储运条件对脐带间充质干细胞存活率的影响
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脐带间充质干细胞的原代培养有组织块贴壁法和 酶消化分离法两种方法[14-15]，且两种方法皆有成功获取 脐带间充质干细胞的报道。其中，组织块贴壁法完全依 赖于脐带组织中的细胞迁徙及贴壁，该方法收获的细胞 数量较少，培养周期较长[16]，但操作简单、稳定性高； 酶消化分离法的原理是蛋白酶能够消化细胞基质，相比 于组织块贴壁法，能够在一定程度上促进细胞游离、贴 壁，进而缩短培养时间，但目前不同研究者采用的消化 酶种类与作用时间有所差异，使得细胞分离效果的组间 差异比较明显[17-19]，无法从根本上形成一个规范的制备 流程。为保证脐带间充质干细胞生长周期的一致性和操 作处理的稳定性，实验采用组织块贴壁法培养原代脐带 间充质干细胞。
无核的细胞碎片能够一定程度上干扰锥虫蓝拒染实验的结果。 4 实验结果表明，介质中加入白蛋白并避光运输能够有效维持细胞活性。在 16 ℃、避光和 1%白蛋白的
保存条件下，109 L-1 密度的细胞在 8 h 内的存活率可达 90%以上。 关键词： 干细胞；脐带脐血干细胞；脐带；间充质干细胞；存活率；白蛋白；光；细胞培养；省级基金；干细胞图片 文章 主题词： 干细胞；脐带；间质干细胞；血清白蛋白 基金资助： 山东大学自主创新基金(2012ZD023)*；山东省科技发展计划项目(2010G0020213)*
收稿日期：2012-11-21 修回日期：2013-01-29 (20121121001/W·Q)
Effects of transportation conditions on survival rate of umbilical cord mesenchymal stem cells
Wang Da-kun1, Wang Zhi-hui2, Guo Hong2, Zhang Le-ling3 (1Cryomedicine Lab, Qilu Hospital of Shandong University, Jinan 250012, Shandong Province, China; 2Shangdong Qilu Stem Cells Co., Ltd., Jinan 250004, Shandong Province, China; 3Qilu Children’s Hospital, Shandong University, Jinan 250022, Shandong Province, China)
Received: 2012-11-21 Accepted: 2013-01-29
6430
P.O. Box 1200, Shenyang 110004
汪大琨，等. 储运条件对脐带间充质干细胞存活率的影响
group without albumin, loss rate reached 38.5% and survival rate reached 86% at 8 hours. Results revealed that 1% albumin predominantly improved cell survival rate in long-distance transport of umbilical cord mesenchymal stem cells. When transport time was more than 8 hours, cell loss rate increased and cell survival rate downregulated. Our experimental data demonstrated that umbilical cord mesenchymal stem cells preserved in normal saline consisting of 1% albumin placing in dark environment at 16 ℃ apply to clinical application criterion in 8 hours.
Subject headings: mesenchymal stem cells; serum albumin Funding: the Autonomous Innovation Project of Shandong University, No. 2012ZD023*; the Shandong Provincial Technology Development Project, No. 2010G0020213*
Wang DK, Wang ZH, Guo H, Zhang LL. Effects of transportation conditions on survival rate of umbilical cord mesenchymal stem cells. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2013;17(36):6430-6435.
[]
汪大琨，王芝辉，郭红，张乐玲. 储运条件对脐带间充质干细胞存活率的影响[J].中国组织工程研究，2013，17(36):6430-6435.
