen)抗酸染色液(1)石炭酸复红液:硷性复红4g,溶于95%酒精100ml,作成饱和溶液,再取该饱和液10ml与5%石炭酸溶液90ml混匀即成.(2)3%盐酸酒精液.浓盐酸3ml加入95%酒精97ml中即成.(3)吕(Loeffer)氏美蓝染色液美蓝2g,溶于95%酒精100ml中,作成饱和液.再取该饱和液30ml与0.01%氢氧化钾水溶液100ml混合匀称即可.六、奈瑟染色法1、材料(1)染液甲第一液:美兰1g,95%酒精30ml,冰醋酸50ml,蒸馏水100ml.其次液:结晶紫1g, 95%酒精10ml, 蒸馏水300ml.以上第一液二份,与其次液一份混合之.(2)染液乙,黄叱精1或2g,热蒸馏水300ml,待溶解后过滤.2、染色法(1)涂片按常规法固定后,滴加奈瑟染液甲液数滴于涂片上,15~30 Sec,水洗.(2)用奈瑟染液乙液复染10~30秒钟.(3)快速用水洗,吸干、镜检.3、结果菌体呈鲜亮黄色、异染颗粒呈深紫兰色.。
细菌的简单染色实验报告细菌的简单染色实验报告细菌是一类微小的生物体,常常存在于我们周围的环境中。
为了更好地研究和了解细菌的结构和特性,科学家们发展了各种实验方法。
其中,染色实验是一种常用的技术,可以通过染色剂使细菌在显微镜下更加清晰可见。
本文将介绍一种简单的染色实验方法,并分享实验结果。
实验目的:通过染色实验,观察并分析细菌的形态、结构和数量。
实验材料:1. 细菌培养物:我们选择了一种常见的大肠杆菌作为实验对象。
2. 染色剂:我们使用了靛洁液作为染色剂。
实验步骤:1. 准备培养基:将适量的培养基倒入培养皿中,确保培养基的均匀分布。
2. 接种细菌:用无菌的匀菌棒,从细菌培养物中取出一小部分,均匀地划过培养基表面。
3. 培养:将接种好的培养皿放入恒温培养箱中,在适当的温度和湿度条件下培养细菌,一般为37摄氏度。
4. 准备染色液:将适量的靛洁液加入一定体积的蒸馏水中,混合均匀。
5. 染色:将培养好的细菌样本取出,滴加染色液,静置片刻,然后用酒精洗去多余的染色液。
6. 水洗:用蒸馏水轻轻冲洗细菌样本,去除残留的染色剂。
7. 干燥:将洗净的细菌样本晾干,避免在显微镜下观察时出现水珠。
实验结果:在显微镜下观察,我们可以看到细菌样本呈现出不同的形态和结构。
大肠杆菌是一种革兰氏阴性菌,染色后呈现出粉红色或红色的颜色。
通过放大镜头,我们可以看到大肠杆菌呈现出长条状的形态,有些细菌还具有鞭毛或纤毛结构。
此外,我们还观察到细菌的数量较多,呈现出集群或链状排列的特点。
讨论与分析:通过染色实验,我们可以更加清晰地观察和研究细菌的形态和结构。
大肠杆菌是一种常见的肠道细菌,对人类健康具有重要意义。
通过染色实验,我们可以更好地了解大肠杆菌的特征和数量,为进一步研究其生物学功能提供基础数据。
然而,需要注意的是,染色实验只是细菌研究的初步手段之一。
在实际研究中,还需要结合其他技术和方法,如电镜观察、分子生物学技术等,来进一步深入了解细菌的结构和功能。
细菌常用的染色方法细菌是一类微生物,它们在自然界中广泛存在,包括空气、土壤、水体等各种环境中。
为了研究细菌的形态、结构和功能,科学家们发明了各种染色方法。
本文将介绍细菌常用的染色方法,包括革兰氏染色、抗酸染色和吉姆萨染色。
一、革兰氏染色革兰氏染色是最常用的细菌染色方法之一,它是根据细菌细胞壁的组成差异来区分细菌的。
革兰氏染色的步骤包括:将细菌涂片烘干,然后用碘酒浸泡,再用乙醇洗涤,最后用碱性颜料(如紫色染料)染色。
