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实验六硫氰酸钠对斑马鱼的蓄积毒性实验硫氰酸钠对斑马鱼的蓄积毒性实验一、实验目的1、了解蓄积毒性实验方法2、评价硫氰酸钠对斑马鱼的蓄积作用强度。
二、实验原理蓄积毒性作用(cumulative coefficient action)是当低于中毒剂量的环境毒物或外来化合物反复多次的与生物体持续接触，经一定时间后使生物体出现明显的中毒表现。
蓄积毒性实验分为：蓄积系数法、20天蓄积试验法和受试物生物半衰期测定法。
蓄积系数法(cumulative coefficient method)是一种常用来评价环境污染物蓄积作用的方法。
1、蓄积系数法蓄积系数法是一种用来评估毒物和污染物蓄积作用的方法。
蓄积系数(comulative coefficient,K)，是分次给予受试物后引起50％受试动物出现某种毒效应的总剂量(以ED 50(n))表示)，与一次给予受试物后引起50％受试动物出现同一毒效应的剂量(以ED 50(1)表示)的比值，即K＝ED 50(n)/ED 50(1)若以死亡为毒效应指标，上式为K越小，受试化合物的蓄积毒性越大。
测定方法：固定剂量每天连续染毒法剂量定期递增染毒法1）固定计量法固定每天染毒剂量为1/20—1/5 LD50，连续染毒，直至实验动物半数死亡。
如果染毒剂量累计已达5个LD50动物死亡仍末达半数，实验均可告结束，计算蓄积系数，作出评价。
2）递增剂量法2、先测定LC50，然后对另一组动物每天染毒，以4天为一期，开始给予0.1LC50。
以后每期按1.5倍递增剂量，直至动物半数死亡，或实验已达20天，可结束实验，计算系数。
染毒时间/天每日染毒剂量/mg/L每四天染毒总剂量/mg/L累计染毒总剂量/mg/L注：表中的递增染毒剂量为ED50或LD502、20天蓄积试验法按LD 50的1/20、1/10、1/5、1/2及0（溶剂对照）随机分成5组。
每天对动物进行染毒，连续20 d，各组总剂量分别为1LD 50、2LD 50、4LD 50、10LD 50。
第一节常规毒性试验一、急性毒性试验急性毒性试验是研究化学物质大剂量一次染毒或24h内多次染毒生物所引起的毒性试验。
其目的是确定化学物质的毒性程度以及剂量—反应关系，确定此化学物质与其他化学物质的相对毒性，确定具体的急性毒作用以及提供毒作用模式方面资料，并为进一步开展其他毒性试验提供理论依据。
一项设计合理的急性毒性试验，可以得到用以计算LD50的资料。
(一)水生生物急性毒性试验1．鱼类毒性试验鱼类急性毒性试验，是水生生态毒理学的重要内容之一，并广泛应用于水域环境污染监测工作中，对控制工业废水的排放，保护水域环境，发展渔业生产，制定渔业水质指标，具有重要意义。
(1) 试验用鱼的选择应具有代表性，便于在实验室条件下饲养的当地经济鱼类，对毒物敏感，个体健康。
短期试验多采用我国的青鱼、草鱼、鲢鱼及鳙鱼四大养殖淡水鱼，一般体长在7cm以下为宜。
也可采用金鱼，一般在3cm以下。
选择行动活泼、体色光泽、鱼鳍舒展完整、逆水性强和食欲好的当年鱼种，在实验室内驯化培养7—10天使用(2) 试验条件试验容器采用玻璃缸或白搪瓷桶，其盛水量以每条鱼2—3L为宜，水的PH值为6.5—8.0，冷水温度为12—18℃，温水温度为20—28℃，一次试验中水温变化范围为±2℃。
水中溶解氧不能低于4mg/L，可用清洁的河水、湖水或放置3天以上的自来水。
（3）半数致死浓度（LC50）的测定先做预备试验，确定100％致死浓度和不引起死亡的最大浓度，然后以此浓度范围，按等对数间距确定5-6个浓度组，另加一空白对照组，每组10-20尾鱼，染毒48-96h。
染毒刚开始8h内经常观察，以后可作24h、48h、72h、96h的定期观察，记录中毒反应及死亡时间。
死亡鱼立即取出剖检。
试验期间保持溶解氧、pH值、水温等条件的稳定。
