肝素原应用研究进展

北方药学 ２ ０ １ ３年 第 ｌ ０卷 第 ８期
肝素类药物 临床应 用的研究进展
李 凤 （ 江苏 省盐 城卫生职 业技术学院 药学院 盐城 ２ ２ ４ ０ ０ ５ ）
摘要 ： 肝素类药物的临床用途有很 多， 如治疗毛细支气管 炎、 预防过敏性紫癜性 肾炎、 抗肿瘤等 。对肝素类药物结构和功能研究 的不断完善 ， 有望对临床 更多疾病 的治疗Fra bibliotek供新 的途径 。
关键 词 ： 肝 素 临床 用途 抗 凝 血 肿 瘤 中图分类号 ： Ｒ ９ ６ ９ 文献标识码 ： Ｂ 文章编号 ： １ ６ ７ ２ — ８ ３ ５ １ （ ２ ０ １ ３） ０ ８ — ０ ０ ４ ４ — ０ １
肝素是一种抗凝剂 ， 最早 发 现 于 肝 脏 ， 是 由两 种 多 糖 交 替 时增加患者痛苦及经济负担 ， 而且增加护士的工作量 。彭易 、 程 连接而成的多聚体 。 在体 内外都有抗凝血作用 ， 临床上 主要 用 云等人通过大量文献的调研发现 ：单独持续滴注肝素稀释液 ， 于治疗 血栓栓塞性疾 病 、 心肌梗死 、 心血管手 术 、 心脏导管 检 对预防新生儿输注过程中 Ｐ Ｉ Ｃ Ｃ的堵管有显著效果 ；在肠外 营 查、 体外循环 、 血液透析等 。随着药理学及临床医学 的进展 ， 肝 养液中添加肝素稀释液持续滴注对于预防新生儿应用 Ｐ Ｉ Ｃ Ｃ输 素的应用 范围不断扩大 ， 对 其类 似物 的研究逐渐广泛 。现将 近 注过程中的堵管和预防因血栓而发生的拔管也有显著效果 。 年来肝素类 药物临床用途 的研究进展综述如下 ： ５ 肝素及其衍生物对肿瘤 的抑制作用 １肝素雾化吸入治疗毛细支气 管炎 肝素及其小 分子肝素 （ Ｌ ＭＷＨ）除了具有抗凝血 的作用 毛细支气管炎通常是 由普通感 冒 、流行性感 冒等病毒 性 外 ， 还有很 多其他 的生物学 活性 ， 如抗肿瘤 、 抗 血管生 成和抗 感染引起 的并发症 ， 也可能 由细菌感染所致 ， 是婴幼儿 常见的 炎作用 。肝素是属 于葡糖胺 聚糖家族 的硫酸化多糖类 ， 而低 分 种急性下呼 吸道感染 。临床症状像肺 炎 ， 但 以喘憋为主 ， 此 子量肝 素（ Ｌ ＭＷＨ ｓ ） 是对 肝素进行酶解 或化学解 聚而成 的 ， 研 病多发生在 ２ ． ５岁 以下 的小儿 ， ８ ０ ％在 １岁以内，多数 是 ６个 究显示 ： 肝素和 Ｌ ＭＷＨ 具有抑制肝 素酶（ ＨＰ Ｓ Ｅ） 活性 、 减少 细 月 以下 的ｄ ， Ｊ Ｌ 。刘爽 、 王霞等人通过临床研究 ， 发现小 剂量肝 胞外基质 （ Ｅ Ｃ Ｍ） 中Ｈ Ｓ Ｐ Ｇ降解 以及 阻断肿瘤 细胞 向其他组织 素雾化吸入治疗呼 吸系统疾 病 ，可以提高细支气管及 肺泡 内 和 器官转移 的活性 的作用 ｌ 引 。硫酸 乙酰肝素 （ ｈ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｎ ｓ ｕ ｌ ｆ ａ ｔ ｅ ， 肝素的浓度 ， 使其在肺泡 巨嗜细胞内储存 ， 药效持久 ， 同时可 以 ＨＳ ） 广泛存在 于哺乳动物和一些植物体 内 ， 它通过共价键结 合 湿化气道 ， 改善喘憋 ， 缓解气道狭窄 ， 且小剂量应用不会影响患 在核心蛋 白的丝氨酸甘氨酸残基上 ，共 同组 成硫酸 乙酰肝 素 儿的凝血功能 ， 提示肝素雾化吸入联合 常规治疗婴幼儿毛细支 蛋 白聚糖 （ ｈ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｎ ｓ ｕ ｌ ｆ ａ ｔ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｏ ｇ ｌ ｙ ｃ ａ ｎ ， Ｓ Ｐ Ｇ） ， 研究 证实 Ｈ ｓ可 气管炎安全 、 有效 ， 且能改善患儿气道炎症和免疫状态 ， 这将为 以通过 抑制肿 瘤细 胞增 殖肿 瘤血管 生成 而具 有抗 肿瘤 的作 婴幼儿毛细支气管炎的治疗 提供新 的思路 和途径ｉ ” 。 用嘲 。肿瘤耐药 是晚期肿瘤治疗的棘手问题 ， 肝素及其衍 生物 ２ 低分子肝素对 Ａ Ｃ Ｓ患者 的抗凝治疗 的抑制肿瘤作用 的发现及 机制 的逐 步 明确 ， 为解 决肿瘤耐 药 急性 冠脉综合 征（ Ａ ｃ ｓ ） 是指 冠状 动脉 内不稳定 的动脉粥 提供 了新 的思路 。 样 斑块破 裂 或糜烂 引起 血栓形 成导 致 的心脏 急性 缺血综 合 ６ 问题 与 展 望 征， 它是指 急性 心肌缺血 引起 的一组 临床症状 ， 包括 ｓ Ｔ段抬 肝 素 因其特 殊 的功效 已广 泛应 用 于临床 很 多疾 病 的治 高急性心肌梗 塞与非 ｓ Ｔ段 抬高急性 心肌梗 塞以及不 稳定 型 疗 ， 而且效果较好 ， 如肝素是需要迅 速达到抗凝作用 的首选药 心绞痛 。低分子肝素 （ Ｌ ＭＷＨ） 是 由普通肝素解 聚制备而成 的 物 ，同时它也在心脏手术 和肾脏透 析时维持血液体外循 环畅 类分子量较低 的肝索的总称 ，常见的低分子 肝素有依诺肝 通 。但不 同的剂量和使用的方法也会导致 一些 并发症 ， 如肝素 素钠 、 那 曲肝素钙 、 达肝素钠等 。低分子肝 素在临床 已被广 泛 诱 导的血小板减少症就是一种肝素诱 发 、免疫介 导的促血栓 用 于血栓性疾 病的防治 ， 近期研究 发现 ， 低分 子肝 素仅选择性 形 成并 发症 。以后可 以通过改变注射剂量 、 与其他药物联合使 地提高 ｔ Ｐ Ａ活性 ， 而不影 响 Ｐ Ａ Ｉ 一 １ 活性 ， 有间接抑制体 内血 小 用或者对肝素 的结构进行 改造 等方 式来 减少并发症 和不 良反 板 活化 的作用 ，达肝素和那 曲肝素钙可以用于 Ａ Ｃ Ｓ患 者的抗 应。此外 ， 肝素低聚糖 和一些非抗凝肝素衍生物有望成为安全 凝治疗 ， 而且安全 、 有效 。 有效的抗血管生成 ， 诱导肿瘤细胞凋亡 ， 抑制转移 和抗 炎症的 ３ 肝素对过敏性紫癜 性肾炎预 防和治疗作用 药物。随着研究 的不断成熟 和技术 的改进 ， 可以对肝素类化合 过 敏性 紫癜性 肾炎 （ Ｈ Ｓ Ｐ Ｎ） 是在 过敏性 紫癜 患者 的病 程 物进行结构改造 ， 有望获得一种高效低毒 的抗 肿瘤药物 ， 并且 中极易出现的症状 ， 它对患者的损害较大 ， 如不能及时 给予 治 能在较低成本下进行 较大规模 的生产 。 疗和控制 ， 容 易进展为 终末期 肾病或 肾衰 竭 ， 所 以， 对 于过 敏 参考文献 性紫癜性 肾炎的防治十分重要。 肝素有抑制肾小球系膜及基质 【 １ 】 刘爽 ， 王 霞， 等． 肝 素雾化吸入 治疗毛 细支 气管炎疗效及 血 增生以及阻止胶原纤维形成 的作用 ， 也可 以直接影响患者免疫 Ｉ ｇ Ｅ和 Ｔ细胞亚群 改变ｆ Ｊ １ ． 中华 实用诊 断与治疗杂 志 ， ２ ０ １ ２ ， ２ ３ ６ ） ： ６ ０ ５ — ６ ０ ７ ． 复合物 。 肾炎的发生机制 ， 所以肝素可 以在一定程度上防止。 肾小 （ 球疾病和减小 肾小球损伤 。邓满玲等人通过临床研究发现在过 ［ ２ 】 赵向 阳， 徐建， 等． 低分子肝 素对 Ａ Ｃ Ｓ病人 内源性抗 纤溶 系 敏性 紫癜患者 出现 肾损 害之前 ， 对 患者进行肝 素治疗 ， 能够有 统及血 小板 活化 影响 【 Ｊ １ ． 青 岛大学医学院学报 ， ２ ０ １ ２ ， ４ ８ （ ６ ） ： ６— ４７８ ． 效地降低 Ｈ Ｓ Ｐ Ｎ的发生率 ，并且一定 程度上延迟 了患者 出现 ４７ 肾炎的时间 。这一研究表明对过敏性紫癜患者进行适时适量 ［ ３ １ ｘ ｌ ￣ 满玲 ． 肝 素预 防过敏 性 紫癜 性 肾炎的临床效 果［ Ｊ ］ ． 当代 医 的肝素治疗 ， 有积极 的临床意义 ， 是一项较好的方案 。 学， ２ ０ １ ２ ， １ ８ （ ２ １ ） ： １ ３ ７ — １ ３ ９ ． ４ 肝素稀释液维持新生儿 Ｐ Ｉ Ｃ Ｃ导管通畅的作用 ［ ４ 】 彭易， 程云 ， 芦吉洁 ， 等． 肝素稀释液维持新生儿 Ｐ Ｉ Ｃ Ｃ导管通 Ｐ ［ Ｃ Ｃ是指导管尖端定位于上腔静脉的导管 ， 由外周静脉穿 畅作用的 ｍｅ ｔ ａ分析ｌ Ｊ １ ． 中华护理杂志， ２ ０ １ ２ ， ４ ７ （ １ １ ） ： １ ０ ２ ３ — １ ０ ２ ７ ． 刺插管， 主要用于为患者提供中长期的静脉输液治疗 。Ｐ Ｉ Ｃ Ｃ已 『 ５ ］ Ｅ ｌ ａ ｉ ｎ ｅ Ｇ， Ｂ ａ ｒ ｂ ａ ｒ ａ Ｍ， Ｔ ｒ ｅ ｖ ｏ ｒ Ｗ， ｅ ｔ ａ １ ． Ｈ ｅ ｐ ａ ｒ ｉ ｎ ａ ｎ ｄ ｌ ｏ ｗ —ｍ ｏ ｌ ｅ — 在新 生儿 中应用 ， 通过肠外营养 的供 给可 以很好地提高早产儿 ｅ ｕ —ｌ ａ ｒ － ＿ ｗ ｅ ｉ ｇ ｈ ｔ ｈ ｅ ａ ｐ Ｏ ］ ． Ｔ ｈ ｒ ｏ ｍ ｂ Ｈ ａ ｅ ｍｏ ｓ ｔ ， ２ ０ ０ ８ ， ９ ９ （ ５ ） ： ８ ０ ７ — ８ １ ８ ． 存活率和改善早产儿预后 的恢 复状况。导管堵塞 是长期 留置 【 ６ １ 马琳艳 ， 刘浩， 蒋志文． 肝 素与硫 酸 乙酰肝 素相 关抗肿 瘤药 Ｐ Ｉ Ｃ Ｃ导管最常 见的非感染性并发症 ，它会影响患者 的治疗 ， 同 物 的研 究进展『 Ｊ １ ＿ 中国药理学通报 ， ２ ０ １ ２ ， ２ ８ （ ９ ） ： １ １ ９ ３ — １ １ ９ ６ ．

