血红蛋白的提取和分泳法
1、蛋白质特性的差异
(1)分子的形状和大小；
(2)所带电荷的性质和多少；
(3)溶解度；
(4)吸附性质；
(5)对其他分子的亲和力。
2、分离蛋白质的方法 (1)凝胶色谱法 ①概念：也称做分配色谱法，是根据相对分子质量的大 小分离蛋白质的有效方法。 ②凝胶：微小的多孔球体，大多数是由多糖类化合物构 成，内含许多贯穿通道,如葡聚糖或琼脂糖。
③电泳常用方法 a.琼脂糖凝胶电泳：由于琼脂糖本身不带电荷，各种分子 在电场中的迁移速率因各种分子带电性质的差异、分子大 小和形状的不同而不同，从而得以分离。 b.聚丙烯酰胺凝胶电泳 加入SDS作用：掩盖不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳 迁移率完全取决于分子的大小。（原理：SDS使蛋白质发 生完全变性，解聚成单条肽链，并与其结合形成蛋白质— SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质原有的 电荷量。测定的结果只是单条肽链的分子量）
以哺乳动物红细胞为材料，血红蛋白质的提取和分 离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。
（一)样品处理及粗分离 1、红细胞的洗涤 (1)目的:去除杂蛋白； (2)过程：
(3)实验注意事项：为防止血液凝固，加入抗凝血剂柠檬 酸钠。生理盐水洗涤防止红细胞吸水涨破。低速短时 离心。如果离心速度过高和时间过高会使白细胞和淋巴细 胞一同沉淀，达不到分离的效果。④洗涤次数过少，无法 去除血浆蛋白,分层不明显⑤上清无黄色，表明细胞已洗净。
3、缓冲溶液 ①概念：在一定范围内，能够抵制外界的酸、碱对PH的 影响，维持pH基本不变的溶液。 ②缓冲溶液的配制 1～2种缓冲剂 调节使用比例控制pH范围
二、血红蛋白的提取和分离 血红蛋白由四条肽链组成，包括两条α-肽链和两条
