结核感染t细胞检测方法

结核感染T细胞检测试剂盒（免疫斑点法）说明书【产品名称】通用名称：结核感染T细胞检测试剂盒（免疫斑点法）英文名称：T-SPOT.TB【包装规格】24人份/盒。

【预期用途】该产品用于检测人外周抗凝全血中的结核特异抗原刺激活化的效应T细胞，仅适用于临床疑似结核病的辅助诊断。

结核感染的免疫应答反应以细胞免疫为主，作为免疫应答的一部分，T细胞受结核抗原刺激致敏，形成活化的效应T细胞，包括CD4和CD8，从全血中单独被分离出来，在体外受特异抗原刺激并被记数。

从结核分枝杆菌复合群（人型、牛型、非洲型）中选择有用的抗原降低与BCG（卡介苗）和环境分枝杆菌的交叉反应提高特异性。

两个单独的抗原模仿ESAT-6和CFP 10，联合应用提高检测灵敏度。

T-SPOT.TB是一种更简单的酶联免疫斑点（ELISPOT）检测方法。

ELISPOT检测是高灵敏度的，在细胞分泌的细胞因子扩散稀释前，其能够立即捕获细胞周围所分泌的细胞因子。

这使得ELISPOT检测更加的灵敏，超过传统的ELISA实验。

T-SPOT.TB 被设计出来用于检测结核特异抗原刺激活化的效应T细胞。

T-SPOT.TB记数每个活化的结核特异效应T细胞。

【检验原理】外周血单个核细胞（PBMCs）从全血样本中被分离，通过洗涤排除本底干扰因素。

记数PBMCs，保证有标准的细胞数量用于检测。

这可以保证因为免疫系统削弱（免疫力低下和免疫抑制）而导致T细胞浓度低的样本也有足够的细胞数加入反应孔检测。

与ELISPOT技术一样的洗涤和记数过程，提高了检测结核病和结核感染的性能。

抗原和PBMCs一起孵育，刺激所有的致敏T细胞。

分泌的细胞因子被预包被在反应孔膜上的特异抗体捕获，然后细胞和其它不必要的物质通过洗涤被去除。

标记二抗，碱性磷酸酶配对的与细胞因子上不同的抗原决定簇结合，在反应孔膜上捕获细胞因子。

通过洗涤去除任何未标记的抗体。

可溶的底物溶液加入到每个检测孔中，在反应部位被酶分解形成不溶性色素沉淀斑点。

结核感染T细胞检测（T-SPOT.TB）一、背景结核病是由结核分枝杆菌（MTB）引起的传染性疾病。

全世界每年大约有8，000，000新增的结核病例。

据此估计，三分之一的世界人口已被结核杆菌感染并成为潜在的或活动性结核患者。

亚洲结核发病率约占世界结核病发病率的７０％，我国结核发病率则位居世界第二位。

２０００年第四次全国结核病流行病学抽样调查结果估计，我国活动性结核患者约有４５０万人，占全球结核患者总数的１／４，其中痰菌阳性的结核患者约有２００万人，痰涂片阳性的结核患者约１５０万人。

每年约有１３万人死于结核病。

由于卡介苗的使用，现在结核病的发病率比过去有所下降，但是由于艾滋病、吸毒、免疫抑制剂的使用，酗酒与贫困，难民迁移等诸多因素的影响，结核及其它分枝杆菌所致的感染发病率又呈上升趋势。

如何能够快速、准确的诊断结核病，有效的控制结核病的继续蔓延，已经成为我们首要重视的问题。

然而，目前结核诊断的标准仍局限于临床检查结核细菌培养和涂片直接镜检再辅以X线检查和结核菌素皮肤测试观察。

这些方法均依赖于病人的临床症状，不能达到早期检测潜在结核感染的目的。

结核感染T细胞检测试剂用于肺结核和肺外结核诊断与鉴别诊断具有独特优势：（1）具有非常高的灵敏度和特异性（2）不受环境分枝杆菌感染和卡介苗（BCG）接种影响（3）基本不受机体免疫抑制影响，适用于HIV感染和免疫抑制剂治疗人群（4）简单的实验室血液检查，24小时快速报告结果二、产品的检测原理和方法结核感染T细胞检测试剂盒（T-SPOT.TB）为英国Oxford Immunotec公司生产，应用的方法学为酶联免疫斑点技术（ELISPOT），产品的检测原理和检测方法如下。

这类反应统称为γ干扰素释放试验（γ Interferon Release Assay, IGRA），目前已经列入美国、欧洲等地结核病诊疗指南，用于结核病辅助诊断。