cati on(DREA M )trial 1J 21D i atet es Care ,2008;31(5):1007-14119 K j el d sen SE ,J a m erson KA,Bak ri s GL,et al 1Avoiding card i ovascular e -ven ts t h rough comb i nati on therapy i n patients li vi ng w it h syst oli c hyper -tens i on i nvesti gators 1Pred ictors of blood p ressure res pon se to i nten sified and fi xed co mb i nati on treat m en t of treat m en t of hypertens i on:t he AC -COM PL I SH study 1J 21B lood Press ,2008;17(1):7-17120 W ang J G,Staessen J A,L i Y ,et a l 1C aroti d i n ti m a -m ed i a th i ckn ess andan ti hypertens i ve treat m ent :a m eta -anal ys i s of rando m i zed contro ll ed tr-i als 1J 21Stroke ,2006;37(7):1933-40121 M arti na B ,W einb acher M,Dre w e J ,et a l 1E ffects of l osartan titrated tol os art an /hydroch l oroth i az i de and am l od i p i ne on blood press u re and pe -ri pheral cap illary m icroci rcu l ation i n pati en ts w it h m il d -to -m oderate hy -pertens i on 1J 21J H um H ypertens ,1998;17(7):473-8122 C al houn DA,J on es D ,Tex t or S ,et a l 1Resistant hyperten si on :d i agnos i s ,eval uation,and treat m en t :a sci en tific state m en t fro m t h eAm eri can H eartAssociati on Profes s i on al Educati on Co mm ittee of the C ouncil f or H igh B lood Press ure Res earch 1J 21H yp ertension ,2008;51(6):1403-19123 The ALL HAT offi cers and coord i n ators f or t h eALL HAT coll ab orati ve re -searc h group 1M aj or outco m es i n h i gh ri sk hyp ertens i ve patients rando m-i zed t o ACE i nh i b it or a ca l ci um channel B l ocker vs D i u retic-The ant-i hypert en sive and lipid -lo w ering treat m en t t o preven t heart attack trial (ALL HAT )1J 21J A M A,2002;288(23):2981-97124 B erl T ,Hun sicker LG ,Le w i s JB ,et al 1Irb esartan D iabetic Neph ropathyT ri al 1Collaborative S t udy G roup 1C ard i ovascu l ar ou tco m es i n the Irbe -sartan DiabeticN ephropathy Trial of pati en ts w i th t ype 2diabetes and o -vert nephropat hy 1J 21Ann I n tern M ed ,2003;138(7):542-9112010-07-21收稿 2010-09-06修回2(编辑 曲 莉)肝素及其衍生物的抗肿瘤作用研究进展陈小军 孙丽华 (南京医科大学附属南京市第一医院呼吸科,江苏 南京 210006)1关键词2 肝素;低分子量肝素;血管内皮细胞;细胞外基质;血管平滑肌1中图分类号2 R73 1文献标识码2 A 1文章编号2 1005-9202(2010)22-3425-03第一作者:陈小军(1973-),男,博士,主治医师,主要从事呼吸系统肿瘤研究。

肝素药物的研发与应用肝素（Heparin）是一种常见的抗凝血药物，广泛应用于人们的日常生活中。

肝素药物的发明对人类是意义深远的，它不仅可以解决血管栓塞等抗血凝现象，而且还可以在手术中帮助人体对抗出血风险。

此外，肝素药物还广泛用于各种心脏手术、肾脏疾病、深静脉血栓等。

本文主要探讨肝素药物的研发与应用，以期为读者提供更深入的知识和理解。

一、肝素药物的发明历程肝素药物由加拿大生物化学家麦克莱恩（Jay McLean）在1916年首先提取，其后由美国癌症研究院的沃特曼（William Henry Howell）和研究小组进一步研究。

