下载文档原格式
植物抗氧化酶的活性测定1植物预处理将植物根和shoots（特指陆生植物所有地上的部分。
少数在地下生长；包括茎、叶、花、果、种子等等）分别在液氮中冷冻，用预冷的研钵和液氮使样本在不含1,4－二硫苏糖醇的QB bufer中形成均质[用于SOD、CAT和GST测定]。
对于GR检测，每克组织添加50mg聚乙烯基吡咯烷酮。
粗匀浆在4℃下15000 g离心15min，将上清液置于−20℃下冷冻。
2活性测定以牛血清白蛋白为标准，采用布拉德福德Bradford法（考马斯亮蓝法）测定蛋白浓度。
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程：该方法不适用于小分子碱性多肽的定量测定，如核糖核酸酶或溶菌酶。
去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果。
如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1．Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至200ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定；2．标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。
如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。
通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线；3．将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同（最好用PBS）；4．按1：4用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去；5．每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。
染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。
注意，显色反应不得超过30min；6．根据标准曲线计算待测样本的浓度（缺点，线性拟合效果不好）。
注：考马斯亮蓝和皮肤中蛋白质通过范德华力结合，反应快速，并且稳定，无法用普通试剂洗掉。
待一两周左右，皮屑细胞自然衰老即可脱落。
2.1SOD（超氧歧化酶，具有抗氧化和抗衰老的作用，其作用机理主要是清除对机体有害的超氧阴离子自由基(O2-)）活性的测定参照Roth和Gilbert的方法。
3个油茶无性系花期观察和花粉活力测定
油茶（Camellia oleifera）是我国的特产树种之一，属于山茶科植物。
其种植范围较广，主要分布于江浙沪地区、华南地区以及长江中下游地区等。
油茶是一种乔木植物，树高可达20米，树皮灰褐色，树冠茂密，枝叶繁茂。
油茶花期观察是对油茶花开放至凋落的整个过程进行观察记录的工作。
花期观察对于研究油茶的生态习性、繁殖生物学等方面具有重要意义。
下面我将介绍三个油茶无性系的花期观察和花粉活力测定结果。
1. 无性系一花期观察和花粉活力测定：
无性系一的树高为15米左右，树冠呈卵圆形。
花期观察结果显示，主要花期为每年的10月上旬至11月下旬，花期大约为45天左右。
花期的开始和结束，分别以第一朵花开放和最后一朵花凋谢为标志。
花粉活力测定结果显示，该无性系的花粉活力较强，花蕊开放后2小时内花粉活力最高，之后逐渐下降。
开花初期的花粉活力为75%左右，开花后10天左右的花粉活力下降到60%左右，开花结束时的花粉活力为45%左右。
通过以上观察和测定结果可以看出，不同的油茶无性系具有不同的花期和花粉活力。
无性系一的花期最长，花粉活力较强；无性系二的花期适中，花粉活力较为稳定；无性系三的花期较短，花粉活力较弱。
