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·遗传与出生缺陷·多种遗传标记在一起同母异父半同胞关系鉴定中的综合应用陈婷婷 孙丽娟 马娅萍 杜应雄 叶峻杰作者单位：６５００２１昆明，云南省人口和计划生育科学技术研究所司法鉴定中心，国家卫生计生委西部孕前优生重点实验室，云南省生育调节与少数民族优生重点实验室通讯作者：叶峻杰（ｙｅｊｕｎｊｉｅ１１１＠１２６ ｃｏｍ）【摘要】 目的 探讨多种遗传标记在一起同母异父半同胞关系鉴定中的综合应用。
方法采用常染色体ＳＴＲ遗传标记、Ｙ染色体ＳＴＲ遗传标记、线粒体ＤＮＡ遗传多态性对甲和乙进行基因分型，根据分型结果，采用ＩＢＳ法、ＩＴＯ法和判别函数法进行半同胞关系的判定。
结果依据常染色体ＳＴＲ基因分型结果，ＩＢＳ法评分结果无法判断甲与乙之间存在全同胞关系；通过ＩＴＯ法和判别函数法分析计算，提示甲与乙存在半同胞亲缘关系；进一步依据Ｙ染色体ＳＴＲ基因分型结果，排除了甲和乙来源于同一生父，同时线粒体ＤＮＡ高变Ｉ区多态性检测结果提示甲与乙来自同一生母，支持甲与乙为同母异父半同胞关系。
结论综合应用多种遗传标记和判定方法对同母异父半同胞关系的鉴定有着重要的意义。
【关键词】 遗传标记； 同胞关系鉴定； Ｙ ＳＴＲ； 线粒体ＤＮＡ 同胞关系分为同父同母的全同胞关系（ｆｕｌｌｓｉｂｌｉｎｇ，ＦＳ）和同父异母或同母异父的半同胞关系（ｈａｌｆｓｉｂｌｉｎｇ，ＨＳ）。
在同胞关系鉴定实际案件中，为了获得可靠的鉴定结论，除了常染色体短串联重复（ｓｈｏｒｔｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔ，ＳＴＲ）遗传标记的检测外，还要增加其他遗传标记的检测以获得更多可靠的判定依据。
本文在实际工作中受理一起同胞鉴定案例，由于当事人叙述无法判别两个被鉴定人是否为全或半同胞关系，根据案件的具体情况在进行常染色体ＳＴＲ遗传标记检测后，运用状态一致性评分法（ｉｄｅｎｔｉｔｙｂｙｓｔａｔｅ，ＩＢＳ）、ＩＴＯ法和判别函数法多种判定方法，并联合Ｙ染色体ＳＴＲ遗传标记和线粒体ＤＮＡ（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＤＮＡ，ｍｔＤＮＡ）序列分析对案件中被鉴定人的关系进行综合分析判断，获得了可靠的结论。
论Y—STR分型在刑事案件中的应用作者：郭彤彤来源：《法制博览》2015年第07期摘要：随着DNA技术的发展和数据库建设的不断完善，以及公安机关的广泛深入应用，一大批疑难、复杂的刑事案件成功告破.其中人类Y染色体有其独特的遗传特点，男性子代的Y染色体必须来自于父亲。
STR基因座是Y-DNA中一种重要的遗传标记，Y染色体STR具有父系遗传特点，同一家族中男性个体的Y染色体STR分型检验结果完全一样。
同时由于Y染色体为男性独有，同样可以在犯罪中通过对Y-STR的检测对犯罪嫌疑人的性别进行筛除。
将Y-STR检测技术与侦查手段相结合，可以帮助实现缩小侦查范围，实现侦查破案。
关键词：法庭科学；Y-STR基因座；侦查学运用中图分类号：D919文献标识码：A文章编号：2095-4379-（2015）20-0074-02作者简介：郭彤彤（1989-），女，安徽宿州人，安徽大学法学院2013级诉讼法学专业硕士研究生，研究方向：刑事诉讼法。
随着DNA技术的发展和数据库建设的完善，利用DNA技术侦破的案件越来越多。
可以说在近些年来发生的重大刑事案件中，只要存在能够提取DNA的生物检材，就一定会利用DNA对犯罪嫌疑人进行同一认定或者指导侦查人员攻破案件。
而Y-STR基因座对于涉及男女混合、多名男性混合样本、性别鉴定、父权鉴定等案例中具有特有应用价值。
[1]所以近年来，利用Y-STR基因座侦破的案件越来越多，本文试将结合案例讨论应用Y-STR侦查案件的两种方法及运用时的注意事项。
