乙醇脱氢酶(ADH)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

乙醇脱氢酶（ADH）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：UPLC-MS-4340规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶4℃保存粉剂一粉剂×1瓶4℃保存试剂一液体45mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×2支-20℃保存试剂三液体6mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、提取液：临用前将粉剂一倒入提取液中，溶液为悬浊液，使用前需摇匀；2、试剂二：临用取一支加入1.5mL蒸馏水，-20℃分装保存4周，避免反复冻融。

产品说明：ADH是生物体内短链醇代谢的关键酶，催化乙醇与乙醛可逆转换，在很多生理过程中起着重要作用。

哺乳动物ADH主要在肝脏生成，肝脏损伤导致ADH释放到血清中。

血清ADH活性高低反映了肝功能是否异常。

ADH催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+，NADH在340nm处有吸收峰，而NAD+没有；测定340nm吸光度下降速率，来计算ADH活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：冰、低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液器、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。

16000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。

2、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；16000g，4℃离心20min，取上清液置冰上待测。

脯氨酸脱氢酶（ProDH）活性检测试剂盒说明书货号：UPLC-MS-4460可见分光光度法规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液一液体60mL×1瓶4℃保存提取液二液体0.6mL×1支4℃保存试剂一液体40mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶4℃保存试剂三粉剂×1瓶4℃保存试剂四粉剂×1瓶-20℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前加入5mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；2、试剂三：临用前加入4mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；3、试剂四：临用前加入10mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂可分装-20℃保存，避免反复冻融。

4、工作液的配制：首先将试剂三和试剂四配成溶液，临用前根据用量按照试剂一（V）：试剂二（V）：试剂三（V）=1.6（mL）：0.2（mL）：0.15（mL）的比例充分混匀。

（注意：现配现用，用多少配多少）产品说明：ProDH是存在于线粒体内的催化脯氨酸降解的关键酶。

降低ProDH活性对于调节渗透平衡、防止渗透胁迫对植物造成伤害、清除自由基、保护细胞结构具有重要意义。

ProDH催化脯氨酸脱氢生成延丙酮酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm处具有特征吸收峰，通过600nm吸光度的下降，测定2,6-DCPIP的还原速度，代表ProDH 活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、丙酮、匀浆器/研钵、冰、蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：按照组织质量（g）：提取液一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g样本，加入1mL 提取液一），进行冰浴匀浆，1500g4℃离心15min，取上清液于一支新的EP管中，加入10μL提取液二，涡旋混匀，冰浴放置30min后，15000g4℃离心20min，取上清置冰上待测。

细胞乙醛脱氢酶2活性比色法定量检测试剂盒产品说明书主要用途细胞乙醛脱氢酶2活性比色法定量检测试剂盒是一种旨在使用乙醛脱氢酶2敏感性抑制剂，通过检测反应系统中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）还原后峰值的增高，即采用比色法来测定细胞裂解萃取液样品中酶活性的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种细胞包括胚胎干细胞、神经干细胞等裂解悬液样品（动物、人体等）乙醛脱氢酶2的特异活性检测。

产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景乙醛脱氢酶（aldehyde dehydrogenase；ALDH；EC1.2.1.3），又称为乙醛NAD氧化还原酶（aldehyde NAD－oxidoreductase）是一类NAD（P）依赖性酶，催化广谱的外源性或内源性脂肪族和芳香族乙醛类底物氧化，包括乙醇、氨基酸、生物胺（biogenic amine）、维生素、固醇类、脂质、药物和环境分子等代谢产物。

乙醛脱氢酶是乙醇在体内分解代谢过程中两种主要酶之一。

乙醛脱氢酶把乙醛中的两个氢原子脱掉，使乙醛转化为乙酸，生成的乙酸进入脂肪酸氧化途径，最终被氧化成二氧化碳和水。

乙醛脱氢酶主要有两种同工酶：ALDH1和ALDH2。

ALDH1存在于胞液中，ALDH2存在于线粒体中，ALDH2比ALDH1的活性高。

乙醛脱氢酶的缺少，使酒精不能被完全分解为水和二氧化碳，而是以乙醛继续留在体内，使人喝酒后产生恶心欲吐、昏迷不适等醉酒症状。

基于来自于乙醇代谢产生的乙醛（acetaldehyde），在7-羟基-3-（4-羟苯基）-异黄酮-7-糖苷（Daidzein-7-O-β-D-glucopyranoside；Daidzin）存在与否的情况下，由乙醛脱氢酶2的催化作用，转化为乙酸（acetic acid）产物后，通过测定反应体系中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidized reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NAD）转化为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）的变化（340nm波长），来定量分析乙醛脱氢酶2的特异活性。