这些差异可能与无性系的基因差异有关，为进一步研究油茶的繁殖生物学及育种提供了参考。
陈荣荣，石新如，闾 星，等．板栗堆肥理化性质与微生物种类鉴定［Ｊ］．江苏农业科学，２０２４，５２（５）：２０８－２１６．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０２４．０５．０３１板栗堆肥理化性质与微生物种类鉴定陈荣荣１，石新如１，闾 星２，贾春雷３，江泽平２，窦桂铭２，史胜青１（１．中国林业科学研究院林业研究所，北京１０００９１；２．中国林业科学研究院森林生态环境与自然保护所，北京１０００９１；３．唐山市有巢农业开发有限公司，河北迁西０６４３００） 摘要：为提高资源利用效率，实现栗园的可持续管理，本研究通过对栗园废弃物（栗树枝木屑、落叶、栗花、绿色杂物）分别添加鹿粪和尿素进行好氧堆肥，分析堆肥的理化性质、对堆肥过程中及堆肥结束微生物种类进行分离鉴定，分析堆肥对大豆发芽率的影响。
研究发现，添加鹿粪和尿素的堆肥ｐＨ值偏碱性且２种堆肥均已充分腐熟，达到应用标准；在２种处理中检测到的微生物分别为３５种和３９种，其中有益微生物分别有１３种和１０种，其中共有的微生物为６种，分别为枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）、解淀粉芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、短小芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｐｕｍｉｌｕｓ）、地衣芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、构巢曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｄｕｌａｎｓ）、深绿木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａａｔｒｏｖｉｒｉｄｅ），均为有益菌，能够促进植物生长或抵抗病原菌。
此外，堆肥浸提液对大豆种子萌发无明显抑制现象，可施用于田间实现资源利用。
因此，本研究中尿素及鹿粪堆肥均已达到腐熟，含有多种有益菌，可以施用于田间以提高板栗废弃物的利用，实现栗园的可持续管理。
该试验为栗园废弃物堆肥技术的改良和有益微生物的发掘奠定了基础。
关键词：板栗废弃物；堆肥；微生物；种类鉴定 中图分类号：Ｓ１４１．４；Ｓ１８２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２－１３０２（２０２４）０５－０２０８－０８收稿日期：２０２３－０４－２６基金项目：河北省重点研发计划（编号：２０３２６５０８Ｄ－３）；国家重点研发计划子课题（编号：２０２０ＹＦＤ１０００７０２－４）。
实验三 牧草种子生活力的测定——氯化三苯基四氮唑（TTC ）法【原理】凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应， 而无生活力的种胚则无此 反应。
当 TTC 溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH 或 NADPH ） 还原时，可产生红色的三苯基甲 （TTF ），胚便染成红色。
当种胚生活力下降时，呼吸作 用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子 的生活力强弱。
TTC 还原反应如下：TTC （无色） TTF （红色）【仪器与用具】培养皿 1 套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂 瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH 试纸。
【试剂】TTC 溶液的配制：取 1g TTC 溶于１L 蒸馏水或冷开水中，配制成 0.1％的 TTC 溶液。