通过革兰氏染色,细菌可分为革兰阳性菌和革兰阴性菌两类。
革兰阳性菌的细胞壁较厚,能保持紫色,而革兰阴性菌的细胞壁较薄,易被乙醇洗去紫色染料,然后再染红色。
革兰氏染色可以帮助科学家们快速区分细菌的类型,对于细菌的鉴定和分类具有重要意义。
二、抗酸染色抗酸染色是一种特殊的染色方法,用于检测结核菌和分枝杆菌等抗酸杆菌。
这些细菌具有特殊的脂质组分,使它们不易被一般染色方法染色。
抗酸染色的步骤包括:将细菌涂片加热,然后用碱性染料(如碱性红染料)染色,再用酸洗去多余染料,最后用蓝色染料(如甲基蓝)染色。
通过抗酸染色,结核菌和分枝杆菌等抗酸杆菌可呈现红色,而其他细菌则呈现蓝色。
这种染色方法对于抗酸杆菌的检测非常重要,可以帮助医生快速诊断结核病等疾病。
三、吉姆萨染色吉姆萨染色也是一种常用的细菌染色方法,它可以帮助科学家们观察细菌的形态和结构。
吉姆萨染色的步骤包括:将细菌涂片用吉姆萨染料(由蓝色和红色组成)染色,然后用水洗去多余染料,最后在显微镜下观察。
通过吉姆萨染色,细菌的细胞壁、细胞质等结构可以呈现出不同的颜色,帮助科学家们研究细菌的形态和结构特征。
吉姆萨染色在细菌学研究中应用广泛,对于揭示细菌的性状和特性非常重要。
细菌染色方法的研究和应用对于细菌学的发展和医学诊断具有重要意义。
除了上述介绍的革兰氏染色、抗酸染色和吉姆萨染色,还有许多其他的染色方法,如苏木精-伊红染色、格拉姆-玛尔基纳染色等。
这些方法都有各自的特点和适用范围,在细菌学研究和临床诊断中起到重要的作用。
细菌的常用染色技术简单染色法:利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
例如番红。
1.涂片:用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀,涂成极薄的菌膜。
2.干燥:可自然晾干,或将涂片置于火焰高处微热烘干,但不能直接在火焰上烘烤。
3.固定:手执玻片一端,有菌膜的一面朝上,通过迅速通过火焰2-3次(用手指触涂片反面,以不烫手为宜)。
4.染色:加适量(以盖满菌膜为度)结晶紫染色液(或石炭酸复红液),染l~2min。
5.水洗:用自来冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止。
6.干燥7.镜检复染色:利用用两种以上染料对细菌进行染色。
例如革兰氏染色法。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,需要碱性染料(basic dye)初染液;媒染剂(mordant);脱色剂(decolorising agent)和复染液(counterstain)。
碱性染料初染液的象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样,而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫(crystal violet)。
媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力,即以某种方式帮助染料固定在细胞上,使不易脱落,碘(iodine )是常用的媒染剂。