根据24h、48h、96h各组鱼的死亡数，按LC50计算方法，求出相应时间的LC50 。
一般采用直线内插法或对数-概率模式法。
姓名：刘金鑫学号：201428006037073 培养单位：地理所生态毒理学实验设计一.【实验题目】：砷对两种淡水藻类的毒性作用。
二.【实验设计思想】：砷在环境中是一种普遍存在的污染物，它来源于人为源和自然源的释放，通过一定的途径进入地表、土壤和饮用水体中。
通过目前的研究已经发现进入水体的砷对水中的生物存在影响，我们有必要研究水体中砷对水生生物的毒性作用，在这些研究中要数藻类的研究较多。
我准备通过使用72小时生长速率——一种抑制生物检测方法，来判定五价砷和三价砷对两种在无外来干扰的热带的淡水藻类（绿藻和单针藻）的毒性。
这个实验的意义在于，看砷对藻类的毒害作用是否很强，如果藻类对于砷的耐性较强，可以指导后面的藻类用于砷污染水体修复的研究。
三.【实验目的】：1、掌握藻类的室内无菌培养。
2、学会藻类生长速率测定的方法。
3、掌握72小时生长速率的检测方法。
4、判定砷对两种藻类的毒害作用。
四.【实验原理】：1、藻类的选取：由于不同种类的藻对砷毒性的反应不同，有的藻对砷比较敏感，而有的对砷的耐性较好，所以我选择了一种敏感性的单针藻和一种耐性较好的绿藻。
2、培养液的选择：为了排除自然水体和纯净水体的影响，我用人工合成的软水（内部成分以及含量都是已知的）来进行实验。
3、培养瓶的选择：为了防止砷在普通瓶体上的吸附，我选择250ml 的硼硅酸盐的锥形瓶。
4、检测前处理：将处于指数生长阶段（5-6天）的细胞通过离心（2500rpm，7min），超纯水洗涤三次确保培养液除去后，再用于生物检测。
5、培养条件：将培养瓶放在培养架上进行培养。
培养架周围的环境条件：27±1℃、12：12h的光照和无光、每天用手摇晃两次锥形瓶使其进行充分的气体交换。
6、通过多功能计数仪测定结果。
7、数据分析：通过线性插值法计算72hIC50。
8、藻对砷和磷的吸收具有竞争性。
五.【实验材料】：绿藻、单针藻、玻璃烧杯、天平、硼硅酸盐锥形瓶、镊子、酒精灯、量筒、真空过滤器、滤膜、试管、无菌操作台、吸管、多功能计数器、移液枪、PH试纸（PH5.4—9）、牛角匙、牛皮纸、棉花、纱绳、高压蒸汽灭菌锅、培养架、温度计、恒温室、冷光源、NaHCO3、CaSO4·2H2O、MgSO4、KCl、CaCO3、10%HNO3、超纯水、Na2AsO4·7H2O、NaAsO2、NaNO3、KH2PO4等。
农药环境毒理学检测内容
1. 毒性测试，农药的毒性测试是评估其对环境中不同生物的毒性效应，包括对水生生物、陆生生物和微生物的影响。
这些测试通常包括急性毒性、慢性毒性、生殖毒性、毒素累积等方面的评估。
2. 生物富集和生物标志物，通过采集环境中的生物样本，如水生生物、植物或土壤中的生物，来评估农药在生物体内的富集情况以及对生物体的影响。
同时，还可以通过检测生物体内的特定标志物来评估农药的暴露情况和毒性效应。
3. 环境归趋分析，通过对农药在土壤、水体和空气中的分布和迁移进行分析，评估其在环境中的归趋和残留情况，以及对生态系统的长期影响。
4. 生态毒理学研究，通过对农药在生态系统中的行为和影响进行研究，评估其对生态系统结构和功能的影响，包括对群落结构、食物链传递、生物多样性等方面的影响。
5. 靶标分析，通过对环境中的非靶标生物和生态过程进行监测和分析，评估农药对非靶标生物和生态系统的影响，以及可能引起
的生态风险。
综上所述，农药环境毒理学检测内容涉及了对农药在环境中的毒性效应、富集情况、残留情况以及对生态系统的影响进行全面评估的过程，旨在揭示农药对环境的潜在风险，为环境保护和农药合理使用提供科学依据。
1．5．1一般观察包括外观特征和行为活动、精神神经症状、呼吸循环症状、消化道症状、粪便性状、体温及体重变化等。
体温于试验前、试验每周、给药结束和恢复期结束各测1次。
体重每周检查1次，其它每天最少检查1次，并及时做好记录。
