动物模型：裸鼠PC-9细胞肿瘤模型

肿瘤动物模型的建立可以：（1）评价抗肿瘤免疫治疗的疗效；（2）作为抗肿瘤药物筛选模型；（3）为肿瘤转移研究提供更好的研究平台；（4）为研发抗肿瘤转移性药物提供良好的实验工具。

实验方法：诱发性肿瘤动物模型实验方法原理：诱发性肿瘤动物模型是指研究者用化学致癌剂、放射线、致癌病毒诱发动物的肿瘤等。

实验材料：肿瘤细胞小鼠试剂、试剂盒、无血清培养基质、3%中性甲醇石腊仪器、耗材、低温离心机、血球计数器、游标卡尺实验步骤一、肝癌1．二乙基亚硝胺（DEN）诱发大白鼠肝癌（1）取体重250 g左右的封闭群大白鼠，雌雄不拘；（2）按性别分笼饲养。

除给普通食物外，饲以致癌物，即用0.25%DEN水溶液灌胃，剂量为10 mg/kg，每周一次，其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由饮用；（3）共约4个月可诱发成肝癌；（4）也可以单用0.005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。

2．4-2甲基氨基氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌（1）用含0.06%DBA的饲料喂养大鼠，饲料中维生素B2不应超过1.5～2 mg/kg；（2）4～6月就有大量的肝癌诱发成功。

3．2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌（1）给成年大鼠含0.03% 2AAF标准饲料；（2）每日每平均2～3 mg 2AAF（也可将2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%动物产生肝肿瘤。

4．二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌：（1）用剂量为每日0.3～14 mg/kg体重，混于饲料或饮水中给予；（2）6～9个月后255/300大鼠发生了肝癌。

5．亚胺基偶氮甲苯（OAAT）诱发小鼠肝癌（1）用1%OAAF苯溶液（约0.1 ml含1 mg）涂在动物的两肩胛间皮肤上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。

（2）实验后7～8周即而出现第一个肝肿瘤，7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。

（3）或用2.5 mg OAAT溶于葵瓜子油中，给C3H小鼠皮下注射4次，每日间隔10天，也可诱发成肝癌。

肿瘤动物模型得建立可以：（1）评价抗肿瘤免疫治疗得疗效；（2）作为抗肿瘤药物筛选模型；（3）为肿瘤转移研究提供更好得研究平台；（4）为研发抗肿瘤转移性药物提供良好得实验工具。

实验方法：诱发性肿瘤动物模型实验方法原理：诱发性肿瘤动物模型就是指研究者用化学致癌剂、放射线、致癌病毒诱发动物得肿瘤等。

实验材料：肿瘤细胞小鼠试剂、试剂盒、无血清培养基质、3%中性甲醇石腊仪器、耗材、低温离心机、血球计数器、游标卡尺实验步骤一、肝癌1．二乙基亚硝胺（DEN）诱发大白鼠肝癌（1）取体重250 g左右得封闭群大白鼠，雌雄不拘；（2）按性别分笼饲养。

除给普通食物外，饲以致癌物，即用0、25%DEN水溶液灌胃，剂量为10 mg/kg，每周一次，其余5天用0、025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由饮用；（3）共约4个月可诱发成肝癌；（4）也可以单用0、005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。

2．4-2甲基氨基氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌（1）用含0、06%DBA得饲料喂养大鼠，饲料中维生素B2不应超过1、5～2 mg/kg；（2）4～6月就有大量得肝癌诱发成功。

3．2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌（1）给成年大鼠含0、03% 2AAF标准饲料；（2）每日每平均2～3 mg 2AAF（也可将2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%动物产生肝肿瘤。

4．二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌：（1）用剂量为每日0、3～14 mg/kg体重，混于饲料或饮水中给予；（2）6～9个月后255/300大鼠发生了肝癌。

5．亚胺基偶氮甲苯（OAAT）诱发小鼠肝癌（1）用1%OAAF苯溶液（约0、1 ml含1 mg）涂在动物得两肩胛间皮肤上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。

（2）实验后7～8周即而出现第一个肝肿瘤，7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。

（3）或用2、5 mg OAAT溶于葵瓜子油中，给C3H小鼠皮下注射4次，每日间隔10天，也可诱发成肝癌。

肿瘤动物模型介绍
细胞株移植瘤模型（cell derived xenograft, CDX)，即将体外传代培养的肿瘤细胞接种至免疫缺陷小鼠，过去常用的免疫缺陷鼠是裸鼠。

