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专题17动物细胞工程和胚胎细胞工程专题分析➢题型解读本专题是新高考中的一大考查热点，选择题和简答题均有涉及，常单独成题或与植物细胞工程对比着进行考查，重点考查学生的思维能力。
➢考向分析围绕动物细胞培养、动物细胞融合、胚胎工程等内容进行考查，且重点考查单克隆抗体的制备及其应用、动物体细胞核移植和克隆动物。
➢答题技巧作答本专题时，应牢记各种技术的原理、过程，从而能在一定的理论基础上作答。
并要准确掌握住题干所涉及的知识范围，迅速做出判断，所以要求学生具有一定的理解能力。
对点训练一、单选题1．（2023·辽宁·联考三模）孤独症谱系障碍与基因S的变异有关，科研人员对猕猴的基因S进行编辑，首次获得孤独症模型猴，然后再通过动物细胞工程和胚胎工程技术获得更多克隆猴，下列叙述正确的是（）A．在克隆模型猴时，利用囊胚细胞核移植比体细胞核移植更有优势B．培养早期胚胎的培养基中需要有糖类、氨基酸等营养条件，但无需提供气体环境C．胚胎移植的过程中，需要选择具有优良遗传性状的雌性个体作为受体D．为获得更多克隆猴，可以采用胰蛋白酶或胶原蛋白酶对早期胚胎进行分割，经移植获得同卵双胎或多胎【答案】A【详解】A、囊胚细胞的分化程度低于体细胞，囊胚细胞的全能性高于体细胞，在克隆模型猴时，利用囊胚细胞核移植比体细胞核移植更有优势，A正确；B、培养早期胚胎的培养基中需要有糖类、氨基酸等营养条件，同时也需提供气体环境：95％空气和5％CO2，B错误；C、胎移植的过程中，需要选择有健康的体质和正常繁殖能力的个体作为受体，C 错误；D、为获得更多克隆猴，可以采用分割针或分割刀对早期胚胎进行分割，经移植获得同卵双胎或多胎，D错误。
故选A。
2．S蛋白是新冠病毒表面的刺突糖蛋白，其通过识别人体肺泡细胞表面的ACF2蛋白并与之结合，进而侵染细胞。
研究人员制备了抗S蛋白的单克隆抗体以阻止病毒侵入受体细胞，如图表示单克隆抗体的制备过程。
听神经病谱系障碍转基因小鼠模型的研究进展王莉;王秋菊【期刊名称】《中华耳科学杂志》【年(卷),期】2015(13)2【摘要】听神经病谱系障碍（auditory neuropathy spectrumdisorder，ANSD 堤一种具有特殊临床表现的听功能障碍疾病，其主要表现为时域听觉处理能力的下降，外毛细胞功能不受影响。
听力学表现包括：反映内毛细胞及听觉传导通路功能的听性脑干反应（auditory brainstem response，ABR）严重异常甚至缺失，主要反映外毛细胞功能的诱发性耳声发射（evoked otoacoustic emission，EOAE）正常或基本正常，言语识别率相对于纯音听阈不成比例地下降等。
【总页数】4页(P258-261)【作者】王莉;王秋菊【作者单位】解放军总医院解放军医学院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所北京100853; 南开大学医学院天津300071;解放军总医院解放军医学院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所北京100853【正文语种】中文【中图分类】Q429.8【相关文献】1.婴幼儿听神经病谱系障碍诊断及处理指南——婴幼儿听神经病诊断及处理指南研讨会制订(2008年,意大利,科莫) [J], 黄丽辉2.婴幼儿听神经病谱系障碍评估与管理的实践指南(一) [J], 王洪阳; 王秋菊; 于澜; 张梦茜; 龙越; 熊芬; 李进; 应航; 兰兰; 关静3.关于《婴幼儿听神经病谱系障碍评估和处理指南》的解读与思考 [J], 熊芬;于澜;张梦茜;谢林怡;兰兰;王洪阳;刘海红;王秋菊4.听神经病谱系障碍患者人工耳蜗术后长期听力康复效果分析 [J], 王杰;张李芳;陈婧媛;陈彪;李永新5.听神经病谱系障碍患儿的ASSR特征 [J], 彭峤琛;吴秀娟;郭薇燕;覃少进;李琰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
双侧丘脑注射β淀粉样肽42寡聚体是构建阿尔茨海默病小鼠模型的新方法*丁燕1， 朱培植1，2▲， 宋萍萍1， 刘昱君1， 张玉生1△（1暨南大学附属第一医院神经内科，广东 广州510630；2东莞东华医院神经内科，广东 东莞 523000）［摘要］ 目的：通过双侧丘脑注射β-淀粉样肽42（amyloid β-peptides 42， Aβ42）寡聚体构建阿尔茨海默病（Alzheimer disease ， AD ）小鼠动物模型。
方法：将120只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、溶剂组和Aβ组，每组40只。
Aβ组利用立体定位技术将Aβ42寡聚体注射至双侧丘脑。
术后3、7、14和28 d 分别利用Morris 水迷宫实验评价动物神经功能；免疫组化和Western blot 检测小鼠双侧丘脑神经元核抗原（neuronal nuclear antigen ， NeuN ）、胶质细胞原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein ， GFAP ）、离子钙结合适配器分子1（ionized calcium binding adapter molecule 1， Iba1）和磷酸化tau 蛋白［p -tau （Ser396）］水平。