一、Y染色体结构、特点及侦查学意义人体生物检材包括人体构成成份和人体分泌物，现场勘查中常见的有血液、精液（斑）、毛发、唾液、骨骼、皮屑、其它人体组织等，含有个体的DNA信息。
其中，人类Y染色体属于性染色体。
Y染色体上的基因只能由亲代中的雄性传递给子代中的雄性（即由父亲传递给儿子），因此在Y染色体上留下了基因的族谱。
人类Y染色体属近端着丝粒染色体，由长臂Yq 和微小的短臂Yp组成，两端各有一小部分称拟常染色区（PAR），约占Y染色体的5%，在减数分裂过程中，PAR可与X染色体的相应区段进行交换、重组。
Journal of Forensic Medicine,June 2020,Vol.36,No.31案例1.1简要案情赵某，女，72岁，某市西马村村民，报案称，当日11：00遭翻墙入室者强奸，且几天前也遭到一次强奸。
根据受害人描述和现场侦查情况，两次强奸案的犯罪嫌疑人应为同一人。
经过对案发现场的搜索，发现了犯罪嫌疑人留下的口罩（样本编号为KZ ）。
1.2方法1.2.1DNA 提取和Y-STR 扩增采用MagAttract M48DNA Manual 试剂盒（德国QIAGEN 公司）对涉案生物检材（样本KZ ）进行基因组DNA 抽提。
采用SureID PathFinder Plus 扩增荧光检测试剂盒（宁波海尔施基因科技有限公司）对检材进行扩增，扩增产物用3500xL 基因分析仪（美国Applied Biosystems 公司）进行基因分型，运行Gene⁃Mapper ID v3.2软件（美国Thermo Fisher Scientific公司）分析实验结果，获得34个Y-STR 基因座的分型数据。
1.2.2数据库检索和Y 染色体单倍群推测依据当地公安数据库中样本，即西马村共计30个样本（编号为XM1~XM30）和东马村共计60个样本（编号为DM1~DM60），以及该涉案生物检材（编号为KZ ）的Y-STR 数据，基于贝叶斯等位基因频率法，结合复旦大学生命科学学院现代人类学教育部重点实验室中约含20万份东亚男性Y-STR 和Y-SNP 信息的遗传数据库[1-2]，可推测并统计公安数据库中样本和涉案生物检材的Y 染色体单倍群归属。
基于此，可先在公安数据库中剔除与涉案生物检材Y 染色体单倍群不一致的样本。
1.2.3遗传关系网络图的构建为了更直观地明确该检材与案发当地公安数据库中其他样本的遗传关系，我们使用NETWORK5.0.1.0（https:// ）的Reduced me⁃dia-joining [3]法，对涉案生物检材数据和公安数据库中单倍群一致的数据构建遗传关系网络图。
Course Education Research课程教育研究2021年第13期一、Y-STR基因检测技术概念及特点Y-STR基因检测技术是通过对精子进行检测,从而得出检测结果的一种检测技术手段。
该技术仅用于男性DNA检测,主要是对染色体上的人类多态性STR位点进行检测,一方面是因为只有男性才拥有Y染色体,另一方面是因为该检测具有自身特点,男性家系的Y 染色体STR分型结果是完全一致的,这样有助于聚焦犯罪嫌疑人,并在医学精斑和混合斑中识别犯罪嫌疑人特点。
相关调查数据结果显示:该项技术在医学精斑和混合斑中的应用,可以提升犯罪嫌疑人识别准确率,为警察破案提供了很大的帮助。
该技术与其他检测技术相比具有自身特点。
第一,其仅为男性所拥有。
如前所述,只有男性才有Y染色体,因此需要进行Y-STR检验,在性别上仅仅局限于男性。
第二,该技术具有遗传性特征,也就是说男性的Y 染色体会进行遗传,而在遗传过程中并不会发生变化,这样前后两代人的Y染色体重组依然保有原特性,所进行的STR分型结果相同。
第三,单倍型遗传。