脱色剂是将被染色的细胞进行脱色,不同类型的细胞脱色反应不同,有的能被脱色,有的则不能,脱色剂常用95%的酒精(ethanol)。
复染液也是一种碱性染料,其颜色不同于初染液,复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色,而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色,而且将细胞区分成G+和G-两大类群,常用的复染液为番红。
1.载玻片固定。
在无菌操作条件下,用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀,在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。
2.草酸铵结晶紫染1分钟。
3.自来水冲洗,去掉浮色。
4.用碘-碘化钾溶液媒染1分钟,倾去多余溶液。
5.用中性脱色剂如乙醇(95%)或丙酮酸脱色30秒,革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色,革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。
细菌特殊的染色方法细菌的染色方法是微生物学中常用的一种技术,用于检测和分析细菌的形态、结构和生理特性。
细菌染色的目的是使细菌可见,并帮助科学家更好地研究和了解细菌的性质。
除了常规的革兰氏染色和抗酸染色外,还有一些特殊的染色方法被用于研究细菌的不同特性。
以下将介绍几种常用的特殊细菌染色方法。
1.阴离子染色法:阴离子染色法是利用带负电荷的染色试剂与细菌细胞外层的阳离子反应而形成染色产物色素。
该方法不仅可检测细菌的形态和结构,还能对细菌的细胞壁和胞外结构进行观察。
常用的阴离子染色试剂包括果胶酸(Alcian blue)和煤青子酸(Azure A)等。
2.荧光染色法:荧光染色法是利用特定荧光染料与细菌发生特异性反应,通过荧光显微镜观察染色产物。
这种染色方法灵敏性高、分辨率好,对细菌的检测和观察非常有帮助。
常用的荧光染色试剂包括荧光素及其衍生物、丙烯蓝等。
3.金属盐染色法:金属盐染色法是利用一些特定金属盐与细菌细胞壁中的阴离子反应,生成颜色变化的染色产物。
常用的金属盐染色试剂包括久青锉盐(Cuprocin)、伊红及其衍生物和伊绿等。
这些金属盐染色试剂的染色效果较好,并且对不同细菌表现出不同的染色特性,可用于鉴别和分类细菌。
4.钙染色法:钙染色法是利用钙离子对细菌细胞的染色效果。
细菌通过吸收染色试剂中的钙离子,形成钙合物而染色。
常用的钙染色试剂包括蓝天冠蓝(Solochrome cyanin R)和木蓝等。
5.抗体染色法:抗体染色法是利用抗体与细菌其中一种特定抗原发生特异性反应,将染色产物与细菌细胞结合而形成染色。
该方法对细菌进行检测和鉴别非常有帮助,尤其在免疫学研究和临床领域中得到广泛应用。
总体而言,特殊的细菌染色方法为科学家提供了较好的工具,以观察和研究细菌的特异性特征和形态结构。
通过这些特殊染色方法,科学家能更全面地了解和研究细菌的性质,进而推动微生物学研究和应用的发展。
细菌染色技术(2010—11-22 22:29:46)目的要求初步掌握细菌涂片制作,单染色法及革兰染色法等染色技术。
实验内容1.细菌染色一般程序涂片干燥固定初染 (媒染)脱色复染(1)涂片临床标本或液体培养物可直接涂抹于洁净的载玻片上,固体培养的细菌先在玻璃片上滴一滴生理盐水,然后取菌少许在盐水中磨匀,呈轻度混浊.涂好的菌膜大小一般以1cm2左右为宜。
