带你了解结核感染T细胞检测

临床应用案例
肺外结核辅助诊断：
➢某院感染科，女，75岁 ➢临床症状：发热数日，胸痛，干咳 ➢检测结果：X射线胸腔积液影像，积液涂片（-）、积液培养
（-）、TB-IGRA T-N 350pg/ml，积液单核细胞增多，血沉 快 ➢结果分析：对于肺外结核的诊断，涂片与培养的阳性率极低， TB-IGRA（+），结合其他非特异辅助指标可明确诊断肺外结 核。
•以肺结核最常见，死亡人数仅次于艾滋病。也可见于全 身各器官。肺外结核占整个发病率的10%-20%，死亡率占 结核病全部死亡率的14.1%-17.6%。
•全世界约三分之一的人群感染，《2014年全球结核病报告》 显示：2013年有900万新发病例， 150万人死亡。
•中国是结核病高发区，发病数居全球第二，现有600万活 动性肺结核，且患者人数逐年增加，始终位居全国甲乙类 传染病的前列。
A
发病人群前五位的国家
• India(2.0 million–2.5 million) (26%) • China (0.9 million–1.2 million) • South Africa (0.40 million–0.59 million) • Indonesia (0.37million–0.54 million) • Pakistan (0.33 million–0.48million).
A
1
Υ干扰素释放试验 （IGRAS）临床应用
南京医科大学第二附属医院 呼吸科 沈红
A
2
目录
contents
1. 结核病的诊断现状 2. TB-IGRA产品介绍 3. TB-IGRA的临床应用 4. TB-IGRA检测方法及结果解释
结核病现状
A

分类
根据感染部位，骨科结核感染可 分为脊柱结核、关节结核和骨结 核等。
临床表现与诊断
临床表现
早期症状可能不明显，随着病情发展 可能出现疼痛、肿胀、活动受限等症 状。
诊断
结合临床表现、影像学检查和实验室 检查进行诊断，其中T细胞斑点检测（ SPOT）是一种常用的实验室检查方法。
骨科结核感染的流行病学
采用其他检测方法进行确认。
05 SPOT检测的案例分享
案例一
患者情况
一位中年男性，因髋关节疼痛就诊，疑似髋 关节结核感染。
诊断结果
结合患者临床表现和SPOT检测结果，最终 诊断为髋关节结核感染。
SPOT检测
对患者进行T细胞斑点试验（SPOT），检测 结果显示阳性，提示存在结核感染。
治疗方案
患者接受抗结核药物治疗，并进行髋关节手 术治疗，术后恢复良好。
案例二
患者情况
一位青年女性，已确诊为脊柱结核感 染。

02
SPOT检测
对患者进行T细胞斑点试验（SPOT）， 检测结果显示阳性，提示结核感染活 动期。
01
治疗方案
继续抗结核药物治疗，并定期进行复 查。
05
03
病情变化
经过一段时间的抗结核药物治疗后， 患者病情得到控制，再次进行SPOT检 测。
04
检测结果
结合其他技术
扩大应用范围
探索将SPOT检测与其他诊断技术相结合， 提高诊断的全面性和准确性。
研究SPOT检测在骨科其他疾病诊断中的应 用价值，拓展其应用领域。
感谢您的观看
THANKS
监测疗效
治疗后，SPOT检测可以监测治疗效 果，评估病情恢复情况。
预测复发
通过长期监测SPOT检测结果，可以 预测结核感染的复发风险。

