饮用水大肠菌群检验纸片(五管法)

饮用水大肠菌群检测方法大肠菌群是指在37℃培养24h 内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革蓝氏阴性无芽孢杆菌的总称。

主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。

水的大肠菌群数是指100 mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。

在正常情况下，肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽孢杆菌等多种细菌。

这些细菌都可以随人畜排泄物进入水源，由于大肠菌群在肠道内数量多，所以，水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。

目前，国际上已公认大肠菌群是粪便污染的指标。

因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。

水中大肠菌群的检测方法，常用多管发酵法和滤膜法。

多管发酵法可适用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要的时间较长。

滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于堵塞滤孔的水样。

(一)水样的采集供细菌学检验的水样，必须按一般无菌操作的基本要求采集，并保证再运送、贮存过程中不受污染。

水样从采集到检验不应超过4h，在0～4℃下保存不应超过24h ，如不能在4h 内分析，应在检验报告上注明保存时间和条件。

1、自来水取样：应在水龙头打开放水5min，再用无菌容器接取水样，待分析。

如水样内含有余氯，则采样瓶灭菌后按每500mL水样加3%Na2S2O3.5H2O溶液1mL。

2、江、河、湖、池自然水体取样：可用采样器，采样瓶应先灭菌。

采样后，瓶内应留有空隙。

如果与其他化验项目联合取样，细菌学分析水样应采在其他样品之前。

(二)初发酵试验1.水样稀释：制备水样10-1、10-2的稀释液，方法为用无菌移液管吸取水样10mL放于盛有90mL无菌水和若干玻璃珠的锥形瓶中，充分振荡使混合均匀，并使其中的细菌尽量呈单个存在，即为10-1稀释液;再从10-1制备10-2稀释液。

以此类推，稀释到所需倍数。

2.接种和培养：以无菌操作于5支三倍浓缩培养基(接种前一定应先检查杜汉氏小管内有无气泡)中各加入水样10mL，5支普通培养基试管中加入水样1mL，5支普通培养基试管中加入10-1稀释液1mL，小心混匀放入37℃培养箱中培养24h 。

多管发酵法与纸片法测定水中总大肠菌群和粪大肠菌群李恒，等多管发酵法与纸片法测定水中总大肠菌群和粪大肠菌群Determination of Total Coliform Group and Fecal Coliform Group in Water by Multi-tube Fermentation and Paper Disk Method李恒张志君王光惠陈泓+（湖南省衡阳生态环境监测中心，湖南衡阳421000）［摘要］通过多管发酵法和纸片快速法对实际水样的总大肠菌群和粪大肠菌群进行实验比对，结果表明，两种方法的结果相差不大，但纸片快速法比多管发酵法操作简便、检测时间短，更适用于环境监测日常分析％［关键词］多管发酵法；纸片快速法；总大肠菌群;粪大肠菌群［中图分类号］X833［文献标识码］%引言粪大肠菌群是能在44.5!温度下生长并发酵乳糖产酸产气的耐热的大肠菌群，属于总大肠菌群的一部分，主要来自粪便。

水中粪大肠菌群和总大肠菌群的检验是研究水体污染和环境卫生的重要指标，具有广泛的卫生学意义。

目前，国内已颁布的标准主要是多管发酵法和纸片快速法［1+4］。

多管发酵法操作繁琐且时间过长（48~72h$,难以满足当前环境监测工作的需求［5］%纸片快速法不仅培养时间短（18~ 24h）,且无需提前准备培养基，可以避免培养基杂菌入侵和时间过长等不足。

为更精确、快速、可靠地进行监测，本文用多管发酵法和纸片快速法同步进行对比实验，并对两种分析方法的实验结果进行了比较分析。

1材料与仪器1.1材料水质粪大肠菌群、总大肠菌群快速检验纸片（广东达元绿洲食品安全科技股份有限公司）；粪大肠菌群、总大肠菌群、培养基、革兰氏染色液％1.2试剂EC培养基：胰豚20g,乳糖5g,胆盐三号1.5g，磷酸氢二钾4g,磷酸二氢钾1.5g,氯化钠5g%将上述成分加热溶于1000ml水中，灭菌后的pH应在6.9左右。