乙醇酸氧化酶（GO）检测试剂盒（乙醇酸比色法）乙醇酸氧化酶(GO)检测试剂盒(乙醇酸比色法)简介：乙醇酸氧化酶(Glycolate oxidase，GO)是乙醇酸循环的一种酶，在乙醇酸代谢循环中乙醇酸通过乙醇酸氧化酶的作用而变成乙醛酸。

光合作用与呼吸作用是植物代谢的两大核心内容，前者是物质合成与能量储存过程，属于同化作用，为包括人来在内的几乎所有生物的生存提供物质来源和能量来源；后者是物质分解与能量释放过程，属于异化作用，为生命提供能量。

通过测定样品中乙醇酸氧化酶活性，了解植物的光合和呼吸代谢的基本方法。

Leagene乙醇酸氧化酶(GO)检测试剂盒(乙醇酸比色法)检测原理是在弱碱条件下，在乙醇酸氧化酶作用下，乙醇酸氧化生成乙醛酸和过氧化氢，以半胱氨酸为氢受体，接受乙醇酸氧化时脱下的氢离子有最大吸收，通过分光光度比色法(分光光度计)测定处吸光度的变化，计算出乙醇脱氢酶活性水平。

该试剂盒主要用于检测植物样本中乙醇脱氢酶活性，进而了解植物的光合和呼吸代谢情况。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、研钵或匀浆器2、纱布或滤纸3、离心管或试管4、离心机5、pH计6、氮气(备选)7、水浴锅8、比色杯编号名称TE053350TStorage试剂(A):GO Lysis buffer2×500ml4℃避光试剂(B):蛋白沉淀剂100g RT避光试剂(C):GO悬浮液100ml RT试剂(D):GO Assay buffer100ml4℃避光使用说明书1份9、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、准备样品：取新鲜植物叶片，清洗干净，吸水纸吸干，称取，加入预冷的GO Lysis buffer，冰浴情况下充分匀浆或研磨，经纱布或滤纸过滤，将滤液置于离心管或试管中离心，取上清液置于新的离心管或试管，调节pH值，离心，取上清液。

按上清液：蛋白沉淀剂一定的比例加入蛋白沉淀剂，不断混匀，离心，取上清液。

乙醇脱氢酶(ADH)提取液简介：乙醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase，ADH)的系统名为乙醇：辅酶I 氧化还原酶（alcohol：NAD+oxidoreductase），大量存在于人和动物肝脏、植物及微生物细胞之中，是一种含锌金属酶，具有广泛的底物特异性。

乙醇脱氢酶够以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)为辅酶，催化伯醇和醛之间的可逆反应：CH3CH2OH+NAD+→CH3CHO +NADH+H+。

在人和哺乳动物体内，乙醇脱氢酶与乙醛脱氢酶(ALDH)构成了乙醇脱氢酶系，参乙醇脱氢酶与体内乙醇代谢，是人和动物体内重要的代谢酶。

作为生物体内主要短链醇代谢的关键酶，它在很多生理过程中起着重要作用。

丙酮酸脱羧酶(PDC)、乙醇脱氢酶(ADH)是乙醇发酵途径的关键酶，无氧呼吸途径代谢产物的过程积累对细胞产生毒性，影响线粒体结构和三羧酸循环的相关酶活性。

Leagene 乙醇脱氢酶(ADH)提取液主要用于裂解植物组织，提取样品中的乙醇脱氢酶。

该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、蒸馏水2、离心管或试管3、匀浆器或研钵4、低温离心机操作步骤(仅供参考)：1、取植物组织清洗干净，切碎。

2、配制乙醇脱氢酶提取工作液：取出乙醇脱氢酶提取液和PMSF，恢复至室温，混匀，即配即用，不易久置，否则蛋白酶抑制剂PMSF 的效率会有所下降。

3、加入预冷的乙醇脱氢酶提取工作液，冰浴情况下充分匀浆或研磨。

4、离心，留取上清液即为乙醇脱氢酶粗提液，保存，用于乙醇脱氢酶的检测或其他用途。

编号名称CS0436Storage 试剂(A):乙醇脱氢酶提取液500ml4℃避光试剂(B):PMSF1ml 4℃使用说明书1份计算：组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%注意事项：1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于-20-80℃。

