动物模型的复制方法-最新教育文档
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第四节动物模型的复制方法一、复制方法和应用动物疾病模型的复制,是用人为的方法,使动物在一定的致病因素(物理的、化学的、生物的)作用下,造成动物组织、器官或全身一定损害,出现某些类似人类疾病的功能、代谢、形态结构方面的变化或各种疾病,通过这种手段来研究人类疾病的发生、发展规律,为研究人类疾病的预防、治疗(包括新药物试用)提供理论依据。
所以动物疾病模型的复制,在医学科学研究中占有十分重要的地位。
目前我国生物医学科学研究中,动物疾病模型主要用于三个方面:即实验生物学、实验病理学和实验治疗学(新药筛选亦属于实验治疗学范畴)。
由于研究目的不同,对于疾病模型的要求也有所区别。
如实验病理学,它着重于研究用某种特定方法复制出某些疾病。
整个疾病复制过程,就是它的研究内容,目的是通过疾病的复制去探讨疾病的病因学和发病原。
而实验治疗学则完全不同,疾病的复制仅是它研究的开始,因为它的主要目的是为了阐明在该病的发生发展过程中,某些治疗措施或药物的疗效如何。
诱发性动物模型的复制方法不外是用生物的、物理的、化学的和各种环境因子作用于动物而产生。
生物学因素包括细菌、病毒、寄生虫、细胞、生物毒素、激素等各种致病原,通过接种而使正常动物发生疾病。
如接种细菌、病毒于敏感动物使其产生各种传染病。
目前已知的150余种人畜共患病提供了极有意义的传染病材料。
从流行病学、病理学或并发症等不同角度研究,首先要充分了解动物与人在疾病易感性和临床表现等方面的同异处。
例如轮状病毒可引起婴儿急性坏死性肠类,犬感染轮状病毒后的表现只是亚临床的。
然而严重威胁幼犬的肠道病毒是细小病毒,而人对细小病毒则并不易感。
物理因素是多方面的。
例如在机械力作用下产生各种外伤性脑损伤、骨折等模型,气压变动复制高空病、潜水病;温度改变产生各种烧伤和冻伤;放射线照射可复制各型放射病,引起免疫功能抑制或诱发Spragae-Dawley系大鼠乳腺癌;闪光刺激诱发癫痫模型;噪音刺激引起听源性高血压及改变行为记忆功能等。
动物克隆的基本过程
嘿,朋友们!今天咱来聊聊动物克隆这神奇的事儿。
你说这克隆就像是变魔术一样,能复制出一个一模一样的动物来。
咱先说说这细胞吧,就好像是动物身体的小零件。
要克隆呀,就得先找到合适的细胞。
这就好比你要盖房子,得先找到好的砖头不是?然后呢,把这个细胞放到一个特殊的环境里,就像给小零件找了个特别的家。
接下来,就有个关键的步骤啦!得把这个细胞和一个卵细胞结合起来。
这就像是把两个不同的拼图块拼在一起,组成一个新的整体。
这可不是随随便便就能成功的哦,得非常精细地操作才行。
然后呢,这个新的组合就开始发育啦!就像一颗种子开始发芽、长大。
慢慢地,它就会长成一个和原来的动物几乎一样的新生命。
你说神奇不神奇?