结果：与假手术组和溶剂组相比，Aβ组小鼠平均逃避潜伏期显著延长，穿越原平台次数和在原平台所在象限游泳时间显著减少（P <0.05），Aβ组小鼠GFAP 、Iba1和p -tau （Ser396）水平显著升高，而NeuN 表达显著减少（P <0.05）。
结论：Aβ42寡聚体小鼠双侧丘脑注射法是构建AD 动物模型的新方法。
［关键词］ β-淀粉样肽；丘脑；阿尔茨海默病；小鼠模型［中图分类号］ R749.1+6； R363.2 ［文献标志码］ Adoi ： 10.3969/j.issn.1000-4718.2023.06.022A new approach to establish a mouse model of Alzheimer disease by in⁃jection of amyloid β-peptide 42 oligomers into bilateral thalamusDING Yan 1， ZHU Peizhi 1，2▲， SONG Pingping 1， LIU Yujun 1， ZHANG Yusheng 1△（1Department of Neurology ， The First Affiliated Hospital of Jinan University ， Guangzhou 510630， China ； 2Department of Neurology ， Dongguan Tungwah Hospital ， Dongguan 523000， China. E -mail ： 757181750@ ）［ABSTRACT ］ AIM ： To establish a mouse model of Alzheimer disease （AD ） by injecting amyloid β-peptide 42 （Aβ42） oligomers into the bilateral thalamus. METHODS ： Male C57BL/6 mice were randomly divided into sham group ， vehicle group and Aβ group with 40 mice in each group. The Aβ42 oligomers were injected into bilateral thalamus by a ste‑reotaxic technique in Aβ group. At 3， 7， 14 and 28 d after the operation ， neurological function was tested by the Morris water maze experiment. Immunohistochemistry and Western blot were used to detect the protein levels of neuronal nuclear antigen （NeuN ）， glial fibrillary acidic protein （GFAP ）， ionized calcium binding adapter molecule 1 （Iba1） and p -tau（Ser396） in the thalamus. RESULTS ： Compared with sham group and vehicle group ， the average escape latency was sig‑nificantly longer ， the times of crossing the original platform and the time of swimming in the quadrant were significantly re‑duced in the Aβ group （P <0.05）， and the levels of GFAP ， Iba1 and p -tau （Ser396） in Aβ group were significantly in‑creased ， but the expression of NeuN was significantly decreased （P <0.05）. CONCLUSION ： Injection of Aβ42 oligomersinto bilateral thalamus might be a new method to establish AD animal model.［KEY WORDS ］ amyloid β-peptides ； thalamus ； Alzheimer disease ； mouse model阿尔茨海默病（Alzheimer disease ， AD ）是一种以进行性认知功能下降和行为障碍为特征的中枢神［文章编号］ 1000-4718（2023）06-1136-09［收稿日期］ 2023-03-27 ［修回日期］ 2023-06-02* ［基金项目］ 广东省自然科学基金资助项目（No. 2020A1515011249）；广州市-暨南大学市校联合基金资助项目（No. 2023A03J00442）；广东省潮州市卫生健康局科研项目（No. 2021068； No. 2022089）△通讯作者 Tel ：189****2857； E -mail ： 757181750@ ▲并列第一作者· 实验技术 ···1136经系统退行性疾病，其标志性病理学特征包括细胞外β-淀粉样肽（amyloid β-peptides， Aβ）聚集成老年斑、细胞内tau蛋白异常磷酸化形成神经原纤维缠结（neurofibrillary tangle， NFT）和神经元丢失等［1］。