(2)干燥涂片最好在室温下自然干燥,或将标本面向上,置于酒精灯火焰高处慢慢烘干,切不可在火焰上烧干。
(3)固定细菌的固定常用火焰加热法,即将上述已干的涂片在火焰中迅速通过3~5次,温度以手能摸时热而不烫为度.目的在于杀死细菌,凝固细胞质,改变细菌对染料的通透性。
(4) 初染不同的染色方法,所用染液也不同。
染液以覆盖菌膜为度。
(5) 媒染通过媒染可增加染料和被染物质的亲和力。
媒染剂还可用于固定之后,亦可含在固定液或染液中。
(6) 脱色此步骤主要目的是观察细菌与染料间结合的稳定程度,作为鉴别染色之用.(7)复染细菌初染色被脱色后常以复染液复染,便于观察。
复染液的颜色与初染液有明显不同。
2.常用染料原液配制一般制备100ml纯酒精饱和溶液所需染料量:美兰2g~5g;结晶紫7g~14g;碱性复红3g~7g.3.常用的染色方法(1)单染色法即用一种染料染色的方法。
常用吕氏美兰或稀释石炭酸复红染液。
1) 染液①吕氏美兰液美兰酒精饱和液30ml+0.01%KOH溶液70ml即成。
②稀释石炭酸复红液碱性复红酒精饱和液10ml+5%石炭酸溶液90ml,然后用蒸馏水作10倍稀释即成。
2) 菌种大肠埃希菌普通斜面培养物.3) 染色方法于已做好的涂片上滴加吕氏美兰或稀释石炭酸复红染液,染色1min,以水冲洗至无颜色流下为止,自然干燥或以远火烘干后镜检。
4)结果以美兰染色者菌体呈现兰色;以稀释石炭酸复红染色的菌体呈现红色。
(2)革兰染色法1) 原理细菌被结晶紫着色后,再经媒染剂处理,染成深紫色或紫黑色.如被酒精脱去颜色,经复红复染成红色,称为革兰阴性菌;如不被酒精脱色,则仍为紫黑色,称为革兰阳性菌。
革兰染色的原理尚未完全明了,主要有三种学说:①等电点学说革兰阳性菌的等电点低(pH2~3),革兰阴性菌等电点较高(pH4~5),一般染色液pH值为7.0左右,故电离后阳性菌所带阴电荷比阴性菌多,因此,摄取带阳电荷的染料(如结晶紫)多且不易脱色。
②通透性学说革兰阳性菌细胞壁的通透性比阴性菌小,脱色剂较易通过革兰阴性菌的细胞壁,将染料溶解洗出,故易脱色;阳性菌的细胞壁通透性低,故不易脱色。
③化学学说革兰阳性菌细胞内含有某种特殊化学成分,一般认为是核糖核酸镁盐与多糖的复合物,它能和染料-媒染剂互相结合,使已着色的细菌不易脱色;革兰阴性菌体含核糖核酸镁盐复合物较少,易被脱色.2) 染液①结晶紫染液取结晶紫饱和溶液20ml+1%草酸铵水溶液80ml混合过滤。
②卢戈碘液取碘化钾2ml以10ml蒸馏水充分溶解,然后加碘1g待完全溶解后加蒸馏水至300ml。
③脱色剂 95%乙醇.④稀释石炭酸复红同单染色法。
3) 菌种大肠埃希菌和葡萄球菌混合菌液。
4)方法①初染将结晶紫染液2~3滴加于制好的涂片上,染色 1min,水洗;②媒染加卢氏碘液2~3滴染色1min,水洗;③脱色 95%乙醇脱色0。
5min(无紫色脱落为止),水洗;④复染加稀释石炭酸复红数滴,染色1min,水洗干后镜检.5) 结果革兰阳性菌染成紫色,革兰阴性菌染成红色。
6) 注意事项①涂片不宜过厚,否则脱色受影响,使革兰阴性菌染成革兰阳性菌,造成错误鉴定。
②为防止染液蒸发而改变浓度,碘液的颜色变淡应弃去。