2、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。

细菌乙醇脱氢酶总活性光度法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途细菌乙醇脱氢酶总活性光度法定量检测试剂是一种旨在通过检测反应系统中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）还原后峰值的增高，即采用光度法来测定细菌裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种细菌菌株裂解悬液样品乙醇脱氢酶的总活性检测。

产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景乙醇脱氢酶（alcohol dehydrogenase；ADH；EC1.1.1.1），又称为乙醇NAD氧化还原酶（alcohol NAD- oxidoreductase），属于氧化还原酶家属成员之一，是一组含有6个亚酶的催化乙醇氧化的锌依赖性金属酶蛋白。

存在于许多生物体中。

通过氧化原发性和继发性醇类分子和半缩醛（hemiacetals），转化产生乙醛或酮。

乙醇脱氢酶分成三类：一类为辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD）或辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate；NADP）依赖型；一类为吡咯喹啉醌-，血红素基团、F420（Pyrroloquinoline quinone，haem group，F420）依赖型；一类为黄素腺嘌呤二核苷酸（Flavin adenine dinucleotide）依赖型。

NAD或NADP依赖型乙醇脱氢酶又可以分成三种：一种为锌依赖性的中长链型（350氨基酸残基）；一种为锌非依赖性的短链型（250氨基酸残基）；一种为铁激活性（385氨基酸残基）。

在微生物中，乙醇脱氢酶起着发酵功能。

且用于酒精性饮料、工业溶剂、醋的生产，参与外源性芳香族化合物（xenobiotic aromatic compounds ）的降解，帮助细菌或酵母在甲醇环境中生长。

基于底物乙醇，在乙醇脱氢酶的作用下，转化为乙醛（aldehyde）产物后，通过测定反应体系中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidized nicotinamide adenine dinucleotide；NAD）转化为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）的变化（340nm 波长），来定量分析乙醇脱氢酶的总活性。

转氢酶-2活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC3260规格：50T/24S产品内容：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂一：粉剂×2瓶，-20℃保存；临用前加入6mL试剂三备用，可分装后-20℃保存，但避免反复冻融。

试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存；临用前加入10mL试剂三备用。

试剂三：液体50mL×1瓶，4℃保存；产品说明：转氢酶位于线粒体的内膜上，又称为线粒体复合体六，催化NADH+NADP+和NAD++NADPH相互转化，调节线粒体NAD(H)和NADP(H)平衡。

把逆向反应称为TH-2，催化NADPH和NAD+生成NADP+和NADH。

NADH和NADPH均在340nm有特征吸收，因此TH催化的转氢反应不能导致340nm吸光度发生变化。

用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸（APAD+）替代NAD+，TH-2催化APAD+还原生成APADH，APADH在375nm有特征光吸收，测定375nm光吸收的增加速率，来计算TH-2活性。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、转氢酶-2的提取(1)称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1.0mL提取液，用匀浆器或研钵于冰上匀浆。

(2)4℃600g离心10min。

(3)将上清液移至另一离心管中，4℃11000g离心15min。

(4)上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的转氢酶-2（此步可选做，可以判断线粒体提取效果）。

(5)在沉淀中加入800μL提取液，超声波破碎（功率20％，超声5秒，间隔10秒，重复15次），用于转氢酶-2酶活性测定，并且用于蛋白含量测定。

二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至375nm，蒸馏水调零。

2、样品测定：在1mL石英比色皿中分别加入试剂名称测定管对照管试剂一400-试剂二400400样品100100试剂三100500将上述试剂分别加入1mL石英比色皿后充分混匀，于375nm处测定初始吸光值A1，迅速将比色皿连同反应液放入37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴锅中水浴3min，然后迅速拿出擦干测定3min后的吸光度A2，计算△A测定=A2测定-A1测定，△A对照=A2对照-A1对照，△A=△A测定-△A对照。

乙醇脱氢酶(ADH)检测试剂盒(乙醛微板法)简介：乙醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase，ADH)的系统名为乙醇：辅酶I氧化还原酶（alcohol：NAD+oxidoreductase），大量存在于人和动物肝脏、植物及微生物细胞之中，是一种含锌金属酶，具有广泛的底物特异性。

乙醇脱氢酶够以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)为辅酶，催化伯醇和醛之间的可逆反应：CH3CH2OH+NAD+→CH3CHO+NADH+ H+。

