尿蛋白电泳扫描及图谱

［ ｙｗ ｒ ｓ ｕ ｉｅｐ ｏｅｎｅｅｔｏ ｈ ｒ ｓｓ Ｓ － Ｋｅ ｏ ｄ ］ ｒｎ ｒ ｔｉ ｌｃｒ ｐ ｏ ｅｉ； ＤＳ ＡＧＥ； ｋ ｄ ｅ ｉｅ ｓ ｉｎ ｙｄｓ ａｅ
用 于 肾脏 疾病 诊 断 的 传 统 。 能 测 定 ， 能大 体 了解 肾 脏 肾功 只 功 能 的情 况 ， 能 判 断 肾脏 损 伤 的 部 位 和 程 度 。尿 液 成 分 的 分 不
疾 病 患者 尿 液 进 行 电 泳 分析 。 结 果 根 据 尿 蛋 白 电 泳 图谱 扫 描 测 定 ， ０ １ ４例 尿 蛋 白 电泳 显 示 １ Ｏ例 为 生 理 性 蛋 白 尿 ， ７例 为 肾小 球 性 ３ 蛋白尿 ， ２例 为 肾小 管 性 蛋 白尿 ， ５例 为 混 合 性 蛋 白尿 ， 中 ２ １ ４ 其 Ｏ例 同 时做 肾 活检 ， 系膜 增 生 性 肾 小球 肾 炎 １ ８例 ， 增 生性 肾 小球 肾 炎 ２ ， Ｄ － ＧＥ尿 蛋 白 电 泳 结 果 与 肾活检 结 果基 本 相 符 。 结 论 琼 脂糖 尿 膜 例 Ｓ ＳＡ
析 ， 其 是尿 蛋 白 电泳 成 分分 析 ， 据 各 组 分 的 出现 与否 及 含 量 尤 根
３０ ０ｒｒｉ 心 ５ｍｉ ， 在 生 化 分 析 仪 上 测 定 尿 蛋 白 总 量 ， ０ ／ ｎ离 ａ ｎ先 若 尿 蛋 白 含 量 大 于 １ ５ｇ Ｌ， 用 生 理 盐 水 将 尿 液 作 相 应 稀 ． ／ 则
１ ｉ ｅ ｓ ｍ ｐｌｓ ｗ ｅ ｅ ｃａ ｓｆｅ ｓ ｔ ｅ ｆ ｌ ｗ ｉ ａｔｇｏ ｉｓ： ０ ｗ ｅ ｅ ｐｈｙ ｉ ｏ ｃ ｌｐｒ ｅｎ ｉ ３ ｗｅｒ ｏ ｅ ｕ ａ ０４ ｕｒｎ ａ ｅ ｒ ｌｓ ｉｉｄ ａ ｈ ｏｌｏ ｎｇ ｃ ｅ ｒｅ １ ｒ ｓｏｌｇｉａ ｏｔｉ ｕｒａ； ７ ｅ ｇｌｍ ｒ ｌ ｒ ｐｒ ｅｎｕ ｉ １ ｗｅ ｅ ｔ ｂｕｌｒ ｐ ｏ ｅｎｕｒａ；４５ ｗ ｅ ｅ ｍ ｉ ｄ ｐｒ ｔ ｉ ｉ．Ａ ｍ ｏ ｈｅ ２ ｔｅ ｓ ｗｈｏ ｕｎｄ ｒ ｎｔｐｅ ｃ ｔ ｏｔ ｉ ｒａ； ２ ｒ ｕ ａ ｒ ｔｉ ｉ ｒ ｘｅ ｏ ｅｎｕｒａ ｎｇ ｔ ０ ｐａ ｉｎｔ ｅ ｗｅ ｒ ｕ ａ ｎ ｏｕ ｅ ａ ｏ ｙ ｓｒ ｕ１ａ ｏ ｌ １ ｅ ｅ ｍ ｅ ａ ｇｉｌｐｒ ｌｆ ｒ ｔｖｅ ｇｏｍ ｅ ｕｌ ｅ ｓ ｒ ｎ ｌｂｉｐｓ ｉｎ ｔ ｎｅ ｕｓｙ， ｗ ｒ ｓ ｎ ａ ｏ ｉｅ ａ ｉ ｌ ８ ｒ ｏｎｅ ｈｒｔｓ， ｅ ｅ ｍ ｅ ｂｒ ｎｏｐ ｏｌｆ ｒ ｔｖ ｐ ｉｉ ２ ｗ ｒ ｍ ａ ｒ ｉｅ ａ ｉ ｅ ｇｌｍ ｅ ｕｌ ｅ ｏ ｒ ｏｎ ｐｈｒｔｓ ｈ ｅ ｕｌｓ ｆ ｕ ｉ ｏｔ ｉ ｌ ｃ ｒ ｈｏ ｅ ｉ ｅ ｅ ｎ ｃ ｏｒ ｎ ｅ ｉｉ．Ｔ ｅ ｒ ｓ ｔ ｏ ｒｎｅ ｐｒ ｅｎ ｅ ｅ ｔｏｐ ｒ ｓｓ ｗ ｒ ｉ ａ ｃ ｄａ ｃ ｗｉｈ ｒ ｎ ｌｂｉ ｙ． ｎｃｕ ｉｎ ｔ ｅ ａ ｏｐｓ Ｃｏ ｌｓｏ