③涂片积水过多会改变染液浓度,影响染色效果,故每次水洗后应将玻片甩干.④注意细菌的菌龄,一般以18h~24h左右培养物效果最好,菌龄过长影响细菌染色性.(3) 萋-纳抗酸染色法(ziehl—neelsen):主要用于结核杆菌和麻风杆菌检查.1)染液①石炭酸复红染液取碱性复红酒精饱和液10ml+5%石炭酸水溶液90ml 混合。
②脱色剂 3%盐酸酒精。
③复染剂吕氏美兰染液,同单染色法。
2)菌种卡介苗和表皮葡萄球菌混合液。
3) 方法①初染在已固定的涂片上滴加石炭酸复红染液,远火徐徐加热至有蒸汽冒出,但切不可沸腾,并随时添加染色液,染色3 min~5min,冷却后水洗。
②脱色滴加3%盐酸酒精脱色至无红色流下为止,一般为2min。
③复染水洗后用吕氏美兰复染0。
5 min~1min,水洗干后镜检.4)结果抗酸菌染成红色,非抗酸菌染成蓝色。
5) 注意事项①加热时火切勿过大,防止染液沸腾。
②每张玻片只允许放一份标本,以免阴阳结果混淆。
③用过的玻片要彻底洗干净,防止抗酸菌留在玻片上。
④切勿使用染色缸,印干的滤纸只能一片一张,不得重复使用。
⑤脱色时间宁长勿短,以免误诊。
⑥为防止实验室感染,标本要高压灭菌后再制片。
(4) 潘本汉抗酸染色法(panpenhein) 主要用于尿及粪便中抗酸菌检查.当用萋-纳抗酸染色检出抗酸菌后,用该方法染色,结核分枝杆菌染成红色,耻垢分枝杆菌染成蓝色。
1) 染液①石炭酸复红染液见萋—纳抗酸染色法。
②复染液取蔷薇色酸1g先溶于100ml无水乙醇中,然后加美兰2g(至饱和),置室温中4天,使其充分溶解,过滤后加甘油20ml混匀备用。
2)标本怀疑肾结核患者的尿液。
3) 方法①初染于制好的涂片上滴加石炭酸复红染液数滴加温染色2min。
②复染倾去染液勿水洗,滴加复染液,边滴边倾去,重复4~5次后,水洗、待干、镜检.3) 结果结核分枝杆菌染成红色,耻垢分枝杆菌及其他细菌染成蓝色。
(5)鞭毛镀银染色法1)染液①甲液鞭酸5g,三氯化铁5g,36%甲醛1ml,1%NaOH 1ml,蒸馏水100ml.②乙液取AgNO3 2g溶于100ml蒸馏水中,临用前用15%氨水滴定,出现棕色沉淀后继续滴加氨水直至呈现乳白色薄雾状为止.2)方法①将奇异变形杆菌在 1.4%的软琼脂上传两代,形成迁徙生长现象。
取洁净玻片一张,于玻片上滴加蒸馏水一滴,然后取上述迁徙生长边缘的细菌少许,轻轻点于蒸馏水中,使其自然扩散、干燥,切勿火焰固定。
②在制好的涂片上滴加甲液染3 min~5min,用蒸馏水冲洗。
③用乙液冲去残水后,加乙液0.5 min~1min,并在火焰上方稍加热,用蒸馏水冲洗,干后镜检。
3) 结果菌体染成深褐色,鞭毛染成浅褐色。
4)注意事项①细菌培养时传代次数因菌种不同可适当增加。
②制涂片时菌量不宜过多,动作要轻,切勿研磨,以免鞭毛脱落。
③加乙液后加热温度不要太高。
(6)魏曦氏鞭毛染色法1)染液饱和钾明矾液2ml,5%石炭酸液5ml,20%鞣酸液2ml相混合。
临用时加碱性复红酒精饱和液1ml,混合后过夜,次日过滤后使用。
此染液以3日内使用效果最好。
2)方法将奇异变形杆菌在1。
4%的软琼脂上传两代,形成迁徙生长现象。
取高度洁净玻片一张,于玻片上滴加蒸馏水一滴,然后取上述迁徙生长边缘的细菌少许,轻轻点于蒸馏水中,使其自然扩散,置37℃培养箱内让其自干.无需火焰固定.滴加染液染0.5 min~1min,水洗待干,镜检。
3) 结果菌体与鞭毛均呈红色.(7) 芽胞染色法1) 染液①石炭酸复红染液见抗酸染色法。
