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实验二细菌的革兰氏染色一.实验目的1.了解革兰氏染色原理并掌握其操作。
2.巩固无菌操作技术及显微镜使用方法。
二.实验原理革兰氏染色法能将细菌分成两大类，即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
在用乙醇进行脱色时，两种菌的细胞壁结构不同，阳性菌细胞壁为网状结构，比较厚，结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，而阴性菌细胞壁比较薄，颜色更容易洗脱出来，所以最终革兰氏阴性菌为红色，阳性菌为紫色。
三.仪器、试剂与材料1.菌种：枯草芽孢杆菌和大肠埃希氏菌属25922。
2.染色液和试剂：结晶紫、碘液、番红、95%的乙醇、沙黄、香柏油、二甲苯、蒸馏水。
3.器材：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、滴管、吸水纸四.实验步骤1.染色步骤：（1）制片：接种环蘸取细菌液置于载玻片，酒精灯外焰加热玻片进行细菌固定。
（2）初染：添加结晶紫染色，1min后倾去染色液，蒸馏水冲洗至无色。
（3）媒染：吸干残留蒸馏水后，加入一滴碘液，作用1min，水洗。
（4）脱色：吸干残液后，加入95%酒精进行脱色，30s后水洗。
（5）复染：吸干残液后，用番红液复染，1min后，水洗。
（6）镜检：吸干残液后，低倍镜寻找目标物体，再用高倍镜放大目标物，目标视野添加香柏油进行观察。
2.平板划线（1）左手中指、无名指和小拇指托住无菌平皿。
（2）盖子用食指和拇指掰开，右手持接种环进行第一区划线。
（3）酒精灯灼烧接种环至通红，晾凉后进行第二区划线（4）重复（3）进行第三、四区划线（5）将平皿置于适宜温度的培养箱培养过夜。
五.结果与讨论1.革兰氏染色结果图1为显微镜下的染色结果，从结果可以看出，这是革兰氏阳性菌，也就是我们所用的实验材料之一枯草芽孢杆菌，不过红色比较零星，这可能是因为我们在清洗载玻片的时候不小心清洗过度，将一部分细菌冲洗掉了，所以效果并不是很好。
图1 枯草芽孢杆菌而我们所用的另外一个实验材料大肠埃希氏菌属25922理论上说应该是革兰氏阴性菌，这也就意味着最终显微镜下看到的颜色应该是紫色，但是试验最后我们只观察到一片白色，回过头来思考原因，这可能是因为我们在吸干载玻片的过程中用力过猛用纸巾把细菌给擦去了，所以最后细菌都没了，也就没有染上相应的颜色。
