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ELISA法检测麻疹IgM抗体质控图的建立摘要】目的:探讨适用于麻疹实验室质量控制的有效方法。
方法:建立麻疹IgM抗体检测的实验室动态质控图。
结果:保证了实验结果的准确性。
结论:在实验过程中进行动态质控有较高的应用价值。
【关键词】酶联免疫吸附试验麻疹IgM抗体质控图【中图分类号】R446.5 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）12-0012-02在疫苗可预防的疾病中麻疹仍然是引起儿童死亡最多的,主要在发展中国家［1］。
2005年在WHO西太平洋区地区会议上我国签署了承诺2012年消除麻疹的文件。
为实现这一目标，麻疹实验室的作用至关重要。
目前酶联免疫吸附试验（ELISA）是检测麻疹抗体最常用的检测方法。
但在实际操作中ELISA法检测麻疹IgM抗体的影响因素较多，往往导致结果出现较大偏差。
因此，在实验中加入一个室内质量控制血清对实验进行动态质控，以保证每次结果的准确可靠［2］。
现将实验室动态质控图的建立报告如下。
1 材料与方法1.1 资料来源 2010年南宁市疾病预防控制中心麻疹网络实验室资料。
1.2 检测方法采用间接法ELISA检测麻疹IgM 抗体，试剂由德国维润赛润研发有限公司提供，有效期内使用，严格按试剂说明书操作。
内部对照是试剂盒提供的阴性和阳性对照。
每次检测设空白对照1孔，阴性对照1孔，阳性对照2孔。
实验室内部质控血清(IHC)由广西疾病预防控制中心计划免疫科提供，取室内质控血清10μl加入500μl的标本稀释液中，按每周检测2-3次所需量分装后置-20℃冰箱保存。
检测样本时将室内质控血清带入同时检测，已启用的置2-8℃冰箱保存，一周内未用完应弃去。
当Cul-off值、阴性、阳性对照结果符合要求．试验成立时．记录室内质控血清S／CO值。
1.3 判定有效性标准用酶标仪405 nm 波长测OD值，底物空白的OD值＜0.25；阳性对照平均OD值必须满足在评估表中给定有效范围之内。
麻疹病毒（MLs）IgM抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明（96T/48T）[原理]本试剂盒采用亲和素-生物素化麻疹病毒抗原预包被板ELISA 原理，检测人血清/血浆中存在的麻疹病毒IgM 抗体，并配以酶标记抗人IgM单克隆抗体作为标记物。
加入底物TMB显色后终止反应，在450nm波长测各孔O.D值，O.D值的大小与待检抗体含量成正比。
生物素系统（biotin-avidin system）的稳固级联放大作用，使试剂的特异性、灵敏度、稳定性极大地提高。
另外，血清/血浆经预吸收后非特异性因素（如RF因子和变性或聚合的人IgG）的影响被彻底消除，经验证其结果完全等同于capture-ELISA，为本试剂盒之独特点。
[用途]麻疹是是传染性很强的急性呼吸道疾病，其并发症常见为下呼吸道感染、巨细胞间质肺炎及神经系统慢性进行性疾病-亚急性硬化性全脑炎（SSPE）等。
本试剂盒用于定性检测人血清/血浆中的麻疹病毒早期IgM型抗体，对早期和原发性感染的诊断具有重要价值。
适应范围：麻疹的早期诊断和筛查。
易感人群和高发地区的监查。
[试剂盒组成]1、生物素化抗原预包被板1块（8X12/4X12）2、阴性对照血清1瓶3、阳性对照血清1瓶4、标本稀释液（含抗干扰因子）1瓶（20 ml/10ml，直接使用）5、酶结合物1瓶（12/5ml，直接使用）6、30X浓缩洗液1瓶（20/10ml，加蒸馏水1：30稀释使用）7、显示剂A、B液各1瓶（5/3ml）8、终止液（2M H2SO4）1瓶（5/3ml）9、说明书1份[操作步骤]将试剂盒平衡至室温后取出反应板拆封后置于板架上。
1、样本稀释：用标本稀释液以1：101（5ul—500ul）稀释标本，混匀后置37℃20分钟。
2、加样：小心吸取已稀释待检标本上清液100ul于反应孔中，设阴、阳性对照（各100ul）及空白对照（加100ul标本稀释液）各一孔。
轻拍混匀。
3、37℃温育30分钟。
大鼠麻疹病毒(MeV）ELISA试剂盒操作说明大鼠麻疹病毒(MeV）ELISA试剂盒操作说明大鼠麻疹病毒(MeV）ELISA试剂盒实验原理大鼠麻疹病毒(MeV）ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被大鼠麻疹病毒(MeV）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的大鼠麻疹病毒(MeV）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本处理及要求1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。
