丙酮酸脱氢酶(PDH)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法

丙酮酸（PYR）测定试剂盒（乳酸脱氢酶法）适用范围：用于体外定量测定人体血清或血浆中丙酮酸的含量。

1.1 试剂盒包装规格试剂1：1×15mL，试剂2：1×5mL；试剂1：2×30mL，试剂2：2×10mL。

试剂1：2×54mL，试剂2：2×18mL；试剂1：3×45mL，试剂2：3×15mL；试剂1：4×54mL，试剂2：4×18mL；试剂1：2×300mL，试剂2：1×200mL；试剂1：1×9L，试剂2：1×3L。

校准品（选配）：2×0.5mL，2×1mL（2水平）。

质控品（选配）：2×0.5mL，2×1mL（2水平）。

1.2 试剂盒主要组成成分注：校准品和质控品存在批特异性，具体浓度见对应批次产品标签。

2.1 外观试剂1：无色澄清液体；试剂2：无色澄清液体。

校准品：无色至淡黄色澄清液体。

质控品：无色至淡黄色澄清液体。

2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。

2.3 试剂空白吸光度在37℃、340nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不小于0.5。

2.4 分析灵敏度测定浓度在200µmol/L附近的样本时，吸光度变化值（ΔA）应不小于0.02。

2.5 线性在（30，1200）µmol/L线性范围内，线性相关系数r不小于0.990。

在(150，1200）µmol/L范围内的线性相对偏差不大于±10%；测定结果（30，150]µmol/L时线性绝对偏差不大于±15µmol/L。

2.6 重复性重复测试高低浓度的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于8%。

2.7 批间差不同批号试剂测试同一份样本，测定结果的批间相对极差应不大于10%。

2.8 准确度与已上市产品进行比对试验，在（30，1200）µmol/L范围内，与比对系统的相关系数r不小于0.975；在（100，1200）µmol/L区间内与比对系统的相对偏差应不大于±15%，（30，100] µmol/L区间内与比对系统的绝对偏差应不大于±15µmol/L。

苯丙氨酸解氨酶试剂盒说明书（分光光度法）使用说明苯丙氨酸解氨酶试剂盒说明书(分光光度法)使用说明货号:BC0210规格:50管/48样产品简介：PAL（EC4.315）广泛存在于各种植物和少数微生物中，是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶，在动物体内尚未发现。

与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物正常生长发育和抵御病菌侵害过程中起重要作用。

PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm处有最大吸收值，通过测定吸光值升高速率计算PAL活性。

试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1ml比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体40m L×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×3瓶，4℃保存，临用前每瓶加入4mL双蒸水充分溶解待用；现配现用。

试剂三：液体2.5mL×1瓶，4℃保存。

操作步骤：一、粗酶液提取：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。

10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

二、测定操作表：试剂名称测定管（μL）对照管（μL）样本20试剂一780800试剂二200200混匀，30℃准确水浴30min试剂三4040混匀，静置10min后，290nm处用蒸馏水调零，测定对照管吸光值A1和测定管A2，计算△A=A2-A1。

注意：对照管只用作一管。

PAL活性计算：（1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每mg组织蛋白在每ml反应体系中每分钟使290nm 下吸光值变化0.1定义为一个酶活力单位。

PAL（U/mg prot）=△A×V反总（1040μL）÷V样（20μL）÷T(30min)÷0.1÷Cpr （mg/mL）=17.3×△A÷Cpr（mg/mL）（2）按样本鲜重计算：单位的定义：每g组织在每ml反应体系中每分钟使290nm下吸光值变化0.1定义为一个酶活力单位。

脯氨酸脱氢酶（ProDH）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC4160规格：50T/48S产品内容：提取液一：液体60mL×1瓶，4℃保存；提取液二：液体0.6mL×1支，4℃保存；试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入4mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入10mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂可分装-20℃保存，避免反复冻融。

产品说明：ProDH是存在于线粒体内的催化脯氨酸降解的关键酶。

降低ProDH活性对于调节渗透平衡、防止渗透胁迫对植物造成伤害、清除自由基、保护细胞结构具有重要意义。

ProDH催化脯氨酸脱氢生成延丙酮酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm处具有特征吸收峰，通过600nm吸光度的下降，测定2,6-DCPIP的还原速度，代表ProDH活性。

自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、丙酮、匀浆器/研钵。

操作步骤：一、样本处理：组织：按照组织质量（g）：提取液一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 样本，加入1mL 提取液一），进行冰浴匀浆，1500g 4℃离心15min，取上清液于一支新的EP 管中，加入一滴提取液二（用10μL 的枪头加入），涡旋混匀，冰浴放置30min 后，15000g 4℃离心20min，取上清置冰上待测。