一般在小鼠皮下、静脉或原位注入肿瘤细胞，观察肿瘤的形成、发展及抗肿瘤药物的效果。

CDX肿瘤模型包括：乳腺癌、胶质瘤、骨肉瘤、胰腺癌。

服务内容：各类细胞系肿瘤模型，包括皮下模型和原位模型的建立。

动物的选择：可以选择4-6周龄Nude裸鼠或其他免疫缺陷小鼠。

也提供有自主产权的NSFG小鼠，NOD-SCID，IL2rg基因敲除的小鼠，是目前免疫缺陷程度最高，最适合肿瘤移植的工具小鼠。

接种部位与接种细胞量：接种部位常为皮下，静脉或原位；细胞量一般是5*106个/100ul-200ul，但是不同的细胞系的接种量略有差别。

成瘤时间：皮下接种的细胞一般会在1-2周成瘤，一般不会超过1个月；尾静脉和腹腔接种的细胞一般也是1周左右，会密切观察动物的体重与状态。

人源肿瘤组织来源移植瘤模型（patient derived xenograft，
PDX）,将肿瘤组织以小组织块的形式移植至缺陷程度较高的免疫缺陷小鼠体内，能够保持了肿瘤的异质性、其生物学特性保持的更加完整、与临床相似度更高，是现阶段最优秀的肿瘤动物模型。

PDX肿瘤模型包括：乳腺癌、骨肉瘤、白血病模型。

上图为PDX白血病模型。

胸腔原位种植与经左心室注射建立肺癌脑转移动物模型的比较陈愉生;涂洵崴;俞梅娥;林献;李鸿茹【摘要】Objective To establish an appropriate animal model of brain metastases from lung cancer in nude mice by thoracic orthotopic implantation in the chest or left ventricular injection , and to serve further studies on the mechanisms of lung cancer brain metastasis .Methods PC-9 cells (1 ×106/0.1 mL) in logarithmic phase were respectively injected into 18 nude mice by orthotopic implantation in the chest or left ventricular injection ( n=9 each group ) .The statuses of nude mice were observed after implantation .Animals showing clear signs of dyscrasia were killed .At autopsy, the lung, brain, liver and kidney were removed and histological sections were stained with H /E to detect the presence of tumor cells . Results In the thoracic orthotopic implantation group , three weeks after implantation , the number 4, 6, 9 mice showed tumor nodules in the chest wall , they began to lose weight in the fourth to sixth week differently , showing signs of dyscrasia gradually , and were sacrificed at the fifth to seventh week .The thoracotomy revealed that the whole thorax was occupied by many large lung cancer masses , spreading into bilateral ribs , pleura and spinal vertebra , with scarce eroded , compressed , pale and distorted lung tissues left .Histological examination with HE staining showed the presence of neoplasms in their lung tissues but only the number 6 mouse showed metastatic lesions in the brain tissue .In the left ventricular injection group, the mice almost began to lose weight in thethird week simultaneously and became moribund slowly , which were all sacrificed at the fourth week .After thoracotomy , the thoraxes were clear except the number 11 and 18 mice which appeared 2-3 tiny tumor foci in the chest wall , with normal lung tissues .Histological examination with HE staining showed the pres-ence of brain metastases in all the nine mice .The rate of brain metastases from lung cancer in the left ventricular injection group was 100%, compared with 11.1% in the thoracic orthotopic implantation group .Conclusions The establishment method of mouse model by left ventricular injection shows significantly higher rate of lung cancer brain metastases than that by thoracic orthotopic implantation .%目的为研究肺癌脑转移机制提供一种可靠的造模方法. 方法 18只BALB/c nude裸鼠随机分为2组,分别经胸腔原位种植与经左心室注射的方法,接种处于对数期生长的人肺腺癌PC-9细胞(1 ×106/0.1 mL),接种后观察裸鼠状态,在裸鼠出现严重恶液质时处死. 解剖裸鼠,观察肺、脑、肝、肾转移情况;病理取材、HE染色观察. 结果胸腔原位种植组:3周后,第4、6、9号裸鼠可见胸壁瘤结凸起形成,渐增大;裸鼠于第4~6周开始出现体重减轻,并逐渐出现恶液质,分别于第5~7周处死. 开胸后见:胸腔广泛灰白色肿瘤结节、团块形成,双侧肋骨、胸膜、脊柱多发种植灶,双肺被侵蚀压缩,颜色苍白,形态改变. HE染色见:肺表面广泛种植瘤形成,与正常肺组织分界清楚;仅6号裸鼠出现脑转移.经左心室注射组:裸鼠于第3周开始出现体重下降,并逐渐出现恶液质,全部裸鼠于第4周处死. 开胸后:除11、18号裸鼠胸壁见2~3个散在瘤结分布(直径约1~3 mm) ,其余胸腔视野正常;肺组织轮廓清楚,未见瘤结生成. HE染色见:9只裸鼠均出现大小不一的多发脑转移灶. 胸腔原位种植组:脑转移率为11.1%;经左心室注射组:脑转移率为100%. 结论经左心室注射建立肺癌脑转移动物模型的方法,较胸腔原位种植的方法保证了更高的脑转移率.【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2015(023)005【总页数】5页(P490-494)【关键词】肺癌脑转移;左心室注射;胸腔种植;动物模型【作者】陈愉生;涂洵崴;俞梅娥;林献;李鸿茹【作者单位】福建医科大学省立临床医学院,福州 350001;福建医科大学省立临床医学院,福州 350001;福建医科大学省立临床医学院,福州 350001;福建医科大学省立临床医学院,福州 350001;福建医科大学省立临床医学院,福州 350001【正文语种】中文【中图分类】Q95-33肺癌作为一种常见的恶性肿瘤，其死亡率占癌症死亡率之首［1］。