②脱色剂 95%乙醇。
③复染液吕氏美兰染液,同单染色法.2)菌种炭疽芽胞杆菌普通斜面培养物。
3)方法①初染于制好的涂片上滴加石炭酸复红染液加热染 3 min~5min,勿使染液沸腾。
②脱色水洗后用95%乙醇脱色约1min,水洗。
③复染加吕氏美兰染液染1min,水洗干后镜检。
4)结果芽胞染成红色,菌体呈蓝色.(8) 黑斯(Hiss)荚膜染色法1) 染液结晶紫染液:取结晶紫饱和液5ml加蒸馏水95ml混合;20%CuSO4水溶液.2) 标本提前数日小白鼠腹腔注射肺炎链球菌菌液0。
2ml,小鼠死亡后解剖取腹腔液印片。
3)方法①将印片在空气中自然干燥,无需加热固定。
②滴加结晶紫染液在火焰上加热,使有蒸汽冒出为止,勿水洗。
③以20% CuSO4溶液冲洗染液,勿水洗,干后镜检。
4)结果菌体呈紫色,荚膜呈淡紫色.(9)阿尔伯特(Albert)异染颗粒染色法1)染液①甲液甲苯胺兰0。
15g,孔雀绿0.2g,溶于95%酒精2ml中再加入蒸馏水至100ml及冰醋酸1ml,放置24h后过滤备用。
②乙液将碘化钾3g溶于蒸馏水10ml~20ml中,再加碘2g等溶解后加蒸馏水至300ml备用。
2) 菌种白喉棒状杆菌吕氏鸡蛋斜面培养物。
3)方法已固定的涂片上加甲液染 3 min~5min,水洗后,再加乙液染色1min,水洗待干,镜检。
4) 结果菌体呈蓝绿色,异染颗粒呈蓝黑色。
(10) 刚果红染色法(负染色法):背景着色而菌体不着色的染色方法.1)染液 2%刚果红水溶液,1%盐酸酒精溶液。
2)方法于载玻片上滴加2%刚果红溶液1滴与少量培养菌混合,涂成均匀厚片待干,以1%盐酸酒精溶液冲洗,待干后镜检。
3)结果背景呈蓝色,菌体无色。
(11) 金胺“O"染色法1)染液①金胺“O"染液金胺“O”0.1g溶于10ml95%酒精中,另取3ml石炭酸加在87ml的蒸馏水中.将此二液混匀,虽混浊但不必过滤,装入褐色瓶中,放室温保存。
②0。
5%盐酸酒精。
③0。
5%高锰酸钾溶液。
2)菌种怀疑结核的痰标本。
3)方法在已固定的涂片上加金胺“O"染液染15min,水洗后用0.5%盐酸酒精脱色2min,水洗,再加0.5%高锰酸钾液作用3min,水洗,待干,用荧光显微镜观察.4)结果抗酸菌呈亮黄色荧光。
(12)美兰染色法美蓝是常用的活体染色染料,当它处于氧化状态是呈现出蓝色,而还原态时为无色。
用它进行活体染色时,由于活细胞代谢过程中的脱氢作用,美蓝接受H后就由氧化转变为还原态,故表现出无色;而衰老的细胞由于代谢缓慢或停止,不能使美蓝还原,所以呈蓝色或者淡蓝色。
(13)苏木精-伊红染色苏木精-伊红染色,又称“苏木素—伊红染色",或“H&E染色”(hematoxylin and eosin stain、HE stain),是组织学最常用的染色方法之一。
这种染色方法的基础是组织结构对不同染料的结合程度不同.染料苏木精可以将嗜碱性结构染成蓝紫色,而伊红可以将嗜酸性结构染成粉红色。
嗜碱性结构通常包括含有核酸的部分,如核糖体、细胞核及细胞质中富含核糖核酸(RNA)的区域等。
嗜酸性结构则通常由细胞内及细胞间的蛋白质,如路易体(Lewy body)、酒精小体(Mallory body)、细胞质的大部分等。
有时,黄褐色也会出现在染色样本中,这是由于组织内原有的色素,例如黑色素等造成的。
(14)吉姆萨染液吉姆萨染液(英语:Giemsa stain)是一种用于染色体的染色方法。