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实时荧光定量PCR检测肝癌组织中早期B细胞因子3mRNA表达水平王跃国;毛丽萍;王惠民;鞠少卿;金小云;吴月平【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2009(024)001【摘要】目的建立SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR(FQ-RT-PCR)检测肝组织中早期B细胞因子3(early B-cellfactor 3,EBF3)tuRNA含量的方法,探讨EBF3 mRNA在肝癌中的检测意义.方法在EBF3基因第85,第9外显子区,在内参β2M 第1和第2外显子区设计特异性引物,实时检测PCR产物的荧光强度,以各自标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中EBF3及β2M mRNA含量,以EBF3 mRNA和β2M mRNA含量的比值进行EBF3 mRNA表达水平评价.结果 FQ-RT-PCR检测EBF3 mRNA含量线性范围为3.08×107～3.08×1012copies/L,批内和批间变异系数分别为8.6%和13.7%.18例肝癌和配对远端肝组织中EBF3 mRNA 与β2M mRNA的对数比值分别为0.52±0.17和0.28±0.23,差异有统计学意义(t=3.56,P=0.0011).结论 FQ-RT-PCR检测EBF3 mRNA含量的方法具有较好的检测灵敏度和重复性,适用于临床研究.【总页数】4页(P25-28)【作者】王跃国;毛丽萍;王惠民;鞠少卿;金小云;吴月平【作者单位】南通大学附属医院检验科,江苏南通,226001;南通大学附属南通第三医院,江苏南通,226001;南通大学附属医院检验科,江苏南通,226001;南通大学附属医院检验科,江苏南通,226001;南通大学附属南通第三医院,江苏南通,226001;南通大学附属南通第三医院,江苏南通,226001【正文语种】中文【中图分类】R735.7;Q786【相关文献】1.流式细胞微球阵列术检测肝癌组织中细胞因子水平及其意义 [J], 李洁羽;黎巧连;彭峰;谷伟伟;黄传钟;汤志伟;陈强;叶韵斌2.实时荧光定量PCR检测乳腺癌组织中KLK4 mRNA表达 [J], 闻新棉;于晶;胡成进;陈英剑3.实时荧光定量PCR检测胎膜早破胎膜组织中MMP-9mRNA表达 [J], 王素梅;陈玲;唐卉;黄玲玲;钟琳琳4.肝癌组织中Fas和FasL mRNA表达水平的变化及其意义 [J], 李海民;窦科峰;李韧;周景师;帝振宇;张福琴5.实时荧光定量PCR检测多重耐药大肠杆菌AcrA基因mRNA表达水平 [J], 尹秀玲;王玮;邓旭明;郎需龙;张晶;王丽艳;柳巨雄因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
双重荧光实时定量PCR法检测TNF-α mRNA表达水平姚霜;郑璐;于洋;喻妙梅;潘丽莉;张俊;冯悦华;罗光华【摘要】目的:建立单管检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和内参GAPDH mRNA表达水平的双重荧光实时定量PCR方法.方法:脂多糖刺激小鼠巨噬细胞Ana-1后提取细胞RNA,经反转录合成cDNA,应用自行设计的不同荧光标记的TNF-α和GAPDH引物探针,经PCR扩增后,在FAM通道和CY5通道分别读取Ct值,同时应用基因测序技术对结果进行验证,并构建质粒标准品分析该方法的灵敏度和重复性.