实验二 沉淀反应(2015修改)

实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。

熟悉蛋白质的沉淀反应，进一步熟悉蛋白质的有关反应。

二、实验原理蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。

不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。

颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应，因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。

另外，颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。

蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相对的。

如果条件发生了变化，破坏了蛋白质的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。

三、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、ph试纸6、水浴锅7、移液管四、实验试剂1、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍，3-4层纱布过滤，滤液放在冰箱里冷藏备用。

2、 0.5%苯酚：1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。

3、millon’s试剂：40g汞溶于60ml浓硝酸（水浴加温助溶）溶解后，冷却，加二倍体积的蒸馏水，混匀，取上清夜备用。

此试剂可长期保存。

4、尿素晶体5、1%cuso：1g cuso晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml 446、10%naoh：10g naoh溶于蒸馏水，稀释至100ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.9、冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液：100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。

12、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。

13、95%乙醇。

14、醋酸铅溶液：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、10%三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液：100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。

18、1%醋酸溶液。

五、实验步骤蛋白质的颜色反应（一）米伦（millon’s）反应1、苯酚实验：取0.5%苯酚溶液1ml于试管中，加millon’s试剂0.5ml，电炉小心加热观察颜色变化。

实验二沉淀反应一、实验目的1、了解沉淀的生成、溶解和沉淀的转化条件，掌握沉淀平衡，同离子效应以及溶度积原理。

2、学习离子分离操作和同离子效应和电动离心机的使用。

二、实验的内容1、沉淀的生成和溶解①查表得：PbI2的ksp为7.1×10-9取1d 0.1mol/L的Pb（NO3）2+9d水，取1d+9d水，配成1×10-3mol/L的Pb（NO3）2溶液取1d 0.1mol/L的kI+9d水，取其中1d+9d水，再取1d+1d 水+首先配好的1×10-3mol/L的Pb（NO3）2溶液2d→不出现黄色沉淀，溶液无变化。

计算：Q=【pb2+】·【I-】2=25/8×10-11﹤ksp计算值也不应该有沉淀。

反应方程：pb2++ 2I-≒pbI2实验结论：1、计算结果与实际相符，Q﹤ksp，不出现沉淀2、没看到pbI2黄色沉淀，不等于不存在pbI2，溶液中还是存在少量的pbI2②查表得：pbs的ksp=8×10-28 pbcro4ksp=2.8×10-13取1d 0.1mol/L的Na2S+1d0.1mol/L的k2cro4,稀释至2.5mL 取1d上述溶液+1d 0.1mol/L的Pb（NO3）2→有棕黄色的混合沉淀出现。

计算：Q﹙pbs﹚=【S2-】【pb2+】=4×10-6﹥其kspQ﹙pbcro4﹚=【S2-】【cro42-】=4×10-6﹥其ksp反应方程：pb2++ S2-≒pbs pb2++ cro42-≒pbcro4实验结论：只要Q﹥ksp，就会出现沉淀，在同一溶液中也不会因沉淀的ksp的大小而出现沉淀的先后，而是同时沉淀。

如随着某离子的加入，Q先达到某个沉淀的ksp，后达到另一个沉淀的ksp，这是才会出现沉淀的先后之分。

2、沉淀的溶解和转化1d 0.1mol/L Pb（NO3）2+2d 0.1mol/L NaCL→Pbcl2↓（白色）+2d 0.1mol/L kI溶液→pbI2↓(黄色) {离心，去掉上清液→稀释至0.5mL}+饱和Na2so4晶体→ pbso4↓(白色) +0.1mol/L k2cro4→pbcro4↓（黄色）+2~3d 0.1mol/L k2S→pbs↓(黑色) {离心，取上清液，颜色为粉红色}★查表得：ksp（Pbcl2）=1.6×10-5 ksp（pbI2）=7.1×10-9 ksp（pbso4）=1.6×10-8ksp（pbcro4）=2.8×10-13 ksp（pbs）=8×10-28★计算：例Pbcl2转化为pbI2的过程：Pbcl2+ 2I-≒pbI2+2cl-K°=【cl-】2/【I-】2=【pb2+】【cl-】2/【pb2+】【I-】2= ksp （Pbcl2）/ ksp（pbI2）=1.6/7.1×104K°值越大，沉淀转化的越完全，对同一类型的沉淀来说，溶度积越大的沉淀越易转化成溶度积小的沉淀对ksp小→ksp大的方向进行的特例：ksp（pbI2）/ ksp（pbso4）=【pb2+】【cl-】2/【pb2+】【so42-】推出→【so42-】min=0.16/7.1 因此Na2so4晶体或饱和Na2so4溶液满足此条件。