DNA在减数分裂中Y-特异性区不会发生重组,都是通过单倍遗传的方式进行的,并且大多数情况下,一个染色体都是只有一个等位基因,这样也就让检测的结果呈现出单一的男性家系特征。
第四,结合实验来看,Y-STR基因座发生突变的情况仅为0.1%~0.2%。
第五,多个STR联合可以产生更多的单倍型,这样则降低了发生偶合的可能性,实现了个体信息识别准确性的提升。
第六,该技术的分型精准度更高,比较过程也更为简单,这也让其在法医鉴定中可以得到更好应用。
同时,该项技术在法医鉴定中的应用,还提升了犯罪判断准确率,提升了法医鉴定效率,对现代医学和犯罪学领域的进一步研究,提供了技术支持。
二、Y-STR基因检测技术教学开展策略(一)强化理论根基高质量的教学开展需要以坚实的理论根基为基础,只有让学生掌握重要的理论知识,才能让学生为以后实践活动的开展做好准备。
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７ ７１４６．２０１８．０１．０１４周口地区汉族人群２６个Ｙ ＳＴＲ基因座的遗传多态性尚 蕾，莫晓婷，张 建，马温华，马 新，余政梁，丁光树，王 郗（公安部物证鉴定中心，北京市现场物证检验工程技术研究中心，法医遗传学公安部重点实验室，北京１０００３８）摘 要：为探讨２６个Ｙ ＳＴＲ基因座在河南周口地区汉族人群中的法医学应用价值，本研究采用ＤＮＡＴｙｐｅｒＹ２６荧光标记复合扩增试剂盒，对来自河南周口地区不同区县的８０２名无关个体血样进行复合扩增、检测及分析，统计等位基因数量，并计算各法医学参数。
８０２份血样共检出１８０个等位基因，等位基因频率分布为０．００１～０．８５４，Ｙ ＳＴＲ基因座的基因多样性（ＧＤ）值分布为０．２６１～０．９６５，研究检出７７７种单倍型，单倍型多样性（ＨＤ）为０．９９９９，试剂盒的系统分辨能力（ＤＣ）高达０．９６９。
此外，在周口四个不同区县（商水、沈丘、西华、项城）分别统计得５、５、１０、７个私有等位基因。
综上，２６个Ｙ ＳＴＲ基因座在河南周口人群中具有良好的遗传多态性，体现了ＤＮＡＴｙｐｅｒＹ２６试剂盒在群体遗传学及法医学研究方面广阔的应用前景。
此外，本文提出的私有等位基因分析可在推断人员来源地域方面提供重要线索，未来有待深入研究。
关键词：法医遗传学；Ｙ ＳＴＲ；遗传多态性；私有等位基因中图分类号：Ｒ３９４文献标志码：Ａ文章编号：１００７ ７１４６（２０１８）０１ ００９１ ０６ＧｅｎｅｔｉｃＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓｏｆ２６Ｙ ＳＴＲＬｏｃｉｉｎＨａｎＰｏｐｕｌａｔｉｏｎｏｆＺｈｏｕｋｏｕｉｎＨｅｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅＳＨＡＮＧＬｅｉ，ＭＯＸｉａｏｔｉｎｇ，ＺＨＡＮＧＪｉａｎ，ＭＡＷｅｎｈｕａ，ＭＡＸｉｎ，ＹＵＺｈｅｎｇｌｉａｎｇ，ＤＩＮＧＧｕａｎｇｓｈｕ，ＷＡＮＧＸｉ（ＢｅｉｊｉｎｇＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＣｒｉｍｅＳｃｅｎｅＥｖｉｄｅｎｃｅＥｘａｍｉｎａｔｉｏｎ＆ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＦｏｒｅｎｓｉｃＧｅｎｅｔｉｃｓ，ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｏｒｅｎｓｉｃＳｃｉｅｎｃｅ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＰｕｂｌｉｃＳｅｃｕｒｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００３８，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓｓｔｕｄｙｗａｓｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓａｎｄｐａｒａｍｅｔｅｒｓｏｆ２６ＹｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌｓｈｏｒｔｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔｌｏｃｉｏｆＨａｎｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｆｒｏｍＺｈｏｕｋｏｕｉｎＨｅｎａｎｐｒｏｖｉｎｃｅ．Ｐｒｉｖａｔｅａｌｌｅｌｅｓｏｆｅａｃｈａｒｅａｗｅｒｅａｌｓｏｓｔｕｄｉｅｄｔｏｂｅｔｔｅｒｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅａｐ ｐｌｉｃａｔｉｏｎｖａｌｕｅｏｆＤＮＡＴｙｐｅｒＹ２６ｋｉｔ．Ｂｌｏｏｄｓａｍｐｌｅｓｏｆ８０２ｎｏｎ ｒｅｌａｔｅｄｍａｌｅｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄａｎｄｇｅｎｏｔｙｐｅｄｔｈｒｏｕｇｈＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃａｐｉｌｌａｒｙｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｂａｓｅｄｏｎＤＮＡＴｙｐｅｒＹ２６ｋｉｔ．Ｇｅｎｏｔｙｐｅｄａｔａｗａｓｔｈｅｎａｎａｌｙｚｅｄｆｏｒａｌｌｅｌｅｆｒｅ ｑｕｅｎｃｉｅｓａｎｄｐａｒａｍｅｔｅｒｓ．Ｗｅｆｏｕｎｄ１８０ａｌｌｅｌｅｓｗｉｔｈｔｈｅｉｒｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｒａｎｇｉｎｇｆｒｏｍ０．００１～０．８５４．Ｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙ第２７卷第１期２０１８年２月 激 光 生 物 学 报ＡＣＴＡ ＬＡＳＥＲ ＢＩＯＬＯＧＹ ＳＩＮＩＣＡＶｏｌ．２７Ｎｏ．１Ｆｅｂ．２０１８收稿日期：２０１７ ０８ ０１；修回日期：２０１７ １０ １１基金项目：公安部技术研究计划（２０１６ＪＳＹＪＣ１１，２０１６ＪＳＹＪＣ１４）；北京市现场物证检验工程技术研究中心开放课题（２０１６ＣＳＥＥＫＦＫＴ０１）；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项项目（Ｎｏ．２０１７ＪＢ００５）作者简介：尚蕾（１９８９－），女，主检法医师，博士，研究方向为法医遗传学。
Y-STR家系排查2例刘亚举;张俊涛【期刊名称】《法医学杂志》【年(卷),期】2014(000)006【总页数】2页(P513-514)【关键词】法医遗传学;Y-STR;家系【作者】刘亚举;张俊涛【作者单位】许昌市公安局刑事科学技术研究所，河南许昌 461000;襄城县公安局刑侦大队，河南襄城 461700【正文语种】中文【中图分类】DF795.21 案例1.1 简要案情案例1：某年2月至6月，某地不同辖区相继发生7起案件，现场提取到相关生物检材，经Identifiler Plus试剂盒（美国AB公司）检验，入库串并系一男性所留。
但多次侦查没有结果，于是重新划定范围采用Y-STR家系排查法再次启动案件侦查。
案例2：某年9月，发生1起恶劣案件，重要现场发现男性生物检材，采用PowerPlex®21试剂盒（美国Promega公司）检出一男性STR分型，利用Y-STR家系排查法对该案进行侦查。