储运条件对脐带间充质干细胞存活率的影响**
汪大琨1，王芝辉2，郭 红2，张乐玲3 (1山东大学齐鲁医院低温医学研究室，山东省济南市 250012；2山东齐鲁干细胞有限公司，山东 省济南市 250004；3山东大学齐鲁儿童医院，山东省济南市 250022)
0 引言 Introduction
间充质干细胞可从多种成人组织(尤其是骨髓和脂肪 组织)中分离得到，并具有向间质细胞、成骨细胞、脂肪 细胞、软骨细胞、肌腱细胞、神经细胞和脏层中胚层细胞 分化的能力[1-6]。体外培养时，间充质干细胞贴壁生长， 同时高表达CD29、CD44、CD54、CD73、CD90、CD105， 不表达造血细胞表面标记CD34或CD45[2-6]。间充质干细 胞能分泌多种细胞因子，并具有抗氧化应激和免疫调控能 力，所以被广泛应用于退行性疾病[7]、损伤性疾病及自身 免疫病等多种疾病的治疗中[8-11]。
文章亮点： 1 实验采用目前临床常用的间充质干细胞运输介质生理盐水，具有获取容易、操作简单、临床认可度高
的优点。 2 实验结果证实，白蛋白组的细胞活性要明显高于对照组。这可能与白蛋白溶液作为缓冲剂为细胞提供
一个更温和的保存环境相关。 3 作者使用了 Millipore 公司的 MuseTM Cell Analyzer 细胞仪和 MuseTM Count&Viability Kit 试剂，证明
汪大琨，1986 年生，山东 省威海市人，汉族，2009 年山东大学毕业，主要从 事生物技术专业研究。 sagittariuswong@
通讯作者：张乐玲，硕士， 主任医师，山大齐鲁儿童 医院，山东省济南市 250022
中图分类号:R394.2 文献标识码:A 文章编号:2095-4344 (2013)36-06430-06
Abstract BACKGROUND: General assessment of viability of umbilical cord mesenchymal stem cells during transport is not considered at home and abroad. OBJECTIVE: To explore the effects of different transportation conditions such as albumin and transport time on survival rate of umbilical cord mesenchymal stem cells. METHODS: Umbilical cord mesenchymal stem cells cultured in vitro were divided into experimental and control groups. Each of group contained 3.15×109/L cells in 3 mL normal saline. The experimental group contained 1% albumin in dark environment. The control group included two subgroups: dark preservation group with the absence of albumin and light preservation group with the presence of albumin. Cell counting, trypan blue staining and cell survival rate were compared at 0, 2, 4, 8, and 24 hours. RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the control group, no cell loss was observed in experimental group (with the presence of albumin in the dark) and a 90% viability ratio was achieved at 8 hours. In the control
摘要 背景：国内外尚无对脐带间充质干细胞运输过程中相关活力指标的全面评估。 目的：检测白蛋白和储运时间等不同条件对脐带间充质干细胞存活率的影响。 方法：体外培养的脐带间充质干细胞分为实验组和对照组，每组将 3.15×109 L-1 细胞悬浮在 3 mL 生理盐水中。 其中实验组加入 1%白蛋白并避光保存，对照组分为不加白蛋白避光保存组和加白蛋白光照保存组，在 0，2， 4，8 和 24 h 分别测定各组细胞数、锥虫蓝拒染率和细胞存活率。 结果与结论：与对照组相比，实验组(保存液中加白蛋白且避光)的 8 h 细胞损失率几乎为零，细胞存活率接 近 90%。对照中不加白蛋白组 8 h 细胞损失率高达 38.5%，细胞存活率为 86%。在脐带间充质干细胞的长 途运输中，加入 1%白蛋白可以有效保证细胞存活量。运输时间超出 8 h 后，细胞损失率上升且存活率下调。 实验数据表明，16 ℃、避光和 1%白蛋白生理盐水的保存条件下，脐带间充质干细胞在 8 h 内符合临床输 注要求。
无核的细胞碎片能够一定程度上干扰锥虫蓝拒染实验的结果。 4 实验结果表明，介质中加入白蛋白并避光运输能够有效维持细胞活性。在 16 ℃、避光和 1%白蛋白的
保存条件下，109 L-1 密度的细胞在 8 h 内的存活率可达 90%以上。 关键词： 干细胞；脐带脐血干细胞；脐带；间充质干细胞；存活率；白蛋白；光；细胞培养；省级基金；干细胞图片 文章 主题词： 干细胞；脐带；间质干细胞；血清白蛋白 基金资助： 山东大学自主创新基金(2012ZD023)*；山东省科技发展计划项目(2010G0020213)*
收稿日期：2012-11-21 修回日期：2013-01-29 (20121121001/W·Q)
Effects of transportation conditions on survival rate of umbilical cord mesenchymal stem cells
Wang Da-kun1, Wang Zhi-hui2, Guo Hong2, Zhang Le-ling3 (1Cryomedicine Lab, Qilu Hospital of Shandong University, Jinan 250012, Shandong Province, China; 2Shangdong Qilu Stem Cells Co., Ltd., Jinan 250004, Shandong Province, China; 3Qilu Children’s Hospital, Shandong University, Jinan 250022, Shandong Province, China)
Received: 2012-11-21 Accepted: 2013-01-29
6430
P.O. Box 1200, Shenyang 110004
汪大琨，等. 储运条件对脐带间充质干细胞存活率的影响
group without albumin, loss rate reached 38.5% and survival rate reached 86% at 8 hours. Results revealed that 1% albumin predominantly improved cell survival rate in long-distance transport of umbilical cord mesenchymal stem cells. When transport time was more than 8 hours, cell loss rate increased and cell survival rate downregulated. Our experimental data demonstrated that umbilical cord mesenchymal stem cells preserved in normal saline consisting of 1% albumin placing in dark environment at 16 ℃ apply to clinical application criterion in 8 hours.