６ ２ ｃ ａ ｓ ｅ ｓ ｗｉ ｔ ｈ ｕ ｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ （ ＋ ～ ＋ ＋ ＋ ＋ ）ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ ｄ ｒ ｙ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｗａ ｓ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｔ ｗｅ ｌ ｖ ｅ ｓ ｏ ｄ ｉ ｕ ｍ
ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏｐ ｈｏｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｗａ ｓ ５３ ，ａ ｎｄ ｔ ｈａ ｔ ｂｙ ｉ ｍ ｍ ｕｎｅ ｎｅ ｐｈｅ ｌ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｙ ｗａ ｓ ６ ４ ，ｗ ｉ ｔ ｈ ｎ ｏ ｓ ｉ ｇｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａｎ ｔ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ （ Ｐ ＞ Ｏ． ０５） ． Ｔｈｅ ｃ ｏ ｍ ｐｌ ｅ ｔ ｅ ｃ ｏ ｉ ｎｃ ｉ ｄｅ ｎｃ ｅ ｒ ａ ｔ ｅ ｏ ｆ ｔ ｗｏ ｋｉ ｎｄ ｓ ｏｆ ｍｅ ｔ ｈｏ ｄｓ ｉ ｎ ｄｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｎｇ ｎ ｏｎ — ｃ ｏｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｅ ｄ ｕ ｒ ｉ ｎａ ｒ ｙ Ｉ ｇ Ｇ ｗａ ｓ ８ ９ ，ａ ｎｄ ｃ ｏｅ ｆ ｆ ｉ — ｃ ｉ ｅ ｎ ｔ ｃ ｏｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏｎ ｗａ ｓ ０． ９５， ｓ ｈｏ ｗｅ ｄ ｓ ｉ ｇｎｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎｔ ｌ ｙ ｐ ｏｓ ｉ ｔ ｉ ｖｅ ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏｎ（Ｐ＜ ０．０１ ） ．Ｃｏｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ Ｎｏｎ － ｃ ｏ ｎｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｅ ｄ ｐ ｒ ｏ— ｔ ｅ ｉ ｎ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏｐ ｈｏ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ａ ｎｄ ｉ ｍ ｍ ｕｎｅ ｎｅ ｐ ｈｅ ｌ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｙ ｓ ｈ ｏｗｅ ｄ ｎｏ ｏ ｂｖ ｉ ｏｕ ｓ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｉ ｎ ｄｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏｎ ｏｆ ｕｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ ｌ ｇ Ｇ ． Ｔｈｅ ｔ ｗｏ ｍｅ ｔ ｈ ｏｄｓ ｈ ａ ｖ ｅ ａ ｓ ｉ ｇｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｃ ｏｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ，ａ ｎｄ ａ ｒ ｅ ａ ｃ ｃ ｕｒ ａ ｔ ｅ ａ ｎｄ ｈｉ ｇｈ ｓ ｅ ｎｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ ．

正确分析血清蛋白电泳扫描图苏洁平,张晓静(吉林大学中日联谊医院,吉林长春130031) 血清蛋白电泳虽然是一个传统的检验项目,但目前在临床上对一些疾病的诊断(如对肝病、肾病、多发性骨髓瘤,以及一些自身免疫性疾病等)仍起着不可替代的作用。