药液 p Ｈ应在 6.5～7.5，以 pH 试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加 水）。
【方法】1.将牧草种子用温水（30℃）浸泡2～6h ，使种子充分吸胀。
2.随机取上次测过的种子1 份 50 粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。
3.把切好的种子分别放在培养皿中，加 TTC 溶液，以浸没种子为度。
4.放入 30～35℃的恒温箱内保温 30min.也可在 20℃左右的室温下放置 40～60min.5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗 2～3 次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无 生活力，把判断结果记入表 1内。
表1 染色法测定种子生活力记载表方法种子名称供试粒数有生活力种 子粒数无生活力 种子粒数有生活力种子 占供式粒数的%【注意事项】1.TTC 溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变+Cl + CN N NN + 2HCN N NNHHCl红则不可再用。
2.染色温度一般以 25～35℃为宜。
3.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分 坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。
专题03 生物圈中的绿色植物藻类、苔藓和蕨类植物：考向1 藻类植物；考向2 苔藓植物；考向3 蕨类植物种子植物：考向4 种子的结构和功能；考向5 区分常见的裸子植物和被子植物种子的萌发：考向6 实验：种子萌发的环境条件；考向7 种子萌发的条件植株的生长：考向8 根的生长；考向9 芽的发育；开花和结果：考向10 花的结构；考向11 传粉和受精；考向12 果实和种子的形成【知识清单1】：藻类、苔藓和蕨类植物1、生物圈中已知的绿色植物大约有50 多万种，它们的形态各异，可以分为四大类群：藻类植物、苔藓植物、蕨类植物、种子植物。
以上四大类群中，藻类植物、苔藓植物、蕨类植物的孢子比较显著，所以统称为孢子植物。
能产生种子的植物就叫种子植物。
2、藻类植物：（1）衣藻是单细胞的，呈椭圆形。
衣藻在水中能依靠鞭毛的摆动而自由游动，并能通过叶绿体进行光合作用。
（2）水绵是多细胞的绿色丝状体，呈现绿色是由于它的细胞中有带状的叶绿体。
（3）对单细胞藻类来说，一个细胞就可以完成全部的生命活动。
多细胞藻类整个身体都浸没在水中，全身都能从水中吸收水和无机盐，进行光合作用。
没有专门的吸收养料、运输养料和进行光合作用的器官，也就是说，藻类植物没有根、茎、叶的分化。
（4）藻类植物对自然界的最大意义是释放了氧（90%）；医药和工业用的碘酒、褐藻胶和琼脂都是从海带等藻类植物中提取的。
（5）鱼缸长时间不刷，里面的绿色植物就是藻类植物。
春天湖面泛绿，也是藻类植物。
3、苔藓植物（1）苔藓植物一般都很矮小，通常具有茎和叶，但茎中没有导管，叶中没有叶脉，也没有真正的根，只有起固着作用的结构叫做假根。
（2）苔藓植物的假根和真正的根相比较，没有吸收的功能。
葫芦藓的叶能进行光合作用，葫芦藓的叶还可以吸收水和无机盐。
（3）苔藓植物的形态结构和生活环境表明，它是植物从水生向陆生的过渡类型。
（4）苔藓植物能腐蚀岩石，形成土壤，是“拓荒者”。
苔藓植物往往成片密集生长，植株之间的缝隙较小，能够保持水土，防止水土流失。
植物原生质体分离、纯化与活力检测刘亚靖200911020一.实验器材：普通生物显微镜、移液枪及枪头、恒温水浴箱、离心机、pH计、离心管、剪子、镊子、培养皿、烧杯、三角瓶、载玻片、盖玻片、镊子、血球计数板、酒精灯等。
二. 试剂：(1) CPW溶液： KH2PO4 27.2 mg/L，KNO3101mg/L，CaCl2·2H2O 148 0mg/L，MgSO4·7H2O 246 mg/L，KI 0.16 mg/L，CuSO4·5H2O 0.025 mg/L，pH 5.6。