【专题】肿瘤模型专区（9-12页）多发肿瘤模型medsky1982：我的实验要求经脾脏注射大鼠肝癌细胞,建立肝内多发肿瘤模型,查看国内的大鼠肝癌细胞株有：CBRH-7919,RH-35,Walker256,但是他们在经脾脏注射建模中的特性不清楚，最好是能有高的转移成瘤能力，又不易产生腹水。

Swordzjsh不知道你们的试验目的是什么，但是我们一般不会考虑去建立直接多发的肿瘤模型，除非是转移模型，因为多发的肿瘤不好进行评价，单个的肿瘤灶可以量大小，可以剥出来称重，而且在造模的时候也比较好控制，所以很少去留意多发肿瘤模型的资料。

开腹手术medsky19821.另外想请教一下你们在做大鼠开腹手术（时间2小时左右）时，一般要不要经颈外静脉生理盐水补液？2.你们开腹肝内原位种植肿瘤手术后的护理应该注意什么，比方饮食，抗感染之类？Swordzjsh1.不知道，我从来没有构建原位模型开腹这么久的。

开腹后几分钟就关腹了2.没有什么特别需要注意的，就是小心缝线打结要结实，否则第二天你会发现几只线破肠流的尸体。

裸鼠造模周龄Futingtingftt我得实验是准备造乙型肝炎动物模型，用HepG2.2.15细胞皮下或者腹腔接种裸鼠成瘤，大家都说裸鼠最好是5－6周龄的，可是我想问问各位高手，有没有4周龄接种成功的呢？4周造模成功率怎么样？我想买4周龄的裸鼠，如果细胞很好的话就可以直接接种，不好的话就是裸鼠再长2周也可以用Swordzjsh一般建议用5~7周龄的，4周龄太小，至少4周半吧。

其实有时候8周龄也凑活能用。

复苏瘤块接种：Tumin我做兔vx2肿瘤模型.现在只有冻存的vx2瘤块,问是否可以直接复苏后注射到兔肌肉内制成荷瘤兔?Swordzjsh可以的，但是建议也要在体内穿三代，而且接种的时候要几块组织接到一个位点，因为刚复苏的瘤块活力比较差。

nude_mice:按照我们平时的经验，总是说肿瘤细胞要先在动物体内传几代，才能正式实验。

用于活体成像的人肺腺癌自发骨转移小鼠模型韩帅;杨兴海;万宗淼;周旺;姜东杰;尹华斌;王霆;肖建如【摘要】Objective To establish mouse models of lung adenocarcinoma spontaneous bone metastasis and perform a preliminary study on isolating the epithelial‐mesenchymal transition(EM T ) cells from the mouse models . Methods We injected different concentration bone‐seeking PC‐9 cells with Luciferase and GFP gene expression into the lung of the BALB/c nude mice .The survival time ,bodyweight ,tumor formation rate in the lung and metastasis rate to other organs were observed .Then we analyzed the EMT cells of the mouse models by in vitro bioluminescence imaging and flow cytometry analysis .Results Compared with the normal group ,the bodyweight and daily food intake of the mouse‐model groups decreased from day 21 after the injection of tumor cells .Bone metastasis occurred on day 20 and death on day 27 after the injection of tumor cells in high‐concentration group .The bone metastasis rate of the high‐concentration ,mid‐concentration and low‐concentration group wer e 60% (6/10) ,25% (2/8) and 0%(0/5) respectively ,which were higher in the EMT cells positive mice .Conclusion Spontaneous bone metastasis mouse models of human lung adenocarcinoma for in vivo imaging were successfully established ,from which EMT cells can be isolated .Such models could be used for studies on the mechanisms of lung cancer and the development of anticancer drugs .%目的建立小鼠人肺腺癌PC‐9细胞株骨转移模型，初步探讨由模型动物中分离上皮‐间质细胞转化（EM T ）癌细胞的可行性。