该培养基在低温无菌条件下可以保存一个月％无菌水：将纯水在115!高压蒸汽灭菌20min,备用。

大肠菌群测试片操作流程1.样品的前处理(建议使用蔬菜瓜果、河水及大肠菌群标准菌作为样品)（1）蔬菜瓜果：称取25g样品切成1cm左右的碎片，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min制成1:10的样品匀液。

（2）河水：以无菌吸管吸取25mL河水置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。

（3）大肠菌群标准菌：挑取平板上大肠菌群标准菌的单菌落，于盛有5mL LB 液体培养基的试管中，37℃培养过夜，以此作为菌原液。

用1mL无菌吸管或微量移液器吸1mL菌原液于盛有9mL的稀释液的无菌试管中，制成1:10的样品匀液。

2.样本稀释倍数用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL的稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸管尖端不要触及稀释液面），振荡试管或换用一只无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。

按此操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释液必要时用1mol/L氢氧化钠（NaOH）或1mol/L盐酸（HCl）调节pH至7.0~7.2。

（1）蔬菜样品的稀释倍数：取100、10-1两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况记性调整)。

（2）河水样品的稀释倍数：取10-1、10-2两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况记性调整)。

（3）大肠菌群标准菌原液的稀释倍数：取10-7、10-8两个进行接种验证(可根据实际情况记性调整)。

（4）自来水的稀释倍数：直接取自来水接种进行验证。

3.接种一般食品选1～2个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。

将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液垂直加入到测试片中央，用手轻轻将上层盖下，使检测样品液覆盖整个检测圈（应尽量避免产生气泡），静置1min使培养基凝固，最后用手轻轻将上层盖下。

2023版细菌总数大肠菌群国纸片法2023版细菌总数大肠菌群国纸片法细菌总数大肠菌群国际标准方法（也称为国际纸片法）是一种用于测定食品和饮用水中大肠菌群数量的常用方法。

该方法于2023年进行了更新和改进，以提高准确性和可靠性。

首先，为了进行测试，我们需要准备一些必要的材料。

这些材料包括培养基、平板计数器、无菌纸片、无菌培养皿和试管。

接下来，我们需要收集样品。

样品可以是食品或饮用水。

确保样品收集过程中的卫生条件，并尽量避免外界污染。

然后，将样品转移到试管中，并进行适当的稀释。

这是为了确保在培养过程中细菌数量适中，以便于计数。

接下来，将稀释后的样品倒入无菌培养皿中，并将无菌纸片放置在培养皿表面。

确保纸片完全接触到培养基上。

然后，将培养皿放入恒温箱中，在适当的温度下孵育一段时间。

这个时间通常为24小时，但也可以根据需要进行调整。

在孵育结束后，取出培养皿，并使用平板计数器进行计数。

计数时，只计算纸片上的大肠菌群数量。

大肠菌群通常呈现为红色或粉红色的菌落。

最后，根据计数结果，可以得出样品中大肠菌群的数量。

这个数量可以用来评估样品的卫生状况，并判断是否符合卫生标准。

需要注意的是，这个方法只能测定大肠菌群的总数，并不能区分不同种类的细菌。

如果需要进一步了解细菌种类和数量的信息，可以使用其他更为复杂和精确的方法。

细菌总数大肠菌群国际标准方法是一种简单而有效的方法，用于评估食品和饮用水中大肠菌群数量。

通过遵循正确的操作步骤和使用适当的设备，我们可以获得准确可靠的结果，并确保食品和饮用水的安全性。

大肠菌检验方法（快速纸片法）验证方案食（饮）具大肠菌群检验方法—纸片法验证方案1．验证目的和原理1.1 验证目的为确认本实验室所采用的方法适合于食（饮）具大肠菌群检验，特制定本方案验证GB 14934-94食（饮）具消毒卫生标准食（饮）具大肠菌群检验方法，纸片法能否准确检验出食（饮）具中的大肠菌群。