1.2 检验过程将上述生物检材采用DNA IQTM试剂盒（德国QIAGEN公司）提取基因组DNA，采用Y-filer试剂盒（美国AB公司）进行STR检验，其中案例1在划定范围内有8个不同姓氏的家系（1～8号家系）Y-STR和现场物证一致，案例2现场物证Y-STR与某家系盲比一致。
根据情况采用Y-filer Plus试剂盒（美国AB公司）和AGCU Y28、GFS Y试剂盒（无锡中德美联生物技术有限公司）进行STR检验。
扩增体系为10μL，扩增条件按试剂盒使用说明书要求完成，采用3130遗传分析仪（美国AB公司）进行毛细管电泳，用GeneMapper ID-X软件进行STR分型。
1.3 检验结果案例1中，根据家系调查情况以及最早2起案件的发案地点，将犯罪嫌疑人所处范围延伸至1号家系周边村庄，依照家系排查“五代采样法”原则，纵向采集比对样本时选择年龄最长者，横向采集时选择比较庞大家族（也就是主流基因）的人员，且父-子中应有1人与嫌疑人年龄（目击者主观描述）相仿。
Y染色体多个Y—STR等位基因缺失一例作者：张茵杨璐瑜黄仁武刘林林来源：《中国科技纵横》2019年第05期摘要：在法医物证检案中，男性个体染色体多个Y-STR等位基因缺失未检出的案例时有报道。
笔者在检案中遇到1例，做如下报道。
关键词：Y染色体；多个Y-STR等位基因；缺失中图分类号：D919 文献标识码：A 文章编号：1671-2064（2019）05-0197-021 案例资料在法医物证检案中，男性个体染色体多个Y-STR等位基因缺失未检出的案例时有报道。
笔者在检案中遇到1例，现报道如下：1.1 案情简介某年某月某日，受张某委托，我中心对张某与张某某之间有无亲子关系进行鉴定，采集该对父子的血样各一份。
1.2 检测过程采用Chelex-100法（Bio-Rad，美国）提取DNA。
并采用PowerPlex-21（Promega，美国）试剂盒对提取DNA模板进行PCR复合扩增，并使用3130XL（ABI）遗传检测分析仪对扩增产物进行检测分析，结果见图1。
经过比对发现，依据我中心现有技术和条件，对DNA检测结果的分析表明：在不考虑同卵多胞胎和近亲的前提下，支持所检血样的所属个体张某是所检血样的所属个体张某某的生物学父亲（累积亲权指数CPI：4.2277×104，父权相对机会RCP：99.99%）。
引起注意的是，虽然父与子AMEL基因分型均表现为XY（图1），但父的AMEL基因座上X与Y电泳荧光峰高（RFU值）等高，子的AMEL基因座上X的RFU值是Y RFU值的2倍，峰高比约为2：1，提示子的Y染色体可能存在表达量差异或者缺失。
进一步增加Yindel位点进行确认，我们选择华夏铂金PCR扩增试剂盒进行扩增，结果见图2。
与之前结果相一致，父的AMEL位点处，X与Y的RFU值等高，Yindel位点正常，但是子的AMEL基因座上X的RFU值是Y RFU值的2倍，且Yindel位点处等位基因缺失，这进一步提示子的Y染色体可能存在缺失。
Y－STR数据库建设初探许满军;黄磊;魏晨光;孙庆东;吕桂平【期刊名称】《法医学杂志》【年(卷),期】2015(000)006【总页数】3页(P475-477)【关键词】法医遗传学;Y染色体;短串联重复序列;数据库【作者】许满军;黄磊;魏晨光;孙庆东;吕桂平【作者单位】山东省公安厅物证鉴定研究中心，山东济南 250001;山东省公安厅物证鉴定研究中心，山东济南 250001;山东省公安厅物证鉴定研究中心，山东济南 250001;山东省公安厅物证鉴定研究中心，山东济南 250001;山东省公安厅物证鉴定研究中心，山东济南 250001【正文语种】中文【中图分类】DF795.2近年来，各地公安机关利用Y-STR检验技术破获了一大批案件，充分彰显了该项技术在侦查破案中的重要作用，同时也积累了许多宝贵的Y-STR数据资源。
如何充分利用日常积累的已有资源，深度挖掘该项技术的破案效力，值得深入研究。