结果:双重荧光实时定量PCR法检测TNF-α的灵敏度达4×101拷贝/μL,检测线性范围可达6个数量级,批内和批间重复性好.结论:新方法消除了目的基因与内参的加样误差,节约成本,快速准确,适用于TNF-α mRNA的定量检测.【期刊名称】《江苏大学学报（医学版）》【年(卷),期】2015(025)006【总页数】4页(P524-527)【关键词】双重荧光定量PCR;肿瘤坏死因子-α;GAPDH【作者】姚霜;郑璐;于洋;喻妙梅;潘丽莉;张俊;冯悦华;罗光华【作者单位】苏州大学附属第三医院综合实验室,江苏常州213003;苏州大学附属第三医院综合实验室,江苏常州213003;苏州大学附属第三医院综合实验室,江苏常州213003;苏州大学附属第三医院综合实验室,江苏常州213003;苏州大学附属第三医院综合实验室,江苏常州213003;苏州大学附属第三医院综合实验室,江苏常州213003;苏州大学附属第三医院综合实验室,江苏常州213003;苏州大学附属第三医院综合实验室,江苏常州213003【正文语种】中文【中图分类】R393巨噬细胞是机体重要的免疫细胞和炎性细胞，经致炎因素刺激后能够产生炎症因子，调控炎症反应［1］。
脂多糖是革兰阴性菌细胞壁的重要成分，是诱导机体产生炎症反应的关键物质，通过脂多糖刺激巨噬细胞产生促炎因子建立体外炎症模型，常用于某些潜在抗炎因子（如载脂蛋白M等）或药物作用机制的研究［2］。
定量逆转录聚合酶链反应定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）是一种常用的分子生物学技术，用于检测RNA的表达水平。
该技术包括两个步骤：逆转录反应和聚合酶链反应。
首先，通过逆转录酶将RNA转录成cDNA（反转录过程），然后使用DNA聚合酶扩增cDNA。
通过纳米量热法分析PCR 反应几率，可以定量分析样品中RNA的表达水平。
qRT-PCR技术具有高灵敏度，高特异性和较高的准确性。
与传统的聚合酶链反应（PCR）相比，qRT-PCR技术可以在更短的时间内得到更加准确的结果。
此外，它的操作简化了DNA 净化和定量，同时也避免了自发的DNA降解，使检测结果更加准确。
首先，需要合成一个逆转录引物的混合物，用于RNA转录成cDNA。
当这个组合物加入RNA样品中时，引物会与RNA序列配对并将其反转录成cDNA。
在该过程中，逆转录酶还需要加入两个重要的酶：RNA酶抑制剂和dNTP混合物。
RNA酶抑制剂可以预防RNA酶扩大反转录过程，而dNTP混合物是用于扩大cDNA的。
在RNA转录成cDNA之后，需要进行PCR扩增反应。
这个过程中，需要加入引物和标志性的探针。
引物即为PCR中的引物，被用于扩大cDNA，而标志性的探针则被用于量化PCR 产物。
这样就可以精确计算RNA表达水平。
标志性的探针通常是由一个荧光染料和一个探针组成。
当PCR反应产生荧光时，可以通过纳米量热法来计算PCR反应对应的RNA表达水平。
qRT-PCR技术有很多应用。
例如，在癌症研究中，研究人员可以通过qRT-PCR技术来优化治疗期间所用的化学药物剂量，以便最大限度地减少每次治疗的副作用。
同时，研究人员还可以通过qRT-PCR技术来研究修饰因子（例如过度表达或下调的基因），这些基因在癌症细胞中表现出类似于正常细胞的痕迹。
qRT-PCR技术也可以应用于病毒检测，检测外科标本中的微量染色体异常等等。
总之，qRT-PCR技术是一种高效，可靠且高灵敏度的分子生物学技术，可用于精确的RNA表达水平分析。