裸鼠成瘤实验-超详细资料裸鼠成瘤实验总结-超详细资料接种量接种部位接种部位:腋窝中部外侧皮下为好。

皮下肿瘤模型中，想要成瘤率高就接种在腋下。

接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，要保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位点时注射，退出针头，这样操作的目的并不完全是避免漏液，其实熟练后，不需要皮下穿行也不会漏液，主要是避免污染，进针点还有少量污染的可能性的，针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染的可能。

如果是用于正式实验，那么一只老鼠就只能接种一个位点，不可以接种多个位点用于保证可用的模型数。

因为在有些情况下，一个老鼠身上有多于一个肿瘤的情况下，会有相互影响的可能，无论这几个肿瘤相距有多远。

要是想多打几个部位做做预试验，倒也不是不可以，但是我觉得，基本上没有什么必要。

皮肤不用绷得太紧，平展就可以了，另外接种的时分进针点很靠下，针头在皮下走一段再注射，速度不要太快。

注射前针头稍微动一动，能动就申明在皮下，不然大概在皮内或者肌肉内。

普通来说都是有鼓包的但是要是你接种位置太深入腋窝，你是看不到鼓包的。

主要靠针头稍微动一动来判断。

是否应用免疫抑制剂裸鼠皮下种瘤后，可以通过应用免疫抑制剂，比如环磷酰胺（2mg每只，打两天）来加速瘤体的生长，当然我知道裸鼠是T免疫缺陷动物，但是人家说的CTX可以进一步抑制裸鼠的体液免疫和NK细胞杀伤的保护作用，可以加快瘤子的生长，这样造模的周期很短，也可以进行人为的控制，不知道这个观点是不是有道理，实践中是不是真有人这么做呢？楼上说的文献中也有报道，而且还有预先用放射照射抑制动物免疫功能再接种的方法，但是一般常规应用中大多数时候不推荐这么做。

另外还有一个问题应该被考虑到，大家现在都在琢磨着怎么让肿瘤出瘤的更快，造模周期更短，但是如果人为的把肿瘤生长加速，其实对实验并不好。

因为造模周期短，很可能生长速度也会被加快，肿瘤可能很快就溃烂了，这样就不得不被迫中止实验，而用药却没有用到足够的时间，药效还没有发挥出来就结束了，这样是很不利的。

《运用裸鼠动物模型筛选胃癌转移相关蛋白和基因》一、引言胃癌是全球范围内常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均居高不下。

胃癌的转移是导致患者死亡的主要原因之一。

因此，研究胃癌转移的机制，寻找有效的治疗靶点，对于提高胃癌患者的生存率具有重要意义。

近年来，随着生物医学技术的不断发展，裸鼠动物模型在胃癌研究中得到了广泛应用。

本文旨在运用裸鼠动物模型，筛选胃癌转移相关蛋白和基因，以期为胃癌的转移机制研究和治疗提供新的思路和方法。

二、材料与方法1. 动物模型构建选用裸鼠作为动物模型，通过胃部注射胃癌细胞株构建胃癌转移模型。

在建模过程中，严格控制实验条件，确保模型的可重复性和可靠性。

2. 样品采集与处理在模型建立后，定期采集裸鼠的肿瘤组织、正常组织及血液等样本。

样品经过处理后，用于后续的蛋白质组学、基因组学等实验。

3. 实验方法采用蛋白质组学、基因组学、生物信息学等技术手段，对样品进行检测和分析。

具体包括样品制备、质谱分析、基因芯片检测、生物信息学分析等。

三、实验结果1. 胃癌转移相关蛋白的筛选通过蛋白质组学分析，我们发现胃癌转移过程中存在一系列差异表达蛋白。

这些蛋白在胃癌组织中的表达水平明显高于正常组织，且与胃癌的转移密切相关。

进一步分析这些蛋白的功能和作用机制，有助于揭示胃癌转移的分子机制。

2. 胃癌转移相关基因的筛选基因组学分析显示，胃癌组织中存在一系列与转移相关的基因。

这些基因的表达水平与胃癌的转移密切相关，且在胃癌的发生和发展过程中发挥着重要作用。

通过生物信息学分析，我们进一步探讨了这些基因的互作网络和调控机制。

3. 裸鼠动物模型的应用价值裸鼠动物模型在胃癌转移研究中具有重要价值。

通过构建胃癌转移模型，我们可以更好地模拟人体内胃癌的转移过程，从而更准确地评估胃癌转移相关蛋白和基因的作用和价值。

此外，裸鼠动物模型还为我们提供了研究胃癌转移机制、筛选治疗靶点以及评估新药疗效的重要工具。

四、讨论本文通过运用裸鼠动物模型，成功筛选出胃癌转移相关蛋白和基因。