02
报告格式应规范、清晰，易于阅 读和理解。建议使用表格、图表 等形式展示数据和结果。
SPOT检测结果的沟通与交流
医生应向受检者详细解释SPOT 检测结果的含义，并根据结果制
定相应的诊疗方案。
对于阳性或灰区结果，医生应进 一步询问受检者的结核病史、接 触史、临床表现等信息，以便更 好地评估病情和制定治疗方案。
病患者都有症状。
结核病对肺部、骨骼、肾脏等器 官均可造成损害，其中骨科结核
感要发生在脊柱、 髋关节和膝关节等部位，其中 脊柱结核是最常见的。
骨科结核感染的发病率呈逐年 上升趋势，主要与人口老龄化、 免疫系统疾病增多等因素有关。
骨科结核感染的流行病学特征 包括地域差异、人群分布和传 播途径等。
实验环境
确保实验室环境清洁、无 菌，符合进行细胞培养和 检测的要求。
样本采集与处理
采集样本
根据实验需求，采集患者的血液或淋巴结样本。
样本处理
将采集的样本进行离心，分离出血清或淋巴结组织。对血清或组织进行预处理，如去除杂质、过滤等。
SPOT检测实验步骤
细胞培养
将处理后的样本加入细胞培养板或瓶中，进行细胞培养。
T细胞斑点检测的优势与局限性
优势
T细胞斑点检测具有较高的特异性和敏感性，能够早期检测结核感染，尤其对 于潜伏感染者；该方法操作简便、快速，适合大规模筛查。
局限性
T细胞斑点检测无法区分活动性结核感染与潜伏感染，对于已经接受抗结核治疗 的患者可能出现假阴性结果；此外，该方法对于免疫抑制人群的准确性有待提高。
SPOT检测的未来发展方向与挑战
提高灵敏度和特异性
针对不同病种和人群，进一步 提高SPOT检测的灵敏度和特异
性，减少误诊和漏诊。

的鉴别诊断；
4、TB-IGRA阳性，表明机体曾经患过结核病，不能区分目前是否为活动性结核病；
5、TB-IGRA所用抗原为MTB特异性抗原，阴性检测结果代表目前机体没有MTB特异抗原致敏的T淋巴细胞，即受检者目前未感染MTB。
说明：近期有其它细菌感染、慢性病等可能会造成体内γ-干扰素升高，或者近期接受γ-干扰素治疗也会导致体内γ-干扰素水平过高。
免疫缺陷患者，应用免疫抑制剂、肾上腺皮质激素治疗患者，病危病人和免疫能力极其低下，在接受结核杆菌相关抗原刺激时，γ干扰素的分泌比较低，可能会产生阴性结果。
建议对该类患者检测前参考CD4含量水平或者T淋巴细胞水平。
结核感染T细胞(TB-IGRA)/γ-干扰素释放试验
项目名称
标本类型
临床意义
“结核感染T细胞(TB-IGRA)”(又称“γ-干扰素释放试验”）
肝素锂抗凝血（长绿管），采集静脉血不低于4mL
1、可用于结核病辅助诊断，特别是对于菌阴肺结核和肺外结核的辅助诊断有更大的临床意义；
2、潜伏性结核筛查(不受卡介苗接种和环境分枝杆菌的影响)，主要用于生物制剂/免疫抑制剂使用前后的结核感染筛查；

T-SPOT.TB试验结果用每106 PBMCs中斑点形成细 胞（SFCs）的数目来描述，即SFCs/106 PBMCs
T-SPOT.TB高灵敏度
种类
活动性结核/ 灵敏度
内容摘要
将T-SPOT.TB的检测结果与最后通过涂片和培养确诊的结 果进行比较。包括牛型结核杆菌和非洲型结核杆菌感染的 患者。T-SPOT.TB的灵敏度为97.2%。（CI 90.3-99.7%）
在经培养确诊的活动性结核患者中，T-SPOT.TB的灵敏度 为94%。
87
Lee et al.
ERJ 2006; 28:24–30
30
Clark et al. Clin. Exp.
Imm.
2007; 150(2):238-44
140
Kang et al Chest.
2007 Sep;132(3):959-65
抗原刺激后分泌γ 干扰素而设计的T细胞免疫斑点试验。 检测外周血中受结核特异抗原刺激释放γ 干扰素的T淋巴
细胞，经酶联免疫显色后，通过ELISPOT分析系统 对斑点进行计数，1个斑点代表一个分泌细胞，计算出抗 原特异性细胞的频率。
空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑点数 大于20时视为试验有效
Immunol 2008; 15;168-
71
T-SPOT.TB高特异性 检测所用的ESAT-6＆CFP 10抗原均来自结核
分枝杆菌基因组RD1区域，RD1区基因仅存在于结 核分枝杆菌复合群（人型、牛型、非洲型）。 卡介苗和大多数环境分枝杆菌缺失RD1区基因 因此 T-SPOT.TB不会受卡介苗或者非结核分枝杆 菌影响。
32
Kim et al. Arch Intern
Med.