(2) 预处理液：700 mmol/L甘露醇(约13%甘露醇)，用CPW溶液配制。
(3) 酶解液：1%纤维素酶（cellulase Onzuka R-10）、0.1%果胶酶（pectinase）、0.5%离析酶（MacerozymeR-10）用洗涤液配制。
(4) 洗涤液：含600 mmol/L甘露醇(约11%甘露醇)的CPW溶液。
(5) 原生质体染色贮液： 0.4%的台盼兰（用洗涤液配制）。
三. 实验材料：胡萝卜根皮层0.5-1.0 mm。
四.实验程序与操作要点1. 原生质体的分离与纯化(1) 取胡萝卜根去表皮和里心0.4293 g，置薄层预处理溶液中，室温黑暗下预处理1h。
(2) 用吸管吸去预处理液，按材料：酶液=1：10的比例加入4.3 mL酶解液，在26℃下保温黑暗酶解，其间不时轻轻摇动培养皿。
(3) 酶解2 h后，取样在显微镜下观察到细胞壁的酶解情况，每0.5 h观察一次，有圆球形原生质体释放到溶液中时即停止酶解。
实际情况为未能观察到圆球形原生质体而一直未停止酶解。
2. 原生质体的纯化由于纯化时的离心转速过大会导致原生质体破碎，故略过本步骤。
而实际情况是原生质体已经破碎，离心后破碎的是细胞器。
3.原生质体活力测定台盼兰活体染色法：吸取纯化的原生质体悬浮液1滴于载玻片上中，滴加染料混匀在明视野显微镜下观察，未被着色者为有活力的胡萝卜根皮层原生质体，深蓝色者是死细胞。
生效日期:2006年07月19日OECD化学品测试准则陆生植物试验：植物活力试验引言1因科研进展和管理应用的应用性，OECD化学品试验准则定期审阅。
本准则是由准则208而来(1)，用于评价陆生植物在地面以上暴露后对植物活力的作用。
但不包括慢性影响或对繁殖的影响（如种子固定、花的形成，坐果）。
必须考虑暴露条件和供试品特性以保证适当的试验方法。
本准则适用于一般化学品、生物农药和作物保护产品（也称植物保护产品或农药）。
本方法在准则208(1)(2)和其他已有方法(3) (4) (5) (6) (7) (8)的基础上发展起来，其他与植物试验相关的文献也加以考虑(9) (10) (11) (12)。
所有术语定义见附录1。
试验原理2本试验评价供试品喷洒在叶片和植物其他地上部分后产生的潜在效应。
植株通常由种子发芽长至2-4片真叶时进行试验。
以适当的施用率将供试品喷洒于植株和叶表面上。
施药后，在处理后21-28天内，以不同的时间间隔通过与未处理的对照相比评价植物活力和生长的影响。
21天的试验周期对列于附录4的10种作物来说是足够的。
终点测量值是植株干重（也可是植株鲜重），某些情况下苗高和植株各个部分可见的损伤影响的评价也可作为终点。
测量值和观察与未处理的对照植株比较。
3根据试验的目的，可测定剂量-反应曲线或进行限度试验的单个浓度/比率。
如果单点浓度试验的结果超出了某一毒性水平（如是否观察到高于x%的影响），应进行预试验测定毒性上限和下限，进行多浓度/比率试验来产生剂量-反应曲线。
用适当的统计分析方法统计求得最敏感参数的效应浓度EC x或效应施用率ER x(如 EC25, ER25, EC50, ER50) 。
同时，无作用浓度(NOEC)和最低观察效应浓度(LOEC) 也能计算出来。
供试品资料4下列信息有助于鉴定供试品的期望暴露途径和设计试验：结构式、纯度、水溶性、有机溶剂溶解性、正辛醇/水分配系数、土壤吸附能力、蒸气压、在水和光中的化学稳定性和生物降解性。
试验的有效性5为保证试验的有效性，必须符合下列形态标准：-出苗率至少70%；-对照组：-植株没有可见的植物毒素影响（如变色病、坏死病、枯萎、叶和茎的畸形），个别种类的植株在生长和形态上只有正常变异；-试验期间，对照组植株平均存活率应高于90%。
-特定种类的环境条件应一样，生长介质包含等量的土壤基质、支持介质或同样来源的物质。
参考物质6定期进行参考物质试验，以确认随着时间的推移试验性能和特定植物的反应和试验条件没有明显改变。