血清蛋白电泳就是根据血清中各组分蛋白质分子量的不同,将各组分蛋白质分离开,分子大的泳动慢、分子小的泳动快,依次分为白蛋白、α12球蛋白、α22球蛋白、β2球蛋白(有时可出现前β2球蛋白带区属正常)和γ2球蛋白5个带区(或6个带区)[1,2]。

常见几种疾病的蛋白电泳变化见表1。

表1　几种常见疾病的血清蛋白电泳扫描图的变化特征病名白蛋白球蛋白α12球蛋白α22球蛋白β2球蛋白γ2球蛋白肾病↓↓↑↑↑↑↓弥慢性肝损伤↓↓↑↓↓↑肝硬化↓↓↓↓β2γ桥原发性肝癌↓↓AFP↑多发性骨髓瘤↓↓↑↑↑慢性炎症↓↑↑↑妊娠↓↑↓无丙种球蛋白血症↓↓双血蛋白血症双峰 注:↑轻度增高,↑↑明显增高,↓轻度降低,↓↓明显降低 下面对几种血清蛋白电泳扫描图作简要说明[3,4]。

1　图1:为正常人血清蛋白电泳扫描图,由左至右为白蛋白峰、α12球蛋白峰、α22球蛋白峰、β2球蛋白峰、γ2球蛋白峰。

其含量分别为52%～63%,4%～5%, 6%～9%,9%～12%,15%～23%。

2　图2及图3:见增高的γ2球蛋白峰。

肝病患者病程较长,当白蛋白和α12球蛋白降低,γ2球蛋白增高,提示病情较重。

当肝细胞严重受损时,β2球蛋白可降低,重症肝炎转为肝坏死后γ2球蛋白增高。

3　图4:可见β区到γ区连续一片,难以分开,是由于IgA、IgM、IgG同时增高所致,称β2γ桥。

β2γ桥为肝硬化所独有的特点。

如伴有α12球蛋白、α22球蛋白降低即可诊断肝硬化。

若治疗后白蛋白回升,标志治疗有效。

4　图5:见明显增高的α22球蛋白峰,β2球蛋白峰同时增高,而白蛋白峰明显减低。

由于肾病患者长期丢失白蛋白,故血清中的蛋白明显减少。

（五）染料结合法
• 考马斯亮蓝常用于需更高呈色灵敏度的蛋 白电泳中，也可用于测定尿液、脑脊液等 的蛋白质，
• 优点：简便、快速、灵敏 • 缺点：不同蛋白质与染料的结合力不一 致，且试剂对比色杯有吸附作用。
（六）紫外吸收法
• 测定原理：蛋白质中的色氨酸、酪氨酸 的共轭双键，在280nm处有一吸收峰。 • 尿酸和胆红素在280nm附近有干扰，不 适合血清、尿液等组成复杂的蛋白质溶 液测定
表3-2
三种比色法和紫外分光光度法测定蛋白质的比较
灵敏度
化学干扰程度 不同蛋白质
快速性和
(最低测定值)
间的误差
复杂性
双 缩脲 100μg 酚试剂 1μg 考马斯亮蓝 1μg 紫外分光光度 10μg
中等 严重 低 较严重
小 大 大 大
快速简单 较复杂 快速简单 快速简单
表3-6
方 法 1．凯氏定氮法
• 用于较纯酶、免疫球蛋白等蛋白质测定
（六）紫外吸收法
• 生物样品也常混有核酸，核酸最大吸收峰为 260nm，在280nm也有较强的光吸收，因而 测定蛋白质可采用两个波长的吸光度予以校 正. • 蛋白质浓度（g/L）＝1.45A2800.74A260nm。
（六）紫外吸收法
• 优点： 操作简便、快速，线性 20-100mg/l 灵敏度高(较双缩脲法约10倍)， 样品少，且无需处理可直接测定 样品可全部回收，特别适用于来源不 便，成本较高的微量蛋白的定量。 • 缺点:不适用成分复杂的蛋白
免疫透射浊度法如图3－23所示
（四）比浊法
• 优点 操作简便、灵敏度高
• 缺点 准确性差、各种蛋白质形成的浊度有
较大差异，影响因素多，包括加入试剂的
手法、混匀技术、反应温度等。 • 一般用于测定尿液、脑脊液等蛋白质浓度 较低的样品

