丙酮酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法)

如何检测CheKine™NAD激酶（NADK）活性？细胞代谢是指发生在细胞内的所有有序化学变化的总称，简单理解就是指细胞里的所有化学反应。

细胞代谢活动的测量可作为细胞研究的一个重要指标，广泛应用基础研究和药品研发当中。

Abbkine CheKine™细胞代谢学产品线包括大量相关代谢物、酶、营养和代谢物定量检测试剂盒等。

那么今天我们来一起看看有关细胞代谢分析的相关研究，希望对大家有所帮助哦！一、CheKine™硫氧还蛋白过氧化物酶（TPX）检测试剂盒（比色法），#KTB1660TPX属于过氧化物酶家族，在体内主要通过还原过氧化氢和一些氢过氧化物来实现抗氧化作用，功能与GPX 类似，也是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。

TPX普遍存在于各种生物体内，如酵母、植物、动物、原生动物、寄生虫、细菌和古细菌，在进化上高度保守。

TPX与细胞增殖、分化、细胞凋亡及肿瘤发生调控密切相关。

TPX的主要功能包括细胞脱毒、抗氧化和调节由过氧化氢介导的信号转导和免疫反应。

CheKine™硫氧还蛋白过氧化物酶（TPX）检测试剂盒，提供了一种简单易用的比色法，用于分析不同生物样品（细胞/组织裂解液，生物液体）中硫氧还蛋白过氧化物酶活性。

TPX催化H2O2氧化二硫苏糖醇（DTT），通过测定240 nm（H2O2的吸收波长）吸光度的下降速率，用对照组减去过氧化氢酶（CAT）催化分解的H2O2，即可计算出TPX活性。

因此，本试剂盒可以同时测定样品TPX和CAT活性。

二、CheKine™丙酮酸激酶（PK）活性检测试剂盒（比色法），#KTB1120PK（EC 2.7.1.40）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化糖酵解过程中的最后一步反应，是糖酵解过程中的主要限速酶之一，也是产生ATP的关键酶之一，因此测定PK活性具有重要意义。

CheKine™丙酮酸激酶（PK）活性检测试剂盒，提供了一种简单易用的比色法，用于分析不同生物样品（细胞/组织裂解液，生物液体）中丙酮酸激酶活性。

1概述乳酸脱氢酶(LDH或LD)是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一，可催化丙酮酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应，也可催化相关的α-酮酸。

LDH广泛存在于人体组织中，以心、肾、骨骼肌含量最高，肝、脾、胰和肺组织次之。

LDH测定方法主要有比色法和连续监测法。

2标本的收集新鲜无溶血标本，血清或血浆样本均不溶血。

血浆样本只能采用肝素或EDTA 抗凝。

样本在4摄氏度可稳定7天。

采血前病人应禁食12小时，采集静脉3ml,待凝固后（最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟）通常为加抗凝剂的血液在30-60分钟凝血析出血清。

3000r/min离心5-10分钟，分离出血清备用。

不建议采用血浆标本。

3：方法原理样本中的碱性磷酸酶催化水解磷酸对硝基苯酚，生成游离的对硝基苯酚和磷酸，引起405nm处的光吸收值升高，，通过检测405nm处光吸收值上升的速率，可以测定碱性磷酸酶的活力。

4剂来源，配置及储存试剂来源：试剂配置：试剂一和试剂二均为液体试剂，可直接使用。

启用后在2-8度可稳定30天。

若试剂混浊，或以蒸馏水为空白在405nm处的光吸收值低于0.8A,应予丢弃。

试剂储存：试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。

5分析仪器CS-600B全自动生化分析仪6计算方法ALP(U/L)=( A/min*Tv*1000)(18.8*Sv*P)式中Tv=总反应体积Sv=样本体积18.8=NADH在405nm处的毫摩尔消光系数P=比色杯光径（cm）7 线性范围：本实验的线性范围：0----2000U/L8 参考范围：(1)比色法：150～450U/L。

(2)连续监测法：男80～280U/L女100～230U/L9 失控控理1：立即重测同一质控品，如重测后结果仍不再允许范围，请进行下一步。

2：新开一瓶质控品，重测失控项目，如新开的质控血清结果正常，那么原来质控血清可能过期或在室温防止时间过长而变质，如结果仍不再允许范围，则进行3：进行仪器维护，重测失控项目。

乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法)产简介：乳酸(Lactic acid ，LD)又称2-羟基丙酸是一种化合物，是一种含有羟基的羧酸，分子式是C 3H 6O 3，参与生物化学很多反应过程。

乳酸检测有化学氧化法、酶催化法、电化学法、酶电极感应器法。

乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法)其检测原理是在NAD 存在条件下，乳酸脱氢酶(LDH)催化乳酸生成丙酮酸，同时生成NADH 。

在碱性条件下显色剂与丙酮酸生成复合物，并使平衡偏向乳酸氧化为丙酮酸的方向，驱动反应完成，生成的NADH 与乳酸为等量摩尔。

通过分光光度比色法测定340nm 处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出LD 水平。

组成：自备材料：1、 离心管或小试管2、 蒸馏水3、 水浴锅或恒温箱4、 比色杯5、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：血浆、血清、尿液及其他体液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存。

编号 名称TC0733 50T Storage试剂(A): 乳酸标准(20mmol/L) 1ml -20℃ 避光 试剂(B): 乳酸标准稀释液 1ml RT 试剂(C): LD 显色液C1: LD Assay buffer 15ml 4℃ 避光 C2: NAD buffer 2支 -20℃ 避光 C3: LDH solution50μl-20℃ 避光试剂(D): LD 终止液 200mlRT 使用说明书1份细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于LD 的检测。

高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的LD ，可以使用原有的裂解液或PBS 等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5～10倍后检测。

2、 配制标准品工作液：4℃避光保存2个月有效。

3、 LD检测：按照下表设置空白管、对照管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。

丙酮酸（PYR）测定试剂盒（乳酸脱氢酶法）适用范围：用于体外定量测定人体血清或血浆中丙酮酸的含量。

1.1 试剂盒包装规格试剂1：1×15mL，试剂2：1×5mL；试剂1：2×30mL，试剂2：2×10mL。

试剂1：2×54mL，试剂2：2×18mL；试剂1：3×45mL，试剂2：3×15mL；试剂1：4×54mL，试剂2：4×18mL；试剂1：2×300mL，试剂2：1×200mL；试剂1：1×9L，试剂2：1×3L。

校准品（选配）：2×0.5mL，2×1mL（2水平）。

质控品（选配）：2×0.5mL，2×1mL（2水平）。

1.2 试剂盒主要组成成分注：校准品和质控品存在批特异性，具体浓度见对应批次产品标签。

2.1 外观试剂1：无色澄清液体；试剂2：无色澄清液体。

校准品：无色至淡黄色澄清液体。

质控品：无色至淡黄色澄清液体。

2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。

2.3 试剂空白吸光度在37℃、340nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不小于0.5。

2.4 分析灵敏度测定浓度在200µmol/L附近的样本时，吸光度变化值（ΔA）应不小于0.02。

2.5 线性在（30，1200）µmol/L线性范围内，线性相关系数r不小于0.990。

在(150，1200）µmol/L范围内的线性相对偏差不大于±10%；测定结果（30，150]µmol/L时线性绝对偏差不大于±15µmol/L。

2.6 重复性重复测试高低浓度的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于8%。

2.7 批间差不同批号试剂测试同一份样本，测定结果的批间相对极差应不大于10%。

2.8 准确度与已上市产品进行比对试验，在（30，1200）µmol/L范围内，与比对系统的相关系数r不小于0.975；在（100，1200）µmol/L区间内与比对系统的相对偏差应不大于±15%，（30，100] µmol/L区间内与比对系统的绝对偏差应不大于±15µmol/L。

丙酮酸测定试剂盒（乳酸脱氢酶法）适用范围：用于体外定量测定人体血清中丙酮酸（PYR）的含量，临床主要用于糖尿病引起的酮症酸中毒的辅助诊断。

1.1 包装规格包装规格见表1。

表1 包装规格1.2主要组成成分主要组成成分见表2。

表2 主要组成成分2.1 外观试剂1为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂2为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；校准品为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；质控品为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。

2.2 净含量试剂的净含量应不少于标称量。

2.3 试剂空白吸光度A340nm下测定空白吸光度应≥0.5000。

2.4 准确度回收试验：在临床样本中加入一定体积的校准品溶液，进行测定，回收率在90%～110%之间。

2.5 分析灵敏度样品浓度为200 µmol/L时，其吸光度变化在0.0400～0.1200之间。

2.6 线性范围在[30，1000]µmol/L区间内，线性相关系数r≥0.990，在[30，150]µmol/L区间内线性偏差应不超过±15µmol/L，在(150，1000]µmol/L区间内线性偏差应不超过±10%。