细胞或细菌：按照细胞数量（104个）：提取液一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL 提取液一），冰浴匀浆，1500g 4℃离心15min，取上清液于一支新的EP 管中，加入一滴提取液二（用10μL 的枪头加入），涡旋混匀，冰浴放置30min 后，15000g 4℃离心20min，取上清置冰上待测。

丙酮酸脱羧酶（PDC）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法丙酮酸脱羧酶（PDC）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号:BC1070规格:50T/48S产品内容：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体36mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1支，﹣20℃保存。

试剂四：粉剂×1支，﹣20℃保存。

混合试剂：临用前配制，将试剂三和试剂四用适量试剂二溶解后再全部转移到试剂二中备用。

试剂五：液体5mL×1瓶，4℃保存。

产品说明：PDC主要存在于酵母中，是乙醇发酵的关键酶之一，催化丙酮酸脱羧生成乙醛。

PDC催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶（ADH）来进一步催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH在340nm有吸收峰，而NAD+没有；通过测定340nm光吸收下降速率，来计算PDC 活性。

试验中所需的仪器和试剂：台式离心机、紫外分光光度计、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、粗酶液提取：1、细胞或微生物样品的制备：先收集细胞或微生物样品到离心管内，弃上清，按照每500万细胞或微生物加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）。

10000rpm，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。

2、组织样品：称取约0.1g组织，加入1mL提取液，冰上充分研磨。

16000g4℃离心20min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。

二、测定步骤：1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、试剂一37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴提前预热30min。

3、操作表：试剂名称（μL）测定管空白管试剂一700700试剂五100100混合试剂100100样本100-蒸馏水-100迅速混匀后于340nm比色，记录10s和70s的吸光值，测定管的记为A1和A2，空白管的记为A3和A4，计算ΔA=（A1-A2）-（A3-A4）。

丙酮酸测定试剂盒（乳酸脱氢酶法）适用范围：用于体外定量测定人体血清中丙酮酸（PYR）的含量，临床主要用于糖尿病引起的酮症酸中毒的辅助诊断。

1.1包装规格包装规格见表1表1 包装规格1.2主要组成成分主要组成成分见表2。

表2 主要组成成分注：不同批号的校准品、质控品赋值有差异，具体赋值详见靶值单。

2.1 外观试剂1为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂2为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；校准品为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；质控品为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。

2.2 净含量试剂的净含量应不少于标称量。

2.3 试剂空白吸光度A340nm下测定空白吸光度应≥0.5000。

2.4 准确度回收试验：在临床样本中加入一定体积的校准品溶液，进行测定，回收率在90%～110%之间。

2.5 分析灵敏度样品浓度为200 µmol/L时，其吸光度变化在0.0400～0.1200之间。

2.6 线性区间在[30，1000]µmol/L区间内，线性相关系数r≥0.990，在[30，150]µmol/L区间内绝对偏差应不超过±15µm ol/L，在(150，1000]µmol/L区间内相对偏差应不超过±10%。

2.7 测量精密度2.7.1 重复性对高、低不同浓度的同一血清样本或质控品重复测定10次，其测定值的变异系数（CV％）应不大于10％。

2.7.2 批间差随机抽取三批试剂盒的批间相对极差（R）应不大于10%。

2.8 稳定性试剂盒在2℃～8℃密封避光保存，有效期为12个月。

在试剂盒有效期满后一个月以内，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7.1的要求。

2.9 校准品溯源性按GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，提供所有产品校准的来源、赋值过程以及测量不确定度，试剂盒校准品溯源至Sigma公司。

DPPH 自由基清除能力检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：BC4750 规格：50T/24S产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称 规格 保存条件 提取液 液体50 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂一 液体60 mL×1瓶（自备）常温保存 试剂二 粉剂×1瓶 2-8℃保存 试剂三粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、 试剂一：无水乙醇自备；2、 试剂二：粉剂置于瓶内EP 管中。

临用前加入6.08 mL 试剂一振荡溶解，用不完的试剂可于-20℃保存1个月，建议分装保存，避免反复冻融；临用前根据试验所需量按照试剂二：试剂一（V:V ）= 4：21的比例配制成工作液，现配现用，用不完的工作液可于2-8℃保存一周；3、 试剂三：10 mg 维生素C 。

