预先静脉注射维生素C 对家兔肠系膜上动脉—最新版
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维生素对兔子及仓鼠的作用及日粮添加方法维生素对兔子的作用维生素在兔子的生长和健康中起着重要的作用。
以下是几种主要维生素对兔子的作用:1. 维生素A:维生素A有助于维持兔子的视力和皮肤健康。
它还起着维护呼吸道和消化系统健康的作用。
2. 维生素D:维生素D有助于兔子吸收和利用钙和磷,维持骨骼的健康。
3. 维生素E:维生素E是一种强效的抗氧化剂,有助于保护兔子的细胞免受氧化应激的损伤。
4. 维生素B群:维生素B群是多种维生素的组合,包括维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素B12等。
这些维生素有助于兔子的能量代谢和神经系统的正常功能。
5. 维生素C:维生素C对兔子来说很重要,因为它们无法自行合成。
维生素C有助于保护兔子免受感染和疾病的影响。
维生素日粮添加方法日粮中添加适量的维生素可以确保兔子和仓鼠获得足够的营养。
以下是添加维生素的方法:1. 饲料添加剂:市场上有许多维生素的饲料添加剂可供选择。
选择合适的饲料添加剂,按照产品说明添加到兔子和仓鼠的日粮中。
2. 饲料混合:如果你不喜欢使用饲料添加剂,你也可以选择购买已经添加了维生素的饲料混合。
这确保了兔子和仓鼠每天摄取所需的维生素量。
3. 天然食物补充:除了添加维生素到日粮中,你还可以通过提供充足的新鲜水果、蔬菜和草料来补充兔子和仓鼠所需的维生素。
某些食物如胡萝卜和菠菜富含维生素A,而柑橘类水果则是维生素C的良好来源。
请注意,为了确保兔子和仓鼠获得适当的维生素摄取量,建议咨询兽医或饲养专家的意见,并根据不同动物的需求进行维生素的添加。
以上是关于维生素对兔子及仓鼠的作用及日粮添加方法的简要介绍。
如有其他疑问,请与相关专家咨询。
血管升压素对家兔动脉血压、呼吸运动和尿量的调节xxx(xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx)摘要目的:本实验通过设置对照,观察血管升压素对家兔动脉血压、呼吸运动和尿量的影响,并探究其作用机制。
方法:给家兔施行膀胱插管、动脉插管、气管插管,先后注射0.3ml0.9%NaCl溶液与6U/ml0.3ml血管升压素,观察处理前后动脉血压、呼吸运动和尿量的变化。
结果:与0.9%NaCl溶液组对比,血管升压素组平均动脉血压降低幅度减小、呼吸流量最大值降低幅度减小、呼吸频率加快、尿量减少。
结论:血管升压素可以升高动脉血压,加强呼吸运动,减少尿量。
关键字血管升压素;血压;呼吸;尿量Abstract Objective:By setting the control in this experiment, observation of vasopressin effects on rabbit arterial blood pressure, respiratory movement and the amount of urine, and explore its mechanism of action. Methods:Give the rabbit bladder intubation, artery intubation, endotracheal intubation, successively injected with 0.3ml0.9%NaCl solution and 6U/ml0.3ml vasopressin, changes in arterial blood pressure, respiratory movement and the amount of urine were observed before and after treatment. Result:With 0.9%NaCl solution group contrast, vasopressin group mean arterial blood pressure decreased amplitude decreases, respiratory flow maximum amplitude decreases, reducing the increase of respiratory rate, reduce the amount of urine. Conclusion:Vasopressin can be elevated arterial blood pressure, strengthen the respiratory movement, reduce the amount of urine.Key words vasopressin;blood pressure;breath;urine volume引言血管升压素(vasopressin,VP)也称抗利尿激素,是在下丘脑的视上核和室旁核合成的一种肽类激素,主要兴奋V1、V2和Oxytox-in受体(OTRs)。
米力农对肠系膜上动脉闭塞性休克兔肠道氧代谢的影响陈雷;张自云;戴云【期刊名称】《云南医药》【年(卷),期】2006(27)4【摘要】目的米力农是磷酸二酯酶Ⅲ抑制剂,许多研究认为能改善休克患者的血流动力学及全身的氧供、氧耗,但对肠道的氧供、氧耗的影响研究甚少.本研究旨在探讨米力农对肠系膜上动脉闭塞性(SMAO)休克兔肠道氧代谢的影响.方法 16只健康家兔随机分为对照组和治疗组,经腹分离肠系膜上动脉复制SMAO休克模型.对照组静脉泵入米力农0.1ml·kg-1·min-1,治疗组静脉注入负荷量米力农50μg·kg-1,随后持续泵入米力农0.5ug·kg-1·min-1,液体总量和A组相同.实验期间于夹闭前-1h、松夹后休克时0h、松夹后1h、2h、定时观察MAP,HR,SMAF;测定肠系膜上静脉、颈内动脉血气,并根据公式计算出氧供(DO2)、和氧耗(VO2).结果松夹后1-2h期间,治疗组较对照组MAP,HR,SMAF,肠道DO2及VO2明显升高(P<0.05或<0.01).结论米力农能显著增加SMAO休克兔肠系膜上动脉血流量,提高肠道的氧供、氧耗、及全身血压,改善了缺血脏器的血供和氧合状态.【总页数】4页(P323-326)【作者】陈雷;张自云;戴云【作者单位】昆明医学院第二附属医院,麻醉科,云南,昆明,65101;昆明医学院第二附属医院,麻醉科,云南,昆明,65101;昆明医学院第二附属医院,麻醉科,云南,昆明,65101【正文语种】中文【中图分类】R9【相关文献】1.米力农对肠系膜上动脉夹闭休克兔氧自由基的影响 [J], 戴转云;张自云2.兔肠系膜上动脉闭塞性休克时血小板激活因子活性增高及其来源 [J], 陈清;张力3.复方麝香注射液对兔肠系膜上动脉闭塞性休克和小鼠缺氧的影响 [J], 叶启智;覃玉智;莫少珍4.HAD对创伤失血性休克兔肝脏血液灌注及氧代谢的影响 [J], 林秀来;胡德耀;刘良明;卢儒权;徐光辉;王淑青5.黄芪注射液对兔肠系膜上动脉闭塞性休克脂质过氧化损伤的防治及其机制 [J], 王艳蕾;景友玲;李宏杰;张一兵;段国贤;王小君;张伟;赵春秀因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