3• 特异的白细胞 (lymphocytes B) 转化为浆 细胞
4• 浆细胞 合成抗体蛋白,即免疫球蛋白.
Immunoglobulin
5• 免疫球蛋白 在免疫系统中被用来识别和消 灭如细菌或病毒等外源物
正常浆细胞
正常免疫球蛋白的合成 骨髓瘤或其他恶性浆细胞增生
Normal Immunoglobulin
• 电泳技术就是利用在电场的 作用下, 由于待分离样品中 各种分子带电性质以及分子 本身大小, 形状等性质的差 异, 使带电分子产生不同的 迁移速度, 从而对样品进行 分离, 鉴定或提纯的技术.
• 在生化检测中, 主要用于分 离各类蛋白分子.
正常的电泳图谱
经过毛细管电泳后, 血清蛋白将会被分离成6个条带并同时标注出检测结果
低免疫球蛋白血症
如果血清中未见异常,建议 做尿本周氏蛋白检测
原因: 先天免疫缺陷, 免疫抑制治疗过程中, 游离轻链病)
通过对血清蛋白电泳结果中出现的单克隆免疫球蛋白检测, 对免疫球蛋白疾病进行诊断
有症状型性免疫球蛋白疾病: - 多发性骨髓瘤 - 巨球蛋白血症 - 非霍奇金淋巴瘤 - 慢性淋巴细胞白血病 - 重链病 - 淀粉样病变
出现的单克隆M蛋白
正常免疫球蛋白 的电泳结果图谱 Normal Proteinogram
单克隆免疫球蛋 白的电泳图谱
Proteinogram showing Monoclonal peak
多发性骨髓瘤
人群分布:
多发性骨髓瘤仅次于白血病, 是目前发病率排第二位 的恶性血液肿瘤
占所有肿瘤的1% (每年超过15 000人死于该疾病) 欧洲目前有60 000患者, 世界范围有250 000 因浆细胞过度增殖,继而影响骨髓

室指标 ， 具 有临床诊 断 价值Ｌ １ ］ 。我 们 应 用 十 二 烷 基 硫 酸 钠 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电泳 （ ｓ Ｄ ｓ － Ｐ Ａ ＧＥ ） 技术进 行非浓 缩尿 蛋 白 电泳 ， 用 于肾脏损伤的早期诊断 。
１ 资 料 与 方 法
区带 ； ⑤高相对 分 子质 量蛋 白尿 （ 非 选择 性 肾小 球性 蛋 白 尿） ： 相对分子质量 为 ５ ０。 Ｏ Ｏ ～１ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ， 图形 特 征 为 电泳 条 带 出现 在 清 蛋 白 区 带 以 上 ； ⑥ 混 合 性 蛋 白 尿 ：相 对 分 子
生组织／ 国 际 高 血 压 联 盟 制 定 的高 血 压 诊 断 标 准 ， 所 有 的 肾 病 患 者 均 经 肾 穿 刺 病 理 检 查 确 诊 。对 照 组 ３ Ｏ名 均 来 自本
院健 康 体 检 人 群 ， 男性 １ ８名 ， 女性 １ ２名 ， 平均 年龄 ５ ５岁 。
经检查无糖尿 病、 高血压 、 尿 蛋 白定 性 检 查 阴 性 。 ｌ ＿ ２ 标本 采 集 ： 患 者 留取 清 晨 首 次 尿 液 约 ５ ～１ Ｏ ｍＬ ， 若 尿 液 明显浑 浊 ， ３ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍｉ ｎ离 心 ３ ｍｉ ｎ ， 取 上 清 用 于 电 泳 检 测， 若 不能及 时检 测 ， 密 封 后保 存 于 ４℃冰 箱 中不 超 过 １
条 带 出 现 。病 例 组 与 对 照 组 尿 蛋 白 电泳 检测 结果 ， 见表 １ 。
表 １ 病 例 组 与 对 照 组 尿 蛋 白 电 泳检 测 结 果 比较
３例 ， 肾盂 肾 炎 ５ 例 。糖 尿 病 诊 断 符 合 １ ９ ９ ９年 世 界 卫 生 组 织 糖 尿 病 诊 断 和分 类 标 准 ， 高血压 诊断符合 １ ９ ９ ８年 世 界 卫

