血液标本的微生物学检验程序

微生物检验标本的正确采集及注意事项正确采集临床微生物标本，直接影响到微生物培养鉴定结果。

可靠的检验结果可以指导临床诊断治疗，为临床科学用药和成功的感染控制提供依据，是正确、合理使用抗菌药物，延缓细菌耐药，减少抗菌药物滥用和监测医院感染的第一步，也是最重要的一步。

为此应正确采集各种细菌学标本。

一、血液标本的采集1、采集方法（1）75%酒精清洁局部皮肤。

（2）待皮肤干后，再用2%—2.5%碘酒从穿刺点中心部位开始消毒，范围不应小于5cm（直径），且不能用手指触摸消毒后的皮肤。

（3）皮肤碘酒干后（约1min），穿刺采集血液，采血量成人5-10ml，婴幼儿1-5ml。

（4）采血后立即在床旁接种培养瓶，并迅速轻摇，充分混匀防止凝固，但又不可剧震以防溶血。

2、注意事项（1）怀疑菌血症应尽早采血，体温上升（38.5℃）采血可提高阳性率，但也要防止因等待而延误时机。

（2）对已经使用抗菌药物，而又不能停药者，也应在下次用药前采血。

切忌不要在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本，也不能从静脉导管及动脉插管中取血。

（3）培养基与血液之比以10:1为宜，以稀释血液中的抗生素，抗体等杀菌物质；有人主张对接受抗菌药物治疗的病人，培养基与采血量之比可为20:1或大于这个比例。

（4）近年研究表明，将血液注入血培养基前，更换针头反而易导致污染。

（5）每例至少采血两次，间隔0.5-1h，以利于提高阳性率和区分感染菌与污染菌。

（6）疑为细菌性心内膜炎及布鲁氏病的病人，以肘动脉或股动脉采血为宜，除在发热期采血外，并要多次采血（24h 3-4次）和增加采血量（可增加10ml）。

（7）采血后立即送检，如不能立即送检可置室温，而不能放置冰箱。

（8）如临床表现很似败血症，而血培养多次阴性者，提示考虑厌氧菌和真菌感染的可能。

二、骨髓的采集1、采集方法在病灶部位或髂前（后）上脊处严格消毒后抽取骨髓1ml，注入血培养瓶内。

2、注意事项（1）骨髓内含有大量的单核巨噬细胞系统的细胞，因而骨髓培养对伤寒病人的诊断较血培养优越。

临床微生物检验基本技术标准操作规程微生物检验实验室标本处理标准操作规程 (137)微生物检验实验室标本接种标准操作规程 (138)微生物检验实验室细菌鉴定操作规程 (139)微生物检验实验室不染色标本检查法标准操作规程 (140)微生物检验实验室革兰染色标准操作规程 (141)微生物检验实验室抗酸染色标准操作规程 (142)微生物检验实验室墨汁染色标准操作规程 (144)微生物检验实验室药物敏感试验标准操作规程 (145)取粪便脓血部位标本根据检验申请单要求选择平板，立即接种。

4.6 尿标本接收标本后，立即对标本进行编号、登记，将尿标本混匀，用10ul定量接种环立即接种血琼脂平板、麦康凯平板，分离细菌和菌落计数。

参考文献[1] 周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2] 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006编写人：AAA、BBB 操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室标本接收标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0563灭菌。

用接种环伸入菌种管内挑取移种之菌落。

伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线，或直接自下而上蜿蜒划线。

将接种环垂直插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基底部，然后穿刺线推出接种环。

4.4 穿刺培养法4.4.1 此法用于保存菌种，观察动力及某些生化反应。

4.4.2 以接种环挑取细菌培养物，插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基底部，然后沿原穿刺线退出接种环。

4.5 液体培养基接种法用灭菌接种环挑取菌落或标本。

在试管内壁于液面交界处研磨，使细菌混匀在液体培养基中。

参考文献[1] 周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2] 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006编写人：AAA、BBB 操作人：本室操作人员批准人：革兰阳性球菌：选择GP卡（阳性菌鉴定卡）。

医院微生物室血液感染病原体检验操作规程1、标本采集(1)、采集时间和次数血标本一般应在病人发热初期或根据不同的发热情况在未用抗生素前采集做细菌培养，提高阳性率需连续三次采血进行培养。

(2)、采血部位及抽血量一般抽取肘静脉血。

采血量为成人5-10ml，儿童为3～5ml。

(3)、结果观察：培养72小时后若肉眼或自动血液培养仪报告仍未细菌生长，则盲目移种一次，仍未细菌生长，向临床发出一级初级报告：“血液经72小时培养无细菌生长”：为避免漏诊，应在培养5天、7天时再作盲目移种培养。