在人和哺乳动物体内，乙醇脱氢酶与乙醛脱氢酶(ALDH)构成了乙醇脱氢酶系，参乙醇脱氢酶与体内乙醇代谢，是人和动物体内重要的代谢酶。

作为生物体内主要短链醇代谢的关键酶，它在很多生理过程中起着重要作用。

丙酮酸脱羧酶(PDC)、乙醇脱氢酶(ADH)是乙醇发酵途径的关键酶，无氧呼吸途径代谢产物的过程积累对细胞产生毒性，影响线粒体结构和三羧酸循环的相关酶活性。

Leagene乙醇脱氢酶(ADH)检测试剂盒(乙醛微板法)检测原理是在弱碱条件下，以乙醛为底物，乙醛在ADH催化下被NADH还原为乙醇，ADH每催化1分子乙醛消耗1分子NADH，通过分光光度比色法(酶标仪)测定吸光度的变化，计算出NADH的消耗速率进一步推算出乙醇脱氢酶活性水平。

该试剂盒主要用于检测植物样本、血清等中乙醇脱氢酶活性。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、研钵或匀浆器2、离心管或试管3、低温离心机4、96孔板5、酶标仪编号名称TE0471100TStorage试剂(A):ADH Lysis buffer250ml4℃避光试剂(B):PMSF1ml-20℃试剂(C):ADH Assay buffer20ml RT试剂(D):NADH1支-20℃使用说明书1份操作步骤(仅供参考)：1、配制ADH Lysis buffer工作液：取出ADH Lysis buffer和PMSF，恢复至室温，ADHLysis buffer：PMSF按一定比例混合，混匀，即配即用，不易久置，否则蛋白酶抑制剂PMSF的效率会有所下降。

葡萄糖脱氢酶（GCDH）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC2690规格：50T/48S产品简介：GCDH（EC 1.1.1.47）催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H，主要存在于多种微生物和高等动物的肝脏中。

GCDH是一种制备高含量低聚果糖的理想用酶，同时也是临床血糖测定的诊断用酶，可广泛用于食品工业及医药工业领域中。

GCDH催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH，利用NADH在340nm处吸光值的变化即可反映葡萄糖脱氢酶的活性。

试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计、台式低温离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前加入15mL试剂一溶解，用不完的试剂4℃保存。

试剂三：粉剂×2瓶，-20℃避光保存。

临用前每瓶加入5mL试剂一溶解，用不完的试剂建议分装后-20℃避光保存，避免反复冻融。

操作步骤：一、粗酶液提取：组织：按照组织质量（g）︰提取液体积(mL)为1︰5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后，8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

细胞或细菌：先收集细胞或细菌到离心管内，离心后弃上清；按照细胞数量（104个）︰提取液体积（mL）为500~1000︰1的比例（建议500万个细胞或细菌加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞或细菌（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，总时间5min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

血浆（清）：直接检测。

二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、工作液的配制：按照试剂一︰试剂二︰试剂三为4︰3︰2的体积比例充分混匀，备用，用前37℃预热10min。

小鼠小鼠乙醇脱氢酶乙醇脱氢酶(ADH)酶联免疫酶联免疫分析分析分析试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围检测范围：： 96T0.5 U/L -30U/L使用目的使用目的：：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中乙醇脱氢酶(ADH)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠乙醇脱氢酶(ADH)水平。

用纯化的小鼠乙醇脱氢酶(ADH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入乙醇脱氢酶(ADH)，再与HRP 标记的乙醇脱氢酶(ADH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。

TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的乙醇脱氢酶(ADH)呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠乙醇脱氢酶(ADH)浓度。

试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml ×1瓶 7 终止液6ml ×1瓶 2 酶标试剂 6ml ×1瓶 8 标准品（48U/L ） 0.5ml ×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml ×1瓶 4 样品稀释液 6ml ×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A 液 6ml ×1瓶 11 封板膜 2张 6显色剂B 液6ml ×1/瓶12密封袋1个标本标本要求要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。

操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

24U/L 5号标准品 150µl 的原倍标准品加入150µl 标准品稀释液 12U/L 4号标准品 150µl 的5号标准品加入150µl 标准品稀释液 6U/L 3号标准品 150µl 的4号标准品加入150µl 标准品稀释液 3U/L 2号标准品 150µl 的3号标准品加入150µl 标准品稀释液 1.5U/L1号标准品150µl 的2号标准品加入150µl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。