2．2 产品的检测方法2．2．2 检测过程略：见操作说明三、国内、外已批准上市及应用现状目前结核感染T细胞检测试剂（T-SPOT.TB）已获得欧盟CE认证、美国FDA认证。

1520文档结核感染T细胞检测(T-SPOT.TB)
一.临床意义：
结核病临床表现复杂多样，可累及全身各个系统，给临床诊断带来很大困难。

本项目检测通过将分离标本中的单个核细胞加入结核分枝杆菌特异性抗原A、B分别进行细胞培养后，分别检测分泌γ干扰素的特异性淋巴细胞的数量诊断结核感染。

本检测诊断结核感染的敏感性为90%-95%，特异性为93%-100%。

对临床诊断或排除结核病具有重要的参考价值。

二.标本类型、采集及运送要求：
1.采集要求：标本采集后4小时内必须送到实验室，标本采集后如果超过4小时未送检将严重影响检测结果。

2.静脉血：肝素钠（绿头管）抗凝管采集静脉血4ml，立即颠倒数次，充分混匀，以免血液凝固。

采血后向试管中注入血液时请缓慢进行，避免用力过猛造成细胞破坏影响检测结果。

三．标本采集时间、结果发放时间及检测频率
1.标本采集时间：每周一上午12点之前采血；并于4小时之内送到临床微生物实验室。

（必要时可与临床微生物实验室联系）
2.结果发放时间：周二下午4点半检验报告发出。

3.检测频率：暂定每周检测一次。

. 1。

检验科新项目-----结核感染T细胞γ干扰素释放实验（TB-IGRA）为更好满足肿瘤性、结核性包块及肿瘤性、结核性胸腹水鉴别诊断的临床需求，检验科拟开展“结核感染T细胞γ干扰素释放实验”的新项目。

该项目采用经美国CDC及欧盟CDC
推荐的更敏感的结核检测技术。

此技术不受卡介苗和其他常见非结核分枝杆菌的干扰，主要用于癌性胸腹水与结核性胸腹水等的鉴别诊断。

该技术检测标本类型除血液外还可检测体液（如胸腹水、灌洗液、浆膜腔积液等）。

该项目可以医保支付。

一检测原理
结核分枝杆菌感染机体后，T淋巴细胞会形成免疫“记忆”；通过在体外分离到T淋巴细胞后，培养增殖T细胞的同时加入相应结核分枝杆菌特异抗原进行刺激，激活该细胞的记忆；有记忆的细胞会分泌γ干扰素；通过检测γ干扰素的量，来反映机体是否有结核感染。

二临床意义
该检测可用于肿瘤性、结核性包块及肿瘤性、结核性胸腹水等的鉴别诊断。

三 TB-IGRA检测结果的临床意义解读
1 TB-IGRA阴性结果：阴性检测结果代表目前机体没有 MTB 特异抗原致敏的 T 淋巴细胞，即受检者目前未感染 MTB。

临床诊断上首选排除结核病的诊断，尤其是在结核病高发地区、免疫功能正常人群及无可靠依据诊断结核病时。

2 TB-IGRA阳性结果：应结合影像学，临床症状，既往病史，结核中毒症状，有无病灶等综合考虑进行临床诊断和干预措施。

由于该实验涉及活细胞培养，为了保证测定结果的准确性，请严格按照下表要求采样和。

QB—SPOT结核实验
结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）是一种运用IGRA技术，检测被结核分枝杆菌特异的早期分泌靶抗原6（ESAT-6）和培养滤液蛋白10（CFP 10）分别刺激后释放γ-干扰素的效应T淋巴细胞，以辅助诊断结核感染的实验室检测技术。

TBspot试验通常指T-SPOT试验，即结核杆菌感染T细胞斑点试验，又称为结核菌感染干扰素释放试验，是利用结核特异性抗原，通过酶联免疫斑点技术，检测受试者体内是否存在结核效应的T淋巴细胞，从而判断被检查者是否感染结核杆菌。