肝素最初是从牛肺和人肺中提取的存在于粘多糖类似于硫酸肝素的物质。

从此开始，肝素药物就成功地进入到了人类医学的领域。

但是，当时的肝素研究并没有取得突破性进展，因为它的化学结构比较复杂，限制了人们对它的深入研究。

肝素药物的重大突破出现在1930年代。

当时瑞典生物化学家桑德斯陪伴了一位病人死亡，该病人在治疗跳骨头内侧静脉血栓的过程中，血栓并未得到很好的控制。

此时桑德斯想到了之前已经在动物实验中成功使用肝素的研究成果，于是便自行加入肝素进入了该病人的治疗过程中，并取得了成功。

这引发了人们对肝素药物的重视，肝素药物的研究方向也逐渐转向医学领域，并取得了积极成果。

二、肝素药物的分类及作用原理肝素药物可以分为无需监管的抗血小板聚集剂和需要监管的抗凝血剂。

抗血小板聚集剂主要是指那些能够防止血小板粘附或聚集的药物；抗凝血剂则是指那些可以抑制凝血因子活性的药物。

这些药物在广泛应用于临床治疗的同时，也成为了重要的危险信号。

肝素药物的作用原理是通过干扰凝血过程，阻止凝血因子活性并促进其降解。

在人体内，凝血过程是由一系列凝血酶分子的激活过程所引起的。

当血液中的血小板粘附在炎性细胞上时，这些炎性细胞和肝脏将通过调节凝血因子的产生和降解来维持身体的新陈代谢状态，并干扰血小板的粘附和聚集。

因此，在不稳定的炎性环境中，肝素药物就可以调整血小板活性的增强程度，并保证其有效性。

不同种属来源肝素组成与结构分析方法研究进展刘晋仙１ꎬ李玮涛１ꎬ２ꎬ柳晓芳２ꎬ王秀萍２ꎬ张中志２(１.东营市食品药品检验研究院ꎬ山东东营２５７０９１ꎻ２.东营天东制药有限公司ꎬ山东东营２５７０００)摘要:肝素是临床上广泛应用的一种抗凝药物ꎬ除抗凝活性外ꎬ肝素同时具有抗炎㊁抗病毒㊁抗肿瘤㊁抗疟疾等功能ꎮ目前«欧洲药典»㊁«美国药典»和«中国药典»明确要求肝素及低分子肝素仅限来源自猪肠黏膜ꎬ不得混有其他来源肝素ꎮ本文简要总结了近年来不同种属来源肝素组成与结构分析方法的研究进展ꎮ关键词:肝素ꎻ种属来源ꎻ鉴别ꎻ研究进展中图分类号:Ｒ９７３＋.２㊀文献标志码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２３)０９－０７１９－００５ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２３.０９.０１４ＲｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｎｔｈｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｈｅｐａｒｉｎｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｐｅｃｉｅｓＬＩＵＪｉｎｘｉａｎ１ꎬＬＩＷｅｉｔａｏ１ꎬ２ꎬＬＩＵＸｉａｏｆａｎｇ２ꎬＷＡＮＧＸｉｕｐｉｎｇ２ꎬＺＨＡＮＧＺｈｏｎｇｚｈｉ２(１.ＤｏｎｇｙｉｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌꎬＤｏｎｇｙｉｎｇ２５７０９１ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＤｏｎｇｙｉｎｇＴｉａｎｄｏｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＣｏ.ꎬＬｔｄ.ꎬＤｏｎｇｙｉｎｇ２５７０００ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｈｅｐａｒｉｎｉｓａｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｃｌｉｎｉｃａｌａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔ.Ｂｅｓｉｄｅｓｉｔｓａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙꎬｈｅｐａｒｉｎｅｘｈｉｂｉｔｓｍａｎｙｏｔｈｅｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓꎬｓｕｃｈａｓａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎꎬａｎｔｉ－ｖｉｒｕｓꎬａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒａｎｄａｎｔｉ－ｍａｌａｒｉａ.Ｃｕｒｒｅｎｔｌｙꎬｏｎｌｙｐｏｒｃｉｎｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｃｏｓａｈｅｐａｒｉｎ/ＬＭＷＨｉｓａｕｔｈｏｒｉｚｅｄｔｏｂｅｕｓｅｄｉｎＥＵ㊁ＵＳＡａｎｄＣｈｉｎａ.ＨｅｐａｒｉｎｆｒｏｍｏｔｈｅｒｓｐｅｃｉｅｓｉｓｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄａｓＦａｋｅＤｒｕｇ.Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒꎬｐｒｏｇｒｅｓｓｏｎｔｈｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｈｅｐａｒｉｎｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｐｅｃｉｅｓｉｓｂｒｉｅｆｌｙｓｕｍｍａ￣ｒｉｚｅｄ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＨｅｐａｒｉｎꎻＳｐｅｃｉｅｓｏｒｉｇｉｎꎻＩｄｅｎｔｉｆｙꎻＰｒｏｇｒｅｓｓ㊀㊀肝素(Ｈｅｐａｒｉｎ)是一种带有高密度负电荷的糖胺聚糖类化合物ꎬ产自动物结缔组织型肥大细胞ꎮ肝素蛋白聚糖是由一条独特的核心蛋白(丝甘蛋白)和与其共价连接的多条肝素多糖链组成ꎮ最终ꎬ肝素链在水解作用下断裂形成分子量不同的较小肝素多糖(相对分子质量５０００~２５０００)多分散混合物ꎬ储存在肥大细胞的胞质分泌颗粒中[１]ꎮ临床上主要用于预防和治疗深静脉血栓或肺栓塞(尤其与某些手术有关的栓塞)㊁防止血液透析等体外循环中血栓形成等ꎮ除抗凝活性外ꎬ肝素同时具有抗炎㊁抗病毒㊁抗肿瘤㊁抗疟疾等功能ꎮ肝素分子结构极其复杂ꎬ是由不同分子量的线性多糖糖链组成的多分散性混合物ꎮ其活性成分肝素是由