1.2 原理：通过试验来评价验证整个检验方法的准确性、有效性。

2．验证方法步骤2.1验证前的准备：进行食具大肠菌群发酵法检验验证前，所有的仪器和试剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。

2.2验证试验的操作计划：做空白对照，以及阳性对照。

3．试验实施3.1试验前的准备3.1.1主要仪器设备：除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，冰箱：2 ℃～5 ℃，天平：感量 0.1 g，无菌吸管：1 mL，无菌塑料袋。

3.1.2操作环境：环境洁净度不应低于10000级无菌室。

3.1.3试验样品：两套经消毒灭菌后的餐具，包含碗，盘，口杯，匙，筷子。

3.1.4试剂： 0.9%无菌生理盐水3.1.5验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：中国工业微生物菌种保藏管理中心3.1.7培养基3.2验证试验操作3.2.1样品制备将大肠埃希菌菌苔用9mL生理盐水稀释至10-3，用无菌棉签蘸取稀释后的菌液，涂抹在1套灭菌后的餐具表面待用。

3.2.2验证方法按照编制的作业指导书进行采样，检验，同时做空白对照。

3.3试验结果测试人：复核人：测试日期：复核日期：4．验证结果评价分析（1）验证试验是否有遗漏？（2）验证实施过程中对验证方案有无修改？修改原因、依据以及是否经过批准？（3）验证记录是否完整？（4）验证试验结果是否符合标准要求？起草人：起草日期：年月日验证实施日期：年月日测试人：复核人：测试日复核日期：。

纸片法快速检测生活饮用水大肠菌群分析发表时间：2017-08-16T17:16:48.943Z 来源：《心理医生》2017年17期作者：盛晓梅[导读] 也适用于卫生监督检疫工作人员现场采样，快速检测之用，可大大减少工作量，具有一定的实用价值。

（黑龙江省黑河市爱辉区农村疾病预防控制中心检验科黑龙江黑河 164300）【摘要】目的：探讨纸片法对于生活饮用水快速检测大肠菌群的有效性。

方法：对98份水样分别用纸片法与多管发酵法进行总大肠菌群检测。

结果：两种方法检测大肠菌群阳性率结果无显著性差异，两种检测方法大肠菌群MPN值符合率为96.93%。

结论：两种方法的测定结果基本一致。

但相对于多管发酵法，纸片法更加省时、省力，简便易行，适用于大批量样品快速检测。

【关键词】大肠菌群检测；纸片法；多管发酵法；结果【中图分类号】R123.1 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）17-0295-01 水是生产生活中不可或缺的重要资源，水质的好坏直接影响着人们的生活质量和身体健康。

近年来，环境及水资源污染问题日益严重，水的安全问题也引起了人们的广泛重视[1]。

大肠菌群测定是检测生活饮用水情况的重要指标，具有广泛的卫生学意义。

目前，我国环保部门检测水中大肠菌群常用传统的多管发酵法，但该方法准备工作量大，操作复杂，周期长，无法满足大批量样品快速检测的需求。

1956年，Forg等提出的快速纸片在餐具消毒等的定性检测中得到了广泛应用，并被列入我国卫生部《生活饮用水检验规范(2001)》及国家环保总局《水和废水监测分析方法(第4版)》中的C类方法。

本次研究中，通过对比分析快速纸片法与多管发酵法在生活饮用水中的大肠菌群的试验结果，探讨两种方法在生活饮用水大肠菌群检测中的应用，现报道如下。

1.资料与方法1.1 一般资料选择来自本地区农村生活饮用水，其中农户自备井水43份，农村学校自备水20份，农村饮水安全工程35份，本组水样共计98份。