第30卷第6期实验与检验医学Vol.30No.62012年12月EXPERIMENTAL AND LABORATORY MEDICINEDec.2012前列腺癌(PCa)是西方国家男性中最常见的肿瘤之一,占癌症死亡率的第二位。
近年来我国PCa 的发病率也呈明显上升趋势。
血清前列腺特异性抗原(PSA)是目前临床上应用最广泛的前列腺肿瘤标志物,但是特异性不高。
DD3基因是近年来所发现的一种PCa 特异基因[1],它在正常前列腺组织中呈低表达,在前列腺肿瘤中表达量显著增高,在其他正常组织、肿瘤组织中均不表达,被认为是目前最佳的PCa 特异基因。
前列腺癌DD3mRNA 的高表达有利于检出播散到血液、尿液、前列腺按摩液或精液等体液的少数恶性前列腺癌细胞。
基于以上分析，我们研究了前列腺疾病患者前列腺液中DD3mRNA 的表达水平，试图探讨前列腺液DD3mRNA 检测在前列腺癌早期诊断中的价值。
前列腺液ＤＤ３ｍＲＮＡ检测在前列腺癌早期诊断中的应用张才成1，陈静2，王文1，李俊明1，王道仁3(1、南昌大学第一附属医院检验科,江西南昌330006；2、江西护理职业技术学院；3、南昌大学第一附属医院泌尿外科)基金项目:南昌大学科技基金(医科类)(2008第40号)作者简介：张才成，男，36岁，主管技师，主要从事临床生化检验与研究。
摘要：目的探讨前列腺液DD3mRNA 检测在前列腺癌早期诊断中的应用价值。
方法收集前列腺癌患者、良性前列腺疾病患者和非前列腺疾病患者的前列腺液,采用RT-PCR 方法对其中的DD3mRNA 表达进行研究,分析三组患者DD3mRNA 表达的差异，探讨DD3mRNA 表达与前列腺癌临床分期和病理分级的关系。
同时用ROC 曲线对DD3mRNA 诊断前列腺癌的效能进行分析。
结果前列腺癌组DD3mRNA 表达量明显高于良性前列腺疾病组和非前列腺疾病组，差异具有显著性(P <0.05)，而后两组之间差异无显著性；前列腺癌患者DD3mRNA 表达量与临床分期无关，但不同病理分级之间差异有显著性(P =0.017)；DD3mRNA 的ROC 曲线线下面积高于tPSA 线下面积，当DD3mRNA 相对含量值取0.63时其诊断效能最高。
双荧光素酶结果双荧光素酶（Dual-Luciferase Assay）是一种常用的酶标技术，用于研究基因调控、信号转导以及药物筛选等领域。
该技术基于荧光素酶（Luciferase）的催化作用，可以准确测量靶基因的表达水平和活性。
双荧光素酶是通过测量激酶反应后的荧光素酶酶活性来间接测量基因表达量的一种方法。
该方法利用双荧光素酶报告载体，其中包括荧光素酶和内参基因荧光素酶。
荧光素酶报告载体是一种质粒，其中含有荧光素酶启动子、靶基因启动子及其上游的转录因子结合位点。
在实验中，将该载体转染至感兴趣的细胞中，细胞内的转录因子与载体上的结合位点结合，激活荧光素酶的转录和翻译过程。
在双荧光素酶实验中，首先将感兴趣的基因启动子（Promoter）克隆至荧光素酶报告载体中，形成靶基因报告载体。
然后将靶基因报告载体与内参基因荧光素酶报告载体一起转染至细胞中。
细胞内的转录因子与靶基因报告载体上的结合位点结合，激活荧光素酶的转录和翻译过程。
同时，内参基因荧光素酶报告载体的荧光素酶始终处于活性状态。
细胞内的总荧光素酶活性可以通过加入荧光素底物（如荧光素酶检测试剂）来测量。
测量荧光素酶活性的方法主要有两种：连续测量和间断测量。
连续测量是通过底物的连续供应，实时监测荧光素酶活性的变化。
间断测量是在适当的时间点停止反应，然后加入底物，测量荧光素酶活性。