α－Ｄ－氨基葡萄糖(Ｎ－硫酸化ꎬＯ－硫酸化或Ｎ－乙酰化)和Ｏ－硫酸化糖醛酸(α－Ｌ－艾杜糖醛酸或β－Ｄ－葡萄糖醛酸)组成的二糖重复单位以１－４糖苷键连接形成的线性多糖ꎮ迄今为止ꎬ人们仍未能对肝素的结构进行完全解析ꎬ更遑论人工合成ꎮ肝素可以从猪㊁牛㊁羊等动物的小肠黏膜和牛肺等组织中提取ꎬ但是不同来源的肝素化学结构和生物活性存在明显的差异[２]ꎬ其不良反应程度也不同ꎮ例如ꎬ相较于猪源肝素ꎬ牛源肝素引起血小板减少不良反应(ｈｅｐａｒｉｎｉｎｄｕｃｅｄｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａꎬＨＩＴ)的概率升高了１倍[３]ꎮ２０世纪９０年代源自欧洲的由朊病毒引起的牛海绵状脑病(疯牛病)以及同样由朊病毒引起的羊痒病加剧了世界各国及其药品监管机构对牛㊁羊来源肝素的担忧ꎮ目前ꎬ在肝素产品的主要市场ꎬ如欧㊁美㊁中等ꎬ其药典明确要求肝素及低分子肝素仅限来源自猪肠黏膜ꎬ不得混有其他来源肝素ꎮ中国是世界上第一大肝素供应国ꎬ占比超过５０％ꎮ近年ꎬ特别是新冠肺炎疫情发生以来ꎬ由于肝素类产品作为抗凝药物在新冠肺炎重症患者的对症治疗中起㊀作者简介:刘晋仙ꎬ女ꎬ研究方向:药品检验ꎬＥ－ｍａｉｌ:１１９４６８２８０６＠ｑｑ.ｃｏｍ通信作者:李玮涛ꎬ男ꎬ博士ꎬ主管药师ꎬ研究方向:天然产物提取和质量研究ꎬＴｅｌ:０５４６－７７９１１１８ꎬＥ－ｍａｉｌ:１８３９１０２３２＠ｑｑ.ｃｏｍ到了一定作用ꎬ进一步使肝素价格飙升ꎬ甚至于肝素产业在一定程度上具有了资源类产业属性ꎮ猪源粗品肝素的短缺和价格飙升造成了市场上粗品肝素良莠不齐ꎬ对于不同种属来源的有效区分已经成为目前肝素产品质量控制的重要考量ꎮ因此ꎬ有必要对鉴别不同种属来源肝素检测方法的研究进展进行梳理ꎬ以便于保障广大人民群众的用药安全ꎮ１㊀肝素种属来源的鉴别方法目前ꎬ鉴别肝素不同种属来源的方法主要分为两类:一类是基于残留核酸(ＤＮＡ)㊁残留蛋白的生化检测方法ꎬ另一类是基于肝素结构的理化检测方法ꎮ其中ꎬ生化检测方法易受实验环境㊁熟练程度㊁异物污染等影响ꎮ如肝素的提取㊁纯化过程中使用的强碱㊁高温等条件会导致ＤＮＡ严重破坏ꎬ另外一些不良厂家会有意去除牛羊肝素中的ＤＮＡꎬ同时肝素对聚合酶链式反应(ＰＣＲ)有较强的抑制作用[４]ꎬ导致ＰＣＲ易出现假阴性ꎬ使针对核酸的ＰＣＲ法失去效用ꎻ蛋白质释放后很容易失活ꎬ特别是肝素的提取㊁纯化过程中使用的强碱㊁高温等条件更易导致蛋白质的破坏和变性ꎬ因此基于物种特异性蛋白的检测方法也有很大的局限性ꎮ近年来ꎬ基于肝素特征化学结构的检测方法日益增多[５]ꎬ相关检测方法从肝素结构本身入手ꎬ不易受到干扰ꎬ重现性㊁稳定性都得到了保证ꎮ此类检测方法的一个问题是使用的仪器一般较为昂贵ꎬ但随着国内科学研究仪器的日益完备ꎬ这一问题也逐步得到了解决ꎮ肝素糖链是由艾杜糖醛酸/葡萄糖醛酸与葡萄糖胺组成的二糖重复单位以１－４糖苷键连接形成的线性多糖ꎮ其中ꎬ糖醛酸Ｃ２位可发生硫酸化ꎻ葡萄糖胺的氨基位置可被乙酰化或硫酸化ꎬＣ３和Ｃ６位可发生硫酸化ꎮ不同的硫酸化程度㊁不同的取代基位置形成了肝素复杂的不均一结构[６](见图１)ꎮ对肝素进行结构解析主要有两种策略(见图２):自上而下(Ｔｏｐ－ｄｏｗｎ)㊁自下而上(Ｂｏｔｔｏｍ－ｕｐ)ꎮＴｏｐ－ｄｏｗｎ方法中ꎬ肝素糖链不经过进一步降解ꎬ而直接进行检测分析ꎬ如核磁(ＮＭＲ)㊁红外(ＩＲ)㊁分子排阻色谱法(ＳＥＣ)㊁液质联用法(ＬＣ－ＭＳ)等方法ꎬ从而获得肝素中原始寡糖㊁单糖㊁特征结构等信息ꎮＢｏｔｔｏｍ－ｕｐ方法中ꎬ肝素糖链首先经肝素酶(Ⅰａｎｄ/ｏｒⅡａｎｄ/ｏｒⅢ)或亚硝酸降解ꎬ然后经强阴离子交换高效液相色谱法(ＳＡＸ－ＨＰＬＣ)㊁反相离子对液相色谱法(ＲＰＩＰ)㊁毛细管电泳法(ＣＥ)㊁聚丙烯酰胺凝胶电泳(ＰＡＧＥ)㊁液质联用法(ＬＣ－ＭＳ)等ꎬ对降解后的二糖㊁寡糖进行结构和含量分析ꎬ从而投射出肝素糖链的宏观结构信息ꎮＸ＝ｓｕｌｆｏ或ＨꎬＹ＝ｓｕｌｆｏꎬＡｃ或Ｈ图１㊀肝素结构示意图图２㊀自上而下㊁自下而上分析策略２㊀Ｔｏｐ－ｄｏｗｎ方法Ｔｏｐ－ｄｏｗｎ分析方法以完整肝素糖链为直接分析对象ꎬ因此保留了糖链完整的信息ꎬ例如糖醛酸Ｃ５位差向异构信息ꎮ与Ｂｏｔｔｏｍ－ｕｐ方法相比ꎬ此种分析方法可以提供的肝素钠糖链结构信息更为完整㊁丰富㊁精准ꎮＬｉｕ等[７]的工作报道了采用亲水相互作用色谱－质谱法(ＨＩＬＩＣ－ＭＳ)ꎬ在线分析对比依诺肝素钠原研及仿制药的全糖链结构信息ꎮＨＩＬＩＣ－ＭＳ方法可对糖链的Ｎ－乙酰化程度㊁还原端结构㊁非还原端结构等进行深度解析ꎮＣｈｅｎ等[８]的工作中ꎬ使用类似的方法ꎬ在线分析对比依诺肝素钠原研与羊来源肝素钠制备的依诺肝素钠之差异ꎬ发现羊来源肝素制备的依诺肝素钠含有２２７种寡糖ꎬ而在原研Ｌｏｖｅｎｏｘ中鉴定出２２５种寡糖ꎬ两者存在１３０种相同的寡糖ꎬ种类上有明显差异ꎮ且这１３０种寡糖的具体含量也有明显差异ꎬ如羊来源肝素制备的依诺肝素钠ꎬ其硫酸化程度较高的寡糖[１ꎬ２ꎬ３ꎬ０ꎬ８]ꎬ[１ꎬ４ꎬ５ꎬ０ꎬ１２]ꎬ[１ꎬ５ꎬ６ꎬ０ꎬ１６]ꎬ[１ꎬ５ꎬ６ꎬ０ꎬ１７]和[１ꎬ６ꎬ７ꎬ０ꎬ１７]含量较原研Ｌｏｖｅｎｏｘ多ꎻ其硫酸化程度较低的Ｎ－乙酰化寡糖[１ꎬ４ꎬ５ꎬ１ꎬ１０]ꎬ[１ꎬ４ꎬ５ꎬ１ꎬ１１]和[１ꎬ４ꎬ５ꎬ１ꎬ１２]含量较原研Ｌｏｖｅｎｏｘ多(寡糖组成信息通常采用[ΔＨｅｘＡ㊁ＨｅｘＡ㊁ＧｌｃＮ㊁Ａｃ㊁ＳＯ３]方式描述ꎬ其中ΔＨｅｘＡ代表寡糖链中不饱和糖醛酸㊁ＨｅｘＡ代表糖醛酸㊁ＧｌｃＮ代表葡萄糖胺㊁Ａｃ代表乙酰基㊁ＳＯ３代表磺酸基ꎬ数字代表各种结构的数量)ꎮＨＩＬＩＣ－ＭＳ方法以其良好的质谱兼容性ꎬ可对肝素类产品中含量极低的寡糖进行㊁发现和解析ꎬ近年来成为寡糖序列分析的重要手段ꎮＬｉａｎｇ等[９]的工作中ꎬ介绍了一种对首先对糖链结构中醇羟基㊁胺基进行保护ꎬ然后使用ＬＣ－ＭＳ/ＭＳ方法ꎬ分析肝素/硫酸乙酰肝素中寡糖结构的方法ꎮ糖链羟基㊁胺基上硫酸取代基团在电离过程中易发生破坏ꎬ导致结构损失ꎬ限制了质谱方法在寡糖结构解析中的使用ꎮ该工作中ꎬ用氘代乙酸酐/丙酸酐取代糖链上不稳定的硫酸基团ꎬ得到的衍生化寡糖经Ｃ１８色谱柱分离ꎬ联用ＭＳ分析ꎬ可分析至十二糖ꎬ为鉴别不同来源肝素提供了一种可能的方法ꎮＧｕｅｒｒｉｎｉ等[１０]的工作报道了通过结合１Ｈ和１３Ｃ核磁共振谱图ꎬ表征肝素生产㊁组成㊁硫酸基取代等信息ꎬ猪来源肝素与牛肺肝素在葡萄糖胺６位硫酸化取代程度(猪:８１％~８４％ꎬ牛５９.３％~６１.４％)㊁葡萄糖胺３位硫酸化取代程度(猪:５.１％~７.２％ꎬ牛１.４％~２.４％)㊁Ｎ－硫酸化(猪:７８.