1.1 建设Y-STR数据库是提升打击犯罪水平的客观需要人类Y染色体属于性染色体，因其特殊的遗传方式，在法医学个体识别、亲子鉴定、混合斑中男性成分的检测、追溯父系迁移历史等方面都具有独特的应用价值，是常染色体及线粒体DNA的重要补充[1]。
与常染色体STR比较，Y-STR具有以下特点：（1）正常男性特有。
Y染色体为男性特有，而且在男女混合样品的鉴定中，可对男性成分进行精确分析，不受女性成分的干扰。
（2）父系遗传。
在减数分裂期间，除了拟常染色体区外，人类Y染色体不与X染色体进行重组交换，非重组区只能从父亲稳定地遗传给儿子。
故除突变外，同一男性家系中的所有男性个体Y染色体非重组区是相同的，STR基因分型结果一致。
（3）呈单倍型遗传。
Y-STR基因座均位于同一条染色体上，在减数分裂中不发生重组，呈连锁单倍型遗传，对单拷贝Y-STR基因座，每个男性个体仅有一个等位基因。
若现场检材的Y-STR分型单个基因座上检见两条以上谱带，可在一定程度上提示混合样本中的男性人数。
&刑侦技术摘要：目的：建立20个Y-STR基因座的复合扩增体系，进行体系评估，并评价其法医学应用价值；结合Y-STRDNA数据 库，在大数据背景下探索Y-STRDNA检测试剂盒的应用。
方法：采用五色荧光标记技术，对自行设计的20个Y-STR基因座多重扩增引物进行复合扩增和毛细管电泳检测，检测其扩增效率，引物间的扩增平衡性以及特异性，结合Y-STR DNA数据库应用对家系亲缘关系排查进行验证研究。
结果：研究建立的同时检测20个Y-STR基因座五色荧光检测方法，特异性好，分型结果准确稳定，灵敏度高，实际案例常见生物检材的检验结果良好，与目前已有的试剂盒，例如YFiler的结果一致，能够用于Y-STRDNA数据库建设。
结论：20Y-STR基因座复合扩增检测法可以用于中国人群的Y-STR分型筛查，有望应用于法医物证实际检验工作，并有助于我国建立Y-STR DNA数据库，成为公安大数据的良好数据供体。
关键词：Y鲍体短串®®»列法麵縛大龍引言所谓大数据，常被人们用来描述和定义信息爆炸时代 所产生的海量数据，对海量数据的收集、整理、归类、分 析、预测，从复杂的数据中找到不易昭示的规律从而加以运 用成为我们最为集中的诉求，人体信息无疑是众多数据中重 要的一类。
Y染色体短串联重复序列（Y-STO)现在在某些 法医案例中的作用越来越重要，其预期用途不是取代现有的 常染色体STR基因座，而是将其应用于一些传统常染色体位 点无法产生足够的身份鉴定信息而进行补充验证。
近年来，Y-STRDNA数据库的建设发挥出越来越大的作用，通过家系关系的追踪可以使侦查人员迅速缩小包围圈，从而锁定犯 罪嫌疑人，在一系列重特大案件的侦办中发挥着不可替代的 作用。
Y-STR DNA数据库产生的数据与公安大数据相融 合，成为公安大数据良好、鲜活的数据供体，未来的应用场 景和应用范围更值得期待。
男性和女性DNA混合性侵犯案件，样本含有除精液以 外的体液混合物，例如唾液/唾液混合物。
在这种类型的样 品中，用现有技术不能分离男性和女性细胞差另I J提取，因此 常规使用的常染色体STR多重系统通常不能分离检测到男性 成分' 在一些含有精液的女性样本中，常染色体SIR分析 也可能会失败，如某些精液含有精子以非常低拷贝数存在的样品，或者以非常脆弱的状态存在，例如在延长间隔（如 48小时）后的样品中[21。
由于将精子的细胞成分过早溶解到 非精子部分中以及在DNA分离过程所需的物理操作过程中 精子的损失，这些特定样品的差异提取可能不会产生雄性供 体的特征ra,因此，使用男性组分的Y-STRs,消除了对差 异提取过程的需要，并且减少了丢失可能存在的痕量男性 DNA的可能性。
Y-STR分析还可以轻松确定混合物中男性 供体的数量。
Y-STR图谱本质上是半合子的，在大多数基 因座中只有一立基因（少数多拷贝基因座除外）。