两种方法各有优劣，选择合适的方法需要考虑实验的具体需求和条件。
双荧光素酶实验的结果可以通过计算相对荧光素酶活性（Relative Luciferase Activity）来表示。
相对荧光素酶活性是指靶基因报告载体的荧光素酶活性与内参基因荧光素酶报告载体的荧光素酶活性的比值。
通过比较不同组的相对荧光素酶活性，可以研究基因调控、信号转导等生物学过程。
双荧光素酶结果的分析需要结合实验设计和背景知识进行综合解读。
在比较不同组的相对荧光素酶活性时，应注意控制组和实验组的选择，以及其他可能影响结果的因素。
新冠病毒检测分子生物学方法和技术进展随着新冠病毒（SARS-CoV-2）的全球爆发，准确、迅速地检测和诊断感染情况变得至关重要。
现代分子生物学技术为新冠病毒的检测提供了有效的方法。
本文将介绍一些应用于新冠病毒检测的主要分子生物学方法和技术的进展。
首先，实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）是目前新冠病毒检测的“金标准”，也是最常用的方法之一。
该技术可通过检测病毒基因组中的特定序列来实现对病毒的定量检测。
RT-qPCR的灵敏度和特异性相对较高，可以在感染初期就进行检测，但需要专业实验室设备和熟练操作的技术人员。
其次，逆转录环介导扩增（RT-LAMP）技术是一种新兴的快速检测方法，适用于大规模筛查和无需复杂仪器的病毒检测。
RT-LAMP技术利用逆转录酶将病毒RNA转录成互补DNA，并通过聚合酶链反应扩增特定序列。
该技术具有高灵敏度和特异性，并且检测结果可以直接肉眼观察，无需昂贵的仪器。
因此，RT-LAMP技术在一些资源匮乏地区和移动实验室中得到广泛应用。
除了PCR技术，还有一些其他的分子生物学方法也被应用于新冠病毒的检测。
例如，可以利用基于CRISPR-Cas系统的方法来识别和检测病毒序列。
这些方法利用Cas蛋白与与目标基因组互补的引物结合，通过特定的DNA酶活性产生可检测的信号。
这些技术具有高度的特异性和敏感性，并且在实际应用中表现出良好的效果。
除了各种检测方法的发展进展，新冠病毒检测还涉及样本的采集和后续处理。
例如，鼻咽拭子是目前最常用的样本类型，但采样过程需要经过专业操作，而且对受检者不太舒适。
为了解决这个问题，一些研究团队提出了唾液样本作为一种替代方法。
唾液样本采集更加简单、舒适且易于自我采集，可以减少对专业人员的依赖。
此外，还有一些研究致力于开发简单、无创的检测方法，例如通过呼气或皮肤检测等方式。
需要注意的是，尽管分子生物学方法在新冠病毒的检测中发挥了重要作用，但这些方法仍然需要在专业实验室环境中进行。
实时荧光定量聚合酶链反应测定葡萄膜炎患者血浆EB病毒
DNA的实验研究
邱海江;高宗银
【期刊名称】《新医学》
【年(卷),期】2010(041)008
【摘要】目的:探讨EB病毒感染在葡萄膜炎发病机制中的作用.方法:采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测葡萄膜炎患者(Vogt-Kayanagi-Harada综合征26例, Behcet's病21例,特发性全葡萄膜炎11例,急性前葡萄膜炎7例,中间葡萄膜炎3例,交感性眼炎2例)和健康对照组(30例)外周血EB病毒DNA,并进行比较.结果:26例Vogt-Kayanagi-Harada综合征患者中有6例检测到EB病毒DNA,阳性率为23%,其他类型的葡萄膜炎患者及健康对照组外周血均未检测到EB病毒DNA.结论:EB病毒感染或潜伏感染再激活可能与Vogt-Kayanagi-Harada综合征的发病有关.