想想看啊,如果我们能把那些珍稀的动物都克隆出来,那不是能保护它们不灭绝了吗?这多好呀!但是,这也不是没有问题的哟。
比如说,克隆出来的动物真的能和原来的完全一样吗?它们的性格、行为会不会有差别呢?这都是值得我们思考的问题呀。
而且啊,克隆也不是随便就能做的。
这需要很高的技术和很严格的条件。
可不是我们在家里就能随便试试的,那可不行!要是弄错了,那可就麻烦啦。
不过呢,虽然有这些问题,动物克隆还是给我们带来了很多希望和可能性。
说不定以后我们能通过克隆技术做出很多对我们人类有益的事情呢。
总之,动物克隆是个既神奇又复杂的事情。
我们既要看到它的好处,也要注意它可能带来的问题。
我们要好好地研究它,让它为我们的生活带来更多的好处,而不是坏处。
你们说是不是这个理儿呀?。
动物模型的设计原则和注意事项一、设计原则生物医学科研专业设计中常要考虑如何建立动物模型的问题,因为很多阐明疾病及疗效机制的实验不可能或不应该在病人身上进行。
常要依赖于复制动物模型,但一定要进行周密设计,设计时要遵循下列一些原则。
(一)相似性在动物身上复制人类疾病模型。
目的在于从中找出可以推广(外推)应用于病人的有关规律。
外推法(Extrapolation)要冒风险,因为动物与人到底不是一种生物。
例如在动物身上无效的药物不等于临床无效,反之也然。
因此,设计动物疾病模型的一个重要原则是,所复制的模型应尽可能近似于人类疾病的情况。
能够找到与人类疾病相同的动物自发性疾病当然最好。
例如日本人找到的大白鼠原发性高血压就是研究人类原发性高血压的理想模型,老母猪自发性冠状动脉粥样硬化是研究人类冠心病的理想模型;自发性狗类风湿性关节炎与人类幼年型类风湿性关节炎十分相似,也是一种理想模型,等等。
与人类完全相同的动物自发性疾病模型毕竟不可多得,往往需要人工加以复制。
为了尽量做到与人类疾病相似,首先要注意动物的选择。
例如,小鸡最适宜做高脂血症的模型,因它它的血浆甘油三酯、胆固醇以及游离脂肪酸水平与人十分相似,低密度和极低密度脂蛋白的脂质构成也与人相似。
其次,为了尽可能做到模型与人类相似,还要在实践中对方法不断加以改进。
例如结扎兔阑尾血管,固然可能使阑尾坏死穿孔并导致腹膜炎,但这与人类急性梗阻性阑尾炎合并穿孔和腹膜不一样,如果给兔结扎阑尾基部而保留原来的血液供应,由此而引起的阑尾穿孔及腹膜炎就与人的情况相似,因而是一种比较理想的方法。
如果动物型与临床情况不相似,在动物身上有效的治疗方案就不一定能用于临床,反之也然。
例如,动物内毒性性休克(Endotoxin Shock,单纯给动物静脉输入细菌及其毒素所致的休克)与临床感染性(脓毒性)休克(Septic Shock)就不完全一样,因此对动物内毒素性休克有效的疗法长期以来不能被临床医生所采用。
动物模型的复制原则嘿,各位爱动物的小伙伴们,今天咱们来聊聊动物模型的复制原则。
其实啊,这事儿听起来挺高大上的,但实际上,咱们生活中随时随地都在进行这种复制,只不过换了个形式罢了。
我是个模型爱好者,家里堆满了各种动物模型,从憨态可掬的大熊猫到神气活现的狮子,应有尽有。
要说起这些模型的复制原则,还真有几个秘诀呢。
首先,你得有颗爱动物的心。
你看,我制作这些模型之前,总是先观察它们在自然界中的样子,想象它们生活的环境,这样模型才能更贴近真实。
比如,我制作大熊猫的时候,就会想它那可爱的黑眼圈和圆滚滚的身材,然后再动手制作,这样才能做出让人一看就喜欢的模型。
其次,比例得合适。
这就像咱们拍照,要是比例失调了,人物再好看也会让人觉得别扭。
动物模型也是如此,头身比啊,四肢长度啊,都得恰到好处。
我记得有一次,我制作的猴子模型,因为头部比例过大,结果看起来就像个“大头儿子”,逗得我直想笑。
再来就是细节处理。
细节决定成败,这句话用在动物模型上再合适不过了。
你像动物的毛发、纹理,还有它们那独特的表情,都是体现生命力的关键。
我记得有一次,我为了制作一个逼真的豹子模型,特意查阅了大量的资料,连豹子身上的斑纹都是一点一点画上去的。
然后,材料也很关键。
不同的动物,适合不同的材料。
比如,我制作鸟类模型时,就会选择轻便的木头,这样模型才会飞得起来。
而制作大型猛兽模型,就得选用坚固的材料,不然稍一用力就坏了。
说到这,我想起有一次和好友小明讨论动物模型的事情。