沉淀反应实验报告实验目的：通过观察不同物质间的沉淀反应，了解沉淀反应的特点及其影响因素。

实验原理：沉淀反应是指在两种溶液混合时，由于生成了不溶于水的沉淀物而产生的化学反应。

在此类反应中，通常会发生离子之间的置换反应，生成不溶于水的沉淀。

沉淀反应的发生需要满足两种溶液中存在的阳离子和阴离子能够形成不溶于水的盐类化合物，这种反应通常在溶液中加入一种沉淀剂后发生。

实验材料：1. 硝酸银溶液。

2. 氯化钠溶液。

3. 硝酸铜溶液。

4. 碳酸钙溶液。

5. 硝酸钡溶液。

6. 硫酸铜溶液。

实验步骤：1. 取一小部分硝酸银溶液倒入试管中；2. 分别加入少量氯化钠溶液和硝酸铜溶液，观察产生的沉淀情况；3. 取一小部分碳酸钙溶液倒入试管中；4. 加入少量硝酸铜溶液，观察产生的沉淀情况；5. 取一小部分硝酸钡溶液倒入试管中；6. 加入少量硫酸铜溶液，观察产生的沉淀情况。

实验结果：1. 在硝酸银溶液中加入氯化钠溶液后产生了白色沉淀，反应方程式为AgNO3+ NaCl → AgCl↓ + NaNO3；2. 在硝酸银溶液中加入硝酸铜溶液后未观察到明显沉淀产生；3. 在碳酸钙溶液中加入硝酸铜溶液后未观察到明显沉淀产生；4. 在硝酸钡溶液中加入硫酸铜溶液后产生了白色沉淀，反应方程式为Ba(NO3)2 + CuSO4 → BaSO4↓ + Cu(NO3)2。

实验分析：通过本次实验，我们观察到了不同物质间的沉淀反应。

在硝酸银溶液中，氯化钠与硝酸银发生沉淀反应，生成了白色的氯化银沉淀。

而在硝酸银溶液中加入硝酸铜溶液后，并未观察到沉淀的产生。

这是因为硝酸银和硝酸铜在溶液中并没有发生置换反应，因此没有产生沉淀。

在碳酸钙溶液中加入硝酸铜溶液后也未观察到沉淀的产生，这是因为碳酸钙和硝酸铜在溶液中也没有发生置换反应。

最后，在硝酸钡溶液中加入硫酸铜溶液后产生了白色硫酸钡沉淀，这是因为硝酸钡和硫酸铜发生了置换反应，生成了不溶于水的硫酸钡沉淀。

实验总结：通过本次实验，我们对沉淀反应有了更深入的了解。

实验二蛋白质的沉淀反应一、蛋白质等电点的测定：1.目的：(1)了解蛋白质的两性解离性质。

(2)学习测定蛋白质等电点的一种方法2.原理：蛋白质是两性电解质。

在蛋白质溶液中存在下列平衡：蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。

当溶液的pH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数日相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。

不同蛋白质各有其特异的等电点。

在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。

最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。

本实验借观察在不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。

用醋酸与酷酸钠(醋酸钠混合在酪蛋白溶液中)配制成各种不同pH值的缓冲液。

向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。

3.器材：(1)水浴锅。

(2)温度计。

(3)200毫升锥形瓶。

(4)100毫升容量瓶。

(5)吸管。

(6)试管。

(7)试管架。

(8)乳钵。

4.试剂：(1)0.4％酪蛋白醋酸钠溶液200毫升取0.4克酪蛋白，加少量水在乳钵中仔细地研6，将所得的蛋白质悬波移入200毫升锥形瓶内，用少量40～50℃的温水洗涤乳钵，将洗涤液也移入锥形瓶内。