第26卷第4期2005年8月西安交通大学学报(医学版)J o u r n a l o fX i 'a n J i a o t o n g U n i v e r s i t y(M e d i c a l S c i e n c e s )V o l .26N o .4A u g.2005大剂量维生素C 对急性肺损伤的保护作用孙秀珍,张德信,刘 昀(西安交通大学第二医院呼吸内科,陕西西安 710004)摘要:目的 观察大剂量维生素C (500m g /k g )对油酸诱导的家兔急性肺损伤的预防和治疗效果。
方法 30只家兔分为4组:对照组(C G ),油酸组(O G ),预防组(P G )及治疗组(T G )。
于油酸注入前(0)及后30、90、150m i n 采各组动物颈总动脉血测P a O 2、超氧化物歧化酶(S O D )活力、血浆丙二醛(M D A )。
实验末右肺测湿质量,取支气管肺泡灌洗液(B A L F )后烤箱烘干得湿干质量比值,留少许左肺标本甲醛固定做切片。
结果 油酸注入30m i n 后,P G 组和T G 组P a O 2及S O D 明显高于O G 组(P <0.01);而M D A 明显低于O G 组(P <0.01)。
实验末P G 组和T G 组B A L F 中总蛋白、肺湿干质量比较O G 组低(P <0.05);肺组织病理切片显示损伤较轻。
结论 大剂量维生素C 对油酸所致的家兔急性肺损伤,通过清除氧自由基而发挥保护作用。
关键词:大量维生素C ;肺损伤;氧自由基中图分类号:R 563.8 文献标识码:A 文章编号:1671-825(2005)04-0345-04P r o t e c t i v e e f f e c t o f l a r g e d o s e s o f v i t a m i nCo na c u t e l u n g i n j u r yS u nX i u z h e n ,Z h a n g De x i n ,L i uY u n (D e p a r t m e n t o fR e s p i r a t i o n ,S e c o n dH o s p i t a l o fX i 'a n J i a o t o n g U n i v e r s i t y ,X i 'a n710004,C h i n a )A B S T R A C T :O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e p r o t e c t i v ea n d t h e r a p e u t i c ef f e c t o f l a rg ed o s e s o f v i t a m i nCo nth e a c u t e l u n gi n X u r y i n t h em o d e l o f r a b b i t s i n d u c e db y ol e i ca c i d .M e t h o d s At o t a l o f 18r a b b i t sw e r ed i v i d e d i n t o f o u r g r o u p r a n d o m l y :c o n t r o l g r o u p (C G );o l e i c a c i d g r o u p (O G );p r e v e n t i v e g r o u p (P G )a n d t r e a t m e n t g r o u p(T G ).O x y g e n p r e s s u r e i na r t e r i a l b l o o d (P a O 2),s u p e r o x i d ed i s m u t a s e (S O D )a n dm a l o n d i a l d e h y d e (MD A )i nb l o o dw e r e m e a s u r e d i n 0,30,90a n d 150m i n ,r e s p e c t i v e l y .A l l t h ea n i m a l sw e r ek i l l e di n 150m i nl a t e r .T o t a l p r o t e i ni n b r o n c h o -a l v e o l a r l a v a ge f l u i d (B A L F )a n dw e t d r y w e i g h t r a t i oo f t h e r i g h t l u n g w e r em e a s u r e d ,a n d t h e l e f t l u n g s a m p l ew a s t r e a t e db y f o r m a l d e h y d e f o r p a t h o l o g i c a l t e s t .R e s u I t s P a O 2,S O Di nP G g r o u p a n dT G g r o u p we r e s i g n if i c a n t l y h igh e r t h a nt h a ti n O G g r o u p (1<0.01),a n d MD As i g n i f i c a n t l y de c r e a s e d (1<0.01)30m i naf t e r o l e i c a c i d i n X e c t i o n ;B A L Fa n d l u ng w e t -d r y w e i gh t r a ti o i nP G g r o u p a n dT G g r o u p s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d (1<0.05)c o m p a r e d w i t hi n O G g r o u p ;H Es t a i n i n g s h o w e dt h a tt h el u n g i n X u r y i n P G g r o u p a n d T G g r o u p w a s i m p r o v e d .C o n c I u s i o n L a r g ed o s e s o f v i t a m i nC (500m g /k g )h a s p r e v e n t i v e e f f e c t o na c u t e l u n g i n X u r y.K E Y W O R D S :v i t a m i nC ;a c u t e l u n g i n X u r y ;o x y g e n f r e e r a d i c a l 收稿日期:2004-12-29 修回日期:2005-05-07作者简介:孙秀珍(1951-),女(汉族),教授,硕士生导师.E -m a i l:b o c -l y.s o h u .c o m 急性肺损伤(a c u t e l u n g i n j u r y ,A L I )是急性呼吸窘迫综合征(a c u t e r e s p i r a t o r y d i s t r e s s s y n d r o m e ,A R D S)的早期阶段,是由于多种原因引起的肺毛细血管炎症性损伤;通透性增加,继发急性高通透性肺水肿和进行性缺氧性呼吸衰竭。