注意事项
采血量：6-10ml 采血管：肝素抗凝 样本保存：当天送样，常温运输 注意：PET-CT与输血
*
方法学优点
特异性95%左右，不受卡介苗（BCG）接种与环境分枝杆菌影响 灵敏度95%左右，几乎不受个体免疫功能低下影响 快速，24小时报告结果 国内外指南推荐，多篇文献数据支持 斑点数意义：斑点越多越倾向活动性结核、现症感染、能反应疗效 送样的注意事项
*
——Ribeiro S, Dooley K, et al. BMC Infect Dis, 2009 （IF=3.02）
方法：在肺结核治疗中，用T-SPOT.TB方法评估治疗效果。在治疗开始前，治疗16周和24周后，分别计数ESAT-6和CFP-10刺激产生的斑点数
图1. 所有研究对象ESAT-6, CFP-10和总RD1在治疗前，16周后和24周后的平均斑点数（n=58）
*
方法学缺点
不能够提示临床患者的病变部位，需要结合临床的判断 目前还不能够根据斑点数量的多少来判断患者是活动性结核病或是潜伏感染者
*
内容
结核病基础概念 T-SPOT.TB 产品知识 T-SPOT.TB 临床应用 病例分享
*
肺外结核
结核分枝杆菌能侵染全身大部分器官，其中有20%发生在肺外
100.0% (12/12)
Ferrara et al Lancet 2006 376;1328-34*
83.3% (20/24)
Lee et al Eur Respir J 2006 28;24-30*
96.6% (84/87)
Goletti et al Clin Microbiol Infect 2006 12;6:544-50*
活动性与潜伏性结核感染患者中，T-SPOT.TB斑点数比较

88.6%(39/44)
国外mparison of Tuberculin Skin Testing, QuantiFERON-TB Gold and TSPOT.TB in Children
Latent TB检出高
Positive Tuberculin Skin Test or Interferon-Gamma Release Radiographic Lesions Suggesting Old Healed Tuberculosis
临床应用案例
肺外结核辅助诊断：
➢某院感染科，女，75岁 ➢临床症状：发热数日，胸痛，干咳 ➢检测结果：X射线胸腔积液影像，积液涂片（-）、积液培养
（-）、TB-IGRA T-N 350pg/ml，积液单核细胞增多，血沉 快 ➢结果分析：对于肺外结核的诊断，涂片与培养的阳性率极低， TB-IGRA（+），结合其他非特异辅助指标可明确诊断肺外结 核。
A
25
NTM（非结核分枝杆菌）比例增高
2000 年全国流调分离的抗酸杆菌菌株中，NTM 菌株占11. 1% ， 其中90% 为非结核分枝杆菌肺病。
NTM 肺病的临床表现与结核病相似， 既可有全身中毒症状， 亦有局部损害表现。但症状和体征缺乏特异性，20%-50% 的病 人无明显症状，除非做菌型鉴定，凭临床表现难与肺结核病相 鉴别。
A
16
TB-IGRA 产品特性
➢高灵敏度，检出率85%以上
➢高特异性
RD1区编码的ESAT-6和CFP-10两个特异性抗原
该抗原具 有较强的Thl细胞免疫原性，且在所有制备卡介 苗的菌株及环 境中绝大多数非结核分枝杆菌中均不存在该抗原，不受卡介苗和非分
支杆菌影响
IFNg

