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脐带间充质干细胞PPT

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东营脐带干细胞保存PPT课件

东营脐带干细胞保存PPT课件
脐带采集严格按照无菌操作，新生儿娩出后10秒钟内，在 距新生儿脐部约5厘米处用两把止血钳夹住，从两钳间剪断 脐带后结扎，新生儿抱走正常处理
采集脐带时，用普通管采集5ml脐血，用做病原学检测。 也可采集胎盘血或母血
采集脐血样后，将脐带内脐血尽量躯赶干净，结扎脐带， 隔离穿刺部位
.
29
待胎盘娩出1分钟内，在靠近胎盘处结扎后剪断脐带，结扎 的脐带用浸有0.9%生理盐水及75%酒精的无菌医用纱布擦 试脐带，清除脐带表面羊水、血液及胎粪等污物，污染严 重者先用生理盐水充分冲洗
.
24
美国FDA批准间充质干细胞临床试验疾病明细
❖ 美国FDA批准MSC进行临
床试验
❖ 获得FDA批准上市：MSC
治疗GVHD、克罗恩病、 急性放射综合征（辐射 病）
❖ 临床III期：1型糖尿病
、急性心肌梗塞、慢性 阻塞性肺病（COPD）、 膝关节炎
❖ 临床I期：病骨再生
.
25
采集方法
.
26
❖无菌一次性脐带采集包： ❖含脐带保存液的采集瓶1个
婴儿脐带间充质干细胞救治雷诺氏症的患者 2010年8月
.
22
胜利油田中心医院治疗脑梗（ 2010年11月）
• 病人第二天可以独立下地行走 • 病人第四天右臂肌力从0级恢复到3级 • 病人第十一天精神状
态明显改善，面部表 情丰富，并开始主动 和他人交流。
.
23
自闭症患儿干细胞治疗后尝试入读普通学校
.
6
➢储存脐带 健康期待
.
7
脐带保存
分娩采集脐带
传统方法
提取间充质干细胞
临
长
床
期
治
保
疗

成体干细胞(间充质干细胞,造血干细胞)ppt课件

成体干细胞(间充质干细胞,造血干细胞)ppt课件

造血干细胞的微环境
骨髓微环境中的一些转录因子和蛋白分子对 造血干细胞的移行、增殖和分化起了调控作用。
干细胞因子
与干细胞表面的 C-kit 受体结合 GATA-2对造血前体细胞的增殖与存活是关键的 加强细胞的粘附作用 GATA-1调节红系、巨核细胞等的存活、增殖 参与维持干细胞数目的恒定 和成熟
PU1的表达可促使造血干细胞子代前体细胞进 一步分化产生淋巴系， 而且间充质干细胞相对容易在体外被诱导 分化为成骨细胞和软骨细胞，所以间充质 干细胞在骨损伤，先天骨组织畸形的治疗 方面将有广泛的应用。
间充质干细胞
间充质干细胞的来源
来源于发育早期的中胚层 和外胚层。 MSC最初在骨髓中发现。
具有多向分化潜能，理想
的种子细胞。
间充质干细胞的形态
在个体出生后， 间充质干细胞附于 骨髓窦的内腔面， 形成一种包埋于窦 状网络中的三维细 胞网络。
光学显微镜
扫描电镜
间充质干细胞的表面标志
SH2、SH3、CD29、CD44、CD71、CD90、 CD106、CD120a、及CD124等
成体干细胞的概念
存在于成年个体的许多组织和器官
特点
修复 再生 自我更新
使组织和器官保持生长和衰退的 动态平衡。
成体干细胞的可塑性
成体干细胞可以突破其 “发育限制性”，跨系， 甚至跨胚层分化为其他类 型组织细胞
造血干细胞起源
（hemopoietic stem cell,HSC）是存 在于造血组织中的一群原始造血细 胞，它不是组织固定细胞，可存在 于造血组织及血液中。造血干细胞 在人胚胎2周时可出现于卵黄囊， 第4周开始转移至胚肝，妊娠5个月 后，骨髓开始造血，出生后骨髓成 为干细胞的主要来源。在造血组织 中，所占比例甚少，如在小鼠骨髓 中105核细胞中的有10个，在脾中 105有核细胞中只有0.2个。