疑为亚急性细菌性心内膜炎、真菌血症等时，血培养至少连续培养2～3周，仍无细菌生长方可报告为阴性。

2、检验程序血液标本（无菌采集）72小时盲目移种（初级报告）传统方法或自动血液培养仪指示有细菌生长涂片、染色、镜检需氧培养及CO2培养直接药敏试验（血平板、巧克力琼脂）观察菌落涂片、染色、镜检纯培养血清学鉴定ATB Expression报告3、血培养瓶中不同表现为不同细菌生长：浑浊并有凝无块金黄色葡萄球菌均匀浑浊，发酵葡萄糖产气多为革兰阴性菌微浑浊，有绿色变化肺炎链球菌表面有菌膜，培养基清晰，底层容血枯草杆菌表面有菌膜，膜下有绿色浑浊铜绿假单胞菌血细胞层上面有颗粒状生长，自上而下的溶血溶血性链球菌4、血液及骨髓标本中常见病原菌革兰阳性菌革兰阴性菌肺炎链球菌大肠埃希菌金黄色葡萄球菌伤寒及其它沙门菌表皮葡萄球菌变形杆菌溶血性链球菌产气肠杆菌粪肠球菌肺炎克雷伯氏菌铜绿假单胞菌粪产硷杆菌沙雷氏菌流感嗜血杆菌布鲁氏菌5、报告结果5.1、在血液中检出沙门氏菌，必须以血清凝集试验为依据报告血清型。

5.2、血液正常情况下应是无菌的，如培养出细菌即为致病菌，应报细菌的种属及药敏试验结果。

5.3、血培养阳性均作为危急值报告。

临床微生物学检验的标本采集一、血液和骨髓细菌学检验标本的采集（一）适应症菌血症、败血症和感染性骨髓炎等感染菌的培养鉴定和药物敏感试验。

（二）病人准备1．凡怀疑菌血症和败血症的患者，采血培养时，应尽量在未使用抗菌素前采血，如已使用过抗菌素，应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血，或在病人第二次使用抗菌素之前采集血培养标本。

2．应在病人发热期或寒颤时采集（三）标本采集1．血培养瓶领取：凭医嘱和检验申请单到检验科细菌室领取。

按照实际情况选择相应类型的血培养瓶：如灰色瓶盖为普通成人培养瓶；粉红色盖为儿童需氧菌培养瓶；紫色盖为厌氧菌培养瓶。

2．将患者信息录入相应的血培养瓶条码中，并在作好病人姓名、科别、床号等标识。

2．采集方法：严格消毒病人采血部位和血培养瓶口，抽一定量血液或骨髓后，无菌注入血培养瓶内，轻轻摇匀。

3．标本量：成人每次采血5~10ml，小儿采血3~5ml，骨髓2~3ml，采血量足够则阳性率高，反之阳性率减低。

（四）注意事项1．抽血、抽骨髓和接种时，须严格注意无菌操作，避免污染杂菌。

2．从抽血、抽骨髓到接种入瓶，动作要快，防止血液凝固。

3．成人不明原因发热、怀疑血流细菌感染时宜在不同部位抽血2套，每套2瓶（需氧、厌氧各一瓶）。

4．怀疑伤寒、亚急性细菌性心内膜炎及布鲁氏菌病的病人等，一般一日抽血三次培养，必要时需追加次数。

（五）标本送检和保存1．标本采集后应及时送检，一般不超过1h送交细菌室。

2．送检过程中应注意防止培养瓶打破或其它潜在性污染可能。

二、痰液或下呼吸道分泌物细菌学检验标本的采集（一）适应症肺炎、肺气肿、支气管炎、鼻窦炎、肺结核等感染菌的培养鉴定、药物敏感试验和抗酸菌检查。

（二）病人准备1．尽量在未使用抗菌素前留取标本。

准备好无菌标本容器，贴上条码、标明标识。

2．住院病人应留取清晨起床第一口痰。

为减少正常菌群的污染，嘱患者早上起床后用清水或生理盐水漱口，不要刷牙，除去鼻咽分泌物。

（三）标本采集1．一般病人用力咳出气管深处或肺部痰液，留于无菌标本容器内。

《医学微生物学》三大常规的微生物学检查从临床标本中分离细菌的目的是为疾病的病原学做诊断，或查找与疾病相关的微生物，以及对抗生素的敏感性，这对于临床诊断、治疗、预后和进行流行病学调查是很有价值的。