小明是个艺术家,他问我:“你觉得,一个模型最重要的品质是什么?”我脱口而出:“真实感。
”他笑了笑,说:“那你看看我的作品,是不是也很有真实感?”我一看,果然,他制作的动物模型,仿佛要从画布上跃出来一样,栩栩如生。
总之,动物模型的复制原则就是用心观察、把握比例、注重细节、选择合适的材料,再加上那么一点点的创意。
只要你热爱动物,喜欢动手,其实每个人都可以成为一个优秀的模型师。
嘿,说不定哪天,你的作品就能登上展览馆,吸引一大波观众呢!。
动物模型复制的基本原则动物模型复制的基本原则,听起来有点高深,其实没那么复杂,反正我理解就是:用小动物们来帮咱们搞明白一些咱们自己不容易直接知道的事。
你看,咱们人类就喜欢找捷径,尤其是做实验的时候,实验都贵得很,时间也不等人,所以要做个动物实验,能用小动物代替人类,那效率可就高了。
所以啊,这就有了“动物模型”的说法。
简单来说,动物模型就是通过某种方式让小动物身上模拟出人类的一些生理、病理情况,看看它们怎么反应,咱们就能从中得出一些结论。
听着不难吧?其实要做好一个动物模型,并不是什么都能随便复制的,得有些基本原则,咱们不能像个小孩一样胡乱模仿,得按规矩来。
首先呢,动物模型必须要具备代表性。
你想啊,做个实验,怎么也得找个靠谱的代替品。
举个例子,咱不能拿只狗来做一个肝癌的实验,虽然狗的肝脏也很重要,但它跟人的肝脏比起来,能差出一大截。
人和狗,生理结构差异还是挺大的。
所以,要选对动物,得确保它的生理特点和你想研究的病症有点关系,否则实验就会完全失真,到最后什么也看不出来。
像是研究心血管问题,常用的实验动物就是大鼠和兔子,毕竟它们的心脏结构比较接近人类,研究结果才有参考价值。
然后呢,选择的动物必须健康。
健康的动物才能代表正常的生理状态,不然你搞个生病的动物来做实验,那这实验就变成了“看病”,根本不能用它来说明什么普遍性的问题。
你想想,如果一个人已经得了癌症,能代表普通人的身体情况吗?显然不能。
所以,选动物时得小心,不能让它们带着病来做实验,避免搞出假数据,给科研工作添麻烦。
再来呢,实验环境也得讲究。
咱们常说,环境决定一切,实验环境也不例外。
别看咱们人类能忍受各种奇怪的环境,小动物们可不是那么好糊弄的。
环境太嘈杂,或者温度湿度不合适,动物的身体状态就会受到影响,影响实验结果。
环境控制不好,动物自己都不舒服,怎么可能配合你做实验?咱们做实验不是瞎折腾,要考虑动物的生理需求,给它们合适的居住空间,尽量减少干扰,让它们能自然地生活下去,这样才有数据的意义。
中医证候动物模型复制管见随着科学的发展,中医药学的研究已经完全突破了长期以来以经典校注、引证发挥和临床诊治观察为主的传统模式,实验研究已成为中医科研方法体系的一个重要组成部分。
而在实验研究当中,中医证候动物模型的复制更是开展中医证候及中药新药实验研究的一个重要途径,以其实证性研究方法为广大中医药和中西医结合工作者采用。
近年来,为了探索中医证候动物模型的研制,诸多医家在此方面进行了广泛的研究,取得了较为理想的效果,然而仍存在许多问题需深入探讨,有待进一步的充实完善,笔者不揣浅陋,试探讨建立中医证候动物模型需要注意的有关问题。
1中医证候动物模型需要在中医基础理论体系的指导下研制中医证候动物模型是在中医学整体观念及辨证施治思想指导下,运用脏象学说和病因病机理论,把人类疾病原型的某些特征在动物身上加以模拟复制而成,是中医学人体证候的具体再现。
而中医的证是一个综合的症状群,它是疾病发生、发展过程中特定阶段的病理变化,有着深刻的病因病机理论。
是辨证论治的起点和核心,也是中医证候动物模型的灵魂。
只有在中医理论体系指导下研制的中医证候动物模型,才可以从根本上基本等同于人体临床证候,才具有现实意义。
而目前部分中医证候动物模型的复制。
不是在中医理论体系的指导下,而是纯粹利用化学药物造成一种类似中医的某一“证”的病理状态。
这种与中医临床貌合神离的模型或许实际上只是某些西药引起的毒性反应或机械损伤,出现的病理状态和中医的证候生拉硬套,难免有牵强附会之嫌。
比较典型的如采用注射大剂量外源性醋酸氢化可的松制作阳虚动物模型,四氯化碳肝毒性制作肝阴虚动物模型,利血平毒性制作脾虚动物模型,肾皮质电灼伤诱发“肾阳虚”动物模型等等。
笔者认为,中医证候动物模型所揭示的应该是中医学的基本内涵,这种利用西药造成的中毒反应和病理状态来苟合中医证候之表象,是难以模拟出人体证候之本质的,是不可取的,更是经不起推敲的。