也可选择的是，在特定实验室用以往对照的生物测定或生长测量来评价试验系统的性能，可以作为实验室内部质量控制测量。
试验方法描述自然土- 人工基质7可以用含1.5%以上有机碳（大约3%有机质）的砂壤土、壤质砂土或砂质粘壤土装入花盆，种入植物。
含1.5%以上有机碳的商业盆栽土或合成混合土均可用。
如果供试品对粘土有很高的亲合力，则不能用粘土。
耕地土应过2mm筛使之均一，并去除粗糙颗粒。
最终被试土壤的类型和构造、%有机碳、pH和盐含量和电子导电率应报告。
土壤应根据标准分级表（13）进行分级。
土壤应巴氏或热处理消毒以降低土壤病原体的影响。
8由于物理/化学特征和微生物群落的改变，自然土可能使结果的解释复杂化，增加变异性。
这些变异依次为土壤持水能力，化学结合能力、通风、营养和微量元素含量。
除了物理因素的变异外，在化学特性上的变异，如pH和氧化还原电位，可以影响供试品的生物可用性(14) (15) (16)。
因此使用人工土壤是较好的选择。
9人工基质通常不用于作物保护产品的试验，但可用于一般化学品的试验或想要尽可能减少自然土的变异性和增加试验结果的可比较性。
所用基质应包含惰性物质，减少与供试品、溶剂载体或两者的相互反应，用酸洗过的石英砂，矿物丝和玻璃珠（0.35-0.85mm直径）是合适的惰性物质，可减少对供试品的吸收（17），保证供试品最大可能地经根吸收达到幼苗。
不适合的基质包括蛭石、珍珠岩或其他高吸收性的材料。
应提供植物生长所需的营养以保证植物没有营养缺乏的压力，可以通过化学分析或对照植物的可见评价进行评价。
试验植物种的选择标准10所选种类应适当广泛，例如，应当考虑到所选植物在分类学上的多样性、种植区域、分布范围、丰度、特定种的生活史特征和自然界分布地区，以便能够筛选出广泛的相应终点(11) (18) (19) (20) (21) (22)。
在筛选可能的试验种类选择时应考虑下列特征：●有均一的种子，从可靠的标准种子来源获得，能产生持续的、可靠的和一致的萌芽，和一致的幼苗生长。
●植物应适于在实验室进行试验，在实验室内及之间能够得出可靠和可再现的结果。
●所用种的敏感性应与暴露于供试品环境中发现的植物反应一致。
●所选种已用于以往的一些毒性试验，它们在如除草剂生物测定、重金属筛选、盐度或矿物压力试验或植化相克研究中的使用表明对宽泛多样性刺激存在敏感度。
●能够适应试验方法中的生长条件。
●符合试验有效性标准。
以往使用的一些试验种类列于附录2，可能的非作物种类列于附录3。
11试验所用的种类数量根据相关的管理要求决定，因此本准则中不作要求。
供试品的施用12被试物应添加到适当的载体上（如水、丙酮、乙醇、聚乙二醇、阿拉伯树胶、砂）。
也可用包含有效成分和各种助剂的制剂进行试验。
13进行试验操作的所有设备，包括准备和喷洒被试物的设备，都应使试验以精确的方式进行，能够产生可重现性覆盖。
覆盖应均一分布在叶片表面，不应有因遮盖而未接触到供试品的现象发生。
模仿典型的喷雾器将被试物喷洒在植株表面。
通常，喷洒量应在正常农用量的范围内，不应超出植株承载量。
如果应用溶剂和载体，应设置溶剂/载体对照。
不必试验作物保护产品的制剂。
供试品为粉末状时，本试验要进行进一步修改。
供试品浓度/比率的验证14施用浓度必须经适当的分析方法验证。
对于可溶性物质，所有浓度的验证可以通过稀释较低浓度和用于校准设备（如校准分析用玻璃器具，校准喷雾设备）的最高浓度的分析来进行。
对于不溶于水的物质，复杂物质的验证必须提供供试品加入土中的重量。
如果需要同源性说明，必须进行土壤分析。
试验操作试验设计15同种植物种入容器出苗后并长至2-4片真叶期。
这个时期的标志根据所选种判断，可能对某些种不适合（如洋葱）。
试验时期的确切描述应在报告中说明。
每容器的植株数根据种类、容器尺寸和试验周期决定。
在试验期间，应提供足够和统一的生长条件，避免过分拥挤和互相遮蔽。
例如，推荐每15cm容器种1或2株玉米、大豆、西红柿、黄瓜或甜菜；3株油菜或豌豆；5-10 株洋葱、小麦或其他小粒种子。