家兔常用药物及使用家兔常用药物及使用2010年11月03日来源:《中国畜牧兽医报》责任编辑:caitian养殖户饲养家兔,除了搞好饲养管理外,还必须把疾病防治放在重要的位置上。
现将家兔常用的药物及使用方法介绍如下:1、青霉素针剂,分为20万单位、40万单位、80万单位,对葡萄球菌病、巴氏杆菌等有效,与链霉素合用可增强效力。
口服大部分被胃酸破坏,故不宜内服。
用量:成年兔每千克体重5万~10万单位,肌肉注射,每天2次,连用3~5天,疗效显著。
2、链霉素针剂,每支100万单位,用于家兔传染性鼻炎、肠道感染等。
用量:成年兔每千克体重10万~20万单位,肌肉注射,每天2次,连用3~5天。
幼兔用量减半。
3、庆大霉素针剂,分为4万单位、8万单位、10万单位、20万单位,为广谱抗菌素。
对大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌等有效。
用量:成年兔每只1万~2万单位,肌肉注射,每天1~2次,连用3~5天,幼兔用量酌减。
4、土霉素片剂,每片0.25克,广谱抗菌,但兔不宜长期使用。
用量:每千克体重40毫克,内服,每天2次,连用3~5天。
5、复方敌菌净片剂,每片30毫克或100毫克。
可用于预防和治疗兔球虫病、沙门氏菌病及消化道的感染。
用量:成年兔(预防)每千克体重10毫克,1次内服,每天1次,连用3~5天。
治疗量每千克体重25毫克,1次内服,每天1次,连用3~5天,疗效明显。
喂兔子六大要素2012年10月24日来源:农民日报责任编辑:chendanmin三农直通车综合报道:许多人喜欢都喜欢白绒绒的兔子,也有不少人把它当成宠物来养,但是养兔子也有许多要注意的地方。
一、饲料要合理搭配,不要喂单一品种。
兔日粮中的营养成分为:粗蛋白、粗纤维各10%,脂肪5%,每公斤日粮含消化能2800大卡,氨基酸10%。
如无条件饲喂配合饲料,应适当添加黄豆、豆饼、麸皮、玉米等精饲料和胡萝卜等多汁饲料。
二、要重视喂夜料。
兔有较强的夜食性,夜间采食量可占全天采食量的75%以上。
现场实践报告现场实践报告范包含7篇文章。
在日常生活和工作中,报告不再少见,写报告时要注意内容的完整性。
那么报告应该怎么写才合适呢?以下是边肖精心整理的7份现场实习报告,仅供参考,希望对大家有所帮助。
现场实习报告1:我第一次去现场实习。
刚到的时候很紧张,不知道怎么和别人相处。
实习了几天,发现和同事相处并不难。
当你遇到你不理解的事情时,你必须问更多的问题。
当你提问时,你会有更多的机会与同事交流。
这样,你不仅能解决问题,还能很快融入团队。
在这里,我们要努力学习,多问问题,多与人交流,坦诚待人。
作为大学生,社会实践是我们大学生活中的一个重要环节。
这个暑假真的过得很快。
我不仅去了工地,还去了公司。
在近一个半月的实习中,接触到了一些建筑学的基础知识,积累了很多社会经验。
实习不仅仅是学习,更是体验生活。
实习开始前,我想:这次实习,不仅仅是学习实习,更重要的是观察住在工地上的人,不管是农民工、建筑工人还是老板。
虽然他们的称呼不同,但我相信他们每个人都有值得学习的地方。
刚去工地实习的时候,很期待,也很好奇。
我还在考虑如何和别人相处。
我很早就到了工地的项目部。
老板给我指定了一个师傅。
之后,一切都要靠自己。
师傅在做材料,不知道怎么办。
师傅给了我一套图纸让我看,说有什么不懂的可以问,拿一套图纸,我按一下。
描述、构造和应用以及应用仍然可以理解。
然而,节点结构的一些细节仍然不对应。
第一次* *是在看图纸中度过的,独自一人,我明白无论做什么,基本功一定要扎实。
遇到不懂的事情,一定要多问。
当你提问时,你会有更多的机会和你的主人交流。
这样,你不仅能解决问题,还能很快融入集体。
当今社会很现实。
一定要努力学习,多提问,多与人交流,诚实待人。
在工地实习期间,我踏入工地,在师傅的悉心指导下,熟悉了很多工地的基础知识。
师傅结合我在* *学的知识跟我讲解钢筋的知识,梁、柱的箍筋是加密和不加密的。
当柱高不超过1.2m时,箍筋加密或单独加密,可以说全部加密。
家兔常用的给药方法作者:薛剑来源:《兽医导刊》 2015年第6期薛剑/ 山东省莒南县畜牧局家兔给药途径和方法的不同,会直接影响到药物作用和疗效,也有可能改变药物的基本作用。
临床上,根据不同疾病、病情程度及药物性质不同,需要采取不同的给药途径和给药方法。
(一)内服给药优点是:操作简单,使用方便,适用于多种药物,尤其是治疗消化道疾病;缺点是:药物易受胃、肠内环境的影响,药量难以掌握,药效慢,吸收不完全,有些药还会对家兔胃肠道有强烈的刺激作用,容易造成家兔的不适。
内服给药的方法有自行采食、口服、灌服等。
1. 自行采食。
适用于毒性小、适口性好、无不良异味的药物,主要用于大规模兔群预防性给药或驱虫。
按要求的添加比例将药物均匀地拌入饲料或饮水中(混水药必须易溶于水),让兔自由采食或自由饮水。
2. 口服。
口服法适用于患兔食欲废绝及使用药物剂量小、有异昧的片、丸剂药物。
分为三种:一是直接喂给家兔吃;二是混合在食物中,让其自行采食;三是碾碎后用水稀释,再用注射器直接给兔子灌饲。
3. 灌服。
灌服给药(图1)适用于患兔食欲废绝及药量小、有异味的药物及液体性药剂。
把药物碾碎加入少量水混匀,将汤匙倒执喂药,也可用注射器或滴管吸取药液,从口角缓缓灌入。
(二)注射给药注射给药药量准、吸收快、起效快、安全、节省药物,但需要掌握一定的操作技巧,把握好药品用量及做好注射器、针头、注射部位等的消毒工作。
常用的注射给药方法因注射部位不同分为肌内注射、皮下注射、静脉注射、腹腔注射、气管内注射等几种。
1. 肌内注射。
肌内注射(图2)适用于多种药物的注射,但强刺激剂(如氯化钙等)不能肌内注射,通常选在肌肉丰满的臀肌和大腿内、外侧部位,局部剪毛消毒后,针头垂直于皮肤迅速刺入一定深度,回抽无回血后,缓缓注入药液,注意不要损伤血管、骨骼和神经。
2. 皮下注射。
皮下注射(图3)主要用于疫苗和无刺激性药物的注射,一般选择颈部、股内侧或股下皮肤松弛、易移位的部位,局部剪毛后,用70% 酒精棉球或2% 碘酒(碘酊)棉球消毒,左手拇指、食指和中指捏起皮肤呈三角形,右手如执笔状持注射器斜向刺入,不能垂直刺入,慢慢注入药液。
探究丹参对家兔肠系膜上动脉缺血再灌注肾损伤的影响摘要:目的:初步探究丹参处理对家兔肠系膜上动脉缺血再灌注所引起的肾损伤的作用。
方法:选用健康家兔24只,随机分为3组:肠系膜上动脉缺血前注射生理盐水的对照组(A组)、缺血前注射丹参注射液的实验组(B组)、再灌注前注射丹参注射液的实验组(C组)。
常规动物实验操作找到肠系膜上动脉,夹闭家兔肠系膜上动脉30min造成缺血,再灌注30min。
观察尿量,收集不同时期尿肌酐、血肌酐、丙二醛(MDA)并测定其含量。
结果:家兔肠系膜上动脉缺血再灌注后尿量减少,A组减少最显著,其次是B组,C组减少较轻。