实验动物中心种子资源介绍各位学术精英、科研骨干：大家好！我院实验动物中心现保有一批特殊品系的实验动物，可能会为您的实验提供一些有益的帮助，现将具体情况进行简要介绍，如下——小鼠品系：1.NOD/ShiLtJ （NOD小鼠）详细信息链接：/strain/001976.html品系描述：I型糖尿病小鼠（自身免疫性糖尿病）模型小鼠。
NOD小鼠充分呈现I型糖尿病的生理生化特征即：发病后出现尿频、多饮、高血糖的症状。
在几周的时间内，血糖迅速升高，饮水量剧增，大量地排尿，体重迅速下降，最后昏迷而死亡。
NOD小鼠同时罹患严重的听觉丧失。
应用领域：I型糖尿病机理研究，神经感官研究。
2. DBA/1J （DBA/1小鼠）详细信息链接：/strain/000670.html品系描述：DBA/1J小鼠作为研究类风湿性关节炎的模型被广泛使用。
II型胶原可以诱导DBA/1产生类风湿性关节炎，发病率高于90%。
与人类的情况相似，由II型胶原引发关节炎的小鼠表现出关节膜炎和软骨腐蚀等症状。
另外，动脉粥样化的饮食可诱发DBA/1小鼠动脉粥样硬化以及大动脉的损伤。
DBA/1J小鼠是免疫介导的特征性肾炎模型，其表现为蛋白尿，肾小球性肾炎以及小管间质性疾病。
DBA/1小鼠自发舌钙化，造成舌形态异常。
应用领域：免疫学及炎症方面的研究：自身免疫性疾病（胶原诱导关节炎）、舌形态学研究。
3.C57BL/6-Tg(UBC-GFP)30Scha/J （B6-GFP小鼠）详细信息链接：/strain/004353.html品系描述：GFP转基因小鼠，C57BL/6背景，小鼠所有组织表达绿色荧光蛋白，以血液系细胞表达最为明显。
可以用于特定细胞组织的示踪研究。
应用领域：所有需要细胞或组织示踪的实验研究。
4.B6.SJL-Ptprc a Pepc b/BoyJ （B6-CD45.1小鼠）详细信息链接：/strain/002014.html品系描述：C57BL/6小鼠的白细胞表面表达CD45抗原(CD45.2)，区别于野生型B6小鼠，B6.CD45.1小鼠表达CD45.1亚型，除此之外，二者之间无任何区别。
科技视界SCIENCE & TECHNOLOGY VISION26 |科技点亮视界孤独症谱系障碍（autism spectrum disorder ，ASD ）是一种严重的神经发育障碍性疾病，以社交障碍、重复行为和兴趣受限为特征。
我国最新发表文章显示，我国0～6岁儿童中ASD 的患病率为1.8%[1]，但其统计主要集中在几个省，实际患病率可能更高，并逐年增长。
关于ASD 发病原因，目前普遍认为是胚胎在神经发育时期环境和遗传因素共同作用的结果，但尚无定论，因此也未出现有效治疗ASD 核心症状的方法，迫切需要进行相关实验研究来解决这一困境。
动物模型是探索孤独症的致病机制和寻找潜在治疗方法的重要工具。
关于自闭症的生物学研究主要围绕经典的实验动物模型展开，之前优先选择的动物模型是调控环境因素模型中的丙戊酸诱导模型（VPA 模型）。
为了更深入研究ASD ，研究者找到了一种近交系BTBR T+ Itpr3tf/J 菌株，之后研究人员在对40个近交系菌株做行为学实验研究小鼠基因多样性时，根据它们在加速旋转上的表现发现了BTBR 小鼠具有与ASD 患者非常一致的孤独症行为，并且在神经解剖、生理和免疫等方面与ASD 患者也有高度的相似性。
本综述将对BTBR 孤独症小鼠动物模型近年的研究进展进行梳理和总结，希望对ASD 相关研究提供一些支持和帮助。
1 BTBR 小鼠的孤独症行为1.1 核心症状ASD 患者具有明显的社交障碍、拒绝与他人交流、不关注周围发生的事且很难激起兴趣和注意，情感反应冷淡等。
BTBR 小鼠不同于普通C57小鼠对新奇事物存在偏好，BTBR 小鼠对新奇事物缺乏兴趣，参与互动、相互嗅探、跟随的时间较少，社会互动能力很低，这与基金项目：广西学位与研究生改革课题（JGY2022199）作者简介：刘玉凤，主要研究方向为神经疾病的分子与细胞生物学研究。
通信作者：方方，副教授，主要研究方向为神经疾病的分子与细胞生物学研究。
专利名称：一种构建自闭症谱系障碍的小鼠模型的方法专利类型：发明专利
发明人：陆宗阳,刘真,黄行许
申请号：CN201810914416.2
申请日：20180810
公开号：CN108949831A
公开日：
20181207
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种构建自闭症谱系障碍的小鼠模型的方法，其特征在于，包括：在小鼠受精卵时期利用胚胎显微注射技术胞浆注射甲基化载体以及靶向MeCP2基因TSS区的gRNA载体，得到自闭症谱系障碍的小鼠模型；其中，所述的甲基化载体含有dCas9片段以及人源DNMT3L和DNMT3A催化功能域。