间充质干细胞PPT课件

间充质干细胞PPT课件
*临床应用：急性心肌梗死；缺血性心 肌病；慢性心功能不全。
MSC在神经系统疾病中的应用
*临床应用：新生儿缺氧-缺血性脑病（HIE小儿脑瘫 ）；神经变性疾病，如肌萎缩侧索化症（ALS）、帕金 森病、阿尔茨海默病等。
*干细胞可释放神经营养因子及重建运动神经元微环境 等机制来保护濒死的运动神经元。
ALS病，全称叫“肌肉萎缩性侧面硬化病”， 是一种运动神经元疾病，常在病后3～5年内 死亡。ALS病通常以手肌无力、萎缩为首发 症状，一般从一侧开始以后再波及对侧，随 病程展出现上、下运动神经元混合损害症 状。
体内——MSC单独或与HSC共移植促进骨髓造血 。 因此，单独移植MSC或与HSC共移植，可以发挥其强大的支 持造血，维持免疫稳态的优点，达到治愈疾病的目的。
MSC与基因治疗：
*趋化能力——基因改造后使其携带抗肿瘤基因并大量迁移至肿 瘤病灶。
多向分化——基因工程改造，MSC的组织修复功能得到进一步 的提高。
A为MSCs处理组 B为VSMCs处理组 C为PBS处理组 位于肌纤维间 被染成紫色的颗粒为毛 细血管 （ x400）
比较可知MSCs处理组毛细血管密度最大
支持造血：
•骨髓正常造血依赖于造血干细胞与其生存的造血微环境， MSC是骨髓微环境的前体细胞，因此MSC发挥了强大的支 持造血能力。 •依据：体外——MSC与HSC共培养促进造血克隆形成、增 殖和分化成熟。
*有效的基因治疗要要求： -可以通过一种载体将基因转运向靶细胞； -这种基因转移过程必须具有靶向性； -转入的基因可以在靶细胞内或靶细胞周围表达； -基因的表达产物必须有效且表达时间必须足够长； -整套系统在体内必须具有安全性。
*问题：MSC可通过免疫抑制作用而促进肿瘤生长；注射的干细 胞在体内的迁移路径在各个器官中的分布值得深入探究。

脐带间充质干细胞概述

脐带间充质干细胞概述

脐带间充质干细胞概述医学实验班 70080103 王雪彤脐带是胎儿时期连接母体与胎儿的索状结构,其外被羊膜,内含2条脐动脉、1条脐静脉,在动静脉之间含有特殊的胚胎粘液样结缔组织———华尔通氏胶(Whartonps Jelly) ,从华尔通氏胶分离得到的基质细胞即为人脐带间充质干细胞(HUMSCs) 。

1人脐带间充质干细胞(HUMSCs) 的形貌分析:倒置显微镜下观察人脐带间充质干细胞贴壁生长, 为形态相对均一的梭形细胞,呈平行排列生长或旋涡状生长,低密度时较扁平, 密度增加趋于融合时细胞变细长。

扫描电镜下观察呈长条状纤维样, 细胞膜表面不光滑, 有小结节状物, 细胞无明显突起,细胞间无网络状连接。

透射电镜观察核大, 不规则, 核仁明显, 常染色质多, 异染色质少, 胞浆少。

胞质内细胞器较少, 以粗面内质网和线粒体为主, 内有大量游离核糖体, 部分细胞可见内质网肿胀。

——植块法培养获得的人脐带间充质干细胞(×200)例如三代细胞的形态学特征——人体脐带间充质干细胞离体培养后，培养至第三代。

第三代人脐带间充质干细胞以均一长梭形的细胞为主，细胞周边有较多的丝状伪足，见图1，2；并形成毗邻细胞之间的网状连接，见图3；细胞核较大，核膜清晰，含两三个核仁，核质比较小，见图4。