我们应当在中医理论的指导下从本质上对证候进行复制,从而使实验模型和临床人体达到尽可能的一致,为中医证候的实验研究提供真实而可靠的依据。
转基因动物模型的制作步骤及方法
(1)复制方法主要采用转基因技术建立该模型。
(2)模型特点目前已制备成功的PD遗传模型主要有α-synuclein转基因小鼠和转基因果蝇。
高表达人类α- synuclein的转基因小鼠具有PD的部分特征,如纹状体DA神经末梢丢失,在胞浆有α-synuclein 和ubiquitin阳性的包涵体形成,运动功能障碍。
这些转基因小鼠包涵体与人类Lewy小体有差别,主要表现在缺乏纤维样结构特征。
有时在细胞核内也可见到包涵体,这与人类PD明显不同。
一些转基因小鼠只有包涵体形成和运动功能障碍但无DA能神经元变性,这些小鼠脑干运动神经元病变更明显。
还有一个现象是野生型与突变型转基因小鼠病理改变基本一样。
α- synuclein转基因果蝇具备PD的一些重要特征,包括DA能神经元缺失,神经细胞内包涵体形成,运动功能障碍等。
由于果蝇的遗传规律研究较透彻加上寿命较短,这一模型对了解某些新蛋白在PD发病机制中的作用有重要价值。
(3)比较医学多数PD为散发,遗传因素不起主要作用。
在PD人群中家族性PD占少数的病例,其遗传因素起关键作用,目前至少已发现两个家族性PD致病基因,包括α-synuclein和Park in。
可表达与PD发病有关的野生或突变基因的转基因动物,可作为PD遗传模型,用于相关致病基因的致病机制、环境因素与遗传因素的相互作用等方面的研究。
人类疾病动物模型复制方法学嘿,咱今儿就来唠唠这人类疾病动物模型复制方法学。
你说这动物模型,那可真是个神奇的存在呀!就好像是我们打开人类疾病奥秘大门的一把钥匙。
咱先说说物理因素诱导法。
这就好比给动物来一场特别的“洗礼”,通过一些物理手段,比如高温、低温、辐射啥的,让动物也体验体验咱人类可能会遇到的极端情况,从而模拟出相应的疾病状态。
你想想,这不就像是给动物制造了一个特殊的小环境,让它们在里面产生和人类相似的反应嘛!化学因素诱导法也很有意思。
给动物喂点特别的“食物”或者让它们接触些特殊的“玩意儿”,就能让它们得上特定的病。
这就好像是给动物设了个小圈套,它们不知不觉就掉进去了,然后就呈现出我们想要的疾病状态啦。
还有生物因素诱导法呢!让动物感染一些特定的病原体,这不就跟我们人类被细菌、病毒啥的盯上差不多嘛。
它们也会生病,也会有各种症状,这多神奇呀!咱再说这转基因动物模型。
哎呀呀,这可真是高科技呀!直接把人类的基因给弄到动物身上,让动物变成“小人类”,生和人类一样的病。
这就好像是给动物来了个大变身,一下子就变得和我们息息相关了。
还有呢,自发疾病动物模型。
有些动物自己就会得一些和人类类似的病,这可真是大自然的奇妙安排呀!就像是老天爷特意给我们准备的一样,让我们可以好好去研究。
那我们为啥要搞这些动物模型呢?这还用问吗?不搞这些,我们怎么去深入了解那些复杂的疾病呀!动物模型就像是我们的小助手,帮我们探路,让我们能更快地找到治疗疾病的方法。
你说要是没有这些动物模型,我们得走多少弯路呀!我们得花多少时间和精力去摸索呀!有了它们,我们就能少走很多冤枉路,能更快地为患者带来希望。
而且呀,通过研究这些动物模型,我们还能发现很多以前不知道的疾病机制和治疗靶点呢!这可都是宝贝呀!当然啦,在复制这些动物模型的时候,我们也要小心谨慎,要确保方法科学合理,不能瞎折腾动物。
毕竟动物也是有生命的,我们得尊重它们。
总之呢,人类疾病动物模型复制方法学真的是非常重要且有趣的一门学问。
多发性硬化动物模型的复制
郭德玉;李宗信;李斌
【期刊名称】《中国比较医学杂志》
【年(卷),期】2006(16)12
【摘要】目的复制慢性复发性实验性变态反应性脑脊髓炎(CrEAE)的动物模型.方法采用豚鼠脊髓匀浆及完全福氏佐剂,对6周龄雌性Hartley豚鼠颈后皮内一次性致敏,对照采用用生理盐水代替脊髓匀浆.致敏后每日进行致残程度评分,并称取体重.结果模型组100%的动物发病,83.3%的动物在2月内有复发,2月内平均发病次数为2.0±0.63次.对照组无一发病.结论本研究成功地复制了CrEAE豚鼠模型,是目前较好的多发性硬化动物模型.