自动化和智能化
开发自动化和智能化的T细胞检测系 统，提高检测的效率和可重复性。
T细胞检测与其他检测方法的联合应用
与细菌学检测联合
将T细胞检测与传统的细菌学检测方法相结合，以提高结核病的诊 断准确性。
与免疫学检测联合
将T细胞检测与其他免疫学指标（如抗体水平）相结合，以提供更 全面的免疫反应信息。
与分子生物学检测联合
04
结核感染T细胞检
测的临床应用
诊断结核病
诊断准确性
结核感染T细胞检测通过检测体内是否存在结核特异性抗原，能够准确诊断结 核病，尤其对于肺外结核和痰菌阴性肺结核的诊断具有重要意义。
早期诊断
由于结核感染T细胞检测具有较高的灵敏度，能够在结核病早期阶段就检测出阳 性结果，有助于早期诊断和治疗，减少疾病传播。
临床验证
进行大规模的临床验证研 究，以评估新型T细胞检 测方法的性能和实用性。
THANKS
感谢您的观看
T细胞检测通常采用 酶联免疫法（ELISA） 或酶标仪进行定量检 测。
通过检测IFN-γ水平， 判断是否存在结核特 异性T细胞反应。
T细胞检测的优势与局限性
优势
T细胞检测具有较高的灵敏度和特异 性，能够早期发现结核感染，尤其适 用于潜伏性结核感染的诊断。
局限性
T细胞检测无法区分活动性结核与潜伏 性结核感染，且受免疫系统功能状态 、年龄、疫苗接种等因素影响，可能 出现假阳性或假阴性结果。
结核感染T细胞检测 课件
目录
CONTENTS
• 结核感染概述 • 结核感染的检测方法 • 结核感染T细胞检测原理 • 结核感染T细胞检测的临床应用 • 结核感染T细胞检测的未来发展
01
结核感染概述

检验科新项目-----结核感染T细胞γ干扰素释放实验（TB-IGRA）为更好满足肿瘤性、结核性包块及肿瘤性、结核性胸腹水鉴别诊断的临床需求，检验科拟开展“结核感染T细胞γ干扰素释放实验”的新项目。

该项目采用经美国CDC及欧盟CDC
推荐的更敏感的结核检测技术。

此技术不受卡介苗和其他常见非结核分枝杆菌的干扰，主要用于癌性胸腹水与结核性胸腹水等的鉴别诊断。

该技术检测标本类型除血液外还可检测体液（如胸腹水、灌洗液、浆膜腔积液等）。

该项目可以医保支付。

一检测原理
结核分枝杆菌感染机体后，T淋巴细胞会形成免疫“记忆”；通过在体外分离到T淋巴细胞后，培养增殖T细胞的同时加入相应结核分枝杆菌特异抗原进行刺激，激活该细胞的记忆；有记忆的细胞会分泌γ干扰素；通过检测γ干扰素的量，来反映机体是否有结核感染。

二临床意义
该检测可用于肿瘤性、结核性包块及肿瘤性、结核性胸腹水等的鉴别诊断。

三 TB-IGRA检测结果的临床意义解读
1 TB-IGRA阴性结果：阴性检测结果代表目前机体没有 MTB 特异抗原致敏的 T 淋巴细胞，即受检者目前未感染 MTB。