2人脐带间充质干细胞(HUMSCs) 的生物学特性：HUMSCs既非胚胎干细胞又非成体干细胞,是别于两者之间的一类新的多能间充质细胞,它们之间既有联系又有差异。

根据国际细胞疗法间充质与组织干细胞委员会( the Mesenchymal and Tissue Stem Cell Committee of the Internation2 al Society for Cellular The rapy)制定的最低标准, 脐带间充质干细胞（MSCs）需满足以下条件: 1)MSCs在标准培养条件下呈贴壁生长; 2 )MSCs表达CD105, CD73和CD90,不表达CD45, CD34, CD14或CD11b, CD79a 或CD19和HLA2DR; 3)MSCs在体外至少能向成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞分化。

MSC干细胞PPT课件

MSC干细胞PPT课件

多潜能性、增殖能力有限 研究最早、了解最深 自体来源、无免疫排斥 MSC产率低,1-10MSC/106MNC 有病毒感染风险 有限临床应用
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11
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12
体外培养扩增获取人UCMSC
原代贴壁
原代培养
传代扩增
对于原代细胞中混杂的其它异质细胞，利用MSC的贴壁和高增 殖潜能，通过连续传代，筛除那些不能贴壁生长和虽能贴壁生 长但增殖能力差的细胞，最后通过流式细胞术鉴定。
07年6月7日王恩庆的妻子药守清反映患者尿频和尿 急已恢复正常；皮肤表面黑斑明显变浅；右眼干涩和畏 光已改善；透视显示，肺结核引起的空洞好转80%；精 神状态和饮食情况趋于常人，体重由细胞疗法前的125 斤，增长为145斤，饮食恢复正常，每天不需他人陪同 可独立外出散步。
y
34
患者，女性，26岁，类风湿病史10年。
第二天，当我醒来的时候，突然发现自己的手指明显消肿了，不仅是双手 ，其它肿胀的关节也不酸胀了，全身症状明显减轻，无数的早晨我都是在浑身 僵痛，四肢乏力、情绪低落中度过的，然而今天早晨却让我感受到了一个精神 焕发，充满力量，心情舒畅的我，整个人都很轻松，这对于一个类风湿病人来 说真的是太难得了，当时我非常激动，因为我真的没有想到效果会如此明显和 迅速，通过这次治疗让我再次树立了信心，重新点燃了生活的希望。
我是一名类风湿病的患者，今年26岁，类风湿病史10年，患病以来，长 期服药，并尝试过各种治疗方法，效果均不明显。8月5日，我进行了脐带间充 质干细胞移植治疗，治疗方法比我刚开始想象的简单的多，只是通过静脉输入 的方法将干细胞输入到我的血管，不到半个小时就做完了，没有任何的不适感 ，干细胞移植后就可以回家了。
Biology of Blood and Marrow Transplantation 13:1477-1486, 2007

脐带间充质干细胞制备工艺流程图

脐带间充质干细胞制备工艺流程图
中间品（P2代主细胞库）流向图
脐带
初检、登记 消毒、取样 细胞分离、培养、 冻存包装
中间品
中间品传出
中间品质检
采集物接收室 采集物取样室 原代细胞培养间
P2代 细胞 内包间 外包间 程序降温室 暂存库 主细胞库
细胞复苏 外包间
内包间
细胞制备间 P5代 细胞
细胞扩增
原材料（P5代工作细胞库）流向图
半成品传入
无菌衣传入
废弃物打包 化学消毒 分时段转运 分时段转运
废弃物流向图
制备间 消毒间 危废暂存间 危废暂存仓库 处置单位转运
放行检测 成品传出
P5代 细胞 细胞复苏 外包间
内包间
细胞制备间 终末 制剂
内包间
外包间
无 菌 衣 进
无菌衣传入
穿无菌外衣 穿洁净内衣
手消毒 穿/脱外衣
更鞋 男更入口
人员流向图
洁净走廊
缓冲间
脱
脱
洁
洁
净
净
衣衣消毒间污传出进更路线： 退更路线：
穿无菌外衣 穿洁净内衣
手消毒 穿/脱外衣
更鞋 女更入口
无 菌 衣 进

