神经细胞体外培养方法及应用 ppt课件
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神经干细胞体外培养与鉴定一前言神经干细胞(Neural stem cells, NSC S)是神经系统内能产生神经元和胶质细胞的未分化原始细胞【1-2】。
文献报道,NSC具有无限增殖、自我更新和多向分化能力,在适宜的环境条件下,能分化形成各种靶组织细胞【3-5】。
此外,NSC 还可用作为是细胞移植治疗的有效载体,被广泛用于神经疾病细胞或载体治疗。
根据目前的研究结果,其主要作用包括下列三方面:①NSC分化成宿主细胞来替代丢失细胞的作用;②分泌多种细胞因子发挥生物学功能;③桥接作用【6-8】。
基于NSC的上述特性,从而奠定了NSC在细胞替代治疗中有广泛应用前景,而如何获取NSC则是科学研究和临床实践中首先面临的关键问题。
本实验拟建立绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)转基因小鼠NSCs原代和传代培养技术,为后面的实验提供方法支持。
二实验所需仪器、试剂及其配制(一)实验仪器光学显微镜(Olympus,Japan)倒置荧光显微镜(LEICA DMIRB)冰冻切片机(Leica CM1900,Germany)光明DZKW型电热恒温水浴锅(北京市光明医疗仪器厂)XK96-A快速混匀器(姜堰市新康医疗器械有限公司)HT-200 电子天平(成都普瑞逊电子有限公司川制)FA1004型精密电子天平(上海良平仪器仪表有限公司)MP 8001单臂脑立体定位仪(深圳市瑞沃德科技有限公司)10μl微量进样器(Pressure-Lok,PRECISION SAMPLINGCORP,BATON ROUGE,LOUISIANA,Made in USA)0.5ml、1ml Eppendorff管(Ependorff)手术器械:眼科剪、解剖剪、显微剪、显微有齿镊及无齿镊、蚊式钳、刀柄刀片等。
(二)试剂1. DMEM/F12,Hank's液(Hyclone),N2(Gibico),bFGF(Invitrogen)。
神经干细胞体外培养与鉴定一前言神经干细胞(Neural stem cells, NSC S)是神经系统内能产生神经元和胶质细胞的未分化原始细胞【1-2】。
文献报道,NSC具有无限增殖、自我更新和多向分化能力,在适宜的环境条件下,能分化形成各种靶组织细胞【3-5】。
此外,NSC 还可用作为是细胞移植治疗的有效载体,被广泛用于神经疾病细胞或载体治疗。
根据目前的研究结果,其主要作用包括下列三方面:①NSC分化成宿主细胞来替代丢失细胞的作用;②分泌多种细胞因子发挥生物学功能;③桥接作用【6-8】。
基于NSC的上述特性,从而奠定了NSC在细胞替代治疗中有广泛应用前景,而如何获取NSC则是科学研究和临床实践中首先面临的关键问题。
本实验拟建立绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)转基因小鼠NSCs原代和传代培养技术,为后面的实验提供方法支持。
二实验所需仪器、试剂及其配制(一)实验仪器光学显微镜(Olympus,Japan)倒置荧光显微镜(LEICA DMIRB)冰冻切片机(Leica CM1900,Germany)光明DZKW型电热恒温水浴锅(北京市光明医疗仪器厂)XK96-A快速混匀器(姜堰市新康医疗器械有限公司)HT-200 电子天平(成都普瑞逊电子有限公司川制)FA1004型精密电子天平(上海良平仪器仪表有限公司)MP 8001单臂脑立体定位仪(深圳市瑞沃德科技有限公司)10μl微量进样器(Pressure-Lok,PRECISION SAMPLINGCORP,BATON ROUGE,LOUISIANA,Made in USA)0.5ml、1ml Eppendorff管(Ependorff)手术器械:眼科剪、解剖剪、显微剪、显微有齿镊及无齿镊、蚊式钳、刀柄刀片等。
(二)试剂1. DMEM/F12,Hank's液(Hyclone),N2(Gibico),bFGF(Invitrogen)。
神经干细胞再生与体外培养的实验研究近年来,神经系统疾病已成为世界范围内重要的健康问题之一。
例如,阿尔茨海默病、帕金森氏症和脊髓损伤等疾病,对患者日常生活造成了严重的影响。
虽然目前有许多药物和治疗方法,但是很难完全治愈这些疾病,于是,神经干细胞再生的实验研究成为治愈神经系统疾病的一个新方向。
神经干细胞是一种具有自我更新和多线分化潜能的细胞。
这些干细胞能够分化成各种类型的神经细胞,包括神经元(神经细胞)和神经胶质细胞(支持细胞),并且有望重建损伤的神经组织。
具有自我更新潜力的神经干细胞可以通过细胞分裂不断产生更多的神经干细胞。
而分化潜力可以让神经干细胞,根据特定环境信号分化成一定类型的神经细胞。
在实验室中,神经干细胞的繁殖和分化可以通过体外培养来实现。
体外培养是指将细胞从其体内环境中分离出来,然后将其放置在好氧、无菌的环境中,加入一定的营养因子和细胞因子,提供良好的培养条件,使其生长、分裂,发挥其自我更新和多向分化的能力。
对于神经干细胞的体外培养,关键是要选择一种可以维持其自我更新和多向分化潜能的培养基。
目前,文化基础通常包括一种有机物,如人工合成物MS5和培养基B27,以及一种因子交联的蛋白质或培养基因治疗。
这些因子可以提供正确的信号和良好的环境,激活神经干细胞的分裂和分化。
另外,神经干细胞在培养时,还需要种植在一种支持细胞或未分化的神经细胞上,以提供必要的生长因子和支持。
在干细胞培养和分化的过程中,各种因素的运用互相协作,最终实现了神经干细胞的分化成为神经元和神经胶质细胞。
神经干细胞的再生研究,也可以辅助治疗神经系统疾病。
例如,通过研究神经干细胞在修复损伤后的体外和体内表现,社会上已经能够开发出一些神经干细胞的移植技术。
但是,目前这种技术的应用还面临一系列问题。
例如如何均等的种植神经干细胞、如何让其更好的定位和分化、如何减少免疫抑制剂和避免移植后的排异反应,以及如何克服治疗效果的耐受性等。
随着技术的进步,这些问题的解决将极大地推动神经干细胞和再生医学的发展。