1．5．2心电图检查II导联ECG。
试验前测1次，给药结束和恢复期结束各测1次。
----420S 生物机能实验系统1．5．3血液学检测静脉取血，以EDTA抗凝，用AC920m血球分析仪测定红细胞数、血红蛋白量、白细胞数及血小板数，用涂片法进行白细胞分类，用玻片法测定凝血时间，检测时间同上。
1．5．4血液生化学检测静脉取血，分离血浆，分别检测天门氨酸氨基转换酶(AST)、丙氨酸氨基转换酶(ALT)、碱性磷酸酶(AIJP)、肌酸激酶(CK)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、血糖(GLU)、肌酐(Crea)、总胆固醇(TCH)、总胆红素(TBIL)，检测时间同上。
---7020生化仪1．5．5尿液检测一般常规，检测尿液葡萄糖、胆红素、酮体、比重、pH、尿胆元、尿蛋白、亚硝酸盐、红细胞、白细胞等，检测时间同上。
------优利特180尿液分析仪。
1．5．6病理学检查器官、组织、细胞及亚细胞形态结构的变化差异分别在给药期结束(每组6只)和恢复期结束时(每组4只)进行。
采用颈总动脉放血法处死动物，取脑、心、肝、脾、肺、肾、子宫、卵巢、睾丸、附睾、胃、肠、肌肉、骨(髓)、肾上腺、甲状腺和胸腺称重，观察并记录各器官的变化，称脏器重量及计算脏器系数，并进行组织学检查(炎症反应?增生?萎缩?血管变化?上皮结构?)。
-----病理制片、骨髓涂片、血涂片1．5．7免疫学检测免疫应答？抗体？淋巴组织？炎症因子？，ELISA法检测血清细胞因子TNF-a、IL-6水平1．5．8急毒体重，食量，外观特征/程度，死亡，活动，粪便1．5．9毒代蓄积毒性，靶器官/部位。
1．5．10组织生化方法检测匀浆中丙二醛(MDA)，超氧化物歧化酶(SOD)，髓过氧化物酶(MPO)，羟脯氨酸(HP)等的变化。
最新毒理学实验报告实验目的：本实验旨在评估新型化合物X的潜在毒性，通过一系列体内和体外实验，确定其对哺乳动物细胞的影响，并为其安全性评估提供科学依据。
实验方法：1. 体外细胞毒性测试：- 使用人类肝癌细胞株HepG2和非洲绿猴肾细胞株Vero进行体外细胞毒性测试。
- 将细胞分为不同浓度的化合物X处理组和对照组。
- 通过MTT法测定细胞存活率，评估化合物X的半数致死浓度（LC50）。
2. 体内急性毒性测试：- 选择SPF级小鼠进行实验，分为高、中、低剂量组和对照组。
- 通过灌胃给药，观察7天内的动物生存率、体重变化和行为反应。
- 在实验结束后，对小鼠进行解剖，观察主要器官的宏观病理变化。
3. 遗传毒性测试：- 采用Ames试验评估化合物X对沙门氏菌的致突变性。
- 进行染色体畸变试验和骨髓微核试验，评估其对哺乳动物细胞染色体的影响。
实验结果：1. 体外细胞毒性测试显示，化合物X对HepG2细胞的LC50大于1000μg/mL，对Vero细胞的LC50大于800μg/mL，表明其在测试浓度范围内对这两种细胞株的毒性较低。
2. 体内急性毒性测试中，小鼠在给药后7天内未观察到明显毒性反应，生存率100%。
解剖结果显示，各剂量组小鼠的主要器官未见明显病理变化。
3. 遗传毒性测试中，Ames试验结果为阴性，表明化合物X不具备致突变性。
染色体畸变试验和骨髓微核试验也未发现显著的遗传毒性效应。
结论：根据本次实验结果，化合物X在测试的剂量范围内显示出较低的细胞毒性和遗传毒性。
然而，为了全面评估其安全性，建议进行更长期的慢性毒性和致癌性研究。
此外，应考虑进行生态毒性评估，以了解其对环境生物的潜在影响。
收稿日期:2004-04-29作者简介:王阳峰(19782),男,汉族,河南新乡人,本科学历,助理工程师,主要从事环境保护与污染防治工作。
用水生态毒理学方法评价13种硝基苯类化合物的急性毒性王阳峰1, 吕玉新2(1.新乡市机动车污染源监理中心, 河南 新乡 453003;2.新乡市环境保护监测站, 河南 新乡 453003)摘要: 目的 评价常见的13种硝基苯类化合物的急性毒性。