本发明的定点甲基化载体，可以有效实现细胞中的位点特异的甲基化。
申请人：上海科技大学
地址：200120 上海市浦东新区华夏中路393号
国籍：CN
代理机构：上海申汇专利代理有限公司
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International Journal of Psychiatry and Neurology 国际神经精神科学杂志, 2014, 3, 13-19Published Online August 2014 in Hans. /journal/ijpn/10.12677/ijpn.2014.33003BTBR T~(+)tf/J Mouse: AnIdeal Animal Model for AutismSpectrum DisordersBing Wang, Lin Du, Ling Shan, Honghua Li, Junyan Feng, Feiyong JiaDivision of Pediatric Neurorehabilitation of First Hospital of Jilin University, ChangchunEmail:erkekangfujia@Received: Jul. 15th, 2014; revised: Aug. 10th, 2014; accepted: Aug. 25th, 2014Copyright © 2014 by authors and Hans Publishers Inc.This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY)./licenses/by/4.0/AbstractAutism spectrum disorder (ASD) is a complex heterogeneous of neuro developmental disord-ers which originate from the early childhood with the core symptoms of impaired communica-tion, social impairments, and restricted and repetitive behaviors and interests. Research has so far indicated that ASD exists genetic basis and may be induced bursting out under certain conditions which include the factors such as maternal immunity, autoimmune disorder, natu-ral environment etc., and children with ASD exist cerebral dysplasia. However, the pathogene-sis of ASD is still inadequately understood which needs us to make further study on it. Animal model can be used as an important basis for evaluating the experimental results. Therefore, to establish an appropriate ASD model is the foundation of experiment. Since ASD is a kind of disease caused by many factors and may include many kinds of pathogenetic mechanisms, whe- ther we can choose an animal model which can accurately replicate the pathological and clin-ical features of ASD is of great significance for the further research of ASD. BTBR T~(+)tf/J (BTBR for short) mice is a kind of inbred strain mice which not only possesses the core symp-toms such as reduction of social intercourse, lack of ultrasonic on social occasions and severe repeated grooming behavior, but also possesses cerebral dysplasia and immune biochemical index abnormalities similar to ASD. Based on this, BTBR mice is currently the ideal model for the study of autism. The aim of this article is to summarize the relationship between BTBR mice and ASD.KeywordsASD, Animal Model, BTBR MiceBTBR T~(+)tf/J小鼠：孤独症谱系障碍理想的动物模型王冰，杜琳，单玲，李洪华，冯俊燕，贾飞勇吉林大学第一医院小儿神经康复科，长春Email: erkekangfujia@收稿日期：2014年7月15日；修回日期：2014年8月10日；录用日期：2014年8月25日摘要孤独症谱系障碍(autism spectrum disorders, ASD)是一组起源于儿童早期的以社会交往交流障碍和重复刻板的行为和兴趣为主要症状的神经发育性障碍。