因此，对临床标本的处理和检测应掌握以下原则。

1．临床标本的正确采集和处理对于疾病的正确诊断关系很大。

病人标本一般应在应用抗菌药物前采集。

对血液、脑脊液或穿刺液等标本，应严格按照无菌技术进行采集；对鼻咽拭子、肛拭子、粪便等标本，虽无须严格无菌操作，但也应尽量避免杂菌混入。

2．采集容器上应贴好送检号及病人姓名的标签，连同检验单一起尽早送检验室。

若路途较远，应冷藏保存送检；对脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等特殊标本，送检时应35℃～37℃保温。

3．人体很多部位与外界相通，存在有正常菌群，但不致病，故在涂片检查或分离培养时，应区别标本中是常居菌群的污染还是致病菌。

另外，对某些无菌的部位，如血液、骨髓、脑脊液等，如检查出细菌应视为致病菌，但必须要排除采样及操作中的污染。

4．根据标本来源和可能存在的病原菌，选定各种分离培养基和孵育环境。

如痰标本一般选用血平板，用于化脓性链球菌、无乳链球菌、肺炎链球菌、白喉棒状杆菌等的分离。

【血液标本检查】正常人的血液是无菌的。

当细菌侵入血流并在其中生长繁殖，产生毒素等，可引起菌血症或败血症。

细菌学检验对其诊断和治疗具有极其重要的意义。

一、标本采集l．标本采集必须严格遵守无菌操作，即应去除皮肤上的细菌，又应注意空气中的细菌。

穿刺部位以碘酒、酒精棉球消毒，用干燥的灭菌注射器抽取血液，立即注入选定的液体培养基瓶内，充分混匀以防凝固。

2．采血一般应在治疗前，并在高热、寒战时作培养。

伤寒在发病一周内即菌血症期间采血；化脓性脑膜炎，鼠疫应在发热1～2d内采血；亚急性细菌性心内膜炎也宜于发热高峰采血或多次采血，且每隔1～2h采血一次，连续3～4次，可获较高的阳性率。

3．采血量应相当于培养液的1／10，通常是50ml培养液采血5ml，这样可使存在于血液中的补体、抗体、调理素、溶菌酶等抑制因子被稀释，使之减弱或失去抑制作用。

临床微生物标本采集与运送LG GROUP system office room 【LGA16H-LGYY-LGUA8Q8-LGA162】临床微生物标本采集与运送一、血培养标本采集、运送与报告标准操作规程一、血培养指征患者出现寒战，体温超过38℃或低体温，怀疑血流感染时，尤其存在以下情况时，应抽血做细菌和真菌培养：医院内肺炎；留置中心静脉导管超过72 h；感染性心内膜炎；骨髓炎；有严重基础疾病、免疫缺陷伴全身感染症状；临床医生怀疑有血流感染可能的其他情况。

二、采血时机一旦怀疑有血流感染可能，应立即采血做血培养，最好在抗菌治疗前或停用抗菌药物24 h后，以寒战、发热时采集为宜。

三、采血流程(一)消毒1．培养瓶消毒程序：用消毒液消毒培养瓶橡皮塞，待干燥后使用。

2．皮肤消毒程序：用消毒液从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径达5 cm以上，待消毒液挥发干燥后(常需30 s以上)穿刺采血。

(二)静脉穿刺和培养瓶接种成人用注射器无菌穿刺取血后，排尽针头内空气，直接注入血培养瓶，勿换针头(如果行第二次穿刺或用头皮针取血时，应换针头)，先注于厌氧培养瓶，避免注入空气，然后注入需氧培养瓶，轻轻混匀以防血液凝固。

近年来，临床普遍采用负压血培养瓶，将血从患者静脉直接吸入血培养瓶，减少污染环节。

(三)注意事项1．检验单需注明抗菌药物使用情况、血液采集时间和部位、临床诊断等患者信息。

2．采血部位通常为肘静脉，疑为细菌性心内膜炎时以肘动脉或股动脉采血为宜，切忌在静滴抗菌药物的静脉处采血。

除非怀疑有导管相关的血流感染，否则不应从留置静脉或动脉导管取血，因为导管易被皮肤正常菌群污染。

3．采血次数：对于成年患者，应该同时分别在两个部位采集血标本，在两个不同部位分离到同样菌种才能确定是病原菌。

4．细菌性心内膜炎：在24 h内取血3次，每次间隔不少于30 min；必要时次日再做血培养2次。

5．采血量：以培养基与血液之比10：1为宜，以稀释血液中的抗菌药物、抗体等杀菌物质。

血培养检测规范化操作（世上最全基本操作流程）2016-08-22来源:南方检验医学网阅读: 1291次【字号：大中小】导读：一、血培养检测采血指征：对入院的危重患者未进行系统性抗生素治疗前，应及时进行血液培养，患者出现以下体征时可作为采集血培养的重要指征： 1．发热（38℃）或低温（36℃）。