方法 采用毒理学方法中的静水试验分别考查了13种硝基苯类化合物对大型蚤(Daphnia magna ,HB )的24h 和48h 半数致死浓度(LC 50)。
结果 硝基苯类化合物因其取代基的不同或其取代基位置的不同而对大型蚤表现出不同的毒性,且对二硝基苯的毒性最强,其24h LC 50和48h LC 50分别为0.98±0.03mg ・L -1、0.27±0.02mg ・L -1。
结论 对二硝基苯属极毒类物质,此类化合物对水生态系统及其水环境的影响应引起足够重视。
关键词: 硝基苯;大型蚤;毒理学中图分类号:X131.2 文献标识码:A 文章编号:1004-7239(2004)06-0456-03Assessment of acute toxicity about 13kinds of nitrobenzol compound by aquaticecological toxicological assay WAN G Yang 2feng 1,L U Yu 2xin 2(1.Xi nxiang S upervision Center of V ehicle Poll ution Source ,Henan Provi nce453003,Chi na ;2.Xi nxiang Envi ronmental Protection and Monitori ng S tation )Abstract : Objective To assess acute toxicity about 13kinds of nitro benzol compounds.Methods The paper researched 13kinds of nitriobenzol compounds to daphnia magna (HB ),for a medina lethalconcentration in 24h and 48h ,that is ,24h LC 50and 48h LC 50,by aquatic toxicological assay in mo 2tionless water.R esults That the different toxicity of the nitrobenzol compounds to HB ,because of dif 2ferent substituent and different position of substituent.And the p 2dinitrobezene had the greatest toxicity ,the 24h LC 50and 48h LC 50were 0.98±0.03mg ・L -1and 0.27±0.02mg ・L -1respectively.Conclu 2sion The p 2dinitrobezene is extreme poisonous substance ,so that enough attention should bepaid to the effect of such compound to aquatic environment and ecology.K ey w ords : nitrobenzol ;daphnia magna ;toxicology 有机化工、石油化工、印染、炸药、制革等行业的工业废水中常富含硝基苯类化合物,此类化合物对水的感观性状影响很大[1]。
实验五硫氰酸钠对斑马鱼的急性毒性实验一、实验目的：1、掌握硫氰酸钠对斑马鱼急性毒性实验方法。
2、掌握如何测定硫氰酸钠对斑马鱼的LC50。
3、了解硫氰酸钠对鱼类的毒性等级划分。
二、实验原理1、斑马鱼急性毒性实验：试验鱼同时孵化，体长2-3cm，健康无病，在室内驯化饲养7-14天，待鱼苗死亡率稳定在<10% 时开始试验。
试验期间对照组的死亡率也应控制在<10%以下。