缺血再灌注后血肌酐、血清中丙二醛浓度增加,尿肌酐浓度下降,其中A组变化最明显,其次是B组,C组变化不明显。
结论:丹参能减轻家兔肠系膜上动脉缺血再灌注所引起的肾损伤,对肾损伤有保护作用。
关键词:肠系膜上动脉缺血再灌注丹参肾损伤肠缺血再灌注(IIR)损伤是休克、严重创伤及复苏过程中常见的病理生理过程,普遍存在肠根阻、肠扭转、大手术、烧伤等。
研究表明,小肠缺血再灌注后除对小肠组织本身造成损害外,还会通过全是炎症反应对其他器官造成损伤。
目前认为,缺血再灌注损伤产生的主要机制与活性氧的损伤作用、钙超载的作用、白细胞损伤作用、补体级联的损伤作用有关。
研究表明,丹参具有扩张外周血管、抗血栓形成、改善微循环等作用。
本实验采用家兔肠系膜上动脉缺血再灌注模型造成肠缺血,探讨丹参对家兔肠系膜上动脉缺血再灌注所致的肾损伤的保护作用和影响及其可能的机制。
1.材料与方法1.1材料:1.1.1实验动物:健康家兔24只,体重2—3㎏,清洁级,由南方医科大学实验动物中心提供。
1.1.2主要仪器:医用计算机记录系统(PcLab)及计算机、家兔手术台、哺乳动物手术器械一套、动脉插管、静脉插管、输尿管插管、压力换能器、离心机、分光光度计,恒温水浴箱、带刻度的试管及试管夹、试管和试管架、EP管、微量加样枪带枪头、电子天平、黑色丝线、纱布等。
维生素C在家禽抗应激中的作用研究进展睦国胜茎竖堇(中国农业科学院饲料研究所,北京.100081)摘要本文就应激状态下家禽体内V的台成;应激状态下家禽机体对Vc的吸收,分布和利用效率:日粮中添加V对家禽抗应激及生产性能的影响;Vc 在家禽抗应激作用研究的衡量指标及其测试手段和方法;抗应激中V与其他抗应激剂的互作;日粮v对家禽抗应激影响机理等六部分系统综进了Vc在家禽抗应激中的作用的研究进展.在集约化家禽业中,面临越来越多的应激因素的挑战.引起应激的因素很多,如营养不良,疾病,冷热,疫苗接种,惊吓,运输,转群,抉料,断喙,有害气体和物质的侵袭以及饲养管理不当等.高密度饲养造成的肉鸡的高温应激尤为突出.在高温高湿条件下,肉鸡表现为生产性能下降.自身免疫机能降低,发病率上升,甚至大群死亡.虽然可采取一些改善外部环境的措施,如在饮水中加冰块降温,喷雾降温,雨帘降温等:调整日粮能量和蛋白质水平;于饮水或日粮中添加或肌肉注射某些镇静刘等;但这些措施效果非常有限,而且也会增加生产成本.加强家禽本身抗应激能力则是比较理想的途径.维生素尤其是维生素c(Vc).是影响家禽免疫机能,提高抗应激能力的重要营养索之一.Vc因其具有抗坏血病功能而最早被人类所认识.Waugh和King(1932)首先分离出纯的v,并证明是抗坏血病因子.Abt等(1938)认为v具有抗感染特性.Ling.C.Pouling(1971)提到大剂量vc在家禽抗应激,疾病预防和治疗上的应用效果.随后v越来越被养殖生产者所接受,广泛用于日粮中以提高家禽免疫力,增强其抗应激能力和提高生产性能.但是由于家禽在应激状态下v的营养生理变化,如体内台成,吸收,代谢和利用率变化等尚不清楚,几十年来许多研究文献报道结果也不一致,因而目前在实际应用vc作为抗应激剂方面仍有很多争议.本文就,,在家禽抗应激中的作用.侧重从营养与免疫的角度进行评述.1应激状态下家禽体内vc的合成据Roy等(1958)和Chatterjee(1961)报道除了灵长目(如人类),豚鼠,鱼类.蝙蝠.昆虫,以及一些鸟类外.几乎所有的动物都可以合成V.其中两栖类和爬行类动物的Vc合成是在肾脏完成,家禽体内v也主要在肾脏中合成,而哺乳类是在肝脏中台成,不能台成V的动物需由食物供给.在应激条件下,家禽合成v的能力明显下降.Pardue(1987)报道,家禽虽然体内可以合成收稿日期:1996—05—31f_,,2动物营养第9卷Vc.但刚出壳的雏鸡合成能力较低,加上应激因素如疾病,冷热,饥饿等的影响,易引起v.的缺乏.Njoku(1992)发现,在高温环境条件下,肉鸡在头3周内,vc的生物合成能力十分有限.Cafantaris(1995)认为,2周龄前家禽体内合成的v.可能不能满足代谢需要.2周龄后合成的vc基本可以满足代谢需要:但是当家禽处于应激状况时.对维生素的需要量增加,这时则需要额外补充v.家禽v的合成主要在肾脏中完成,成禽在肝脏中也能台成.文杰等(1994)关于应激和非应激条件下肉鸡肝脏中v.合成的关键酶——古洛糖酸内酯氧化酶活性变化的比较试验表明.肉鸡在热应激条件下,肝脏的v合成能力减弱,血浆中vc含量明显降低,其原因是应激因素使家禽肝脏中的古洛糖酸内酯氧化酶活性降低.同时.外源性v.对该酶的活性无明显影响.但可以使肝,肾和血浆中的v.浓度明显升高.2应激状态下家禽机体对V的吸收,分布和利用效率v的吸收:V的吸收方式与碳水化合物(单糖)相似.在本身不能台成v.的动物体内,vc在肠道的吸收是一个依赖Na离子的主动运输过程.Spencer(1963)提出,不易患坏血病的动物对v的吸收方式可能是被动扩散过程.Kallner(1977)证明,少量的V容易吸收,剂量大时吸收率降低.食物中v的生物利用率一般为80%~90%.Rose(1986)研究表明,在代谢过程中,vc经酶促反应.首先被转化成脱氢,然后在细胞中被还原,还原型v和氧化型v的可逆氧化和还原反应是其最重要的化学特性,也是vc已知的生理学活性及稳定性的基础.被吸收的Vc极易和体内的vc保持平衡.LeeRussellMc.Dowell(1989)报道,v.无特殊的结合蛋白.人们认为它是结合在亚细胞结构上.v.的分解与排泄:绝大多数vc在体内被代谢分解,产物为二氧化碳和草酸,后者随尿排出(灵长目),剩下的v(包括内源性v.)通过尿,汗,粪便排出.尿中Vc的排量主要取决于Vc的摄入量,储存量及肾脏的功能LeeRussellMeDowel|(1989)报道肾脏的vc排出量取决于肾小球的滤过能力,该能力又受血浆中v浓度的影响.Sanberlich(1984)报道.尿中vc的代谢形式有多种,包括氧化型(脱氢)Vc.二酮古洛酸,2一S—v..草酸盐,甲基v和2--酮v等.Y arorsky(1934).Schans(1957).LIoyd和Nclair(1953),Kirk(1962),Heath(1962).Makila(1969)和贺普霄(1994)先后试验证明,吸收后Vc广泛分布于动物体全身组织.在腺体中,以肾上腺的含量最高.在试验动物中,v含量最高的器官是垂体和肾上腺,肝脏,肾,脾,胰腺以及心肌含量也很高,而在脂肪中含量最小.Kirk(1962)和Sung(1979)报道,在家禽体组织中.v主要分布在肾,肾上腺,肝,生殖腺和法氏囊,而且含量与日龄紧密相关.LeeRussellMcDowell(1984)发现新愈合的伤口附近vc的含量也较高.蔡辉益等(1996)在应激和非应激状态下,对肉鸡v营养生理变化的比较研究表明,在应激条件下.肉仔鸡对v的吸收,代谢和动用速度比非应激条件下快:肉仔鸡对Vc的吸收利用率也由84.85%提高到8571%.3日粮中添加,,c对家禽抗应激及生产性能的影响在应激和非应激条件下,家禽是否需要由饲料或饮水中获取vc即家禽自身生物台成的●--1I.一●‘Il■粤●●●第4期陈国胜等:维生素C在家禽抗应激中的作用研究进展3Vc能否满足本身营养需要,是多年来动物营养学专家争论的问题.这在人们获得稳定型v和其衍生物产品以后.