盐酸小檗碱对照品稳定性

1020 引言本文中所述黄藤素是以小檗碱为原料，通过化学合成法制得的产品，合成品国内尚无批准的原料药，也尚未收载在欧洲药典和美国药典及论坛中，根据工艺研究过程中使用原辅料的情况，研究者以植物提取的黄藤素【1】标准，盐酸小檗碱【2】标准为基础，参照中华人民共和国药典（以下简称“中国药典”）、ICH技术指导原则及相关文献【3-19】，重点对产品含量检测方法、有关物质检测方法，如可能存在的有机杂质，金属离子钡的残留等情况进行研究。

通过系统的方法学考察、验证等制定了相应的检测方法，同时开展了稳定性研究，根据研究结果确定了产品贮存条件和产品有效期。

1 仪器与试药1.1仪器1.2试药盐酸巴马汀对照品，批号为110732-201510；盐酸小檗碱对照品，批号为110713-201212，盐酸药根碱对照品，批号为110733-201108，均购自国家官网；非洲防己碱，批号为151108，成都普菲德生物技术有限公司；黄藤素（编号YFS16001、YFS16002、YFS16003）；乙腈为默克色谱纯试剂，三氯甲烷、甲醇、乙醇、乙醚、盐酸、氢氧化钠、磷酸、磷酸二氢铵、硝酸等均为分析纯试剂；自制超纯水。

2含量检测方法2.1 色谱条件检测柱：安捷伦碳十八柱，直径4.6毫米，长度250毫米，孔径5微米；洗脱液为350mL乙腈与0.2%磷酸溶液650mL混合得到，流速为0.8mL/分钟；测试波长为342纳米；柱温35摄氏度；上样体积为5 微升。

2.2溶液的制备2.2.1稀释液分别量取乙腈350mL、0.2%磷酸溶液650mL，混合，摇匀，超声处理，即得2.2.2空白溶剂取1ml甲醇加稀释液稀释至25ml，摇匀，即得。

2.2.3盐酸巴马汀对照品溶液取盐酸巴马汀对照品适量，精密称定，加“2.2.1”稀释液，制成浓度为0.04mg/mL的溶液，即得。

2.2.4盐酸小檗碱储备液取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加“2.2.1”稀释液，制成浓度为0.1mg/mL的贮备溶液。

荧光分光光度法测定盐酸小檗碱片中小檗碱的含量【摘要】［目的］建立荧光分光光度法测定盐酸小檗碱片中小檗碱的含量。

［方法］采用荧光分光光度法以激发波长Ex=365nm，发射波长Em=409nm的条件下测定其荧光强度。

［结果］小檗碱在0.946μg·ml-1～7.568μg·ml-1浓度范围之间线性关系良好，r=0.9993。

平均加样回收率为97.51％，RSD=1.15％。

［结论］方法简便易行,快速准确,可用于该制剂的质量控制。

【关键词】荧光分光光度法；盐酸小檗碱片；小檗碱；含量测定Abstract：［Objective］To measure the content of berberine hydrochloride with fluorospectrophotometry.［Method］Take fluorospectrophotometry to measure the fluorescence strength at starting wave length Ex=365nm，projected wave length Em=409nm.［Result］At the concentration degree of 0.946μg·mL-1～7.568μg·mL-1,the hydrochloride had good linear relation, r=0.9993.The average sample adding rate of recovery was 97.51％，RSD= 1.15％.［Conclusion］The said method is simple for operation, with quick and correct result, can be used for quality control of the preparation.Key words：fluorospectrophotometry；berberine hydrochloride；content measurement盐酸小檗碱片是用于治疗肠道感染的常用抗菌药,其主要成分为盐酸小檗碱。

关于薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连及香连丸中盐酸小檗碱的含量【摘要】目的建立黄连和香连丸中盐酸小檗碱的含量测定方法。

方法样品经提取、薄层展开后，采用薄层色谱-荧光分光光度法对黄连和香连丸中盐酸小檗碱进行含量测定，展开剂为苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)，激发波长Ex＝365 nm，发射波长Em＝409 nm。

结果盐酸小檗碱在0.473～3.784 μg范围内线性关系良好，r＝0.999 3。

黄连的回收率为99.03%，RSD＝1.86%。

香连丸的回收率为97.10%，RSD＝1.09%。

结论该法操作简便，分离效果好，灵敏度高。

【关键词】黄连；香连丸；荧光分光光度法；盐酸小檗碱；含量测定Key words：Coptis chinensis Franch.；Xianglian Pills；fluorescence spectrophotometry；berberine hydrochloride；content determination黄连为毛茛科植物黄连(Coptis chinensis Franch.)、三角叶黄连(Coptis deltoides C.Y.Cheng et Hsiao)或云连(Coptis teeta Wall.)的干燥根茎，具有清热燥湿、抗菌消炎、利胆等功效，临床上用于治疗消化道感染、泻痢等疾病。