2、采用半静态测定方法，试验容器采用玻璃缸，盛水量以每条鱼2-3L水为宜(本实验用水18L)，pH值为6.5-8.0，冷水水温为12-18℃，温水温度为20-28℃（本实验温度为室温），一次实验中水温变化范围为±2℃，水中溶解氧不能低于4mg/L。
3、根据预试验结果在最高安全浓度与最低全致死浓度之间，按级差设5-7个组，并设空白对照，每组养10尾。
试验前24小时停止喂食，试验期间不喂食，染毒48-96小时，记录24、48、72、96小时时鱼的死亡率与中毒症状，及时捞出死鱼。
4、鱼类急性毒性等级划分LC50等级<1mg/L 剧毒级1-10mg/L 高毒级10-100mg/L 中毒级>100mg/L 低毒级5、LC50：动物急性毒性试验中，使受试动物半数死亡的毒物浓度。
三、实验用品斑马鱼、硫氰酸钠、鱼缸、渔具、加氧泵、温度计、烧杯、量筒、分析天平、玻璃棒等。
四、实验步骤1、正式试验前将斑马鱼在与试验相同的环境条件下驯养7-14d，驯养期间斑马鱼死亡率<5%。
驯养时每天喂食1次，曝气充氧，正式试验前24h停止喂食。
2、设定5个给药组，浓度分别为150mg/L、300mg/L、450mg/L、600mg/L和750mg/L，并设空白对照。
3、采用“半静态法”，每24h更换一次药液，每次更换三分之一，24h、48h、72h和96h定期观察并记录斑马鱼中毒症状和死亡情况，并求出其LC50值。
五、实验结果1、求出硫氰酸钠对斑马鱼的LC50。
实验二 铜、镉对青岛大扁藻的联合作用一、 实验目的1. 了解联合作用的定义和种类2. 观察金属离子对海洋微藻的种群生长的影响3. 掌握联合作用实验设计的方法二、 实验原理（1）联合作用 联合作用也称交互作用，凡两种或两种以上的化学物同时或短期内先后作用于机体所产生的综合毒性作用，称为化学物的联合毒性作用。
联合作用主要有相加作用、协同作用、拮抗作用和独立作用。
（2）关于血球计数板的使用：1．16×25型的计数板将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数 。
细胞个数／1mL ＝100个小方格细胞总数/100×400×10000×稀释倍数2．25×16型的计数板中央大方格以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数用。
一般计数四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞数。
细胞个数／1mL ＝80个小方格细胞总数/80×400×10000×稀释倍数（3）血球计数板的使用注意事项1．每天定时取样计数，记录数据。
2．从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几下，这样使青岛大扁藻分布均匀。
3．如果一个小方格内青岛大扁藻过多，难以数清，应当对培养液进行稀释以便于其计数。
具体方法是：摇匀试管，取1mL青岛大扁藻培养液，加入成倍的无菌水稀释，稀释n 倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以稀释倍数。
以每小方格内含有4—5个青岛大扁藻为宜。
特别是在培养后期的样液需要稀释后计数。
4．对于压在方格界线上的青岛大扁藻应当计数同侧相邻两边上的个数，一般可采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理，另两边不计数。
5．计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算，对每个样品可计数三次，再取其平均值。
计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。
按公式计算每1ml （或10mL）藻液中所含的青岛大扁藻个数。