临用前加入1 mL 提取液，充分振荡溶解，配成10 mg/mL 维生素C 溶液，2-8℃保存两周；用于阳性对照。

产品说明：DPPH 自由基一种很稳定的氮中心的自由基，是样本抗氧化能力的重要指标之一，广泛应用于抗氧化类食品、保健品及药品的研究中。

DPPH 自由基有单电子，其醇溶液呈紫色，在515 nm 处有强吸收。

当有抗氧化剂存在时，DPPH 自由基被清除，其溶液颜色变浅，515 nm 的吸光度下降，在一定范围内其吸光度的变化与自由基被清除的程度成正比。

本试剂盒中，通过吸光度下降的程度来反映样本清除DPPH 自由基的能力。

DPPH · DPPH ·H注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅、台式离心机、无水乙醇、研钵/粉碎机、烘干箱、30~50目筛和蒸馏水。

操作步骤：一、样本的制备（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）（1）植物样本的制备：将新鲜样本置于60℃烘箱烘干至恒重，研钵研碎（或粉碎机粉碎），过30~50目筛。

NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC1040规格：50T/48S产品内容：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×2支，-20℃保存；临用前加入360μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；试剂三：粉剂×2支，-20℃保存；临用前加入327μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存。

产品说明：MDH（EC 1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。

草酰乙酸是重要的中间产物，连接多条重要的代谢途径。

因此，MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。

根据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH，细菌中通常只含有NAD-MDH，在真核细胞中，NAD-MDH分布于细胞质和线粒体中。

NAD-MDH催化NADH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光吸收下降。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水。

操作步骤：一、样品测定的准备：1、细菌、细胞样品的制备：细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次），8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：称取约0.05g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。

二、测定步骤和加样表：紫外分光光度计提前预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零，试剂一37℃预热15min。

丙酮酸测定试剂盒(乳酸脱氢酶法) 适用范围：用于体外定量测定人血清中丙酮酸的含量。

1.1规格校准品(选配)：1×1mL；质控品(选配)：水平1：1×1mL，水平2：1×1mL。

1.2组成：注：校准品靶值、质控品质控范围详见包装标签。

2.1 外观2.1.1试剂1：无色液体，无浑浊，无不溶物。

2.1.2试剂2：无色液体。

2.1.3校准品：无色至淡黄色液体。

2.1.4质控品：无色至淡黄色液体。

2.1.5包装外观应整洁，标签字迹清晰，不易脱落。

2.2 净含量液体试剂的净含量不低于标示体积。

2.3 试剂空白吸光度试剂空白吸光度≥0.5。

2.4 分析灵敏度样本浓度为200 μmol/L时，△A≥0.02。

2.5 线性区间在[30，1000] μmol/L范围内，线性相关系数r≥0.990；测试浓度在[30，100] μmol/L时，绝对偏差不超过±10 μmol/L，测试浓度在（100，1000] μmol/L时，相对偏差应不超过±10%。

2.6 精密度2.6.1 批內精密度用高、中、低3个浓度的样本测试试剂盒，各重复测试10次，其变异系数（CV）应不大于10%。

2.6.2批间差用样本分别测试3个不同批次的试剂盒，每个批次测试3次，其相对极差（R）应不大于10%。

2.7 准确度回收率在85%-115%范围内。

2.8 质控品赋值有效性测试结果在质控范围内。

2.9 瓶内均匀性校准品和质控品瓶内均匀性（CV）应不大于10%。

2.10 量值溯源校准品量值溯源至公司内部工作校准品，并与北京九强生物技术股份有限公司生产的丙酮酸测定试剂盒(乳酸脱氢酶法)比对验证。

2.11 稳定性2.11.1校准品开瓶稳定性校准品开瓶后2℃～8℃避光保存可稳定3天。

稳定期过后4小时内进行测试，测试结果与靶值的相对偏差不超过±10%。

2.11.2质控品开瓶稳定性质控品开瓶后2℃～8℃避光保存可稳定3天。

丙酮酸激酶测定试剂盒使用说明分光光度法货号:BC0540规格:50管/48样产品内容：提取液：60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体45mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1支，-20℃保存；试剂三：粉剂×1支，-20℃保存；临用前每支加入 1.5mL双蒸水充分溶解备用，用不完的试剂仍4℃保存一周；试剂四：液体×1支，4℃保存；临用前每支加入900µL双蒸水充分溶解备用，用不完的试剂仍4℃保存一周。

产品说明：PK（EC2.7.1.40）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化糖酵解过程中的最后一步反应，是糖酵解过程中的主要限速酶之一，也是产生ATP的关键酶之一，因此测定PK 活性具有重要意义。

PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸，乳酸脱氢酶进一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PK活性。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本的前处理1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500-1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或者200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1:5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。

二、测定步骤及加样表：1.分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2.工作液的配置：临用前将试剂二转移至试剂一中，充分溶解待用；现配现用。