2.7 测量精密度2.7.1 重复性对不同浓度的同一血清样本或质控品重复测定10次，其测定值的变异系数（CV％）应不大于10％。

2.7.2 批间差随机抽取三批试剂盒的批间相对极差（R）应不大于10%。

2.8 稳定性试剂盒在2℃～8℃密封避光保存，有效期为12个月。

在试剂盒有效期满后一个月以内，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7.1的要求。

糖代谢相关研究，Abbkine多种类生化试剂盒糖类分解代谢的三大途径：糖酵解途径（EMP）、有氧氧化、磷酸戊糖途径（PPP途径）。

1.糖酵解途径糖酵解途径(glycolytic pathway）又称EMP途径，是将葡萄糖和糖原降解为丙酮酸并伴随着ATP生成的一系列反应，是有机体获得化学能最原始的途径，一切生物有机体都普遍存在的葡萄糖降解途径。

在缺氧条件下丙酮酸被还原为乳酸（lactate），在许多微生物中可分解为乙醇或乙酸等，称为糖酵解。

有氧条件下丙酮酸可进一步氧化分解生成乙酰CoA进入三羧酸循环，生成CO2和H2O。

糖酵解途径在细胞液中进行，可分为两个阶段。

第一阶段是准备阶段，需要消耗能量形成磷酸化的活化底物（从葡萄糖生成2个磷酸丙糖）；后一阶段是放能阶段，逐步释放能量并最终生成丙酮酸（是生成ATP的阶段）。

两个阶段共10个反应，每个分子葡萄糖经第一阶段共5个反应，消耗2个分子ATP为耗能过程，第二阶段5个反应生成4个分子ATP为释能过程。

关键酶：己糖激酶、6-磷酸果糖激酶1、丙酮酸激酶。

关键酶催化的反应是单向的，不可逆。

2.有氧氧化葡萄糖在有氧条件下彻底氧化成水和二氧化碳的反应过程就叫做有氧氧化，并且有氧氧化是糖氧化的主要方式，绝大多数细胞都通过它来获得能量。

糖的有氧氧化大致可分为三个阶段：第一阶段是葡萄糖经糖酵解途径分解成丙酮酸；第二阶段就是丙酮酸进入线粒体内，氧化脱羧生成乙酰辅酶A（乙酰CoA）。

第三阶段是三羧酸循环及氧化磷酸化。

其中三羧酸循环（TCA循环），又名柠檬酸循环（Thecitric acid cycle ,CAC）或克雷布斯循环，是所有好氧生物中心代谢途径（Central Metabolic Pathway）的核心组成部分。

这一代谢途径的名称来源于柠檬酸（一种三羧酸，在生理PH下通常以离子形式存在）。

在该循环中，柠檬酸被消耗，而后又通过一系列反应再生，这一系列反应把来自糖代谢、脂肪酸代谢及氨基酸代谢等途径产生的乙酰辅酶A氧化成CO2和水，同时产出NADH、FADH2作为其他各种生化途径中所需的还原力。

丙酮酸激酶（Pyruvate kinase,PK）试剂盒使用说明产品简介：PK（EC2.7.1.40）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化糖酵解过程中的最后一步反应，是糖酵解过程中的主要限速酶之一，也是产生ATP的关键酶之一，因此测定PK活性具有重要意义。

PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸，乳酸脱氢酶进一步催化NADH 和丙酮酸生成乳酸和NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PK活性。

试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水产品内容：提取液：60mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体15mL×3瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×3支，-20℃保存；试剂三：粉剂×3支，-20℃保存；试剂四：粉剂×3支，-20℃保存；临用前每支加入500µL双蒸水充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存；试剂五：液体×3支，4℃保存；临用前每支加入300µL双蒸水充分溶解备用，用不完的试剂仍4℃保存；PK工作液的配制：取试剂一、试剂二和试剂三各一支，将试剂二和试剂三依次转移至试剂一中，充分溶解待用，这样可以分三批测定，防止试剂失效。

操作步骤：一、样品的前处理：(1)细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200万细菌或细胞加入400µL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，工作3s，间歇10s，工作35次），8000g，4℃，离心10min，取上清，置冰上待测。