为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。
最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
需要而未提供的试剂盒器材1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱4.蒸馏水或去离子水1、标准品浓度依次为：详见说明书；2、经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。
ELISA法检测麻疹病毒IgM抗体血清外对照的设置及意义发表时间：2017-01-12T13:34:14.273Z 来源：《心理医生》2016年30期作者：程艳君[导读] 为了严格控制麻疹IgM 抗体ELISA 检测试剂的质量,消除试剂误差产生的检测错误。
（石嘴山市疾病预防控制中心宁夏石嘴山 753000）【摘要】目的：为了严格控制麻疹IgM 抗体ELISA 检测试剂的质量,消除试剂误差产生的检测错误。
方法：根据麻疹IgM 抗体定量测定结果,选择标准曲线线性良好部分血清标本制备外对照血清, 并计算出外对照血清对于海泰公司试剂的参考值范围。
结果：实验测得外对照血清的活性为48.3～60.6Units/ml,对于海泰公司试剂的OD参考值范围是0.631～0.675。
用此外对照血清对海泰公司共4个批号的试剂盒做复核验证,发现海泰公司批号为20151108试剂盒检测结果失控, 而正是此批号试剂对200份血清标本的检测阳性率和符合率明显低于其它试剂盒。
还验证了此外对照血清的有效活性在4℃条件下可至少维持6个月。
结论：对于只有阴/阳性定性指示的ELISA 检测试剂盒, 制备特定OD 值范围的外对照质控血清很有必要。
【关键词】ELISA;麻疹病毒;IgM 抗体;血清外对照【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）30-0124-02 麻疹是由麻疹病毒引起的一种以发热、呼吸道其他症状和全身斑丘疹为特征的急性病毒性传染病[1]，人类是麻疹病毒的自然宿主，麻疹通过呼吸道和直接接触传播。
WHO已把麻疹列为第3类消灭的急性传染病。
我国也提出控制麻疹的根本措施是提高免疫接种率，加强实验室监测工作[2]。
快速准确的实验室诊断对控制麻疹疫情、消除麻疹有着极其重要的意义。
对于麻疹疑似患者实验室一般采用ELISA法检测患者急性期血清IgM 抗体进行诊断[3]。
目前各级疾病预防控制中心的麻疹实验室多数采用珠海海泰生物试剂制药公司生产的两种麻疹病毒IgM 抗体诊断酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂（过夜法和快速法），进行对比和评价用ELISA定性检测麻疹病毒血清IgM抗体时，由于某些试剂盒内提供的阴/阳性对照血清只能定性指示，无OD值参考范围，因此凭借试剂盒内阴/阳性对照血清指示有时会造成检验结果的失控而出现假阴/阳性结果。
麻疹病毒抗体
[项目名称]麻疹病毒抗体
这项化验是判断是否感染了麻疹病毒的一项参考指标。
麻疹病毒的实验室检测是通过抽取静脉血检测体内抗麻疹病毒的IgG和IgM抗体。
[参考值]阴性或IgGAb<1：512
[临床意义]麻疹病毒的IgM抗体可在发病早期出现，10天左右达到高峰，30一60天后消失。
而IgG抗体与lgM抗体同时或较晚出现，6个月内明显下降，以后维持在一定水平并终生存在。
特异性抗体结果判定如下：
1．麻疹病毒的IgG和IgM抗体均为阳性，或者是IgG抗体滴度≥1：512，表明有麻疹病毒近期感染。
2．麻疹病毒的IgG和lgM抗体均为阴性，表明没有受过麻疹病毒感染。
3．麻疹病毒的IgG抗体滴度<1：512，IgM抗体为阴性，说明有过既往感染史。
4．此外，如果麻疹病毒IgG抗体滴度在双份血清中有4倍以上升高，那么无论IgM抗体是否为阳性，都是麻疹病毒近期感染的指标。
ELISA法检测麻疹病毒IgM抗体血清外对照的设置及意义
摘要】目的：为了严格控制麻疹IgM 抗体ELISA 检测试剂的质量,消除试剂误差产生的检测错误。
方法：根据麻疹IgM 抗体定量测定结果,选择标准曲线线性良好部
分血清标本制备外对照血清, 并计算出外对照血清对于海泰公司试剂的参考值范围。
结果：实验测得外对照血清的活性为48.3～60.6Units/ml,对于海泰公司试剂
的OD参考值范围是0.631～0.675。
用此外对照血清对海泰公司共4个批号的试
剂盒做复核验证,发现海泰公司批号为20151108试剂盒检测结果失控, 而正是此批
号试剂对200份血清标本的检测阳性率和符合率明显低于其它试剂盒。