电泳技术基本原理和步骤
目录
• 第一节 • 第二节 • 第三节 • 第四节 • 第五节 • 第六节 • 第七节 • 第八节
区带电泳 等电聚焦电泳 SDS-PAGE电泳 二维电泳 印迹技术 免疫电泳 高效毛细管电泳技术 电泳分析仪
基本原理
不同性质的质点，由于带电性质及电量不同，在 一定电场强度下移动的方向和速度亦不同。
第二节 等电聚焦电泳
• 区带电泳的原理是不同的蛋白质有不同的电泳速度
• 那么可不可以有另外一种方法：使得不同蛋白质在 泳道中本来就有“固定”位置，蛋白质在相应的位 置上停留？
• 蛋白质如何能够停止电泳？
• 除了切断电源之外？
• 蛋白质不带电了——蛋白质处于等电点溶液中
第二节 等电聚焦电泳
• 基本原理 在等电聚焦电泳时必须有一个稳定的pH梯度介
第四节 二维电泳
• 检验医学中的应用
一个问题：如何确定某个条带 是什么蛋白质？
图 6-1 正常血清蛋白电泳图谱 上图：箭头示电泳方向，右侧示各条带的主要组分； 下图：光密度扫描后电泳图谱；HP：触珠蛋白；CP：铜蓝蛋白
第五节 印迹技术
• 免疫印迹法－－基本原理
图 6-13 免疫印迹法的原理
第五节 印迹技术
区带电泳
• 检验医学中的应用－－ 同工酶电泳
图6-3 LDH同工酶区带电泳图谱 左：5份血清iso-LDH电泳图；右：iso-LDH电泳示意图
第一节 区带电泳
• 检验医学中的应用－－ 同工酶电泳
图6-4 CK同工酶示意图 左：血清iso-CK电泳图，3示正 常血清（CK MB<5%），1、2、 4示急性心梗（CK MB>5%）；4 示CK BB阳性； 右：iso-CK电泳图谱示意图

SDS-AGE尿蛋白电泳技术在肾脏疾病中的应用研究杨小燕;吴泳泳;吕春;雷文辉【摘要】@@ 蛋白尿是肾脏疾病的常见临床表现,尿蛋白的选择性在一定程度上反映肾脏病变的程度.肾活检诊断肾脏疾病的准确性虽然高,但由于肾活检属创伤性诊断技术,存在很多不足,如患者的恐惧;顾虑;可能造成出血;感染等.【期刊名称】《实验与检验医学》【年(卷),期】2010(028)001【总页数】2页(P82,92)【作者】杨小燕;吴泳泳;吕春;雷文辉【作者单位】江西省赣州市人民医院检验科,江西赣州,341000;江西省赣州市人民医院检验科,江西赣州,341000;江西省赣州市人民医院检验科,江西赣州,341000;江西省赣州市人民医院检验科,江西赣州,341000【正文语种】中文【中图分类】R446.12+2蛋白尿是肾脏疾病的常见临床表现，尿蛋白的选择性在一定程度上反映肾脏病变的程度。

肾活检诊断肾脏疾病的准确性虽然高，但由于肾活检属创伤性诊断技术，存在很多不足，如患者的恐惧；顾虑；可能造成出血；感染等。

因此，本文采用十二烷基硫酸钠-琼脂糖凝胶(SDS-AGE)进行非浓缩尿蛋白电泳技术分析，在一定程度上可反映肾脏病变的部位及程度，对临床诊断和早期诊断肾脏疾病，特别对未开展肾活检的基层医院有重要临床意义。

1 资料与方法1.1 标本采集1.1 .1病例组 60例肾病患者均来自我院肾内科2008年1月～2008年12月住院病人，年龄10～70岁，平均42岁，男38例，女22例。

1.1 .2对照组健康人5例，无肾脏病史及其他慢性病史，尿蛋白含量0～100mg/24h。

1.2 仪器与试剂1.2 .1仪器法国Sebia公司产HYDRASYS全自动程序化琼脂糖凝胶电泳仪。

1.2 .2试剂均使用该公司提供的专用标准液和试剂。

1.3 方法1.3 .1 样品采集及处理收集新鲜晨尿5～10ml，标本如不能及时测定放冰箱时间不超过1周，先用尿蛋白筛选定量法测定蛋白含量，如蛋白质高于2g/L，则用生理盐水稀释至1.5g/L。