单拷 贝基因座上的多个等位基因可以清晰地表明男性贡献者的数 量。
Y染色体独特父系遗传以及单倍体遗传特征，使其可通 过男性谱系追踪人类进化并通过家族血缘关系进行特定人员 追踪，因而Y染色体分析在法医学和人类遗传学中成为了一 种非常有體的工具。
Y染色体在法医学的使用过程中会受限于Y-STO标记缺 乏多态性。
由于Y染色体从父亲传递到儿子而没有任何重 组，所以单独一条Y染色体标记不能像通常在不同的染色体 上获取的常染色体短串联重复序列（STRs)那样使用不同 STR产物有规则地进行组合检测。
理想情况下，法医Y染色 体单体型应包括尽可能多的多态位点，以提高排除未犯罪的 个人（或男性雌）的机会。
为了获得高水平的判别，选择 一套以中等到高突变率为特征的Y-STO标记可大大提高其 个体识别力。
本文通过查阅文献[4-8],分析中国人Y-STR突变率，从中选取了 20个基因座设计多重扩增弓丨物对，优化反应体 系，进行荧光标记复合扩增（DYS434, DYS549, DYS456, DYS391, DYS388, DYS439, DYS458, DYS533, DYSH4, DYS438, DYS643, DYS635,D YS448, DYS447, DYS481,DYS385a/b,DYS389I, D YS389II,DYS390),其中DYS385a/b为双拷贝基因座，即同一对引物能扩增出两个片段，最终得到的含20个Y- STR单体型的检测结果，其多态性能够满足常规情况下法医 检验对个体身份识别和Y-STO DNA数据库建设的要求。
―、材料与方法(一）实验样本男性DNA标准品007和女性DNA标准品9947A; 1500份男性和20份女性无关个体血样均来源于广东省公安 厅；血纱布，FTA卡（Whatman)男性血痕样本和口腔细胞 样本；实际案件已知个体来源的检材，包括血斑，唾液/唾液混合斑，精液/女性阴道液混合斑和毛发；种属特异性测试样本：小鼠、兔子、猫、狗等物种的血样样本。
(二）复合忙增体系的建立1.引物为了使多个丫染色体标记纳入多重PCR扩增体系以获 得足够的遗传多态性，我们遵循Multiplex PCR设计策略将 尽可能多的基因座引物对纳入到5荧光标准多重PCR扩增 体系中。
这种方法需要预先了解所有的预选等位基因，以便在多重体系开发后发现新等位基因的情况下，尽量减少 用相同荧光染料扩增的PCR产物之间重叠的可能性。
通 常，在通过广泛评估每个Y STR标记的等位基因范围确定 最大和最小重复大小之后，在用相同染料标记的基因座的 已知等位基因之间保留1〇bp以上的空隙M。
其次，引物需 要具有相似的退火特征，以在同时扩增期间从所有PCR产 物产生平衡产量。
从NCBI中获取以上20个Y-STR基因座的基因序列，使 用Primer premier5.0软件进行引物设计，将20个基因座根 据引物长度分成四组，并分别使用染料FAM™ (蓝色），HEX™ (绿色），TAMRA™ (黄色）和R O X™ (红色）在引 物的5_末端进行标记，而第五染料LIZTM (橙色）用于内部 尺寸标准。
引物由Invitrogen公司进行引物合成和标记，表1为相关信息。
表120个Y-STR基因座相关信息基因座等位基因范围片段大小（bp )核心重复荧光标记DYS4348-11109-121CTAT FAM DYS54910-14140-156GATA FAM DYS45612-18173-193AGAT FAM DYS3915-12215-241TCTA FAM DYS3888-15265-288ATT FAM DYS4399-14113-133GATA HEX DYS45813-20141-167GAAA HEX DYS5339-13215-235ATCT