在一定的环境,营养和疾病情况下,证实其添加效应的结论才趋于一致.Lyle(1968).Affia(1976),McDonald(1981).CatherinePorker(1983).Pardu e(1982:1985:1987),Teeter(1985),Chen(1990)和Rogen(1994)等报遭,在家禽日粮中添加vc或其衍生物,可促进其生产性能的充分发挥.提高其抗应激和免疫应答能力.日粮中添加v可提高家禽对各种应激的抵抗力,并且能降低因环境温度升高而引起的高死亡率,对生长,产蛋,解毒和疾病后康复均有良好的作用.杨禄良(1996)在高温高湿条件下日粮中添加不同水平v.观察对艾维苗肉鸡生产性能的影响,结果表明,未添加V组死亡率高达18.33%,显着高于相应常温组(P<0.05).在高温高湿组添加Vci00,200mg/kg组有降低死亡率的趋势,添加vc400rag/kg组可明显降低死亡率(P<0.o5).因此.许多学者建议在家禽日粮中添加Vc,尤其是在各种应激条件下更为重要,建议添加量见表1.家禽在使用疫苗或感染疾病期间,Vc的合成效率较低,家禽对v的需要量增加.其间在家禽日粮中添加Vc可以提高其免疫抗体滴度,增强其免疫应答能力,从而提高应激条件下的生产性能(表2).尽管如此,多年以来CarrickandHange(1925),Ranch(1964),Freeman(1983).N0ckeIs (1984),Pardue(1985a).NRC(1994).霍启光(1995)等营养学家和NRC(1994)一直认为,家禽日粮中不需添加Vc,因为正常条件下,成年家禽本身能够合成v.而且有的报道认为.日粮中添加Vc对家禽抗应激效果不明显,如Nockels(1984)认为.添加200mg/kgV对家禽死亡率无影响.此外,Puron等(1994)在热带气候条件下在生长肉鸡的日粮中添加200mg/kgVc却没有观察到各项生产性能指标的改善.Dudkey(1994)报道.由于加强家禽的免疫应答(免疫应答是感染性或非感染性因子作用于免疫系统的结果).会显着性降低生长率和饲料效率.调整日粮养分可以增强免疫应答.但又会加重生长抑制并进一步降低饲料效率,如提高日粮维生素C和维生素E等添加量有益于增强免疫应答,降低应激,但免疫应答的加强本身会导致一定的生长抑制,所以建议v的添加量应适宜.4Vc在家禽抗应激作用研究的衡量指标及其测试手段和方法维生素以及许多其他养分都对畜禽的免疫能力有着显着的影响.v是家禽免疫系统发挥正常功能所必需的营养素,也是家禽抗应激的重要营养素之一.近几十年来对抗应激作用的衡量指标及其测试手段和方法的研究和报道较多.4.1衡量指标4.1.1生产性能指标和生理生化指标的影响主要测定指标:体增重,饲料转化率,直肠和体表温度,甲状腺,肾上腺和胸腺的重量.总的血清蛋白.血清钾的浓度.4.1.2Vc水平对血液中自细胞活性的影响主要通过加强吞噬中性白细胞和淋巴细胞的功能.发挥吞噬杀灭微生物的作用.4动物营养第9卷表1国内外专家学者建议隶禽日粮添加量1曲1.RecommendedDa~ue5joradditionolvitaminCb$OYl~er~s~aTchersinsid eandoutsideChina①白细胞(WBC)总数计数和分类计数,主要指标:H/L值=异噬性粒细胞数/淋巴细胞数②细胞噬菌率和吞噬细菌率③淋巴细胞转化率和淋巴细胞分类计数——成熟的T一淋巴细胞亚群CD.CD.和CD计数.以及CD./CD.4.1.3v通过免疫活性细胞因子的合成和分泌发生影响主要测定指标:一干扰素(—IFN)和白细胞介素(II一1,IL一2).4.1.4v对抗自由基的损伤,保护机体免遭损伤,提高免疫机能第4期陈国胜等:维生紊C在家禽抗应激中的作用研究进展5表2日粮中螽加Vc与疾病的关系(mg/kg)1西2.TherelationshipofadditmnnjVitaminCtodiseaseso|poultry雏璃禽伤寒传染性鼻炎球虫病雏璃雏鸡肉仔鸡肉鸡对v的需要量增加(血浆v浓度下降)血液(血浆)和组织中v水平下降球虫病对Vc的需要量增加新城疫或禽霍乱新城疫新城疫感染柔擞艾美耳球虫感染堆型艾美耳球虫传染性支气管炎感染大脑杆菌预防和缓和病症500提高抗悻滴度50~100降低死亡率1000预防爰治疗300~33O预防及治疗330明显降低死亡率和心包炎的发生率H.1l和Arren(1958)Squibb等(1955)Degroot(1940),Sykes(1978)厦Kechik和Sykes(1979)Kechl和Sykes(1979)Squibb等(1955)Edirse(1986)Franehlni(1994)Attia善(1978)Kechlk和sykes(1979)Tacconi(I994)Gross(1988)主要测定指标:活性氧中的超氧自由基0和有危害的生物分子自由基其他活性氧如一OH均直接和间接衍生于0.现在还有报道测定血浆中与vc有关的几种防御自由基毒害的酶类,如超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CA T),过氧化物酶(POD),谷胱甘驮过氧化物酶(GsH—Px).4.1.5vc通过参与B一细胞介导免疫应答发生作用主要测定指标:血清中抗体水平.对抗绵羊红血球(SRBC).流产布氏杆菌,太肠杆菌的凝集素水平,以及抗新城疫病毒和马立克氏病毒的抗体滴度(效价). 4.1.6V.通过激素介导免疫功能主要测定以下激素:①肾上腺皮质激素(包括糖皮质激素:主要是皮质醇和皮质酮;盐皮质激素:主要是醛固酮).对家禽而言主要是肾上腺皮质酮.⑦甲状腺激素(包括甲状腺素TI,即3.5.3’,5’,一四碘甲腺原氨酸和Ta.即三碘甲腺原氨酸T.).4.2副试手段和方法4,2,l体液免疫应答评价(Delanty和Solomon,1966;Anoymous.1971:White,1973;Fran.chini,1994)对家禽疫苗(如新城疫疫苗,鸭疫巴氏杆菌一血清1型菌株和绵羊红血球(SRBC)等)接种前后.在不同时间梯度采血样,用血清学试验——血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI)或者酶联免疫吸附试验(EL[SA)方法测定和比较抗体滴度(效价).6动物营养第9卷4.2.2白细胞总数(WBC)和白细胞分类计数(DC)评价静脉采血样,用血细胞计数室镜检白细胞总数(WBC);同时,用全血涂片,瑞氏染色法染色,镜检,白细胞分类计数(DC).主要测定H/L值.4,2.3血浆中皮质酮激素,甲状腺素(T.)和三碘甲腺原氨酸(T.)的测定采取全血样,用皮质酮,T.和T.的药盒,进行放射免疫测定.4.2.4淋巴细胞活性和淋巴细胞转化的流式细胞光度术(FlowCytymetry)评价(Muirhead,.1985;Stefoni,1991;Franchinl,1994)肝素化的新鲜血液样分离出来的淋巴细胞悬浮液,采用FACSCAN 荧光激活流式细胞分离仪(如Beclon—Dickinson,MountainView,USA)激光光柱快速细胞计数,获得淋巴细胞参数:①向前散射试验(Forwardscatterdetermination)——淋巴细胞大小.