以黄连作原料的中成药香连丸气微、味苦，具有清热燥湿、行气止痛等功效，临床多用于湿热痢疾、里急后重、腹痛泄泻、菌痢、肠炎等症。

盐酸小檗碱为两者共有的有效成分，具有抗菌、抗病毒、抗凝等作用，治疗原发性高血压、糖尿病等疾病。

本试验采用薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连和香连丸中盐酸小檗碱的含量，为其质量控制提供依据。

1 仪器与试药RF-5000荧光分光光度计(日本岛津)，UV-1型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)，AG135(四川时运成套仪器有限公司)，80-2离心沉淀器(上海手术器械厂)，CQ-250超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)。

对照品溶液稳定性考察报告（薄层色谱法用于鉴别）报告书编号：YB- 1203·0017-00-01（2013）一、考察目的：通过薄层鉴别实验，考察葛根素等共33种对照品分别用相应溶剂所配制的相应浓度的对照品溶液的稳定性，从而规定其用于薄层鉴别实验的有效期。

二、考察范围：对照品溶液稳定性考察。

三、考察类型：同步考察四、考察日期及对照品及相应溶剂种类考察日期2013 年01 月01 日至2013 年08 月30 日对照品及相应溶剂种类：大黄素（甲醇液）、大黄素（乙醇液）、丹参酮IIA（乙酸乙酯液）、丹参酮IIA （甲醇液）、丹酚酸B（75%甲醇液）、丹皮酚（丙酮液）、甘草酸铵（甲醇液）、葛根素（甲醇液）、瓜氨酸（稀乙醇液）、桂皮醛（乙醇液）、华蟾酥毒配基（乙醇液）、黄芪甲苷（甲醇液）、黄芩苷（甲醇液）、黄芩素（甲醇液）、汉黄芩素（甲醇液）、苦参碱和槐定碱（混合乙醇溶液）、苦参碱（甲醇液）、氧化苦参碱（甲醇液）、苦杏仁苷（甲醇液）、芒柄花素（甲醇液）、毛蕊花糖苷（甲醇液）、没食子酸（甲醇液）、人参皂苷R0蜕皮甾酮（混合甲醇溶液）、山栀苷甲酯（乙醇液）、8-0-乙酰山栀苷甲酯（乙醇液）、芍药苷（乙醇液）、天麻素（甲醇液）、五味子甲素(三氯甲烷液）、盐酸水苏碱（无水乙醇液）、氧化苦参碱（乙醇液）、异钩藤碱（甲醇液）、栀子苷（乙醇液）、酯蟾酥毒配基（乙醇液）、梓醇（甲醇液）、盐酸小檗碱（甲醇液）、黄芩苷（（甲醇液）。

五、考察过程中的偏差及漏项情况：考察试验过程中无偏差情况发生，考察项目无遗漏；考察实施过程中考察方案无修改，考察记录完整，实验结果符合考察要求，无需做进一步的补充试验。

六、考察过程总结：检验仪器设备均在检定效期内；试剂试液等实验条件均符合检验要求；人员具有相应的检验能力和资质。

整个考察过程严格按《对照品（标准品）和对照药材溶液稳定性考察操作规程》(方案编码：1203·0117-00)进行考察。

三黄片质量标准起草说明组别：组员：【名称】三黄片三黄片质量标准起草说明【处方】大黄 300g 盐酸小檗碱 5g 黄芩浸膏 21g 【制法】见正文，按制成1000粒。

【性状】本品为糖包衣或薄膜包衣，除去包衣后显棕色；味微苦、涩【鉴别】（1）盐酸小檗碱的TLC鉴别盐酸小檗碱为该药的主要成分，参照2021版《中国药典》黄柏的TLC鉴别方法，以盐酸小檗碱为对照品（购自中国药品生物制品检定所），用薄层微量进样器分别吸取盐酸小檗碱标准品配制成的对照品溶液和供试品溶液各2ul, 用薄层电动点样器分别点同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上, 以乙酸乙酯-丁酮- 甲酸- 水( 10：7：1 ：1) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置紫外光灯( 365 nm)下检视。

此外，令使用苯- 醋酸乙酯- 甲醇- 异丙醇- 浓氨试液(12 ∶6 ∶3 ∶3 ∶1)为展开剂进行验证，置用氨气预饱和15min 的展开缸内。

展开，取出，晾干，紫外光灯(365nm) 下检视，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上,显相同的一个黄色荧光斑点。

阴性对照色谱在与对照品色谱相应的位置上无斑点。

（2）大黄的TLC鉴别：大黄为本方的君药，所含的大黄酸、大黄素、大黄酚是主要有效成分，参照2021版《中国药典》大黄的TLC鉴别方法，以大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄酚对照品及大黄对照药材（购自中国药品生物制品检定所）吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液及对照药材溶液各10μL ,对照品溶液5μL ,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(30～60 ℃) - 甲酸乙酯- 甲酸(15∶5∶1) 的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm) 下检视。