肾病综合征
肾病综合征时，主要是α2 区的α2巨球蛋白增加，β1 区的ApoB增加所致。
遗传基因突变；或服用β内酰胺类抗生素等导致药物与 白蛋白结合。
低丙球蛋白血症
常见于先天性缺陷或继发性因素（如免疫抑制剂治疗）
高免疫球蛋白血症
高免疫球蛋白(多克隆)，常见于自身免疫性疾病、慢性 感染等
M蛋白
γ区单克隆免疫球蛋白升高，可见于多发性骨髓瘤、淋 巴瘤等疾病
β区M蛋白
因IgA位于β区后部或β和γ区之间，所以单克隆IgA 升高常出现这样图形，主要见于IgA型骨髓瘤 。
M蛋白
M蛋白
即单克隆蛋白monoclonal protein ，是浆细胞或B淋巴细胞 单克隆恶性增殖所产生的一种大量异常免疫球蛋白，其本 质是一种（无功能的）免疫球蛋白或免疫球蛋白片段（重 链，轻链等）。
--毛细管电泳
血清电泳原理
➢ 蛋白质等电点
由于蛋白质含有羧基 “-COOH”和氨基 “-NH2”可 解离成带电荷基团，所以在溶液中有两性电离现象。
当蛋白质溶液处于某一pH时，该蛋白质极性基团解 离正负离子数相等，净电荷为0，此时该溶液的pH值就 是该蛋白质的等电点pI值。
每种蛋白质pI大小是特定的，只与该蛋白质结构有关。
➢ 从正极起依次为白蛋白、a1、a2、b（ b1， b2）、g。 ➢ 区带经丽春红等染料染色后，由光密度扫描仪检测
并自动画出吸光度积分曲线。
血清蛋白电泳正常图谱
Albumin α1 α2 β
γ
正常血清蛋白电泳图谱
白蛋白
a1: a1酸性糖蛋白, a1抗胰蛋白酶，甲胎蛋白等 a2: 结合珠蛋白, a2 巨球蛋白, a脂蛋白, 铜蓝蛋白等 b : 转铁蛋白, b脂蛋白,纤维蛋白原,补体,b2微球蛋白等 g : 免疫球蛋白

γ 球蛋白
0.09~0.18(9%~18%)
哪些病多克隆（Gamma）增高？
多克隆典型电泳图
哪些病M带增高？
单珠峰电泳图（M带）
2球蛋白：肾上腺不 足、肾上腺皮质类固 醇治疗、糖尿病 、肾 病综合征 球蛋白： 转铁蛋白(Tf) C-反应蛋白 营养不良
球蛋白： 体C3、C4 IgG、A、M、D、E
深蓝色柱为典型肾病电泳图，方块内文字是与肾病相关电泳增高的意义
• 预报： • 下期公布关于【免疫蛋白电泳】相关知识。
肾上腺不足肾上腺皮质类固足肾上腺皮质类固醇治疗糖尿病醇治疗糖尿病肾病综合征病综合征肾上腺不肾?球蛋白
典型血清蛋白电泳图片
蒋莹辉

[参考值范围]
醋酸纤维素膜法:
清蛋白
α1球蛋白
0.62~0.71(62%~71%)
0.03~0.04(3%~4%)
α2球蛋白
β 球蛋白
0.06~0.10(6%~10%)
0.07~0.11(7%~11%)

尿蛋白四项解读【最新版】目录一、尿蛋白概述二、尿蛋白四项指标1.尿蛋白定性试验2.尿蛋白定量试验3.尿蛋白电泳4.尿蛋白免疫学检测三、尿蛋白四项检测的临床意义四、结论正文一、尿蛋白概述尿蛋白是指尿液中出现的蛋白质，正常情况下尿液中蛋白质含量很低。