【总页数】2页(P731-732)
【作者】郭德玉;李宗信;李斌
【作者单位】首都医科大学宣武医院,教育部精神变性病学重点实验室,北
京,100053;首都医科大学宣武医院,教育部精神变性病学重点实验室,北
京,100053;New York State Institute for Basic Research in Developmental Disability, New York
【正文语种】中文
【中图分类】R-33
【相关文献】
1.JAK/STAT通路及其抑制剂在多发性硬化和EAE动物模型中的作用 [J], 孙哲;赵聪颖;郭力
2.多发性硬化动物模型研究进展 [J], 彭真;张礼标;吴洁;孙云霄
3.多发性硬化实验动物模型的研究进展 [J], 吕亚楠; 喻志敏; 杨丹
4.多发性硬化实验动物模型的研究与应用进展 [J], 赵培源;陈少昀;刘喜红;杨丽萍
5.多发性硬化相关动物模型的最新进展 [J], 彭永;周建雄;陈之兴;杨欢
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动物模型的复制方法肿瘤模型的复制方法复制动物肿瘤的方法很多,如将实验动物用放射线照射或静脉、局部注射放射性同位素;使用各种化学致癌剂(烷化剂、多环芳香烃类、芳香胺类、氨基偶氮染料、亚硝胺类);使用植物毒素(如苏铁素、黄樟素等);使用金属(如铬、镍、砷、镉等);使用RNA和DNA肿瘤病毒;使用多种致癌性霉菌毒素(其中致癌作用最强者为黄曲霉素)等,均可诱发成各种肿瘤。
诱发性肿瘤模型其数量在诱发性动物模型中占首位。
一般是利用致癌物质通过口服、注入、埋藏和涂抹等方式使动物发生肿瘤。
能诱发动物肿瘤的病毒也有不少报导,例如小鼠白血病病毒(MLV)、鸡白血病病毒(ALV)和猫白血病病毒(FLV)分别能引起大小鼠,鸡和猫白血病。
Rous鸡肉瘤病毒可使田鼠、鸡、鸭、鹌鹑、猴、蛇等多种动物发生肉瘤。
猫肉瘤肉毒(FSV)可使大鼠、猫、犬和猴发生肉瘤。
人类腺病毒能诱发小鼠、田鼠肉瘤和淋巴瘤。
(一)诱发性肿瘤动物模型1.肝癌二乙基亚硝胺(DEN)诱发大白鼠肝癌:取体重250g 左右的封闭群大白鼠,雌雄不拘。
按性别分笼饲养。
除给普通食物外,饲以致癌物,即用 0.25%DEN水溶液灌胃,剂量为10mg/kg,每周一次,其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中,任其自由饮用。
共约4个月可诱发成肝癌。
或单用0.005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。
4-2甲基氨基氮苯(DBA)诱发大鼠肝癌:用含0.06%DBA的饲料喂养大鼠,饲料中维生素B2 不应超过1.5~2mg/kg,4~6月就有大量的肝癌诱发成功。
2-乙酰氨基酸(2AAF)诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌:给成年大鼠含0.03% 2AAF标准饲料。
每日每平均2~3mg2AAF(也可将2AAF混于油中灌喂),3~4月后有80~90%动物产生肝肿瘤。
二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌:用剂量为每日0.3~14mg/kg体重,混于饲料或饮水中给予,6~9个月后255/300大鼠发生了肝癌。
亚胺基偶氮甲苯(OAAT)诱发小鼠肝癌:用1%OAAF苯溶液(约0.1ml含1mg)涂在动物的两肩胛间皮肤上,隔日一次,每次2~3滴,一般涂100次。