②体外DNA合成(InvivoDNASynthesis)——体外瞬时DNA合成的淋巴细胞百分数直接做T一淋巴细胞亚群的鉴定和分类计数,当然还有经典方法:T 一细胞E玫瑰花环试验.淋巴细胞转化试验传统的方法有两种:即形态学检测法和.H一胸腺嘧啶核苷(.H—TDR)掺入法.现在市场已有改进H一胸苷掺入法使用的细胞增殖ELISA 药盒(CELLProlifera—tionELISA,BrdU),通过比色法或者化学发光法测定.4.2.5抗氧自由基的评价按照Knwles和Gibson(1969)报道的应用电子顺磁共振波谱(EPR)分析法或应用Nakamira和Yamazaki(1969)报道的酶学分析技术检测o,使o与超过氧化物酶结合成复合物x后活性下降.分光光度计直接测定法,直接测定GSH减少量来测定谷胱苷肽过氧化氢酶(GSH—PX)酶活力.分光光度法或滴定法,分别冽定未被分解的过氧化氢,计算240nm的光吸收改变量或被催化分解的过氧化氢量,从而测出过氧化氢酶活性.4.2.6不同生理条件下,体组织(主要是血浆,肌肉,肝,肾等)的Vc浓度的测定:按Roe和Kuether(1943)报道的方法测定.在应激和非应激条件下,日粮中添加不同浓度的Vc,测定体组织中的Vc应用较普遍的方法是v.的染色测定法,如血浆中的vc测定采用2,4——二硝基苯肼比色法,该方法常常用在氧化型v和总v的测定,还原型的Vc测定常用2,6——二氯苯酚靛酚(2,6一Dichlorophe一nolindopheno1).目前,T.n.和Fujita(1982)报道的分光光度计测定法及Rose和Nahrwold(1982)报道的气一液相色谱(GLC)和高技液相色谱分析法(HPLC)也开始应用.蔡辉益等(1996)利用同位素示踪方法,用H—Vc测定家禽在热应激条件下营养生理指标的变化.5抗应激中Vc与其他抗应激剂的互作有许多关于在抗应激中V.与其他抗应激剂的组合效果的报道.文杰(1995)报道家禽应第4期陈国胜等:维生索C在家禽抗应撒中的作用研究进展7激时.机体内糖皮质激素的分泌增加,使成熟或已经分化的淋巴器官中的环腺苷酸(cAMP)的含量提高.随之淋巴细胞的免疫功能降低.试验证明.Vc和V能够降低血浆中糖皮质激素,从而抑制cAMP的增加,保护免疫功能.同时,在抗自由基氧化过程中,vc参与生育酚自由基的再生.v不足会影响体内vc的合成.维生素C和维生素之间的互作:Fenster和Weiser(1994)曾论述Vc直接同l一羟基化酶和25一羟基化酶激活v.[25(OH)].参与骨的代谢和蛋壳的形成.Vc 增加了胆钙化醇(VD)向1,25一(OH)的转化,十二指肠钙结合蛋白的结合能力提高约50%.应激条件下,日粮添加v.能更明显地改善肉鸡和肉种鸡由于生长过快.骨骼发育较慢而引起的腿弱症;也能减轻笼养蛋鸡的骨质疏松症.大大降低异形蛋,薄壳蛋发生率和蛋壳破损率.v.和肉碱之问的互作:肉碱作为肉碱酰基位移酶(CarnitineAcyItransIocase)的辅酶,是脂肪酸代谢供能所必需的,也是决定机体肌肉受损产生疲劳的重要因子之一.Vc在肉碱合成中起重要作用,在应激条件下更为重要.v.与其他维生素之间的互作:Vc能减轻维生素A,维生索E,维生素Bt,维生素,维生素B和泛酸不足出现的症状.v.具有强还原性,水溶液呈酸性.而VB.和叶酸在还原性环境中易分解失效,VB.与VB一同使用易相互作用而失效.so10mons和Viteri(1982)详细叙述了v.与矿物质营养素之间的生物互作.可通过改变对铁,硒,铜.钒,铬和钴等的吸收,代谢和排泄等过程与这些元素发生互作.日粮中添加vc可以增强小肠对日粮铁和硒的吸收,减少铜,镍和镁的吸收.但对锌和钴几乎无效.关于Vc对毒性金属铬和汞的小肠吸收的报道不一致.Solomons等(1982)认为无效,而Fox(1971),War.muth(1993)和Rambeck(1994)的报道却认为日粮添加Vc可以消除铬的毒性.BenabdeJelilJensen(1990)也报道过添加v.能有效防止钒对蛋鸡产蛋下降的影响.通过对日粮铁和硒的吸收,增强机体的免疫能力.从而提高抗应激能力.在生产实践中经常使用的一些抗应激剂主要包括:镇静剂,肾上腺受体阻荆,中草药制剂,维生素,微量元素,电解质,个别氨基酸和抗生素等.如为缓和热应激作用,常常把Na:COa,NH.CI.氯丙嗪等作为抗应激添加物.6日粮,厂c对家禽抗应激影响机理的研究关于日粮中添加v.对家禽抗应激影响的机制研究报道很多,对其机理的解释也有多种.可以概括为以下三个方面.6.1v通过调节与机体抗应激作用相关激素(主要是肾上腺皮质酮和甲扶腺激素)的浓度,增强机体的免疫机能.提高抗应激能力6.1.1对皮质酮激素的调节v.在皮质酮激素的合成中起重要作用.McCorkle(1980),PardueandThaxton(1984),Degkweitz(1987)和Brake(1992)等认为,v是通过下丘脑一垂体一肾上腺轴影响皮质酮激素的浓度,问接地在免疫及抗应激过程中起重要作用.中枢神经系统(下丘脑)接受神经和体液传来的刺激源的刺激.其视上核和室旁核分泌颗粒沿着神经纤维到达垂体后叶或通过垂体门脉到达垂体前叶,从而调节垂体及其靶组织动物营养第9卷的活动.应激作用一中枢神经系统(下丘脑)—一促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)一垂体前叶分泌促肾上腺皮质激素(ACTH)一肾上腺皮质(束状带)一糖皮质激素(主要是肾上腺皮质酮)台成与分泌.正常浓度的糖皮质激素的主要作用是维持血糖水平稳定.促进蛋白质和体脂的分解,为糖元异生提供能量.在应激条件下,肾上腺分泌糖皮质激素,促使家禽动员体内蛋白质与脂肪分解,以保证机体的能量需求,降低应激,同时使机体对在糖皮质激素合成中起关键作用的vc的需要量增加.但是汪琳仙(1993)等认为,由于应激原作用,糖皮质激素分泌过多.使其血浆中的含量超过一宅的浓度时,将对家禽机体的免疫机能产生抑制作用.Roy和Gula(1958)用细胞培养的方法研究发现,它能与淋巴细胞样细胞浆中的特异性蛋白受体结合,使得类固醇受体复合物进入细胞核内,可改变酶的活性和影响核酸的代谢.主要是肾上腺皮质酮糖皮质激素分泌过高的影响(1)对体液免疫的影响a.降低巨噬细胞的吞噬机能,抑制对已吞噬物质在细胞内的消化;b.抑制淋巴细胞游走及摄取异物的能力.并使细胞数量减少;c.有溶解B一细胞的作用.从而减少B一细胞的数量:d.引起葡萄糖和蛋白质合成受抑制.Gills(1979)试验证明.各种刺激源引起T一协助细胞(T—Helpcel1)分泌的细胞再生园子即白介素(IL一2)和淋巴细胞活素(Lymphokine)减少,从而抑制浆细胞产生抗体的作用.(2)对细胞免疫的影响a.抑制胸腺内淋巴细胞的有丝分裂,抑制淋巴细胞的DNA合成.影响小淋巴细胞向T细胞转化:b.抑制T一细胞向抗原沉积处移行;c.阻止致敏的T一细胞释放淋巴细胞活素(Iymphokine):d.阻断淋巴细胞与单核细胞在局部的相互作用;e.抑制中性白细胞释放溶酶体.Pardue和Thaxton(1984)和宋振远(1994)等的大量试验证明,日粮中添加v.可降低糖皮质激素分泌.避免困其分泌浓度过高而产生的免疫抑制,从而提高抗应激能力.6.1.2对甲状腺激素的调节甲状腺激素主要是T.