目前研究表明，ASD存在遗传基础，并在一定的环境诱导下发病，包括母体免疫因素、自身免疫紊乱及自然环境因素等，且存在脑发育的异常。
但ASD的病因及发病机制尚不完全明确，尚需我们进一步研究。
动物模型是评价实验结果的重要依据，确立合适的ASD模型是实验的基础。
由于ASD是多因素引起的、可能涉及多种病理机制的疾病，能否选择精准复制ASD病理特征和临床症状的动物模型对ASD的深入研究具有重大意义。
BTBR T~(+)tf/J (简称BTBR)小鼠是一种近交系小鼠，它不仅具有ASD的核心症状：社交减少、社交场合中发出的超声波少、重度的重复理毛行为；同时还具备与ASD类似的脑发育异常以及免疫生化指标异常。
因此，BTBR小鼠是目前研究自闭症的理想模型，本文就BTBR小鼠与ASD的关系进行总结。
关键词孤独症谱系障碍，动物模型，BTBR小鼠1. 引言实验动物根据遗传的均一性、敏感性和一致性，分为近交系动物、封闭群动物、杂交型动物。
其中近交系动物是经过20代以上连续全同胞或亲子交配而得，品系内所有个体都可追溯到起源于第20代或以后代数的一对共同祖先的动物群，具有稳定的基因型，个体之间反应一致，对实验的反应也高度一致，因此，实验数据标准差较小，在实验中实验组和对照组都只需少量的动物。
BTBR小鼠就是一种近交系小鼠，具有稳定的基因型，能稳定的表现出社会交往交流障碍和重复刻板行为和兴趣等ASD样行为，以及ASD类似的脑发育异常以及免疫生化指标异常。
本文通过行为、脑发育、免疫生化三个方面对BTBR 小鼠与ASD关系进行阐述。
2. BTBR小鼠行为学与ASD关系由于病因及发病机制不明，目前ASD的定义是行为标准，故诊断依据主要为行为症状，其核心症状主要有：社会交往障碍、言语交流障碍、兴趣狭窄及刻板行为；除此之外，可以伴随学习障碍及注意力缺陷等症状[1]。
因此，ASD小鼠模型的选用需要大量观察小鼠的具体行为是否具备ASD的各种诊断症状。
行为学家经过大量细致的观察，总结出小鼠一系列社会交往、交流以及重复刻板的行为的表现[2]-[8]，包括：社交方法、社会互动的异常和嗅觉沟通的异常，超声波发声的异常，刻板运动(如旋转和重复跳跃)，刻板行为(如自我理毛和挖掘)等[9]。
研究人员对十余种近交系小鼠进行行为学分析，发现A/J小鼠、BALB/cByJ小鼠、BTBR小鼠和129S1/SvImJ小鼠表现出低水平的社交行为，而C57BL/6小鼠(简称C57)和FVB/AntJ (简称FVB)小鼠是一种具有正常社交行为的标准鼠系。
其中BTBR小鼠不但存在低水平的社交行为，而且在水迷宫中也表现出对固定变化模式的坚持，因此认为BTBR小鼠有可能是一种ASD的动物模型[10]-[12]，从而进一步对其进行一些列行为学检测。
三室装置是用来检测小鼠社交行为的经典装置，主要是在一个被分隔成三个区域的透明装置中的不同区域分别放置陌生小鼠和新奇物体，观察不同鼠系小鼠对物体和同类的关注程度。
研究表明BTBR小鼠对新奇物体的关注度超过对陌生小鼠的兴趣，这与C57小鼠的正常社交行为完全相反[12]-[14]，提示BTBR小鼠存在社会行为缺陷。
在不同环境中BTBR小鼠发出的超声波也明显减少[15]。
对C57、FVB及BTBR三种近交系雄性小鼠对陌生雌鼠的出现(第一阶段)、消失(第二阶段)、再出现(第三阶段)所发出的超声波进行检测，在第一阶段三种近交系雄鼠均发出超声波，而当第三阶段雌鼠再次出现时，发出与第一阶段接近的超声波数量。
其中BTBR雄鼠在这三个环节中所发出的超声波较其他两系明显减少[16]。
除了社会交往受限及发声减少，BTBR小鼠还表现出咬槽癖的狭窄兴趣[17]和自我理毛行为的增加[13] [18] [19]。
与FVB小鼠不同的是，BTBR小鼠在洞板探索试验中，无论洞板下的嗅觉刺激物及位置如何更换，BTBR小鼠都明显的喜欢睡在角落的洞口处[20]。
研究人员进一步对BTBR小鼠和C57小鼠进行不同空间逆转学习试验(100%反馈和80/20概率反馈)，结果表明，在100%反馈逆转学习试验中，两种小鼠表现相似；然而在80/20概率反馈逆转学习试验中，BTBR小鼠却表现出明显的学习缺陷，并出现理石埋藏和自我理毛行为。
提示BTBR小鼠不单具备ASD 患者表现出的刻板行为，还能体现其内在的“坚持相同”的思维方式[21]。
因此，BTBR小鼠不仅能做为研究ASD核心行为的动物模型，还能够作为研究ASD行为灵活度受限的动物模型。
3. BTBR小鼠脑结构及神经递质与ASD关系纹状体是基底神经节的主要组成部分，包括豆状核和尾状核，主要参与维持机体的固定姿势，研究表明，ASD的刻板重复行为与纹状体发育异常相关。