该检查的原理是结核杆菌感染之后，T淋巴细胞会形成免疫记忆。

通常在体外分离到T淋巴细胞之后，培养增殖T细胞的同时，用相应的特异性抗原，进行刺激，激活T细胞记忆，有记忆的细胞则会分泌大量的干扰素。

结核T-SPOT检查即为结核菌T细胞斑点检测，是临床用于诊断结核病的新型检查方法。

通过检测干扰素的量，判断该细胞是否存在结核感染形成的记忆，进而通过进一步的反应判断是否存在结核菌感染。

但它的结果不能作为单独或决定性诊断活动性结核的证据，阳性结果仅提示患者体内存在结核杆菌特异性的效应T细胞。

但是否为活动性结核，则需要结合患者的临床症状及其他检测指标，进行综合判断。

现在已经有多项研究的结果显示，T-SPOT试验只能判断是否感染过结核，但无法鉴别活动性结核与潜伏性结核，因此对于活动性结核的诊断价值有限。

t 细胞斑点法T细胞斑点法是一种用于检测T细胞免疫反应的方法。

它通过检测T 细胞对特定抗原的反应来确定免疫系统是否对某种病原体产生了免疫反应。

这种方法被广泛用于检测病毒感染、肿瘤、自身免疫性疾病等多种情况。

本文将详细介绍T细胞斑点法的原理、步骤及其在临床中的应用。

一、原理T细胞斑点法基于以下原理：当机体受到感染或其他刺激时，特定的抗原会被处理成小片段，并呈现在抗原提呈细胞表面上，这些表面抗原片段能够诱导T细胞免疫反应。

在这个过程中，活化的T细胞会分泌干扰素γ（IFN-γ），而IFN-γ则会刺激靶细胞释放出介导免疫反应所需的化学物质。

因此，通过检测IFN-γ释放量就可以确定是否存在特定的T细胞免疫反应。

二、步骤1.血样采集：使用标准的静脉采血方法采集患者的外周血。

2.细胞分离：将血样中的白细胞分离出来。

这可以通过密度梯度离心法或磁珠分离法实现。

3.抗原刺激：将抗原加入到白细胞中并进行培养。

这个过程需要一定的时间，通常需要24-48小时。

4.检测IFN-γ：将培养液收集起来，并使用特定的酶联免疫吸附试验（ELISPOT）或流式细胞术检测其中IFN-γ的含量。

5.数据分析：根据IFN-γ含量确定是否存在特定的T细胞免疫反应。

三、应用T细胞斑点法在临床中有着广泛的应用。

以下是其中几个方面：1. 检测病毒感染：例如，T细胞斑点法可以用于检测结核病、乙型肝炎和人类免疫缺陷病毒（HIV）等感染。

2. 肿瘤诊断和治疗监测：T细胞斑点法可以用于检测肿瘤特异性T细胞的存在和活性，以评估肿瘤的免疫治疗效果。

3. 自身免疫性疾病诊断：例如，T细胞斑点法可以用于检测类风湿关节炎、系统性红斑狼疮和硬皮病等自身免疫性疾病。

4. 药物过敏反应：T细胞斑点法可以用于检测药物过敏反应中特定的T 细胞免疫反应。

总之，T细胞斑点法是一种可靠、灵敏和特异的检测方法，可以用于评估机体对感染、肿瘤和自身免疫性等方面的免疫反应。

在临床中有着广泛的应用前景。

结核感染T细胞斑点实验临床检测研究
邹盛华;张丽水;黄明翔;毛文捷
【期刊名称】《中国防痨杂志》
【年(卷),期】2009(031)009
【摘要】目的探讨结核感染T细胞斑点实验(T-SPOT.TB)在临床快速诊断结核病中的应用价值.方法利用T-SPOT.TB方法检测外周血中结核感染特异的效应T淋巴细胞的频率.同时与涂片抗酸染色、BACTEC960培养及实时定量PCR方法做比对.结果 164例结核病患者中,155例T-SPOT.TB阳性,提示方法敏感度为
94.5%(155/164),显著高于其他方法.60例非结核呼吸道疾病对照组中有5例阳性,20例健康对照均为阴性,方法的特异度为93.8%(75/80).结论 T-SPOT.TB方法敏感度和特异度均非常高,可用于结核病的快速诊断,尤其是对于结核病和非结核分枝杆菌病的早期鉴别.
【总页数】4页(P539-542)
【作者】邹盛华;张丽水;黄明翔;毛文捷
【作者单位】福建省福州肺科医院,福州,350008;福建省福州肺科医院,福
州,350008;福建省福州肺科医院,福州,350008;福建省福州肺科医院,福州,350008【正文语种】中文
【相关文献】
1.结核感染T细胞斑点实验在结缔组织病患者中辅助诊断结核感染的应用 [J], 王霖
2.结核感染T细胞斑点实验在结核病快速诊断中的临床应用价值 [J], 高万芹
3.肺结核合并糖尿病患者的临床特征及结核感染T细胞斑点实验的应用价值 [J], 郑志炫
4.肺结核合并糖尿病患者的临床特征及结核感染T细胞斑点实验的应用价值 [J], 郑志炫
5.结核感染T细胞斑点实验在临床早期诊断菌阴肺结核中的应用价值 [J], 朱峰;姜秀峰;李柏春;葛良卫
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