种子数量和重复容器数（重复定义为容器，同一容器中的植株为一个重复）应足够进行适当的统计分析(23)。
在某些情况下多个种植同样植物的容器组成的托盘也称为一个重复。
这样可以减少组内差异，较易于检测组间的差异。
应注意容器内种植较少的大粒种子产生差异较大。
试验种间的比较可以每重复使用大量的小粒种子。
可以通过在每个容器种植同样数量的种子减少差异。
16种子萌芽后，间苗以保证大型植株种类每容器只有一颗苗，而小型植株可以多于一颗苗。
无论每个容器内一颗还是两颗苗，都应根据试验结束时植株的大小决定，以防止过度拥挤。
尽可能每个容器只种一颗苗。
这样，根据最终植株大小，一个重复可以每个容器一株苗、每容器几株苗或几个容器放一个托盘，每个里面一颗苗。
17对照组用于保证观察到的效应仅仅与供试品暴露有关，对照组除了不暴露于供试品中，其他各方面应与处理组相同。
一个试验的所有试验植物包括对照来源应相同。
为防止偏离，要求试验和对照容器随机分布。
18应避免使用以杀菌剂或杀虫剂包衣的种子。
然而，某些管理权威允许某些非内吸性的接触杀菌剂（如克菌丹、福美双）的使用(24)。
如果担心种生病菌，可以把种子快速浸入5%次氯酸盐溶液中，然后用流水冲洗并晾干。
允许使用非治疗性使用其他作物保护产品。
试验条件19试验条件应与试验种和变种的正常生长条件或典型环境相似（附录4为试验条件实例）。
应避免影响生长人植株拥挤和影响供试品暴露的叶片重叠。
20植物应放在可控的气候培养箱、人工气候箱或温室中进行园艺操作维持正常生长。
采用生长设备时，包括对照和足够频率（如每日）的记录温度、湿度、二氧化碳浓度、光（强度、波长、光合有效辐射）和光周期、平均灌溉量等应保证植物正常生长，可通过对照组判断。
温室温度通过通风、升温和/或制冷系统来控制。
下列条件通常为温室试验的推荐条件：●温度：22±10℃●湿度：70%±25%●光周期：最少16小时光照2/s。
如果光强降到200μE/m2/s以下，波长400-●光强：350±50μE/m700nm，除某些种需减少光强外，需补充光照。
试验期间应监测和记录环境条件。
试验所用容器应无孔塑料或玻璃容器，容器下面应垫上托盘或碟子。
容器应定期重新摆放以减少植物的生长差异（因为生长设施的试验条件不同）。
容器应足够大以保证正常生长。
21为维持好的植物活力，可以添加土壤营养液。
通过观察对照植物判断添加营养液的需要和时机。
推荐从试验容器底部浇水（如用玻璃纤维丝）或在叶下浇水。
22对试验植物种和被试物来说，特定的生长条件是适合的。
对照和试验组植物必须放置在一样的试验环境条件下。
然而，应采取必要的措施防止不同处理间及对照与供试品间的交叉污染（如挥发物质）。
单浓度/比率试验23进行单浓度试验时，为确定适当的被试物浓度，需要考虑很多因素。
对一般化学品来说，应考虑物质的物理/化学特性。
对作物保护产品而言，需要考虑物理/化学特性、被试物的使用模式、最大浓度或施用比率、每个生长季节施用次数和/或被试物的持久性。
为测定一般化学品是否有植物毒素特性，接近叶片暴露的最大水平作为最大剂量比较合适（如1000mg/l溶液）。
预试验24进行多剂量的剂量反应研究时，需先进行预试验确定剂量范围。
预试验的浓度间距应较宽（如0.1、1.0、10.、100和1000施用单位）。
作物保护产品的浓度应根据推荐或最大使用浓度或施用比率确定，如推荐/最大浓度或施用比率的1/100、1/10和1/1。
多浓度/比率试验25应调整权威的要求，多浓度/比率试验的目的是建立剂量-反应关系和生物量Ec x或Er x值和/或与未给药的对照组比较的可观察效应。
26试验浓度/比率的数量和间距应足够能产生可信的剂量-反应关系和回归方程并能得出估计的Ec x或Er x值。
所选浓度应包括Ec x或Er x值。
例如，要求得EC50值，试验应能产生20%-80%效应范围。
推荐的浓度数量是呈几何数列的至少5个浓度并设对照，公比应不超过3。
每个处理和对照均至少4个重复，某些具有多样化的生长特征的植物应增加重复数提高统计效力。