加入10毫升1当量/升醋酸钠溶液。

把锥形瓶放到50℃水浴中，并小心地旋转锥形瓶，直到酪蛋白完全溶解为止。

将锥形瓶内的溶液全部移至100毫升容量瓶内，加水至刻度，塞紧玻塞，混匀。

(2)1.00当量／升醋酸溶液100毫升(3)0.10当量／升醋酸溶液100毫升(4)0.01当量／升醋酸溶液50毫升5.操作方法：(1)取同样规格的试营4支，按下表颠序分别精确地加入各试剂，然后混匀。

(2)向以上试管中各加酪蛋白的醋酸钠溶液1毫升，加一管，摇句一管。

此时1、2、3、4管的pH值依次为5.9、5.3、4.7、3.5。

观察其混浊度。

静置10分钟后，再观察其混浊度。

免疫学试验计划实验二沉淀试验——双向免疫扩散试验一、目的要求：1、掌握双向免疫扩散试验的原理和用途；2、熟悉双向免疫扩散试验的操作方法。

二、实验原理：1、沉淀反应：可溶性抗原（如血清、细菌的外毒素、内毒素、菌体裂解液、病毒、组织浸出液等）与相应的抗体相遇，当二者比例适当，在一定温度、pH并有电解质存在下，就可能形成肉眼可见的白色沉淀，称为沉淀反应。

根据抗原与抗体的不同反应与其它因素，沉淀反应分为：凝胶内沉淀反应（单向琼脂扩散、双向琼脂扩散等）、免疫电泳技术（对流免疫电泳、火箭免疫电泳、免疫琼脂扩散电泳等）、液相内沉淀反应（环状沉淀反应、免疫浊度试验、絮状沉淀反应等）。

单向沉淀、双向沉淀。

2、抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应. 它既可发生在体内，也可发生在体外。

体外的抗原抗体反应表现为沉淀、凝集、细胞溶解、补体结合、中和反应等反应现象。

沉淀反应（precipitation）是可溶性抗原与相应抗体在电解质存在的条件下发生特异性结合所出现的沉淀现象。

如图所示：3、影响沉淀反应的主要因素：（1）.抗原（Ag）、抗体（Ab）反应的浓度、比例（2）.电解质（3）.温度（4）.酸碱度4、双向免疫扩散试验：将可溶性抗原和抗体分别加到含适量电解质的琼脂板上相应的小孔中，使两者各自向四周自由扩散，若抗原与抗体相对应，两者相遇即发生特异性结合，并在比例合适处发生沉淀，此沉淀物因颗粒较大而不扩散，故形成沉淀带。

沉淀物形成的主要原因是因为抗原与抗体分子表面的疏水基团相互接近而有效的排出它们之间的水分。

利用琼脂凝胶作为扩散介质是因为一定浓度的琼脂凝胶，其内部为多孔网状。

而且孔径很大，可以允许大分子物质（分子量自十几万到几百万以上）自由通过。

因为大多数抗原和抗体的分子量都在20万以上，所以它们在琼脂凝胶中几乎可以自由扩散。

而且琼脂凝胶又具有良好的化学稳定性、含水量大、透明度好、来源方便、处理容易等优点，因此是免疫沉淀检测技术中最理想的扩散介质。

沉淀反应实验报告沉淀反应实验报告引言：沉淀反应是化学实验中常见的一种反应类型，通过溶液中的离子相互作用形成固态沉淀物。

本次实验旨在通过观察和分析沉淀反应的过程和结果，探究反应条件对沉淀形成的影响。

实验目的：1. 理解沉淀反应的基本原理和过程；2. 掌握沉淀反应的实验操作技巧；3. 研究不同条件下沉淀反应的变化规律。

实验材料和仪器：1. 实验材料：氯化银(AgCl)、氯化钡(BaCl2)、硝酸银(AgNO3)、硫酸钡(BaSO4)、盐酸(HCl)、硝酸(HNO3)、蒸馏水；2. 实验仪器：试管、滴管、玻璃棒、烧杯、热水浴。

实验步骤：1. 实验前准备：清洗实验仪器，准备所需试剂；2. 实验一：向两个试管中分别加入等量的氯化银溶液和硝酸银溶液，观察并记录反应结果；3. 实验二：向两个试管中分别加入等量的氯化钡溶液和硫酸钡溶液，观察并记录反应结果；4. 实验三：在一试管中加入氯化银溶液，滴加盐酸，观察并记录反应结果；5. 实验四：在一试管中加入氯化银溶液，滴加硝酸，观察并记录反应结果；6. 实验五：在一试管中加入氯化银溶液，加热至沸腾，观察并记录反应结果。