间充质干细胞的传代课件

间充质干细胞的传代课件

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THANKS
细胞分裂的维持
总结词
细胞分裂是维持细胞数量的关键，通过维持适宜的生长因子浓度，可以促进间充质干细胞的分裂与增 殖。
详细描述
在传代培养过程中，需要确保生长因子的浓度适宜，如碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、表皮生长 因子（EGF）等，以促进细胞的分裂与增殖。同时，还需注意避免细胞过度生长和密度过大导致的细 胞凋亡。
传代培养的定义
传代培养是指将细胞从原代或早期代次培养物中分离出来，继续在体外培养条件 下生长和增殖的过程。
在间充质干细胞的传代培养中，通常使用胰酶处理细胞，使其从贴壁状态脱离， 然后进行分瓶培养。
传代培养的必要性
随着细胞在体外培养时间的延长，细胞会逐渐衰老和分化， 导致其功能和表型发生变化。为了维持细胞的特性和功能， 需要定期进行传代培养。
通过传代培养，可以获得大量细胞用于实验研究、药物筛选 和临床治疗等应用。
传代培养的过程
胰酶处理
将胰酶加入细胞培养液中，轻 轻摇晃培养瓶，使胰酶均匀覆 盖细胞表面。
离心和洗涤
将细胞悬浮液离心，去除上清 液，并用生理盐水洗涤细胞。
准备培养瓶和培养基
选择适当的培养瓶和培养基， 并进行消毒和预处理。
分离细胞
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实验操作注意事项
实验环境与设备
实验室温度
设备与器材
保持恒定的室温，避免温度波动影响 细胞生长。
确保使用无菌、高质量的实验器材， 如细胞培养皿、培养瓶、移液管等。
实验室湿度
维持适宜的湿度，以防止细胞脱水或 过度湿润。
实验操作规程与安全防护
操作规程
遵循标准的细胞培养操作规程， 包括细胞传代、细胞计数、细胞
02

