临床常见苛养菌的培养与鉴定
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《医学微生物学》临床常见病原菌的培养与鉴定病原菌的鉴定是将一个未知菌株按其生物学特征,经过与所有已知菌种进行比较后到一个已知菌种的分析过程。
根据感染特性选择合适的培养基,首先要明确被鉴定菌种已获得纯培养。
然后确定革兰氏染色性、形态,再按科、属、种逐步鉴定下来。
应该利用已具备的条件,尽可能地缩小鉴定范围,这是在作实验设计时必须想到的,要用最小数量的试验方法作出鉴定。
基于鉴定菌的特点,选用合适的鉴定体系,力求方法学简单,反应判断明确,价廉的方法。
血清学鉴定由于操作简便、快速、特异性高,给细菌学鉴定提供了快速诊断方法。
对培养困难的病原菌,可考虑应用基因水平的鉴定技术。
最后还要提示,对检测人员应把知识和经验运用到每一鉴定步骤。
【球菌】球菌主要引起化脓性炎症,故又称化脓性球菌。
包括葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌及淋病奈瑟菌等,根据革兰氏染色可将其分为两类,均无鞭毛和芽孢,少数可形成荚膜。
本实验要求了解化脓性球菌的形态特征及染色性、链球菌溶血素“O”试验;葡萄球菌、链球菌及奈瑟球菌的检验程序和主要的鉴定方法;肺炎链球菌Op—tochin敏感试验。
一、葡萄球菌属葡萄球菌属(Staphylococcus)的细菌常堆聚成葡萄串状。
能引起皮肤粘膜、多种组织器官的化脓性炎症,是最常见的化脓性球菌。
有的菌株还可引起食物中毒、烫伤样皮肤综合征、毒性休克综合征等,又是医院内交叉感染的重要传染源。
近年来,耐药性菌株逐年增多。
临床上首先要与其他革兰氏阳性球菌鉴别,然后再作属内种的鉴定及致病性的检测。
[材料]1.菌种:葡萄球菌培养物。
2.培养基:血琼脂平板,普通琼脂平板,甘露醇发酵管,氧化、发酵(OF)管,甲苯胺蓝核酸琼脂。
3.试剂:兔血浆、3%H2O2、致敏胶乳/红细胞制剂。
4.其他:革兰氏染液、玻片、一次性卡片。
[方法]1.形态学观察:取普通琼脂平板上葡萄球菌培养物少许,涂片,革兰氏染色,镜检。
可见到葡萄状排列的革兰氏阳性球菌。
苛养菌的药敏试验(一)苛养菌是指一类需要特殊营养成分才能生长繁殖的细菌,如淋病奈瑟菌、嗜血杆菌及肺炎链球菌等。
1.淋病奈瑟菌的药敏试验可采用纸片扩散法和稀释法进行。
但需在含1%添加剂的淋病奈瑟菌GC平板上进行。
操作方法同纸片扩散法和稀释法。
在35℃5%C02孵育20~24小时后测量抑菌环直径。
可选用头孢克肟、头孢噻肟、头孢泊肟、头孢唑肟、头孢曲松等抗生素中的1~2种,头孢西丁、头孢呋辛、头孢替坦、环丙沙星或氧氟沙星、青霉素G、壮观霉素、四环素等进行测定。
对于分离的菌株可测定p内酰胺酶,阳性结果预示青霉素 G等耐药。
2.嗜血杆菌属的药敏试验以下抗菌药物:阿莫西林/克拉维酸、头孢克洛、头孢丙烯、氯碳头孢、头孢地尼、头孢克肟、头孢泊肟、口服头孢呋辛酯、阿奇霉素和克拉霉素等对单一嗜血杆菌感染患者的治疗往往不需进行敏感试验,仅在耐药性监测或流行病学调查时才进行。
从脑膜炎、败血症、会厌炎和面部蜂窝炎等重危患者的血液和脑脊液中分离到的流感嗜血杆菌,应进行常规试验并报告氨苄西林、一种三代头孢菌素、氯霉素和美洛培南的药敏结果。
氨苄西林敏感试验测定的结果,可预报阿莫西林的活性;大多数耐氨苄西林和阿莫西林的流感嗜血杆菌分离株产生TEM型l3内酰胺酶。
从细菌性脑膜炎及败血症患者标本中分离的嗜血杆菌,应直接作l3内酰胺酶试验,以快速检出氨苄西林和阿莫西林耐药菌株。
可用纸片扩散法和稀释法进行药敏试验。
纸片扩散法使用嗜血杆菌专用HTM培养基,操作同纸片扩散法。
接种物制备按直接菌悬液法。
稀释法用HTM 肉汤。
可在常规条件下孵育20~24小时报告,而不一定在50/4COz的环境下。
3.肺炎链球菌的药敏试验在M-H琼脂中添加5%绵羊血,倾注平板用于肺炎链球菌的纸片扩散法试验,接种后置5%CO。
、35℃孵育20~24小时观察结果,其他操作同纸片扩散法。
大多数抗菌药物需要用含2%~5%(V/V)溶解马血的阳离子调节的M-H肉汤(AMHI3-LHB)作为基质,稀释抗菌药物,进行稀释法测定。
苛养菌及少见菌分离培养与鉴定苛养菌及少见菌分离培养与鉴定1苛养菌是指对营养要求苛刻,在普通培养基上不生长或难以生长的一类细菌;体外培养需添加特殊因子或其它营养成分。
苛养菌的分离鉴定是衡量一个细菌室技术水平的重要标志。
流感嗜血杆菌肺炎链球菌苛养菌卡他莫拉菌淋病奈瑟菌(一)肺炎链球菌来源肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)简称肺炎球菌(pneumococcus)。
1881年首次由巴斯德(LouisPasteur)及G.M.Sternberg分别在法国及美国从患者痰液中分离出。
为革兰染色阳性,菌体似矛头状,成双或成短链状排列的双球菌,5%~10%正常人上呼吸道中携带此菌。
临床意义肺炎链球菌(Streptococcuspneumoconia,SP)是儿童和成人肺炎的重要病原菌之一,存在于正常人口腔、鼻咽部,在机体抵抗力下降时致病。
它引起肺炎、中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、细菌性脑膜炎、败血症等疾病,尤其对婴幼儿构成严重威胁。
易感人群任何人,皆可被肺炎链球菌感染,但以下3类人士特别容易受到侵袭:65岁以上人士;5岁以下儿童,特别是2岁以下的幼童;高危人群,如长期病患者等。
以年龄层论,受肺炎链球菌侵袭,引致侵犯性肺炎链球菌疾病的最高危者,是5岁以下的小儿,特别是2岁以下的幼童。
一旦受到侵袭,死亡率最高的是年长的老人家及有长期病患的高危人群。
中国2011年妇幼卫生事业发展报告指出,肺炎位列中国五岁以下儿童死因的第二位,在重症肺炎中,约有50%是由肺炎链球菌引起的。
肺炎链球菌不仅是/doc/5345029.html小儿肺炎的主要“元凶”,也是引起肺炎死亡的重要病原。
婴儿从6月龄起母传抗体逐渐消失,因此6月龄到2岁是儿童侵袭性肺炎链球菌性疾病发病率最高的时期。
致病力肺炎链球菌的荚膜在细菌的侵袭力上起主要作用,有荚膜的SP有毒力,失去荚膜则独力减低或丧失。
还可产生溶血素、紫斑产生因子、杀细胞素、皮肤致死毒素等。