实验后7~8周即而出现第一个肝肿瘤,7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。
或用2.5mgOAAT溶于葵瓜子油中,给C3H小鼠皮下注射4次,每日间隔10天,也可诱发成肝癌。
黄曲霉素诱发大鼠肝癌:每日饲料中含0.001~0.015ppm,混入饲料中喂6个月后,肝癌诱发率达80%。
2.胃癌甲基胆蒽诱发小鼠胃癌:取20g左右的小鼠,无菌手术下,在腺胃粘膜面穿挂含甲基胆蒽(MC)线结。
含MC的线结是用普通细线,在一端打结后,将线结置于盛有MC小玻璃试管内,在酒精灯上微微加温,使MC液化渗入线结。
MC浓度为0.05~0.1g20-甲基胆蒽内浸入10~20根线。
手术埋线后4~8个月可诱发成功胃癌。
用不对称亚硝胺,剂量为0.25ml/kg体重,3个月后全部动物发生前胃乳头状癌,7~8个月后有85~100%发生前胃癌。
昆明种最敏感。
A系次之,615系小鼠敏感性最差。
此外还可用甲基亚硝基醋酸尿素给BD大鼠饮水中加2mg/kg体重,每周5次饮用,520天后全部大鼠均发生了腺胃癌。
3.食管癌甲基苄基亚硝胺(MBNA)诱发大鼠食管癌:取体重100g以上的Wistar大鼠,任其食用含甲基苄基亚硝胺的饮水,并将MBNA掺入饲料中使每日摄入量达0.75~1.5mg/kg 体重。
80~100天可诱发成食管癌。
也可用二烃黄樟素(Dihydrosafrole),它是一种制备啤酒的调味品,在大鼠饲料中加入百万分之二千五百至一万(2500~10000ppm)黄樟素,就能引起20~75%的食管癌。
用0.2%或0.005% 的甲基苄基亚硝胺水溶液,给动物经口灌喂,每天一次,大鼠灌注剂量为1mg/kg体重,至第27天即发现一例食管乳头状瘤,154天发现第一例食管癌, 11个月食管癌的发生率为53%。
4.肺癌二乙基亚硝胺(DEN)诱发小鼠肺癌:小白鼠每周皮下注射1%DEN水溶液一次,每次剂量56mg/kg,DEN总剂量达到868mg,观察时间为100天左右时,发癌率可达40%。
而DEN总剂量达到1176mg,观察时间为半年左右时;发癌率可达94%。
乌拉坦诱发肺腺癌:小鼠(A系, 1~11/2月龄)较大鼠敏感,每次每只腹腔注入10%乌拉坦生理盐水液0.1~0.3ml,间隔3~5日再注,共注2~3个月,每只小鼠用量约为 100mg,注后3个月肺腺癌发生率为100%,而且多数为多发性,这种诱发瘤为良性。
此外还可用气管内注入苯并芘、硫酸铵气溶胶、甲基胆蒽等诱发肺癌。
如猴气管内注入3,4苯并芘(苯并花为3~15mg与等量之Fe2O3混合液),每周一次,共10次,6只猴中有2只诱发肺的鳞状上皮癌。
亦有人用硫酸胺气溶剂给100只大鼠吸入,13个月后所有大鼠都发生了肺腺癌。
用0.2%明胶作悬浮剂将甲基胆蒽混合后给金地鼠气管内注入,每次0.1ml(含甲基胆蒽 5mg)每周一次,共6次,53周后有62.5%动物发生了肺癌。
5.鼻咽癌二甲基胆蒽(MC)诱发大鼠鼻咽癌:取直径2~3mm的硬质塑米管,在酒精灯上小火拉成锥形,每段长约3.5cm,管内填以结晶体MC。
小管一端用火封闭,以防药物外溢,尖端用针刺数孔,使MC能从小妃溢出。
取体重120g 左右的大白鼠,雌雄均可,乙醚麻醉后,由前鼻孔将上述含MC的塑料小管插入鼻腔,利用前鼻孔较小管粗端为小的特点,稍加用力,迫使小管全部进入鼻腔内,其尖部可达鼻咽腔。
不需另加固定,即可使小管长期留于鼻腔内。
待到预定时间(半年以上),或动物自行死亡时,到其鼻咽部,10%福尔马林固定,脱钙后,石蜡包埋,进行连续切片。