此外以石油醚(30～60 ℃) - 甲酸乙酯- 乙酸(15∶4∶1.5) 的上层溶液为展开剂进行验证，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。

供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上,显相同5 个橙黄色荧光斑点,在与对照品色谱相应的位置上显相同橙黄色斑点,置氨气中熏后,日光下检视,斑点为红色。

中国科技论文在线HPLC 测定黄柏不同部位盐酸小檗碱和盐酸药根碱孙雪梅，卢先明，辛天怡，赵卫芳成都中医药大学中药材标准化教育部重点实验室，成都（610075）E-mail: icyflower999@摘 要：目的：采用 HPLC 法同时测定黄柏枝皮、干皮、根皮中药根碱、小檗碱的含量。

方 法：通过考察不同溶剂、不同提取方法、不同提取时间和不同流动相，以药根碱、小檗碱提 取率为指标， 采用高效液相色谱法进行测定。

结果： 以盐酸-甲醇（1：100）超声提取 30min， 采用流动相 0.05 mol／L 磷酸二氢钾缓冲液(磷酸调 pH 值至 3.0)一乙腈(72:28)， 进样量 20µL， 检测波长 265 nm，室温条件下检测。

结论：黄柏枝皮、干皮、根皮中生物碱含量有明显差 异。

关键词：HPLC；黄柏；药根碱；小檗碱；不同部位引言黄柏为著名川产道地药材，来源于芸香科植物黄皮树（Phellodendron chinense Schneid.） 的干燥树皮，具有清热燥湿，泻火除蒸，解毒疗疮等功效[1]。

黄柏的主要成分为小檗碱、药 根碱等生物碱，其中小檗碱是抗菌有效成分，药根碱有抗心律失常的作用[2]。

黄柏的传统采 收一般选 15 年以上树木剥皮作药用[3]，但临床黄柏中常在干皮中混有根皮及嫩枝皮等，为 了有效控制黄柏质量， 保证临床用药的安全、 有效性， 我们测定了黄柏三个不同部位即根皮、 干皮、枝皮中小檗碱、药根碱的含量，并对其进行比较。

1实验材料1.1 仪器美国 Agilent 1100 高效液相色谱仪，DAD 检测器检测1.2 试药乙腈为色谱纯(美国 Fisher 公司)，水为超纯水(Milipore 制备)。

其它试剂均为分析纯。

盐酸药根碱、 盐酸小檗碱对照品均购自成都市药品生物制品检定所。

药材经成都中医药大学 卢先明教授鉴定为秃叶黄皮树 （Phellodendron chinense var.glabriusculum Schneid） 粉碎后， 。

RP-HPLC法测定甘海胃康胶囊中盐酸小檗碱的含量摘要：目的RP-HPLC法测定甘海胃康胶囊中盐酸小檗碱的含量。

方法采用十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相：甲醇—水 (80:20)，检测波长为270nm；流速为1.0mL/min。

色谱柱为PhenomenexHyper Clone 5u BDS C18130A(250×4.60mm 5 micron)；柱温为30℃。

结果：盐酸小檗碱进样量在0.515～5.15m g范围内，线性关系良好，A=2.86*106C+7477，r=0.99993。

平均回收率为99.53%，RSD=2.9%。

结论：本方法简便准确、重现性好，可对甘海胃康胶囊进行质量控制。

关键词：甘海胃康胶囊；高效液相色谱法；盐酸小檗碱酮Ⅱ甘海胃康胶囊是由甘草、海螵蛸、沙棘、枳实、白术、黄柏、延胡索、绞股蓝总苷等中药组成的复方制剂。

具有健脾和胃，收敛止痛。

用于脾虚气滞所致的胃脘痛，及慢性浅表性胃炎见上述症状。

黄柏[1]为该制剂的主要药物之一，含有盐酸小檗碱等有效成分。

原标准中未收载含量测定项 ,本文采用高效液相色谱法对该制剂中的盐酸小檗碱含量进行研究 ,实验结果表明，该法简便易行，灵敏度高，能准确地反映盐酸小檗碱的含量[2]，为更好的控制本品的内在质量提供了科学依据。

1 仪器与试药Agilent 1100LC高效液相色谱仪，G1311A四元泵，G1313A自动进样器，G1316A柱温箱，G1315BDAD检测器，Agilent 1100化学工作站，BP211D电子天平。

盐酸小檗碱对照品由中国药品生物制品检定所提供；甘海胃康胶囊为医院售；甲醇为色谱纯；水为双蒸水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Phenomenex HyperClone 5uBDS C18130A(250×4.60mm 5 micron)；流动相：甲醇-水(80：20) [3]；流速：1.0mL/min检测波长：270nm；柱温：30℃；进样量：10μ1。