和T.,T的活性远远大于T.,是体内发挥生理作用影响代谢的主要激素.甲状腺激素主要对淋巴细胞的增殖起重要作用.刺激源(如疾病,冷热应激,饥饿等)对下丘脑一垂体一甲状腺轴的作用.使甲状腺滤泡缩小.降低甲状腺激素的分泌,并使外周淋巴细胞数目减少,体液免疫反应降低.Thexton(1959),汪琳仙(1993)和宋振远(1994)等的试验证明,日粮添加v可缓和高温中甲状腺功能减退,同时.甲状腺激素又可以增加内源性v.的分泌.6.2vc直接参与细胞和体液免疫应答家禽免疫系统可以分为两个结构和功能系统:产生抗体免疫应答的法氏囊依赖性系统(B一细胞)和细胞介导性免疫应答的胸腺依赖性系统(T一细胞).巨噬细胞依赖T一细胞和第4期陈国胜等:维生豪C在家禽抗应教中的作用研究进展9B一细胞的活性.产生一系列特异和非特异应答因子,包括免疫球蛋白和局部产生的淋巴因子.已知巨噬细胞内含的v.水平为血浆中vc水平的40倍.Bains(1996)认为,巨噬细胞中高水平的v.与细胞膜转运机制的启动有关.该机制为包被和杀死入侵病原体,并保护巨噬细胞自身不被破坏.Lillehoi(1991)认为T一淋巴细胞和B一淋巴细胞辨识不同的抗原,B一细胞用表面免疫球蛋白分子获得对感染抗原的灵敏性:T一细胞辨识被抗原递呈细胞(APC)改变了的抗原.(1)V.维持和加强胸腺淋巴细胞功能a.为多形核白细胞(PMN)氧化一还原活性组织的组分:b.增加中性自细胞和巨噬细胞的趋化性和运动性:c.直接影响T细胞分化为成熟的CD(T.),CD(T.)和CD一(T.).从而影响机体的免疫机能.CD.和CD.的比值是衡量机体免疫状态的重要指标之一;d.降低外周异噬细胞性粒细胞数量.(2)直接参与体液免疫反应v促进血清免疫球蛋白和胶元球蛋白的合成,提高血清中IgA,IgG,IgM和补体ca的浓度.这是因为机体中抗体必须有半胱氨酸.抗体分子中有许多二硫键(一S—S一),这些二硫键是由两个半胱氨酸组成的.而半胱氨酸来源于饲科中的胱氨酸,在机体内还原而成.这个过程需要v的参与.同时.在该还原过程中.v.被氧化成为脱氢v..又可使新合成的免疫球蛋白肽链上的琉基(一SH)成为二硫键(一S—S一),促使抗体的形成.Lamn(1971)Anonymous(1971).Dahl(1976).Prinz(1977).Niekerk(1989),Franchini(1994).宋振远(1994)和蔡玉根(1994)等的试验都证实了这点.但是McCorkle(1980)的报道指出.v只对B一淋巴细胞起作用,调节抗体免疫应答,而不是T一淋巴细胞.6.3V抗氧自由基作用.提高家禽免疫及抗应激机能生物体内除了因物理和化学因素雨产生外源性自由基外.还可以从非酶和酶反应中产生内源性自由基,这些均为家禽机体产生应激的因素.内源性的自由基一般指氧自由基及其活性衍生物.主要是超氧阴离子O一.(或HO:)羟基自由基一OH和单线态的氧O及其衍生物HO,RO,RO,ROOH.所谓活性氧就是指氧的某些代谢产物及其衍生物等含氧物质,它们都是直接或间接由氧转化而成.而且具有较氧活泼的化学反应性.活性氧主要指O一.,其它如OH均直接或间接衍生于O.Nohl(1981).BoonP.chew(1994)和方允中(1994)指出,这些高活性氧在正常的需氧细胞代谢中不断产生,并逐步被还原,但也不断被清除,因而显不出自由基对机体的损伤.否则,自由基的产生和增加,或者机体清除自由基的能力减弱,或者兼而有之,都会造成对机体的损伤.在机体内自由基产生和清除的平衡过程中.v起重要作用.Stocker和Frei(1991)报道v是细胞外液中最重要的抗氧化物质.Fret(1989)和Sies(1992)认为vc 通过有效地抗活性氧自由基,减少组织中氧自由基来保护生物膜免遭过氧化物的损伤. v是电子供体.为还原剂.当它供给一个电子时就成为半脱氢抗坏血酸自由基,如再供给一个电子.则成为脱氢抗坏血酸.由于v.具有这种特性.低浓度时它可使Fe”还原为Fe”.动物营养第9卷Fe”与HO反应生成.OH,显示有害作用,但因生物体内抗坏血酸浓度比较高,所以它可作为自由基清除剂.如:。
机能学设计性实验福建医科大学2012级临床医学8中班邱凉凉陈志龙尹哲黄国堡汪声祺预先静脉注射维生素C对家兔肠系膜上动脉缺血-再灌注损伤的保护作用【目的和原理】根据休克的缺血-再灌注损伤理论,通过静脉注射环磷酰胺封闭家兔肝脏网状内皮吞噬系统功能,24h后夹闭肠系膜上动脉若干时间,然后恢复血流灌注可造成小肠缺血-再灌注损伤,肠源性内毒素入血而发生休克[1]。
研究表明,对组织造成损伤的主要因素,不是缺血本身,而是恢复血液供应后,产生大量的自由基攻击这部分重新获得血液供应的组织内细胞,造成肠内皮细胞保护屏障的损伤,肠道毛细血管通透性增高,肠粘膜损伤加重,并出现广泛上皮和绒毛分离,上皮坏死,引起肠道内细菌毒素入血,从而产生类似感染性休克的结果[2]。
已有实验表明,维生素C具有很强的抗氧化(清除氧自由基)和降低肠道细菌易位发生率和易位量的作用,因此预先静脉注射维生素C可使超氧化物歧化酶(SOD)活性增高、血清丙二醛(MDA)含量下降[3],起到保护肠粘膜屏障的作用。
基于以上原理,本实验旨在学习肠系膜上动脉闭塞性休克动物模型复制的方法,探讨维生素C对缺血—再灌注损伤休克的保护作用,从而进一步拓展维生素C的临床应用价值。
【实验动物】家兔9只,体重2 kg以上,雌雄不拘。
【实验器材与药品】RM6240多道生理信号采集处理系统或BL-420生物机能实验系统、压力换能器;手术台、急性动物实验动物手术器械、动脉夹、气管插管、三通管、30ml注射器、玻璃试管、可调节移液枪(100μl和1000μl)、滴管、秒表、纱布、细丝线;0.5%肝素钠生理盐水(625U/ml)、环磷酰胺、20%氨基甲酸乙酯溶液(或3%戊巴比妥钠溶液)、1%普鲁卡因溶液、显色基质鲎试剂盒、无热原的真空采血管、无热原试管等。
【实验步骤与观察项目】1、手术操作(1)术前动物处理:取家兔9只,随机分为三组,分别编号A、B、C,实验前24h各耳缘静脉注射环磷酰胺60mg/kg,禁食,自由饮水。
(2)麻醉与固定:家兔称重,耳缘静脉缓慢注射20%氨基甲酸乙酯溶液5ml/kg或3%戊巴比妥钠溶液1ml/kg麻醉动物,注射时应密切观察动物的肌张力、心跳、呼吸、瞳孔大小、角膜反射和皮肤夹捏的疼痛反映等。
麻醉后将动物仰卧固定于手术台上,注意颈部要放正。
(3)气管插管:剪去颈部的毛,自甲状软骨到胸骨上方沿正中线切开皮肤及皮下组织(切口长约5cm),分离皮下组织和肌肉,暴露气管,气管下方穿一根丝线,在甲状软骨下方的气管上做一倒“T”形切口,插入气管插管后结扎固定。
(4)颈总动脉插管:分离左侧颈总动脉2~3cm,近心端用动脉夹夹闭,远心端(尽量靠近头端)用线结扎,在结扎下方剪一切口,向心脏方向插入注满0.5%肝素钠生理盐水的动脉插管,用另一丝线结扎固定。
打开动脉夹,用注射器经三通管向动脉内注入0.5-1cm的0.5%肝素钠生理盐水,再旋转三通管的开关,使动脉插管与压力换能器相通,即可记录动脉血压。
(5)右颈总静脉插管:颈总静脉位置较浅,位于颈部肌肉外缘,用血管钳轻轻钝性分离并在下方穿两根丝线,结扎远心端,以结扎线作为牵引线提起颈总静脉,并将一手指垫在颈总静脉下。