临床诊断上首选排除结核病的诊断，尤其是在结核病高发地区、免疫功能正常人群及无可靠依据诊断结核病时。

2 TB-IGRA阳性结果：应结合影像学，临床症状，既往病史，结核中毒症状，有无病灶等综合考虑进行临床诊断和干预措施。

由于该实验涉及活细胞培养，为了保证测定结果的准确性，请严格按照下表要求采样和。

THANKS
感谢您的观看
与免疫学指标关联
分析TB-IGRA检测与免疫学指标（如CD4+T细胞计数、干扰素-γ释放等）的关系，发现这些 指标在结核病患者中异常表达，且与TB-IGRA检测结果相互印证。
与临床表现及预后关联
探讨TB-IGRA检测结果与结核病患者临床表现及预后的关系，发现阳性结果与患者病情严 重程度、治疗反应及预后密切相关。
完善相关法规和政策支持
01
制定行业标准
建立TB-IGRA检测技术的行业标 准和质量管理体系，确保检测结 果的准确性和可靠性。
02
加强政策扶持
03
完善医保报销政策
政府应加大对TB-IGRA检测技术 的投入和支持力度，推动相关产 业的发展和创新。
将TB-IGRA检测技术纳入医保报 销范围，减轻患者的经济负担， 提高检测的可及性。
05
临床案例分析与解
读
不同类型结核病患者案例分析
活动性结核病案例
通过对比活动性结核病患者的TB-IGRA检测结果，发现其 阳性率较高，表明该检测对于活动性结核病的诊断具有较 高敏感性。
潜伏性结核病案例
分析潜伏性结核病患者的TB-IGRA检测结果，可见部分患 者呈现阳性反应，提示存在结核分枝杆菌感染，但无明显 临床症状。
加强国际间合作与交流
分享经验与技术
加强与其他国家和地区的交流与合作，分享TB-IGRA检测技术的研 发和应用经验，共同推动技术的进步和发展。
参与国际标准制定
积极参与国际标准的制定和修订工作，推动TB-IGRA检测技术的国 际化和标准化进程。
加强科研合作
鼓励科研机构和企业加强合作，共同开展TB-IGRA检测技术的基础 研究和应用研究，推动技术的不断创新和发展。

【科普】结核感染T细胞检测流程
一、标本要求
肝素锂（绿帽）抗凝全血4Ml，不必要空腹。

二、检测程序
1.淋巴T细胞36-38℃培养24h；
2.酶联免疫法检测干扰素水平。

三、检测报告
T：测试培养管（T）含量值
N：本底对照培养管（N）含量值
P：阳性对照培养管（P）含量值
点击可了解相关内容介绍
检验科介绍
致病性真菌及检测技术
真空采血管颜色的秘密？
理想的标本是临床检验成功的关键！
健康科普
♥直肠脱垂非小事，莫忍莫拖早诊治！
♥近视度数还在涨？混合性近视是可以治疗的！
♥“拔罐疗法”,你了解吗?
♥湿敷法—肛肠术后换药不再疼痛！
♥中药保留灌肠可治疗哪些肛肠疾病？
♥地震时自救常识！
♥直肠息肉前世今生
♥地震时救助常识！
♥致病性真菌及检测技术
♥震后如何有效预防传染病?
免责声明。

47
在德国用T-SPOT.TB对健康的卫生保健工作者进行筛查。仅1 例阳性（1/95） ，为影像学工作者，接触病人超过35年。 TST检测假阳性结果34% （32/95）。
95
在接触结核的健康医务工作者和健康对照受试者中用TST和TSPOT.TB检测。155健康医务工作者中，TST阳性的27例，而 T-SPOT.TB仅3例阳性。健康对照组T-SPOT.TB全部阴性而 TST有3例阳性。
186
Kim et al. Am J Med 2009；122, 189-195
58 32
Janssens et al ERJ 2007；30(4):722-8 Dominguez et al Clin Vacc Immunol 2008; 15;16871
T-SPOT.TB高特异性 检测所用的ESAT-6＆CFP 10抗原均来自结核
218
Storla et al. BMC Infectious Diseases 2009,9:60
6.结论
T-SPOT.TB在诊断结核感染方面具有良好的敏感 性和特异性，在现有结核诊断方法存在缺陷的今 天， T-SPOT.TB 可以给临床诊断提供参考。 基于结核抗原特异性T细胞向病变部位集中的特点 ， T-SPOT.TB的检测物已不局限于静脉血，支气 管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、脑脊液等也可用 于对肺内及肺外结核的诊断。
分枝杆菌基因组RD1区域，RD1区基因仅存在于结
核分枝杆菌复合群（人型、牛型、非洲型）。
卡介苗和大多数环境分枝杆菌缺失RD1区基因 因此 T-SPOT.TB不会受卡介苗或者非结核分枝杆 菌影响。
种类
内容摘要
受试者数 量 14
文献发表
特异性