实验结果和分析：1. 实验一中，氯化银溶液与硝酸银溶液反应后生成白色沉淀，即氯化银(AgCl)。

这是因为氯化银溶液中的氯离子与硝酸银溶液中的银离子发生反应，生成不溶于水的氯化银沉淀。

2. 实验二中，氯化钡溶液与硫酸钡溶液反应后生成白色沉淀，即硫酸钡(BaSO4)。

这是因为氯化钡溶液中的钡离子与硫酸钡溶液中的硫酸根离子发生反应，生成不溶于水的硫酸钡沉淀。

3. 实验三中，氯化银溶液与盐酸反应后生成白色沉淀，即氯化银(AgCl)。

这是因为盐酸中的氯离子与氯化银溶液中的银离子发生反应，生成不溶于水的氯化银沉淀。

此外，盐酸的加入使反应溶液的酸碱度增加，促进了沉淀反应的进行。

4. 实验四中，氯化银溶液与硝酸反应后生成白色沉淀，即氯化银(AgCl)。

这是因为硝酸中的硝酸根离子与氯化银溶液中的银离子发生反应，生成不溶于水的氯化银沉淀。

一、实验目的1. 理解沉淀反应的基本原理，掌握沉淀反应的实验操作方法。

2. 学习利用沉淀反应进行物质的分离、提纯和鉴定。

3. 培养实验操作技能和数据分析能力。

二、实验原理沉淀反应是指溶液中离子或分子结合成难溶物质的过程。

在实验中，通过添加适当的沉淀剂，使溶液中的目标物质生成沉淀，从而实现分离、提纯和鉴定。

沉淀反应的原理主要基于溶解度积（Ksp）的概念。

溶解度积是指在一定温度下，难溶电解质在溶液中达到饱和时，其离子浓度的乘积。

当溶液中离子的浓度乘积大于溶解度积时，难溶电解质将开始沉淀；当溶液中离子的浓度乘积小于溶解度积时，沉淀将溶解。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 氯化钠溶液- 硫酸铜溶液- 氢氧化钠溶液- 硫酸铝溶液- 硫酸铁溶液- 硝酸银溶液- 硝酸铅溶液- 氯化银溶液- 氢氧化铁溶液- 硫酸钡溶液- 硫酸钙溶液- 氯化钙溶液2. 实验仪器：- 烧杯- 玻璃棒- 移液管- 滴定管- 滤纸- 铁架台- 漏斗- 研钵- 研杵四、实验步骤1. 沉淀反应实验一：硫酸铜与氢氧化钠反应- 在烧杯中加入5mL氯化钠溶液，滴加少量硫酸铜溶液，观察溶液颜色变化。

- 滴加氢氧化钠溶液，观察沉淀的形成。

- 用滤纸过滤沉淀，观察沉淀的颜色和形态。

2. 沉淀反应实验二：硫酸铝与硫酸铁反应- 在烧杯中加入5mL硫酸铝溶液，滴加少量硫酸铁溶液，观察溶液颜色变化。

- 滴加氢氧化钠溶液，观察沉淀的形成。

- 用滤纸过滤沉淀，观察沉淀的颜色和形态。

3. 沉淀反应实验三：硝酸银与氯化钠反应- 在烧杯中加入5mL硝酸银溶液，滴加少量氯化钠溶液，观察溶液颜色变化。

- 滴加硝酸铅溶液，观察沉淀的形成。

- 用滤纸过滤沉淀，观察沉淀的颜色和形态。

4. 沉淀反应实验四：硫酸钡与硫酸钙反应- 在烧杯中加入5mL硫酸钡溶液，滴加少量硫酸钙溶液，观察溶液颜色变化。

- 滴加氯化钙溶液，观察沉淀的形成。

- 用滤纸过滤沉淀，观察沉淀的颜色和形态。

实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。

熟悉蛋白质的沉淀反应，进一步熟悉蛋白质的有关反应。

二、实验原理蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。

不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。

颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应，因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。

另外，颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。

蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相对的。

如果条件发生了变化，破坏了蛋白质的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。

三、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、ph试纸6、水浴锅7、移液管四、实验试剂1、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍，3-4层纱布过滤，滤液放在冰箱里冷藏备用。