还验证了
此外对照血清的有效活性在4℃条件下可至少维持6个月。
结论：对于只有阴/阳
性定性指示的ELISA 检测试剂盒, 制备特定OD 值范围的外对照质控血清很有必要。
【关键词】ELISA;麻疹病毒;IgM 抗体;血清外对照
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）30-0124-02
麻疹是由麻疹病毒引起的一种以发热、呼吸道其他症状和全身斑丘疹为特征
的急性病毒性传染病[1]，人类是麻疹病毒的自然宿主，麻疹通过呼吸道和直接接
触传播。
WHO已把麻疹列为第3类消灭的急性传染病。
我国也提出控制麻疹的
根本措施是提高免疫接种率，加强实验室监测工作[2]。
快速准确的实验室诊断对
控制麻疹疫情、消除麻疹有着极其重要的意义。
对于麻疹疑似患者实验室一般采
用ELISA法检测患者急性期血清IgM 抗体进行诊断[3]。
目前各级疾病预防控制中
心的麻疹实验室多数采用珠海海泰生物试剂制药公司生产的两种麻疹病毒IgM 抗
体诊断酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂（过夜法和快速法），进行对比和评价用ELISA定性检测麻疹病毒血清IgM抗体时，由于某些试剂盒内提供的阴/阳性对照
血清只能定性指示，无OD值参考范围，因此凭借试剂盒内阴/阳性对照血清指示
有时会造成检验结果的失控而出现假阴/阳性结果。
为了提示检测结果的误差，本文制备了试剂盒外的对照血清，专门针对临界值标本进行控制，实验及评价过程
如下。
1.材料和方法
1.1 标本来源
选择近年来收集的麻疹IgM抗体ELISA检测OD临界值附近血清标本共200份。
1.2 检测试剂
麻疹IgM抗体ELISA检测试剂盒购自广东珠海海泰生物制药有限公司（以下
简称海泰公司，批号为20151108、20151110、20151117和20151123）。
1.3 检测方法
用海泰公司出品的上述4个批号麻疹IgM抗体检测试剂盒定性检测，采用捕
获ELISA 法。
1.4 统计学方法
用SPSS 17.0统计学软件，计量资料以均数±标准差（x-±s）表示，计数资料以百分比表示。
分别采用单因素方差分析（ANOVA）和χ2检验，以P＜0.05为差异
有统计学意义。
2.结果
2.1 ELISA 法检测麻疹IgM抗体结果
用海泰公司4个批号ELISA试剂对OD值临界的200份血清进行检测并比较结果，计算每种试剂检测阳性率；将海泰公司4个批号试剂的检测结果与Virion 公
司试剂检测结果比较并计算符合率。
结果发现，海泰公司批号为20151108试剂盒麻疹IgM抗体检测阳性率和符合率分别为3.5%和64.8%，明显低于其余批号试剂盒检测结果（P＜0.01），而海泰公司其它批号试剂盒的检测阳性率和符合率差异无统计学意义（P＞0.05），结果见表1。
3.讨论
1954年Enders与Peebles应用人胚肾细胞培养麻疹病毒获得成功之后，多位学者开始研制麻疹疫苗以控制麻疹的传染[2]。
我国于1965年开始使用麻疹减毒活疫苗，可靠地保护了绝大多数9～12个月乃至年龄更大的儿童。
然而，由于麻疹疫苗的广泛使用，接触野毒株的机会少，体内抗体水平逐年减少，最终可导致不能完全抵御麻疹病毒的侵袭，出现不典型的临床表现。
于是有效的检测方法对麻疹的诊断和及时的治疗起着重要作用。
在麻疹实验室日常检测工作中发现，选用某试剂盒进行麻疹IgM 定性检测时，有时阴/阳性对照虽然正常显色，却不能提示试剂误差，很容易出现假阴/阳性结果。
为了弥补试剂盒内阴/阳性对照的缺陷，本文参照相关方法制备了标准外对照血清，并且测定了其活性值和对于特定公司试剂的OD 值范围[1]。
本次研究发现，某一批号试剂与其他批号试剂之间检测阳性率和符合率有明显差异。
可见，对于检测阳性率和试剂间检测结果符合率均有差异的批号为20151108试剂盒，外对照血清9次复核OD值均在0.632～0.675参考值范围以外；而对于检测结果符合率很好的批号为20151117和20151123试剂盒，9次复核OD值均在参考值范围以内。
由此，用某试剂盒检测时根据外对照血清OD值是否失控就能指示试剂盒误差，提示检测结果失控。
总之，制备麻疹IgM抗体外对照血清对控制麻疹IgM ELISA检测质量有重要意义。
【参考文献】
[1]杨屹，刘雪娟，孟茹，等.弱阳性外部对照质控血清的制备方法[J].中国国境卫生检疫杂志,2004,27(5):269-270.
[2]蒋泓，许文波，Sato Takeshi.乳胶凝集法检测麻疹IgM抗体的应用[J].中国计划免疫，2003,9(2):98-100.
[3]王虹玲.两种ELISA试剂检测麻疹病毒IgM抗体实验室对比与评估[J].中国卫生检验杂志，2007,17(10):1817-1818.。