2．寒战。

3．白细胞增多（1010 9/L，特别有核左移未成熟的或带状的白细胞一、血培养检测采血指征：对入院的危重患者未进行系统性抗生素治疗前，应及时进行血液培养，患者出现以下体征时可作为采集血培养的重要指征：1．发热（≥38℃）或低温（≤36℃）。

2．寒战。

3．白细胞增多（>10×10 9/L，特别有“核左移”未成熟的或带状的白细胞增多。

4．粒细胞减少（成熟的多核白细胞<1×10 9/L）。

5．血小板减少。

6．皮肤粘膜出血。

7．昏迷。

8．多器官衰竭。

或同时具备上述几种体征时应采血培养。

在评估可疑新生儿败血症时，除发热或低烧外，很少培养出细菌，应该补充尿液和脑脊液培养。

肺炎链球菌与流感嗜血杆菌菌血症的患儿（特别是2岁以下的幼儿）一般多见于门诊，常伴有明显发热（≥38.5℃）和白细胞增多（≥20×109/L）。

老年菌血症患者，可能不发热或不低热，如伴有身体不适，肌痛或中风可能是感染性心内膜炎的重要指征。

血培养检测皮肤消毒程序：血培养为防止皮肤寄生菌污染，可使用消毒剂（碘酊或碘伏）对皮肤进行严格仔细的消毒处理，最大限度地减低皮肤污染。

感染性心内膜炎，特别是心脏瓣膜修复术的感染，可能由皮肤寄生的微生物引起（例如：表皮葡萄球菌或棒杆菌属）。

因此，在采集过程中血培养的污染一定要减小至最低程度。

用做培养的血液均不应该在静脉或动脉的导管中抽取，除非静脉穿刺无法得到血液或用来评价与导管感染相关性指标。

如果抽取了导管血，也应同时在其他部位穿刺获取非导管内静脉血液进行血培养。

皮肤消毒严格按以下步骤进行：1．首先用70%酒精擦拭静脉穿刺部位待30秒钟以上。

实验十、血液标本的细菌学检验【器材】发已增菌血液标本1套/桌（1#、2#、3#、4#），发血琼脂平板1个/人【分离培养】（仅做有氧培养）标本→分区划线血平板，35℃18—24h观察结果。

【形态学检查】（每人做）（1#尿标本）涂片，革兰染色镜检。

【鉴定】1.观察菌落形态：2.涂片、革兰染色镜检：3.生化试验1）G+C→触酶：①触酶阳性，为葡萄C→血浆凝固酶试验：阳性为金葡，阴性为表葡②触酶阴性，为链C2）G-b→氧化酶①氧化酶阳性，为非发酵菌，O-F,铜绿水溶性色素→绿脓b②氧化酶阴性，肠道杆菌→KIA、MIU→初步鉴定→血清学试验最终鉴定结合凝固酶试验、胆汁溶菌试验、氧化酶试验鉴定。

【实验结果】（1#尿标本）1.观察菌落形态：在血平板上完全透明的溶血环（β溶血）2.直接镜检，G+葡萄状球菌葡萄状球菌3.生化试验1）触酶试验（+）2）血浆凝固酶试验（+）鉴定结果：1#血液标本直接涂片革兰染色观察：G+球菌，单个或呈葡萄状排列；再经过血平板分离培养，观察菌落特征，革兰染色，生化鉴定（触酶+、血浆凝固酶+）鉴定1#血液标本中的细菌为金黄色葡萄球菌。

【实验讨论】1.血液标本的采集：①采血时间和次数：血标本一般应在病人发热初期或根据不同的发热情况在未用抗生素前采集作细菌培养，为提高阳性率常需连续三次采血进行血培养。

②血部位及抽血量：一般抽取肘静脉血做血培养。

采血量为成人一次5ml～10ml，儿童为3-5ml。

抽取的血液立即以无菌要求注入血培养瓶中，迅速送检。

③采集血标本和接种时要严格无菌操作，避免杂菌污染。

④根据菌血症和脓毒症所引起的疾病，还可采集不同部位的分泌物（痰液和脓液等）标本做涂片、染色和镜检或培养。

2.血液标本采集注意事项：血液标本的细菌学检验，一般不用抗凝剂(因为氟化钠、EDTA、枸橼酸钠可对细菌不利，肝素目前尚未报导有影响)近年来认为在培养中加入0.03-0.05%聚茴香脑磺酸钠有抑制血清中的杀菌物质作用，效果较好。