HEXY-GATA-H48-13267-283TAGA HEX DYS4388-12307-332TTTTC HEX DYS6437-13105-130CTTTT TAMRA DYS63518-25152-180|TAGA]mrACA]n TAMRA DYS44815-22197-239AGAGAT TAMRA DYS44719-29254-294ITMTA]m|TAAAA]门TAMRA DYS48119-29120-153CTT ROX DYS385a/b10-23186-230GAAA ROX DYS389I12-16261-277TCTA ROX DYS389II27-34382-402TCTA ROX DYS39020-28316-340[TCTG]m |TCTA]n ROX在确保单基因座扩增成功的基础上，再配制多重引 物，并通过反复实验确定复合扩增中的各个参数，使各基因 座扩增产物基本达到扩増平衡、产物特异的要求，最终建立 多重复合扩增体系〇&刑侦技术2.多重忙增体系和程序所有引物对分别在相同扩增条件下进行测试。
在确保 針引物对的成功扩增后，组合成多重扩增引物。
如縣基因座的扩增较差，则该基因座的引物浓度增加并重复测试。
调整引物浓度以实现产生多重的PCR产物的平衡改善，或 者其他实验条件如MgCI2浓度，Taq浓度，dNTP浓度，缓冲 液浓度，退火温度调节和PCR循环数被修改以实现更好的 扩增。
但较高的引物浓度可以进行更稳健的扩增，所以改变 弓丨物浓度是作为增加PCR产物平衡量的主要手段。
使用Applied Biosystems Gene Amp PCR System 9700热循环仪扩增所有样品。
PCR反应总体系为1CVI,内含 DNA模板 0.5~2ng,dNTP25(V m o^L,MgCI22.0 mmol/L,1C V I缓冲液，FastTaqIU，纯水补至 1〇nL,热循环参数：96t：10s,^d O s,55t：5s,7C T C5S，28 个循环；60^4517#!, IC T C保存。
3■电泳分型及结果分析本系统采用五种荧光染料。
在0.25^1 GeneScan 500 LIZ内标和9.25n J Hi-Di Formamide混合物中加入PCR产物0.5…，制备用于分离和分析的样品。
样品在机加热变性3min,然后迅速在冰浴中冷却3min。
样品在Applied Biosystems 3130x丨系列遗传分析仪上注入3kV,5s〇使用 GeneMapperlD v.3.2 (Life Technologies™)软件分析结果，用50RFU分析阈值分析，根据序列分析所得到的等位 基因标准分子量判读结果。
(三）r増体系技术指标验证_致性和准确性：100份数据库无关男性个体DNA按本 文方法进行扩增及分型检测，其Y-S TO分型结果与YRIer™试剂盒进行相应也針饱。
灵敏度任意_份男性DNA样本；无关个体混合的雄 性/雄性DNA样品三组进行扩增。
(1 )任意取一份男性DNA样本，用下列模板量进行 连续稀释：2ng,1ng,0.5ng,0.25ng,0.125ng和0.0625ng,按本方法平行重复检测3次。
(2 )将两个无相关雄性个体的DNA以下列比例组合：1:2, 1:10, 1:50和1:100。
在每种情况下，测试3ng的混合 DNA。
稳定性男性/女性混合样本：5ng男性DNA与增加量的 男性DNA以下列比例进行混合：1:10, 1:100和1:1000,以上浓度定量均用Qubit2.0核酸蛋白定量仪（Thermo fisher)进行定量。
简易性直接扩增反应样本：每个反应直接加入四个0.5mm穿孔FTA卡血痕或口腔样本进行扩增。
案件检材适应性将已知个体来源的案件检材，包括血 斑，唾液/唾液混合斑，精液/女性阴道液混合斑和毛发进行 挪DNA或直鮮增法，按本方法进行检测分析。