２％ꎬ牛:８９.６％)和Ｎ－乙酰化(猪:１５.９％ꎬ牛８.７％)组分含量等方面有明显差异ꎮＡｎｇｅ等[１１]的工作报道了使用１Ｈ㊁１３Ｃ㊁ＨＳＱＣ核磁共振谱图ꎬ对来源自猪肠黏膜㊁牛肠黏膜㊁牛肺的肝素进行了对比ꎬ结果表明与猪肠黏膜肝素相比ꎬ牛肠黏膜肝素核磁氢谱中ＧｌｃＮＳ的Ｈ１峰(５.２３ｐｐｍ)明显偏高ꎬＩｄｏＡ的Ｈ１峰(４.９４ｐｐｍ)明显偏低ꎬＧｌｃＮＹ的Ｈ６峰(３.７８ｐｐｍ)明显偏高ꎮ牛肺肝素核磁氢谱中ＧｌｃＮＡｃ的甲基氢信号峰(１.９５ｐｐｍ)明显较低ꎮＭａｕｒｉ等[１２]的工作中对于核磁氢谱的分析部分报道了类似于Ａｎｇｅ工作的结论ꎮ该研究同时表明猪肠黏膜肝素与羊肠黏膜肝素核磁氢谱更为相似ꎬ两者之间一个较为明显的区别是羊肠黏膜肝素的ＧｌｃＮＡｃ的甲基氢信号峰低于猪肠黏膜肝素ꎮ该研究还根据核磁氢谱中ＧｌｃＮＹ的Ｈ６峰(３.８７ｐｐｍ)㊁ＧｌｃＮＳ６Ｘ的Ｈ２峰(３.２８ｐｐｍ)㊁ＧｌｃＮＡｃ的甲基氢信号峰(２.０５ｐｐｍ)相互之间的比值关系给出了一种判断肝素种属来源的方法ꎮＬｕｃｉｏＭａｕｒｉ的工作中对于ＨＳＱＣ谱图的分析部分表明ꎬ来源自牛肠黏膜㊁猪肠黏膜㊁羊肠黏膜㊁牛肺的肝素在单糖组成上有较为明显的差异ꎬ例如ＧｌｃＮｙ６Ｓ(牛肠黏膜<其他来源)ꎬＧｌｃＡ(猪肠黏膜>羊肠黏膜>牛肺)ꎬＩｄｏＡ(猪肠黏膜>羊肠黏膜>牛肺)ꎮＭｏｎａｋｈｏｖａ等[１３]的一项工作中通过核磁共振扩散排序谱(ＤＯＳＹ)可对粗品肝素中不同来源的不同分子量糖胺聚糖进行分析ꎮＭｏｎａｋｈｏｖａ等[１４]的另一项工作中通过化学计量学方法对不同来源肝素核磁氢谱数据进行统计分析ꎬ进而鉴别其来源ꎮ应用主成分分析法(ＰＣＡ)ꎬ因子判别分析法(ＦＤＡ)等可鉴别猪肠黏膜肝素中２％含量的羊肠黏膜肝素掺杂ꎮ该方法同样适用于鉴别不同来源肝素制备的依诺肝素钠ꎮＯｕｙａｎｇ等[１５]的工作中使用主成分分析法(ＰＣＡ)对猪肠黏膜㊁牛肠黏膜㊁羊肠黏膜的核磁氢谱数据进行了统计分析ꎬ该方法可鉴别猪肠黏膜肝素中１０％含量的牛肠黏膜或羊肠黏膜肝素ꎮ３㊀Ｂｏｔｔｏｍ－ｕｐ方法Ｂｏｔｔｏｍ－ｕｐ分析方法是首先将完整的肝素糖链降解为二糖㊁短链寡糖ꎬ以降解后二糖㊁短链寡糖的组分含量和结构为直接研究对象ꎬ得到二糖㊁短链寡糖的指纹图谱ꎬ最后通过对降解后组分的鉴别分析㊁拼接ꎬ实现对糖链完整结构信息的分析㊁推测ꎮＷａｔｔ等[１６]的工作中对不同来源肝素降解后二糖含量百分比进行了分析ꎮ使用强阴离子交换树脂柱对降解后样品进行了分离㊁分析ꎬ结果表明ꎬ不同来源肝素具有不同的二糖组成ꎮ例如牛肝素әＩＩＩＳ含量明显高于羊肝素和猪肝素(见表１)ꎬ与Ｔｏｐ－ｄｏｗｎ方法ꎬ核磁氢谱分析中ＧｌｃＮＹ的Ｈ６峰(３.７８ｐｐｍ)明显偏高结果相对应ꎮ表１㊀猪㊁羊㊁牛肝素二糖组成(％)әＩＶＡәＩＶＳәＩＩＡәＩＩＳәＩＩＩＳәＩＳ猪２.４１.４３.２１０.７５.５６３.０羊１.１０.３１.０７.５２.０６０.０牛２.１１.３０.９７.７１２.５６４.２㊀㊀Ｏｕｙａｎｇ等[１５]的工作中对猪㊁牛㊁羊肝素及不同程度掺杂牛㊁羊肝素的猪肝素样品ꎬ经肝素酶Ⅰ㊁Ⅱ和Ⅲ完全酶解后ꎬ通过反相离子对液相色谱法联用质谱(ＲＰＩＰＬＣ－ＭＳ)检测二糖ꎻ经肝素酶Ⅱ酶解后ꎬ通过ＲＰＩＰＬＣ－ＭＳ检测不被肝素酶Ⅱ降解的四糖ꎮＲＰＩＰ使用挥发性的流动相ꎬ因而与ＭＳ有较好的兼容性ꎬ可以对经色谱法分离的二糖㊁寡糖组分进行更加灵敏的检测和鉴别ꎮ应用主成分分析法(ＰＣＡ)对检测数据进行统计分析ꎬ结果表明该方法可有效区分不同来源肝素ꎬ用于猪肝素中牛㊁羊肝素掺杂的检测ꎮ例如以不被肝素酶Ⅱ降解的四糖为对象分析ꎬ可鉴别猪肝素中１０％含量的牛或羊肝素ꎮ马志华等[１７]的工作中采用ＳＡＸ－ＨＰＬＣ法对经肝素酶Ⅰ㊁Ⅱ和Ⅲ完全酶解后的猪㊁牛㊁羊粗品肝素的二糖组成进行了定量分析ꎬ并对掺杂有５％~２５％牛或羊粗品肝素的猪来源粗品肝素进行了二糖定量分析ꎮ研究结果表明该方法可检测出猪源粗品肝素中５％羊源粗品肝素掺杂ꎬ而对牛源粗品肝素掺杂不能很好地鉴别ꎮ迟连利等[１８－２０]的工作中公开了一类通过分析待测样品经肝素酶Ⅰ㊁Ⅱ和Ⅲ完全酶解后二糖㊁三糖组分ꎬ进而分析待测样品中是否掺杂有反刍类动物肝素的方法ꎮ通过分析肝素待测样品中全硫酸化三糖和әＩＡ的比值ꎬ与猪源肝素标准品相应的数据对比ꎬ可以分析待测肝素样品中是否掺杂有反刍类动物肝素ꎻ通过分析依诺肝素钠待测样品中单硫酸化三糖和还原端әＩＶＳ的比值ꎬ与猪源依诺肝素钠标准品相应的数据对比ꎬ可以分析待测依诺肝素钠样品中是否掺杂有羊源依诺肝素钠ꎮ该方法可以鉴别出猪肝素中１０％羊肝素掺杂比例和５％牛肝素掺杂比例ꎮ李玮涛等[２１]的工作中公开了一种通过分析待测样品经肝素酶Ⅰ㊁Ⅱ和Ⅲ完全酶解后二糖组分ꎬ进而分析待测样品中羊肝素掺杂比例的方法ꎮ通过分析肝素待测样品中әＩＳ和әＩＩＩＡ的比值ꎬ可回归计算出待测样品中羊肝素掺杂比例ꎮ该方法可以鉴别出猪肝素中５％羊肝素掺杂比例ꎮＣｈｅｎ等[２２]的工作中ꎬ经肝素酶Ⅰ㊁Ⅱ和Ⅲ完全酶解后的肝素样品ꎬ使用二维液相与质谱联用方法ꎬ先经强阴离子交换柱分离再经分子排阻色谱柱脱盐ꎬ脱盐后的组分可通过ＭＳ进行定性分析ꎮ通过此种方法ꎬ可以分离㊁定性酶解后样品中存在的二糖㊁肝素酶耐受四糖㊁链接区等结构ꎬ并进行定量分析ꎮＥＰ肝素钠标准品的ＩＩＳ结构较ＣｈＰ㊁ＵＳＰ高ꎻ对于链接区结构的含量各标准品又各有差异(ＣｈＰ>ＵＳＰ>ＥＰ)ꎮＺｈｕ等[２３]的工作中ꎬ肝素经肝素酶Ⅰ㊁Ⅱ和Ⅲ完全酶解后ꎬ经ＳＡＸ－ＨＰＬＣ㊁ＳＥＣ－ＭＳ方法ꎬ同样大大提高了对肝素钠糖链更为细致的分离和结构鉴定ꎬ例如对还原末端进行了较为充分的结构解析ꎮ这种组合策略结合了ＳＡＸ方法的可靠性㊁分辨率和质谱的灵敏度㊁定性分析能力ꎬ为研究肝素质量和结构提供了强有力的工具ꎬ有望在区分肝素不同种属来源和辨别猪肝素掺杂方面ꎬ发挥重要作用ꎮ４㊀结语肝素是临床上广泛应用的一种抗凝药物ꎬ受限于猪肠黏膜来源肝素供应的紧张ꎬ市场上一直存在不法商家以其它来源肝素掺杂入猪肠黏膜肝素的行为ꎬ此举一会损害正常合法的市场经济运行规律ꎬ劣币驱逐良币ꎻ二会损害我国肝素产品㊁肝素生产厂家在国际上的信誉度[２４]ꎻ三最为严重的是掺杂肝素无充分的临床应用经验ꎬ若临床上医生按照猪肠黏膜来源肝素的使用方案使用的却是掺杂肝素ꎬ可能引发严重的临床事故ꎬ严重影响人民群众的生命安全ꎮ本文简要总结了近年来不同种属来源肝素组成与结构分析方法的研究进展ꎬ期望能为肝素市场的规范性和保护人民群众的健康做出点滴贡献ꎮ参考文献:[１]㊀ＲＡＢＥＮＳＴＥＩＮＤＬ.