三．在肺外结核患者诊断中的，敏感性优于结核菌素试验。
四．对小于4岁儿童，与结核菌素实验比较敏感性无优势，美国CDC更推荐结核菌素实
验。
T-SPOT-TB—应用
在结核性脑膜炎、结核性胸膜炎中的诊断意义
1.
敏感性优于ADA、TB-DNA，约在62-75%，特异性无统计学差异。
在结核病治疗中的评价意义
得（interferon gamma release assays）
IGRAs用于检测结核感染。IGRAs通过检
测代表结核分支杆菌的抗原刺激T淋巴细胞
反应后释放IFN-γ的量来判断是否存在结
核杆菌感染。
T-SPOT-TB—定义
以结核特异的混合抗原A和
混合抗原B（分别为ESAT6和CFP-10的部分多肽片
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的阐述您的观点。
汇报人姓名
1.
其数值高低与严重程度无关。
2.
效应T细胞随结核杆菌的清除而消失，其阴性及阳性结果可作为评估治疗效果的手段之一 。
T-SPOT-TB—应用
01
敏感性优于结核菌素试验，且不受卡介苗接种影响。
02
较少受到其他分支杆菌感染影响。
03

其阴性预测值高于阳性预测值，排除诊断意义更高。
在潜伏性结核杆菌 感 染者 的 筛选 中
染二科
核感染T细胞斑点试验
T-SPOT -TB）
击 / 此 / 处 / 添 / 加 / 副 / 标 / 题
演讲人姓名
由来----γ
干扰素释放
试验
（IGRAs）
在2001年前，美国仅批准结核菌素皮肤试
验（TST）用于结核分支杆菌的检测。在

1520文档结核感染T细胞检测(T-SPOT.TB)
一.临床意义：
结核病临床表现复杂多样，可累及全身各个系统，给临床诊断带来很大困难。

本项目检测通过将分离标本中的单个核细胞加入结核分枝杆菌特异性抗原A、B分别进行细胞培养后，分别检测分泌γ干扰素的特异性淋巴细胞的数量诊断结核感染。

本检测诊断结核感染的敏感性为90%-95%，特异性为93%-100%。

对临床诊断或排除结核病具有重要的参考价值。

二.标本类型、采集及运送要求：
1.采集要求：标本采集后4小时内必须送到实验室，标本采集后如果超过4小时未送检将严重影响检测结果。

2.静脉血：肝素钠（绿头管）抗凝管采集静脉血4ml，立即颠倒数次，充分混匀，以免血液凝固。

采血后向试管中注入血液时请缓慢进行，避免用力过猛造成细胞破坏影响检测结果。

三．标本采集时间、结果发放时间及检测频率
1.标本采集时间：每周一上午12点之前采血；并于4小时之内送到临床微生物实验室。

（必要时可与临床微生物实验室联系）
2.结果发放时间：周二下午4点半检验报告发出。

3.检测频率：暂定每周检测一次。

. 1。

140 32
在免疫力正常和免疫力低下的受试人群中，T-SPOT.TB的 灵敏度分别为94%和95%。所有受试者中，42%为肺外结 核患者。
经培养确诊、抗痨治疗不超过2周的结核患者用TSPOT.TB检测，阳性率98%（57/58）。 在经培养确诊的活动性结核患者中，T-SPOT.TB的灵敏度 为94%。
1新检验项目结核感染特异性结核感染特异性tt细胞细胞tspottb检测技术检测技术1结核病的疫情结核病的疫情结核病是一种慢性传染病可在身体各个器官发病其中以肺结核最为常见因此肺结核病是一种严重危害人类健康的传染病得了肺结核病如果不能彻底治疗就会完全丧失劳动能力而且还会传染他人对个人家庭和社会都是极大的危害
受试者数 量 72
文献发表
Meier et al Eur J Microbiol Infect Dis (2005)；24: 529-536 Lee et al. ERJ 2006; 28:24–30
87
30
Clark et al. Clin. Exp. Imm. 2007; 150(2):238-44 Kang et al Chest. 2007 Sep;132(3):959-65 Kim et al. Arch Intern Med. 2007; 167;20:2255-2259
186
Kim et al. Am J Med 2009；122, 189-195
58 32
Janssens et al ERJ 2007；30(4):722-8 Dominguez et al Clin Vacc Immunol 2008; 15;16871
T-SPOT.TB高特异性 检测所用的ESAT-6＆CFP 10抗原均来自结核
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