用眼科剪在近心端血管壁上呈45°角剪一小口,插入带三通开关、已充满生理盐水的静脉导管并深入至相当右心房位置(5~7cm,该长度需在插管前在导管上做标记),遇有阻力应往回退一小段,切不可硬插(易插破静脉进入胸腔)。
此时旋动三通管开关,使静脉插管与压力换能器相通,即可测得中心静脉压,观察插管是否成功。
若导管插管成功,则可见中心静脉压数值在0~12cmH2O范围并随呼吸而上下波动,结扎固定。
三通管连上输液瓶,不测压时使导管与输液管相通,缓慢输入生理盐水(5~10滴/分),保持静脉通畅。
(6)暴露肠系膜上动脉:自剑突下1.5cm起沿腹正中线向下做一个正中切口,切口长约8cm,打开腹腔后,用温生理盐水纱布将内脏轻轻推向左前方,暴露出脊柱和腹膜后组织、在脊柱稍右可见黄色的右肾上腺,于右肾上腺右上方可见肠系膜上动脉,用血管钳钝性分离周围组织,然后在肠系膜上动脉穿线备用。
(7)B组轻轻提起肠系膜上动脉的穿线,用动脉夹夹闭肠系膜上动脉60min 后,除去动脉夹,分别在松开动脉夹后0min、5min、15min、30min、60min、90min、120min于家兔耳中央动脉采血2ml置于含肝素钠抗凝剂的无热原试管中待用,并描记颈动脉血压曲线同时观察血压变化;A组仅暴露但不夹闭肠系膜上动脉,取血与描记颈动脉血压曲线操作与B组同;C组于动脉夹松开前15min(即夹闭后的第45min)由三通管注射维生素C 0.500g/kg(浓度为0.300mg/L)[4],接下来的操作与B组同。
2、系统连接和参数设置(1)实验装置连接:与颈总动脉插管相连的压力换能器置于家兔心脏同一水平面,其输出线接RM6240(或BL-420)系统输入通道1。
(2)参数设置:打开仪器电源,启动计算机,进入RM6240(或BL-420)操作相应界面,预热20分钟。
RM6240系统:采样频率800Hz,扫描速度500ms/div,时间常数选直流,高频滤波30Hz。
模式为压力,灵敏度2.5cmH2O/div。
BL-420F系统:采样频率50Hz,时间常数选直流,高频滤波20Hz。
扫描速度1.0s/div。
通道1选压力,增益50mV。
3、观察项目(1)测定血液内毒素含量分别从各无热原试管取血1ml,在显色基质鲎试剂试剂盒按其使用说明书提供的方法(见附录),测定各血浆内毒素水平并比较A、B、C三组内毒素水平的不同。
(2)描记颈动脉血压曲线轻轻提起肠系膜上动脉的穿线,用动脉夹夹闭肠系膜上动脉,同时观察并描记血压曲线。
然后分别在松开动脉夹后0min、5min、15min、30min、60min、90min、120min观察并描记血压曲线。
将上面的结果记录于记录于表1(见附录)【预期结果】1、三组家兔内毒素测定的平均值分别为:A组:0.008μg/ml; B组:6μg/ml C组:0.05μg/ml可见,实验组(C组)注射维生素C后,家兔血液中的内毒素含量较对照组(B组)明显减少,较空白组(A组)增加不明显。
2、三组家兔的血压变化曲线可见,对照组(B组)的血压较正常组(A组)明显下降,实验组(C组)的血压较正常组(A组)无明显变化。
由上述结果可知,通过预先给家兔注射维生素C,可以在肠系膜上动脉缺血-再灌注休克动物模型中起到减少内毒素释放入血的作用,大大减轻休克损伤,从而起到预防作用。
【实验研究意义】实验创新与临床应用近年来,随着休克治疗的进步以及溶栓治疗、心脏外科体外循环、心肺脑复苏、断肢再植、器官移植等方法的建立和应用,使组织器官的血液循环重建,功能得到恢复。
由于受损组织结构的修复,患者的病情得以好转或康复;但是有时缺血后再灌注,不仅未能使组织、器官功能恢复,反而加重组织、器官的功能障碍和结构损伤。
现已证实,心、脑、肝、肾、肺、胃肠道、肢体及皮肤等多种组织器官存在缺血再灌注损伤的现象。
本实验通过探究维生素C对家兔肠系膜上动脉缺血再灌注损伤的保护作用,将维生素C的抗氧化(清除氧自由基)和降低肠道细菌易位发生率和易位量的作用类推于存在缺血再灌注损伤现象的上述组织器官中,保护组织器官,老药新用。
而且维生素C价格便宜,能够大范围推广使用。
【注意事项】1、剪开腹膜时,如动物仍有疼痛反应,可再用少量的1%普鲁卡因溶液进行腹膜麻醉;2、移动内脏动作轻柔,以免过度牵拉损伤肠管,造成血压下降;3、分离肠系膜上动脉时,动作要轻,不要使用锐器,夹闭时不能用力过猛造成血管大出血;4、正确使用动脉夹,确保夹紧肠系膜上动脉;5、动脉夹夹闭过紧,松夹后动脉仍未被复流的血液冲开,需用食指深入夹闭处搓揉几下。
【附录】显色基质鲎试剂盒使用说明1、材料和设备1.1 试剂鲎试剂、细菌内毒素工作品、显色基质、偶氮化试剂1 、偶氮化试剂2 、偶氮化试剂3、HC l ( 反应终止剂) 、细菌内毒素检查用水。
1.2 器材无热原试管、无热原吸头。
旋涡混合仪、移液器、多道移液器、封口膜、试管架。
恒温水浴箱(37〒1℃)、分光光度计。
注意:接触试剂及供试品的所有器皿必须是无热原的(出产公司提供无热原耗材)。
玻璃器皿可经250℃干烤至少60 分钟去除热原。
2、供试品的贮存与预处理备注:若供试品为血液类,请参照厂家配套血液相关处理试剂使用说明书。
2.1 供试品的pH 值应在6 - 8 之间,若超出此范围,需用无热原缓冲液、0.1N 氢氧化钠或0.1N 盐酸调节。
2.2 若供试品中可能存在鲎实验的干扰物质,处理参见【供试品的干扰试验】。
2.3 若供试品中可能含有β-葡聚糖(β-葡聚糖会产生G 因子旁路反应,干扰内毒素检测),需选用特异性鲎试剂(出产公司提供)。
2.4 若供试品为一些抗菌素如头孢类抗菌素和磺胺制剂会对偶氮染色剂产生偶联反应而干扰偶氮化显色,需要选用不含偶氮化试剂的试剂盒(出产公司提供)。
2.5 若供试品的本底吸光度值大于0.5,必须对供试品进行稀释后再检测。
2.6 若供试品颜色较深(例如溶血),或在酸性条件下颜色加深(例如一些组织培养介质),必须设置供试品空白管以扣除供试品自身的颜色本底。
供试品空白管不加入鲎试剂,以等体积鲎试剂的溶剂(该处为细菌内毒素检查用水)代替。
其余操作同供试品管。
3、实验操作3.1 细菌内毒素标准溶液配制标准曲线所采用的内毒素浓度可以为0.01, 0.025, 0.05, 0.1 EU/ml 或0.1, 0.25, 0.5,1.0EU/ml。
稀释方法如下(以0.1, 0.25, 0.5, 1.0 EU/ml 为例):取细菌内毒素工作品1支,按细菌内毒素工作品使用说明书稀释为10EU/ml 的内毒素溶液,再稀释为1.0EU/ml 的内毒素溶液,以1.0EU/ml 的内毒素溶液为母液按下表稀释成0.1,0.25, 0.5, 1.0 EU/ml 的浓度梯度。
配制好的内毒素标准溶液应在4 小时内用完。
表1 内毒素标准溶液配制内毒素浓度(EU/ml) 1 0.5 0.25 0.1加细菌内毒素检查用水(ml) 0 0.5 0.75 0.9加1EU/ml内毒素溶液(ml) 1 0.5 0.25 0.13.2 阴性对照为细菌内毒素检查用水。
3.3 鲎试剂、显色基质、偶氮化试剂等的溶解显色基质特异性鲎试剂盒使用说明书 (终点显色法,含偶氮化试剂)鲎试剂:按标示量加细菌内毒素检查用水于鲎试剂中,轻轻振摇使鲎试剂完全溶解, 注意不要用旋涡混匀仪激烈振摇。
溶解的鲎试剂应在10 分钟内用完。
显色基质:按标示量加细菌内毒素检查用水于显色基质中,轻轻振摇使显色基质完全溶解。