Subject headings: mesenchymal stem cells; serum albumin Funding: the Autonomous Innovation Project of Shandong University, No. 2012ZD023*; the Shandong Provincial Technology Development Project, No. 2010G0020213*
Wang DK, Wang ZH, Guo H, Zhang LL. Effects of transportation conditions on survival rate of umbilical cord mesenchymal stem cells. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2013;17(36):6430-6435.
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汪大琨，王芝辉，郭红，张乐玲. 储运条件对脐带间充质干细胞存活率的影响[J].中国组织工程研究，2013，17(36):6430-6435.
储运条件对脐带间充质干细胞存活率的影响**
汪大琨1，王芝辉2，郭 红2，张乐玲3 (1山东大学齐鲁医院低温医学研究室，山东省济南市 250012；2山东齐鲁干细胞有限公司，山东 省济南市 250004；3山东大学齐鲁儿童医院，山东省济南市 250022)
0 引言 Introduction
间充质干细胞可从多种成人组织(尤其是骨髓和脂肪 组织)中分离得到，并具有向间质细胞、成骨细胞、脂肪 细胞、软骨细胞、肌腱细胞、神经细胞和脏层中胚层细胞 分化的能力[1-6]。体外培养时，间充质干细胞贴壁生长， 同时高表达CD29、CD44、CD54、CD73、CD90、CD105， 不表达造血细胞表面标记CD34或CD45[2-6]。间充质干细 胞能分泌多种细胞因子，并具有抗氧化应激和免疫调控能 力，所以被广泛应用于退行性疾病[7]、损伤性疾病及自身 免疫病等多种疾病的治疗中[8-11]。
文章亮点： 1 实验采用目前临床常用的间充质干细胞运输介质生理盐水，具有获取容易、操作简单、临床认可度高
的优点。 2 实验结果证实，白蛋白组的细胞活性要明显高于对照组。这可能与白蛋白溶液作为缓冲剂为细胞提供
一个更温和的保存环境相关。 3 作者使用了 Millipore 公司的 MuseTM Cell Analyzer 细胞仪和 MuseTM Count&Viability Kit 试剂，证明
汪大琨，1986 年生，山东 省威海市人，汉族，2009 年山东大学毕业，主要从 事生物技术专业研究。 sagittariuswong@
通讯作者：张乐玲，硕士， 主任医师，山大齐鲁儿童 医院，山东省济南市 250022
中图分类号:R394.2 文献标识码:A 文章编号:2095-4344 (2013)36-06430-06
Abstract BACKGROUND: General assessment of viability of umbilical cord mesenchymal stem cells during transport is not considered at home and abroad. OBJECTIVE: To explore the effects of different transportation conditions such as albumin and transport time on survival rate of umbilical cord mesenchymal stem cells. METHODS: Umbilical cord mesenchymal stem cells cultured in vitro were divided into experimental and control groups. Each of group contained 3.15×109/L cells in 3 mL normal saline. The experimental group contained 1% albumin in dark environment. The control group included two subgroups: dark preservation group with the absence of albumin and light preservation group with the presence of albumin. Cell counting, trypan blue staining and cell survival rate were compared at 0, 2, 4, 8, and 24 hours. RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the control group, no cell loss was observed in experimental group (with the presence of albumin in the dark) and a 90% viability ratio was achieved at 8 hours. In the control
摘要 背景：国内外尚无对脐带间充质干细胞运输过程中相关活力指标的全面评估。 目的：检测白蛋白和储运时间等不同条件对脐带间充质干细胞存活率的影响。 方法：体外培养的脐带间充质干细胞分为实验组和对照组，每组将 3.15×109 L-1 细胞悬浮在 3 mL 生理盐水中。 其中实验组加入 1%白蛋白并避光保存，对照组分为不加白蛋白避光保存组和加白蛋白光照保存组，在 0，2， 4，8 和 24 h 分别测定各组细胞数、锥虫蓝拒染率和细胞存活率。 结果与结论：与对照组相比，实验组(保存液中加白蛋白且避光)的 8 h 细胞损失率几乎为零，细胞存活率接 近 90%。对照中不加白蛋白组 8 h 细胞损失率高达 38.5%，细胞存活率为 86%。在脐带间充质干细胞的长 途运输中，加入 1%白蛋白可以有效保证细胞存活量。运输时间超出 8 h 后，细胞损失率上升且存活率下调。 实验数据表明，16 ℃、避光和 1%白蛋白生理盐水的保存条件下，脐带间充质干细胞在 8 h 内符合临床输 注要求。