Ｈｅｐａｒｉｎａｎｄｈｅｐａｒａｎｓｕｌｆａｔｅ:ｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎ[Ｊ].ＮａｔＰｒｏｄＲｅｐꎬ２００２ꎬ１９(３):３１２－３３１. 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[５]ＴＯＶＡＲＡＭＦꎬＳＡＮＴＯＳＧＲＣꎬＣＡＰＩＬＬÉＮＶꎬｅｔａｌ.Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎｄｈａｅｍｏｓｔａｔｉｃｆｅａｔｕｒｅｓｏｆｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｈｅｐ￣ａｒｉｎｓｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｎｉｍａｌｓｏｕｒｃｅｓ:ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓｔｏｄｅｆｉｎｅｔｈｒｅｓｈｏｌｄｓｓｅｐａｒａｔｉｎｇｄｉｓｔｉｎｃｔｄｒｕｇｓ[Ｊ].ＳｃｉＲｅｐꎬ２０１６(６):３５６１９.[６]ＧＲＡＹＥꎬＭＵＬＬＯＹＢꎬＢＡＲＲＯＷＣＬＩＦＦＥＴＷ.Ｈｅｐａｒｉｎａｎｄｌｏｗ－ｍｏｌｅｃｕｌａｒ－ｗｅｉｇｈｔｈｅｐａｒｉｎ[Ｊ].ＴｈｒｏｍｂＨａｅｍｏｓｔꎬ２００８ꎬ９９(５):８０７－８１８.[７]ＬＩＵＸＹꎬＡＮＧＥＫＳꎬＬＩＮＬꎬｅｔａｌ.Ｔｏｐ－ｄｏｗｎａｎｄｂｏｔｔｏｍ－ｕｐａｎａｌｙｓｉｓｏｆｃｏｍｍｅｒｃｉａｌｅｎｏｘａｐａｒｉｎｓ[Ｊ].ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡꎬ２０１７(１４８０):３２－４０.[８]ＣＨＥＮＪＬꎬＹＵＹＬꎬＦＡＲＥＥＤＪꎬｅｔａｌ.ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＬｏｗ－Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ－ＷｅｉｇｈｔＨｅｐａｒｉｎｓＰｒｅｐａｒｅｄＦｒｏｍＯｖｉｎｅＨｅｐ￣ａｒｉｎｓＷｉｔｈＥｎｏｘａｐａｒｉｎ[Ｊ].ＣｌｉｎＡｐｐｌＴｈｒｏｍｂＨｅｍｏｓｔꎬ２０１９(２５):１０７６０２９６１９８４０７０１.[９]ＬＩＡＮＧＱＴꎬＳＨＡＲＰＪＳ.ＤｅｎｏｖｏＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇｏｆＨｅｐａｒｉｎ/ＨｅｐａｒａｎＳｕｌｆａｔｅＯｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｂｙＣｈｅｍｉｃａｌＤｅｒｉｖａｔｉｚａ￣ｔｉｏｎａｎｄＬＣ－ＭＳ/ＭＳ[Ｊ].ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌＢｉｏｌꎬ２０２２(２３０３):１６３－１７２.[１０]ＧＵＥＲＲＩＮＩＭꎬＢＩＳＩＯＡꎬＴＯＲＲＩＧ.ＣｏｍｂｉｎｅｄＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ１Ｈａｎｄ１３ＣＮｕｃｌｅａｒＭａｇｎｅｔｉｃＲｅｓｏｎａｎｃｅＳｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙｆｏｒＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＨｅｐａｒｉｎＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ[Ｊ].ＳｅｍｉｎＴｈｒｏｍｂＨｅｍｏｓｔꎬ２００１ꎬ２７(５):４７３－４８２.[１１]ＡＮＧＥＫＳꎬＯＮＩＳＨＩＡꎬＦＵＬꎬｅｔａｌ.ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＨｅｐａｒｉｎｓＤｅｒｉｖｅｄＦｒｏｍＢｏｖｉｎｅＴｉｓｓｕｅｓａｎｄＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｔｏＰｏｒｃｉｎｅＩｎｔｅｓｔｉｎａｌＨｅｐａｒｉｎｓ[Ｊ].ＣｌｉｎＡｐｐｌＴｈｒｏｍｂＨｅｍｏｓｔꎬ２０１６ꎬ２２(６):５２０－５２７.[１２]ＭＡＵＲＩＬꎬＭＡＲＩＮＯＺＺＩＭꎬＰＨＡＴＡＫＮꎬｅｔａｌ.１Ｄａｎｄ２Ｄ－ＨＳＱＣＮＭＲ:ＴｗｏＭｅｔｈｏｄｓｔｏＤｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈａｎｄＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅＨｅｐａｒｉｎＦｒｏｍＤｉｆｆｅｒｅｎｔＡｎｉｍａｌａｎｄＴｉｓｓｕｅＳｏｕｒｃｅｓ[Ｊ].ＦｒｏｎｔＭｅｄꎬ２０１９(６):１４２.[１３]ＭＯＮＡＫＨＯＶＡＹＢꎬＤＩＥＨＬＢＷＫ.Ｎｕｃｌｅａｒｍａｇｎｅｔｉｃｒｅｓｏｎａｎｃｅｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙａｓａｎｅｌｅｇａｎｔｔｏｏｌｆｏｒａｃｏｍｐｌｅｔｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆｃｒｕｄｅｈｅｐａｒｉｎｍａｔｅｒｉａｌ[Ｊ].ＪＰｈａｒｍＢｉ￣ｏｍｅｄＡｎａｌꎬ２０２２(２１９):１１４９１５.[１４]ＭＯＮＡＫＨＯＶＡＹＢꎬＤＩＥＨＬＢＷＫꎬＦＡＲＥＥＤＪ.Ａｕｔｈｅｎ￣ｔｉｃａｔｉｏｎｏｆａｎｉｍａｌｏｒｉｇｉｎｏｆｈｅｐａｒｉｎａｎｄｌｏｗｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｈｅｐａｒｉｎｉｎｃｌｕｄｉｎｇｏｖｉｎｅꎬｐｏｒｃｉｎｅａｎｄｂｏｖｉｎｅｓｐｅｃｉｅｓｕｓｉｎｇ１ＤＮＭＲｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙａｎｄｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｔｏｏｌｓ[Ｊ].ＪＰｈａｒｍＢｉｏｍｅｄＡｎａｌꎬ２０１８(１４９):１１４－１１９. [１５]ＯＵＹＡＮＧＹＬꎬＨＡＮＸＲꎬＹＵＹＬꎬｅｔａｌ.Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃａ￣ｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｏｒｃｉｎｅꎬｂｏｖｉｎｅａｎｄｏｖｉｎｅｈｅｐａｒｉｎｓ[Ｊ].ＪＰｈａｒｍＢｉｏｍｅｄＡｎａｌꎬ２０１９(１６４):３４５－３５２.[１６]ＷＡＴＴＤＫꎬＹＯＲＫＥＳＣꎬＳＬＩＭＧＣ.Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｏｖｉｎｅꎬｂｏｖｉｎｅａｎｄｐｏｒｃｉｎｅｍｕｃｏｓａｌｈｅｐａｒｉｎｓａｎｄｌｏｗｍｏ￣ｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｈｅｐａｒｉｎｓｂｙｄｉｓａｃｃｈａｒｉｄｅａｎａｌｙｓｅｓａｎｄ１３ＣＮＭＲ[Ｊ].ＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＰｏｌｙｍｅｒｓꎬ１９９７(３３):５－１１. [１７]马志华ꎬ李志敏ꎬ姬胜利ꎬ等.一种鉴别粗品肝素钠不同种属来源的简便方法[Ｊ].食品与药品ꎬ２０１５ꎬ１７(５):３１８－３２３.[１８]迟连利ꎬ张彬ꎬ石峰ꎬ等.一种鉴别猪来源肝素是否掺反刍类动物肝素的方法:１１４２６４７４１Ａ[Ｐ].２０２２－０４－０１. [１９]迟连利ꎬ李蒙蒙ꎬ张彬ꎬ等.一种利用依诺肝素钠还原端鉴别猪来源依诺肝素钠是否掺有羊来源依诺肝素钠的方法:１１５７９２０４４Ａ[Ｐ].２０２３－０３－１４.[２０]ＺＨＡＮＧＢꎬＳＨＩＤＬꎬＬＩＭＭꎬｅｔａｌ.Ａｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙｍｅｔｈｏｄｔｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｂｏｖｉｎｅａｎｄｏｖｉｎｅｈｅｐ￣ａｒｉｎｓｆｒｏｍｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｐｏｒｃｉｎｅｈｅｐａｒｉｎ[Ｊ].ＣａｒｂｏｈｙｄｒＰｏｌｙｍꎬ２０２３ꎬ３０１(ＰｔＡ):１２０３０３.[２１]李玮涛ꎬ赵丽丽ꎬ王娟娟ꎬ等.一种鉴别猪肠粘膜肝素中羊来源肝素掺杂比例的方法:１１５４３６５４２Ａ[Ｐ].２０２２－１２－０６.[２２]ＣＨＥＮＬꎬＯＵＹＡＮＧＹＬꎬＹＡＮＮꎬｅｔａｌ.Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅａ￣ｎａｌｙｓｉｓｏｆｈｅｐａｒｉｎａｓｅｄｅｒｉｖｅｄｈｅｐａｒｉｎ－ｐｒｏｄｕｃｔｓｕｓｉｎｇｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｃｏｕｐｌｅｄｗｉｔｈｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ[Ｊ].ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡꎬ２０２１(１６４３):４６２０４９. [２３]ＺＨＵＷꎬＣＨＥＮＬꎬＹＡＮＮꎬｅｔａｌ.Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇａｎａｌｙｓｉｓｏｆｈｅｐ￣ａｒｉｎｒｅｄｕｃｉｎｇｔｅｒｍｉｎａｌｓｗｉｔｈｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃａｐ￣ｐｒｏａｃｈｅｓ[Ｊ].ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡꎬ２０２２(１６７７):４６３３１８－４６３３２６. [２４]ＴＲＥＭＢＬＡＹＪ.Ｄｒｕｇｆｉｒｍｍａｙｈａｖｅｕｓｅｄｔａｉｎｔｅｄｈｅｐａｒｉｎ[Ｊ].ＣｈｅｍＥｎｇＮｅｗｓꎬ２０１６ꎬ９４(４８):１４－１５.(收稿日期:２０２３－０７－０５)(上接第７０２页)[５５]ＳＣＨＯＬＺＧꎬＪＡＮＤＵＳＣꎬＺＨＡＮＧＬꎬｅｔａｌ.ＭｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆｍＴＯＲＳｉｇｎａｌｌｉｎｇＴｒｉｇｇｅｒｓｔｈｅＦｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＳｔｅｍＣｅｌｌ－ｌｉｋｅＭｅｍｏｒｙＴＣｅｌｌｓ[Ｊ].ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅꎬ２０１６(４):５０－６１. [５６]ＭＡＥＨꎬＰＯＦＦＥＮＢＥＲＧＥＲＭＣꎬＷＯＮＧＡＨꎬｅｔａｌ.ＴｈｅｒｏｌｅｏｆＡＭＰＫｉｎＴｃｅｌｌｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎ[Ｊ].ＣｕｒｒＯｐｉｎＩｍｍｕｎｏｌꎬ２０１７(４６):４５－５２.[５７]ＰＯＬＬＩＺＺＩＫＮꎬＰＡＴＥＬＣＨꎬＳＵＮＩＨꎬｅｔａｌ.ｍＴＯＲＣ１ａｎｄｍＴＯＲＣ２ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙｒｅｇｕｌａｔｅＣＤ８＋Ｔｃｅｌｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａ￣ｔｉｏｎ[Ｊ].ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔꎬ２０１５ꎬ１２５(５):２０９０－２１０８.[５８]ＡＢＵＥＩＤＲꎬＡＨＭＡＤＳꎬＬＩＮＹꎬｅｔａｌ.ＥｎｈａｎｃｅｄＴｈｅｒａ￣ｐｅｕｔｉｃＥｆｆｉｃａｃｙａｎｄＭｅｍｏｒｙｏｆＴｕｍｏｒ－ＳｐｅｃｉｆｉｃＣＤ８ＴＣｅｌｌｓｂｙＥｘＶｉｖｏＰＩ３Ｋ－ｄｅｌｔａＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎ[Ｊ].ＣａｎｃｅｒＲｅｓꎬ２０１７ꎬ７７(１５):４１３５－４１４５.[５９]ＨＥＲＭＡＮＳＤꎬＧＡＵＴＡＭＳꎬＧＡＲＣＩＡ－ＣＡＮＡＶＥＲＡＳＪＣꎬｅｔａｌ.ＬａｃｔａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｓｙｎｅｒｇｉｚｅｓｗｉｔｈＩＬ－２１ｔｏｐｒｏｍｏｔｅＣＤ８＋Ｔｃｅｌｌｓｔｅｍｎｅｓｓａｎｄａｎｔｉｔｕｍｏｒｉｍｍｕｎｉｔｙ[Ｊ].ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡꎬ２０２０ꎬ１１７(１１):６０４７－６０５５. [６０]ＨＥＮＮＩＮＧＡＮꎬＲＯＹＣＨＯＵＤＨＵＲＩＲꎬＲＥＳＴＩＦＯＮＰ.ＥｐｉｇｅｎｅｔｉｃｃｏｎｔｒｏｌｏｆＣＤ８＋Ｔｃｅｌｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ[Ｊ].ＮａｔＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌꎬ２０１８ꎬ１８(５):３４０－３５６.[６１]ＲＯＤＲＩＧＵＥＺＲＭꎬＳＵＡＲＥＺ－ＡＬＶＡＲＥＺＢꎬＬＡＶＩＮＪＬꎬｅｔａｌ.ＥｐｉｇｅｎｅｔｉｃＮｅｔｗｏｒｋｓＲｅｇｕｌａｔｅｔｈｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌＰｒｏｇｒａｍｉｎＭｅｍｏｒｙａｎｄＴｅｒｍｉｎａｌｌｙＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄＣＤ８＋ＴＣｅｌｌｓ[Ｊ].ＪＩｍｍｕｎｏｌꎬ２０１７ꎬ１９８(２):９３７－９４９.[６２]ＰＡＣＥＬꎬＧＯＵＤＯＴＣꎬＺＵＥＶＡＥꎬｅｔａｌ.ＴｈｅｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｃｏｎｔｒｏｌｏｆｓｔｅｍｎｅｓｓｉｎＣＤ８＋Ｔｃｅｌｌｆａｔｅｃｏｍｍｉｔｍｅｎｔ[Ｊ].Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ２０１８ꎬ３５９(６３７２):１７７－１８６.[６３]ＧＲＡＹＳＭꎬＡＭＥＺＱＵＩＴＡＲＡꎬＧＵＡＮＴꎬｅｔａｌ.ＰｏｌｙｃｏｍｂＲｅｐｒｅｓｓｉｖｅＣｏｍｐｌｅｘ２－ＭｅｄｉａｔｅｄＣｈｒｏｍａｔｉｎＲｅｐｒｅｓｓｉｏｎＧｕｉｄｅｓＥｆｆｅｃｔｏｒＣＤ８＋ＴＣｅｌｌＴｅｒｍｉｎａｌＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄＬｏｓｓｏｆＭｕｌｔｉｐｏｔｅｎｃｙ[Ｊ].Ｉｍｍｕｎｉｔｙꎬ２０１７ꎬ４６(４):５９６－６０８. [６４]ＡＢＤＥＬＳＡＭＥＤＨＡꎬＭＯＵＳＴＡＫＩＡꎬＦＡＮＹＰꎬｅｔａｌ.Ｈｕ￣ｍａｎｍｅｍｏｒｙＣＤ８Ｔｃｅｌｌｅｆｆｅｃｔｏｒｐｏｔｅｎｔｉａｌｉｓｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙｐｒｅｓｅｒｖｅｄｄｕｒｉｎｇｉｎｖｉｖｏｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ[Ｊ].ＪＥｘｐＭｅｄꎬ２０１７ꎬ２１４(６):１５９３－１６０６.[６５]ＡＢＤＥＬＳＡＭＥＤＨＡꎬＺＥＢＬＥＹＣＣꎬＮＧＵＹＥＮＨꎬｅｔａｌ.Ｂｅｔａｃｅｌｌ－ｓｐｅｃｉｆｉｃＣＤ８＋Ｔｃｅｌｌｓｍａｉｎｔａｉｎｓｔｅｍｃｅｌｌｍｅｍｏｒｙ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｇｒａｍｓｄｕｒｉｎｇｔｙｐｅ１ｄｉ￣ａｂｅｔｅｓ[Ｊ].ＮａｔＩｍｍｕｎｏｌꎬ２０２０ꎬ２１(５):５７８－５８７.[６６]ＢＩＡＳＣＯＬꎬＳＣＡＬＡＳꎬＢＡＳＳＯＲＩＣＣＩＬꎬｅｔａｌ.ＩｎｖｉｖｏｔｒａｃｋｉｎｇｏｆＴｃｅｌｌｓｉｎｈｕｍａｎｓｕｎｖｅｉｌｓｄｅｃａｄｅ－ｌｏｎｇｓｕｒｖｉｖａｌａｎｄａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙｍｏｄｉｆｉｅｄＴｍｅｍｏｒｙｓｔｅｍｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＳｃｉＴｒａｎｓｌＭｅｄꎬ２０１５ꎬ７(２７３):２７３ｒａ１３. [６７]ＸＵＹꎬＺＨＡＮＧＭꎬＲＡＭＯＳＣＡꎬｅｔａｌ.ＣｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄＴ－ｍｅｍｏｒｙｓｔｅｍｃｅｌｌｓｃｏｒｒｅｌａｔｅｗｉｔｈｉｎｖｉｖｏｅｘｐａｎｓｉｏｎｏｆＣＡＲ.ＣＤ１９－ＴｃｅｌｌｓａｎｄａｒｅｐｒｅｓｅｒｖｅｄｂｙＩＬ－７ａｎｄＩＬ－１５[Ｊ].Ｂｌｏｏｄꎬ２０１４ꎬ１２３(２４):３７５０－３７５９.[６８]ＳＴＥＭＢＥＲＧＥＲＣꎬＧＲＡＥＦＰꎬＯＤＥＮＤＡＨＬＭꎬｅｔａｌ.ＬｏｗｅｓｔｎｕｍｂｅｒｓｏｆｐｒｉｍａｒｙＣＤ８＋Ｔｃｅｌｌｓｃａｎｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｉｍｍｕｎｉｔｙｕｐｏｎａｄｏｐｔｉｖｅｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ[Ｊ].Ｂｌｏｏｄꎬ２０１４ꎬ１２４(４):６２８－６３７.[６９]ＡＬＶＡＲＥＺ－ＦＥＲＮＡＮＤＥＺＣꎬＥＳＣＲＩＢＡ－ＧＡＲＣＩＡＬꎬＣＡ￣ＢＡＬＬＥＲＯＡＣꎬｅｔａｌ.ＭｅｍｏｒｙｓｔｅｍＴｃｅｌｌｓｍｏｄｉｆｉｅｄｗｉｔｈａｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄＣＤ３０－ｃｈｉｍｅｒｉｃａｎｔｉｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒｓｈｏｗａｎｅｎ￣ｈａｎｃｅｄａｎｔｉｔｕｍｏｒｅｆｆｅｃｔｉｎＨｏｄｇｋｉｎｌｙｍｐｈｏｍａ[Ｊ].ＣｌｉｎＴｒａｎｓｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙꎬ２０２１ꎬ１０(４):ｅ１２６８.[７０]ＳＡＢＡＴＩＮＯＭꎬＨＵＪꎬＳＯＭＭＡＲＩＶＡＭꎬｅｔａｌ.Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆｃｌｉｎｉｃａｌ－ｇｒａｄｅＣＤ１９－ｓｐｅｃｉｆｉｃＣＡＲ－ｍｏｄｉｆｉｅｄＣＤ８＋ｍｅｍｏｒｙｓｔｅｍｃｅｌｌｓｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｈｕｍａｎＢ－ｃｅｌｌｍａ￣ｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ[Ｊ].Ｂｌｏｏｄꎬ２０１６ꎬ１２８(４):５１９－５２８.(收稿日期:２０２３－０３－０２)。