(2)组织处理：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g，4℃，离心10min，取上清，置冰上待测。

(3)血清(浆)样品：直接检测二、测定操作表：试剂名称（µL）测定管PK工作液900试剂四30试剂五15充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴5分钟样本30将上述试剂按顺序加入1mL石英比色皿中，加样本的同时开始计时，在340nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1，比色后迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴中准确反应2分钟；迅速取出比色皿并擦干，340nm下比色，记录2分20秒时的吸光度A2，计算∆A=A1-A2。

乳酸含量（lactic acid，LA）试剂盒使用说明微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC2235规格：100管/48样产品说明：乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。

乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使NAD+还原生成NADH和H+，H+传递给PMS生成的PMSH2还原INT生成红色物质，在530nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

试剂组成和配制提取液：液体110mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体3mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1支，-20℃避光保存。

临用前加入0.6mL蒸馏水充分溶解。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。

临用前加6mL蒸馏水充分溶解。

试剂五：粉剂×1支，30mg，4℃避光保存。

标准品：液体1mL×1支，4℃保存。

显色液：临用前根据用量按照提取液（V）：试剂三（V）：试剂四（V）：试剂五（m）=1：0.3：3：15（mg）的比例充分混匀。

操作步骤：一、样本处理1.组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，12000g离心10min，取上清测定。

2.细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；于4℃，12000g离心10min，取上清测定。

3.血清：直接测定。

二、测定操作空白管样品对照管样品测定管标准对照管标准测定管样品（μL）1010标准品（μL）1010H2O（μL）10060906090试剂一（μL）3030试剂二（μL）4040404040显色液（μL）6060606060充分混匀，于37℃反应30min，于微量石英比色皿/96孔板，空白管调零，测定530nm处吸光值，分别记为A1，A2，A3，A4，△A样=A2-A1；△A标=A4-A3注意：空白管、标准对照管和标准测定管只需测定一次三、计算公式a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下1.按照蛋白含量计算LA含量（μmol/mg prot）=△A样÷△A标×C标÷Cpr=2×△A样÷△A标÷Cpr2.按照样本质量计算LA含量（μmol/g）=△A样÷△A标×C标÷W=2×△A样÷△A标÷W3.按照细胞数量计算LA含量（μmol/104cell）=△A样÷△A标×C标÷细胞数量=2×△A样÷△A标÷细胞数量4.按照液体体积计算LA含量（μmol/mL）=△A样÷△A标×C标=2×△A样÷△A标C标：标准品浓度，2mmol/Lb.用96孔板测定的计算公式如下1.按照蛋白含量计算LA含量（μmol/mg prot）=△A样÷△A标×C标÷Cpr=2×△A样÷△A标÷Cpr2.按照样本质量计算LA含量（μmol/g）=△A样÷△A标×C标÷W=2×△A样÷△A标÷W3.按照细胞数量计算LA含量（μmol/104cell）=△A样÷△A标×C标÷细胞数量=2×△A样÷△A标÷细胞数量4.按照液体体积计算LA含量（μmol/mL）=△A样÷△A标×C标=2×△A样÷△A标C标：标准品浓度，2mmol/L；W：样本质量，g/mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL注意事项：1.空白管、标准对照管、标准测定管只需做一次。

血清乳酸脱氢酶测定1. 实验原理LDHL-乳酸+ NAD ————→丙酮酸+ NADH在波长340nm处测定NADH生成速率，计算出LDH活力。

2. 标本：2.1 病人准备：无特殊要求。

最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。

避免溶血。

2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。

3. 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。

4. 标本运输：冰冻条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血等存运输的标本。

6. 实验材料6.1 试剂：中生乳酸脱氢酶试剂盒（试剂1＋试剂2）6.1.1 试剂组成试剂1：2×65 ml 试剂2:1×70 ml06.1.2 试剂准备：试剂为双液即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂有效期为12个月。

试剂必需避光保存。

试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：当试剂空白吸光率A340nm(1.0cm)＞0.6，或有混浊和可见颗粒时，请不要再使用。

6.1.5 注意事项：试剂请勿直接接触皮肤、眼睛，如有接触，请用大量清水清洗。

请勿吞服。

6.2 校准品：使用OLYMPUS公司提供的多项校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU640生化分析仪项目测定参数.SOP文件。

8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU640生化分析仪操作规程.SOP 文件。

9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。