2、 0.5%苯酚：1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。

3、millon’s试剂：40g汞溶于60ml浓硝酸（水浴加温助溶）溶解后，冷却，加二倍体积的蒸馏水，混匀，取上清夜备用。

此试剂可长期保存。

4、尿素晶体5、1%cuso：1g cuso晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml 446、10%naoh：10g naoh溶于蒸馏水，稀释至100ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.9、冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液：100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。

12、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。

13、95%乙醇。

14、醋酸铅溶液：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、10%三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液：100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。

18、1%醋酸溶液。

五、实验步骤蛋白质的颜色反应（一）米伦（millon’s）反应1、苯酚实验：取0.5%苯酚溶液1ml于试管中，加millon’s试剂0.5ml，电炉小心加热观察颜色变化。

实验二沉淀反应一、实验目的1、了解沉淀的生成、溶解和沉淀的转化条件，掌握沉淀平衡，同离子效应以及溶度积原理。

2、学习离子分离操作和同离子效应和电动离心机的使用。

二、实验的内容1、沉淀的生成和溶解①查表得：PbI2的ksp为7.1×10-9取1d 0.1mol/L的Pb（NO3）2+9d水，取1d+9d水，配成1×10-3mol/L的Pb（NO3）2溶液取1d 0.1mol/L的kI+9d水，取其中1d+9d水，再取1d+1d 水+首先配好的1×10-3mol/L的Pb（NO3）2溶液2d→不出现黄色沉淀，溶液无变化。

计算：Q=【pb2+】·【I-】2=25/8×10-11﹤ksp计算值也不应该有沉淀。

反应方程：pb2++ 2I-≒pbI2实验结论：1、计算结果与实际相符，Q﹤ksp，不出现沉淀2、没看到pbI2黄色沉淀，不等于不存在pbI2，溶液中还是存在少量的pbI2②查表得：pbs的ksp=8×10-28 pbcro4ksp=2.8×10-13取1d 0.1mol/L的Na2S+1d0.1mol/L的k2cro4,稀释至2.5mL 取1d上述溶液+1d 0.1mol/L的Pb（NO3）2→有棕黄色的混合沉淀出现。

计算：Q﹙pbs﹚=【S2-】【pb2+】=4×10-6﹥其kspQ﹙pbcro4﹚=【S2-】【cro42-】=4×10-6﹥其ksp反应方程：pb2++ S2-≒pbs pb2++ cro42-≒pbcro4实验结论：只要Q﹥ksp，就会出现沉淀，在同一溶液中也不会因沉淀的ksp的大小而出现沉淀的先后，而是同时沉淀。

如随着某离子的加入，Q先达到某个沉淀的ksp，后达到另一个沉淀的ksp，这是才会出现沉淀的先后之分。

2、沉淀的溶解和转化1d 0.1mol/L Pb（NO3）2+2d 0.1mol/L NaCL→Pbcl2↓（白色）+2d 0.1mol/L kI溶液→pbI2↓(黄色) {离心，去掉上清液→稀释至0.5mL}+饱和Na2so4晶体→ pbso4↓(白色) +0.1mol/L k2cro4→pbcro4↓（黄色）+2~3d 0.1mol/L k2S→pbs↓(黑色) {离心，取上清液，颜色为粉红色}★查表得：ksp（Pbcl2）=1.6×10-5 ksp（pbI2）=7.1×10-9 ksp（pbso4）=1.6×10-8ksp（pbcro4）=2.8×10-13 ksp（pbs）=8×10-28★计算：例Pbcl2转化为pbI2的过程：Pbcl2+ 2I-≒pbI2+2cl-K°=【cl-】2/【I-】2=【pb2+】【cl-】2/【pb2+】【I-】2= ksp （Pbcl2）/ ksp（pbI2）=1.6/7.1×104K°值越大，沉淀转化的越完全，对同一类型的沉淀来说，溶度积越大的沉淀越易转化成溶度积小的沉淀对ksp小→ksp大的方向进行的特例：ksp（pbI2）/ ksp（pbso4）=【pb2+】【cl-】2/【pb2+】【so42-】推出→【so42-】min=0.16/7.1 因此Na2so4晶体或饱和Na2so4溶液满足此条件。