发癌率可达60%以上。
二乙基亚硝胺滴鼻法诱发鼻咽癌:取120g左右大白鼠,雌雄均可,乙醚麻醉后,用磨平针尖的8号针头,从前鼻孔轻轻插入,针尖可达鼻咽腔。
经注射器灌注用1%吐温-80新配的 33.3%DEN混悬液0.02ml(含DEN6.7mg)每周1次,共15~20次,可诱发成鼻咽癌。
6.宫颈癌取雌性小白鼠,以附有0.1mgMC的棉纱线结在动物不麻醉的状态下,借助于阴道扩张器及磨纯的弯针,将线穿入宫颈。
经右宫角背部穿出,使线结固定于宫颈口。
线的另一端则固定于背部肌肉,缝合皮肤,挂线以后,同日开始连续注射青霉素2~3天。
以防术后感染。
至一定时间(半年左右)处死动物,宫颈组织用10%福尔马林固定,石蜡包埋,连续切片。
7.结肠癌给四周龄的雄性大白鼠,皮下注射二甲基苄肼(Dimethlhydrazine,DMH)每周一次,连续21周,每次DMH21mg/kg。
最后一次给药后1~4周,处死动物。
降结肠部位用Bouin液固定,脱水,石蜡包埋,切片。
所用之DMH 先配成每100ml含 400mg的母液,并加EDTA37mg,用氢氧化纳(0.1N)液将pH调至6.5备用。
(二)移植性肿瘤动物模型目前临床所用的抗肿瘤药中,大多数是经动物移植性肿瘤试验筛选而发现的。
应用动物移植性肿瘤筛选药物的优点是:使一群动物同时接种同样量的瘤细胞,生长速率比较一致,个体差异较小,接种成活率近100%,对宿主的影响相类似,易于客观判断疗效,可在同种或同品系动物中连续移植,长期保留供试验用,试验周期一般均较短,试验条件易于控制等。
因此目前抗肿瘤药筛选大多数采用动物移植瘤作为筛选模型。
目前世界上保存的动物移植肿瘤约有400株,但筛选试验常用者仅20~30种。
据1984年统计,我国在同系、同种动物中已建立各种动物和人的常见的瘤株64个。
例如小鼠肺腺瘤(HP615)、小鼠子宫颈瘤27 号(U27)、小鼠脑瘤22(B22)、小鼠淋巴细胞性血病(L615)、裸鼠人肝瘤移植瘤和人脑恶性胶质细胞瘤(NCS—1)等。
动物肿瘤可通过移植传代而培养出所需要的肿瘤细胞株。
瘤株是一种组织学类型和生长特性已趋稳定,并能在同系或同种动物中连续传代的肿瘤细胞模型。
肿瘤移植于健康动物,相当于活体组织培养,可长期保存瘤种,供实验所用。
实验中常用腹水瘤和实体瘤两种方式进行移植。
对于会产生腹水的肿瘤,可将其一定数量的细胞注入受体动物腹腔形成腹水瘤或产生腹水。
实体瘤移植也是在无菌条件下,把实体瘤切成2~3mm小块,植于受体动物皮下。
自体式同系动物肿瘤植不产生排导现象。
同种动物移植时可结合注射肾上腺皮质激素、抗肿瘤药物和适当量的放射等方法,降低宿主免疫排斥反应。
异种动物肿瘤移植始于Leidy (1834年),难度较大。
近50年来异体移植常用下列方法:①接种于皮下或粘膜下,优点是易观察,但排斥作用大,效果欠佳。
②动物肿瘤移植于鸡胚尿囊膜。
特点是较易存活,但人类肿瘤无成功报导。
③人类肿瘤接种于大鼠、豚鼠、兔的眼前房。
缺点是细胞不能传代。
④移植于动物脑内。
肿瘤生长快,但难度大,不易观察。
1983年Bodgen等人用无胸腺大鼠肾包膜下移植人体肿瘤筛选新药,全部实验仅需11天,且命中率高,这项工作为临床病人的药物筛选带来了福音。
60年代以来国外已建立可移植性人体肿瘤数百种,这些瘤株能防止由传代伴随的形成和功能的退化。
1969年Rygaaid首次成功地将人类肿瘤移于无胸腺裸小鼠,这为异种动物肿瘤移植开辟了新局面。
由于裸小鼠缺乏T淋巴细胞功能,所以是极为理想的肿瘤移植模型材料。