【总页数】3页(P523-525)
【作者】邱海江;高宗银
【作者单位】广州市南沙中心医院眼科,511457;广州市第一人民医院眼科,510180【正文语种】中文
【相关文献】
1.5－氟尿嘧啶对老年鼻咽癌患者血浆EB病毒DNA水平的影响及临床疗效 [J], 蒋成义;李多杰;汪洪涛;江涛;许亚佳
2.应用FQ-PCR技术测定鼻咽癌患者血浆EB病毒DNA定量分析及其临床意义[J], 李冰;司勇锋;覃扬达;张政
3.实时荧光定量PCR法检测鼻咽癌患者血浆游离EB病毒DNA的临床应用 [J], 曾刚毅;唐孝亮;钟海军
4.鼻咽癌患者血浆EB病毒DNA水平的动态变化与临床疗效的关系评价 [J], 王磊黎
5.复发转移鼻咽癌患者血浆EB病毒DNA水平的检测意义 [J], 彭培建;廖海;林忠;肖妹
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人血浆DNA双重实时荧光定量PCR检测法的建立陈丹;潘世扬;张丽霞;高丽;谢而付;黄珮珺;戎国栋【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2007(25)3【摘要】目的建立带有内参照的双重实时荧光定量PCR方法检测血浆DNA含量.方法构建重组质粒DNA作为内参照物,采用共用下游引物的双重实时荧光定量PCR技术同步扩增人看家基因β-actin和重组质粒载体中人工合成DNA序列,定量检测健康成年人血浆DNA含量.结果本法能在同一个反应管中对目的基因和内参照进行同步扩增,两者的扩增无相互干扰,特异性好;重组质粒DNA的平均扩增效率达90%,β-actin基因的平均扩增效率接近100%;本法批内变异系数(CV)11%,批间CV17%.结论成功建立含有内参照的双重实时荧光定量PCR方法,可对血浆DNA进行定量检测.【总页数】3页(P177-179)【作者】陈丹;潘世扬;张丽霞;高丽;谢而付;黄珮珺;戎国栋【作者单位】南京医科大学第一附属医院临床检验中心,南京,210029;南京医科大学第一附属医院临床检验中心,南京,210029;南京医科大学第一附属医院临床检验中心,南京,210029;南京医科大学第一附属医院临床检验中心,南京,210029;南京医科大学第一附属医院临床检验中心,南京,210029;南京医科大学第一附属医院临床检验中心,南京,210029;南京医科大学第一附属医院临床检验中心,南京,210029【正文语种】中文【中图分类】Q503【相关文献】1.新型BCA中基于实时荧光定量PCR的条形码DNA定量方法的建立 [J], 姬长甫;尹惠琼;贾俊婷;王蕊;朱凤宣;杨姝;章金刚2.猪瘟病毒野毒株与疫苗株双重SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立 [J], 王伟;符芳;陈欣;李雪松;李海忠;李曦3.BVDV和IBRV双重实时荧光定量PCR检测方法建立 [J], 刘梦瑶; 张秋楠; 吴文学; 李金祥4.鸭甲型肝炎病毒1型与3型双重TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用 [J], 林梦舟;吴双;徐建生;谢军;吴植;姜勇;朱善元5.PDCoV与TGEV双重实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用 [J], 王征帆;朱利塞;王娟;李祎云;向蕊;应碧云;王贵平;贾爱卿;白挨泉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
荧光定量聚合酶链反应检测沙眼衣原体
吴年浪;张惠成
【期刊名称】《中华实验眼科杂志》
【年(卷),期】2003(021)001
【摘要】@@ 沙眼是一种由沙眼衣原体引起的常见病,多发病.目前由于抗生素的应用,临床表现多不典型,易漏诊误诊.
【总页数】1页(P46)
【作者】吴年浪;张惠成
【作者单位】310006,杭州市第一人民医院;310006,杭州市第一人民医院
【正文语种】中文
【中图分类】R77
【相关文献】
1.荧光定量聚合酶链反应在同时检测淋病奈瑟菌、沙眼衣原体和解脲脲原体中的应用 [J], 杨晓英
2.荧光定量聚合酶链反应检测前列腺炎患者解脲支原体和沙眼衣原体 [J], 颜丹;邓茂;李燎
3.实时荧光定量聚合酶链反应检测解脲脲原体、沙眼衣原体感染 [J], 陶小华;郑爱媚;胡辉;张永乐
4.实时荧光定量聚合酶链反应检测泌尿生殖道炎症淋球菌、沙眼衣原体和解脲支原体 [J], 李传杰;梁金;周淑贤;郭柳薇;马洪熹
5.荧光定量聚合酶链反应检测沙眼衣原体感染的初步应用 [J], 杨文蔚;应春妹
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