脐带间充质干细胞PPT

脐带间充质干细胞PPT

整理版ppt
6
工艺流程简介
供者筛选
采集
接收
制备
发培放养
复苏
冻存
培养
制剂运与输发放
临床应用
信息反馈
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7
如何对脐带干细胞进行质量控制的？
❖ 1）严格控制脐带运输条件； ❖ 2）脐带采集液进行病原微生物检测； ❖ 3）细胞冷冻前进行病原微生物检测和细胞生物学
功能检测； ❖ 4）细胞储存过程中定期对储存环境进行监测； ❖ 5）临床使用前对细胞进行严格检测； ❖ 6）对与细胞制造有关的人员、设备、原材料、方
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12
间充质干细胞质量要求
❖ 细菌检测 ❖ 内毒素检测 ❖ 革兰氏检测 ❖ 支原体检测 ❖ 流式检测 ❖ 活性检测≥90%
阴性
整理版ppt
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细胞发放
❖ 1.细胞的保存：生理盐水（含人血白蛋白） ❖ 2.运输要求：时间、温度 ❖ 3.病人信息填写完整 ❖ 4.样本检测合格
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间充质干细胞移植途径
❖ 腰穿途径 ❖ 静脉途径 ❖ 局部种植 ❖ 介入途径
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前景
❖ 干细胞治疗是继药物治疗、手术治疗之后的又一场 医疗革命。目前，发达国家已经开始将干细胞治疗 技术用于临床治疗自身免疫性疾病、心肌梗死、脊 髓损伤、心力衰竭等疾病。
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谢谢
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法和环境按照相应的标准进行严格控制。
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8
供者筛选
❖ 供者需要提供供者的既往病史、 现病史、家族史等资料。
❖ 经过一系列病原微生物检测，检 测合格后进入制备程序。
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2020/3/6
间充质干细胞质量要求
• 细菌检测 • 内毒素检测 • 革兰氏检测 • 支原体检测 • 流式检测 • 活性检测≥90%
阴性
2020/3/6
细胞发放
• 1.细胞的保存：生理盐水（含人血白蛋白） • 2.运输要求：时间、温度 • 3.病人信息填写完整 • 4.样本检测合格
2020/3/6
间充质干细胞移植途径
• 腰穿途径 • 静脉途径 • 局部种植 • 介入途径• 干细胞治疗是继药物治疗、手术治疗之后的又一场 医疗革命。目前，发达国家已经开始将干细胞治疗 技术用于临床治疗自身免疫性疾病、心肌梗死、脊 髓损伤、心力衰竭等疾病。
2020/3/6
谢谢
2020/3/6
MSC治疗禁忌证：
• 1. 怀孕。 • 2. 精神病。 • 3. 严重的心、肝、肾、肺功能不全。 • 4.不能控制的严重感染或其他有致命危险的疾病。 • 5. 一般受者年龄不超过65岁 （个别患者>65岁）。 • 6. 自体免疫性疾病晚期。 • 7. 恶性肿瘤。 • 8. HIV 阳性
2020/3/6
2020/3/6
工艺流程简介
供者筛选 发培放养
采集 复苏
接收 冻存
制备 培养
制剂运与输发放
临床应用
2020/3/6
信息反馈
如何对脐带干细胞进行质量控制的？
• 1）严格控制脐带运输条件； • 2）脐带采集液进行病原微生物检测； • 3）细胞冷冻前进行病原微生物检测和细胞生物学
功能检测； • 4）细胞储存过程中定期对储存环境进行监测； • 5）临床使用前对细胞进行严格检测； • 6）对与细胞制造有关的人员、设备、原材料、方
反应，可抑制该反应； • 5、可广泛用于多系统疾病治疗及美容保健抗衰老。
2020/3/6
间 充 质 干 细 胞 治 疗 疾 病 机 制
2020/3/6
干细胞在人体内的变化
• 人体的衰老实质上是细胞的衰老，而疾病的产生是因为细胞 衰老到一定程度从而发生了变化。科学研究表明，衰老的重 要原因是体内干细胞的数量减少或者是干细胞的活性降低所 造成的。脐带干细胞，我们称它为零岁干细胞，它使人类征 服衰老不再只是梦想。
2020/3/6
细胞治疗程序
1、治疗前咨询： 明确诊断，明确疾病处于哪一期；
2、治疗风险： 分析利弊；可能的副作用；获益
3、知情同意
2020/3/6
治疗前准备
• 1). 安全检测:菌检； • 2). 个体化治疗方案设计：每一位病人的治疗方案，都根据
其评价结果具体制定; • 3). 需要的细胞数量； • 4). 细胞的使用方法； • 5). 可能出现的不良反应及应对措施。
2020/3/6
什么是脐带间充质干细胞？
• 脐带间充质干细胞（Mesnchymal Stem Cells，MSCs）是指存在于新 生儿脐带组织中的一种多功能干细胞 ，它能分化成许多种组织细胞。
2020/3/6
脐带间充质干细胞应用范围
2020/3/6
脐带间充质干细胞的优势
• 1、来源丰富、采集简便，对母亲和新生儿无任何不良影响； • 2、数量多，增殖能力强，可多次使用； • 3、基因稳定、不易突变、使用安全可靠； • 4、免疫原性低，具有免疫调节功能，使用时不引起免疫排斥
法和环境按照相应的标准进行严格控制。
2020/3/6
供者筛选
• 供者需要提供供者的既往病史、 现病史、家族史等资料。
• 经过一系列病原微生物检测，检 测合格后进入制备程序。
2020/3/6
间充质干细胞在什么条件下储存？ 能够保存多长时间？
• 细胞收集前须给检测送样做细菌检测和流式检 测。
• 我们采用液氮深低温罐（-196℃）保存脐带间 充质干细胞，可以长期保存 。