然而，在某些病理情况下，尿液中的蛋白质含量会增加，这种现象被称为尿蛋白。

尿蛋白的出现可能与多种疾病有关，如肾脏疾病、心血管疾病等。

因此，对尿蛋白的检测具有重要的临床意义。

二、尿蛋白四项指标1.尿蛋白定性试验尿蛋白定性试验是一种初步筛查方法，通过检测尿液中蛋白质的存在与否，对患者的病情进行初步评估。

这种方法主要通过试纸法或硝酸银法进行检测。

2.尿蛋白定量试验尿蛋白定量试验是对尿液中蛋白质含量进行量化的检测方法，可以更准确地反映患者尿液中蛋白质的浓度。

这种方法通常采用比色法、比浊法等方法进行检测。

3.尿蛋白电泳尿蛋白电泳是一种分离尿液中蛋白质的方法，可以对尿液中的蛋白质进行定性和定量分析。

这种方法通过对尿液中蛋白质的等电点进行分离，可以初步判断蛋白质的来源和性质。

4.尿蛋白免疫学检测尿蛋白免疫学检测是一种针对特定蛋白质的检测方法，可以对尿液中的特定蛋白质进行定性和定量分析。

这种方法通过对尿液中蛋白质的抗原和抗体进行反应，可以更准确地判断蛋白质的来源和性质。

三、尿蛋白四项检测的临床意义尿蛋白四项检测可以帮助医生对患者的病情进行全面评估，为诊断和治疗提供重要依据。

尿蛋白定性试验和定量试验可以初步判断患者是否存在尿蛋白现象及其程度；尿蛋白电泳和免疫学检测可以进一步分析尿蛋白的来源和性质，有助于诊断疾病的具体类型和程度。

四、结论尿蛋白四项检测是评估患者尿蛋白状况的重要手段，对疾病的诊断和治疗具有重要意义。

然而，尿蛋白四项检测只是一种辅助手段，具体的诊断和治疗还需结合患者的临床表现、病史等多方面因素综合判断。

Nhomakorabea检验图谱
电泳图谱
血红蛋白电泳扫描及图谱

正常人Hb区带：从负极向正极泳速最快的HbA，占大部 分，约95%；HbA后有一较浅 区带为HbA2，正常人约23%，比下述NHP染色深，但不超过一倍。A2后距加样 线不 远处尚有一或二条区带较为集中，着色更浅的带为 红细胞内的非Hb蛋白质成份（NHP） ，如碳酸酐酶等。 HbF与HbA等电点接近，通常与HbA分不开。但如果含 量较大，与 同时电泳的正常成人Hb比较，还是可以看出 在HbA稍后的HbF带，但不能完全分开。 异常人Hb区带：以HbA为标准，异常Hb可分为较HbA泳 动快的快Hb和较HbA泳动慢 的慢Hb两部分。快Hb有 HbH和HbJ；慢Hb则按与HbA的距离依次为HbG、HbD 和HbE。

急性心肌梗塞发作早期，血清中LD1和 LD2活力均增高，但LD1增高更早，更明 显， 可导致LD1/LD2比值升高；溶血性疾 病、幼红细胞贫血症、肾坏死和假性肥大 性 肌营养不良患者血清中LD1和LD2也可 增高。LD2、LD3增高见于恶性病，尤其 是白 血病、淋巴瘤、急性肺损伤、胶原病、 心包炎和病毒感染。LD4、LD5增高见于 肝 细胞损害（坏死、炎症、充血），肌肉 损伤，心肌梗塞并发充血性心衰时LD5也 增高

肌肉创伤及肌肉注射后CK同工酶只检出 CK-MM。各种原因引起的缺氧性神经系统 疾病，缺氧后48-72小时脑脊液CK-BB升 高。血中CK-BB的出现与脑神经系统疾病 无一定规律。但血中CK-BB与肿瘤有一定 关系。
乳酸脱氢酶同功酶电泳扫描及图谱

仪器：Sebia Hydrasys LC、Hyrys 方法：琼脂凝胶电泳 染料：四氮唑盐

尿蛋白电泳扫描及图谱

非浓缩尿蛋白电泳法和免疫散射比浊法测定尿免疫球蛋白G的比较陈志;王朝晖;邰宏明【摘要】目的比较非浓缩尿蛋白电泳法和免疫散射比浊法测定尿免疫球蛋白G的临床应用及价值.方法分别采用十二烷基磺酸钠-琼脂凝胶电泳技术(SDS-AGE)与免疫散射比浊法分别测定2010年7月至2011年7月兴化市人民医院62例干化学法尿蛋白(+～++++)的住院患者非浓缩尿液标本中免疫球蛋白G的百分含量,并按尿总蛋白定量及尿IgG电泳百分比计算尿IgG含量,与免疫散射比浊法定量做相关分析.结果 62例非浓缩蛋白电泳法尿IgG结果阳性率53％,免疫散射比浊法阳性率64％,电泳法和免疫散射比浊法测定尿中IgG阳性率差异无统计学意义(P＞0.05),两种方法在检测非浓缩尿IgG上完全符合率达89％,相关系数为0.95,呈正相关(P ＜0.01).结论非浓缩蛋白电泳法与免疫散射比浊法检测尿IgG结果差异无统计学意义,有显著相关性,且结果准确,灵敏度高.【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2013(010)008【总页数】2页(P940-941)【关键词】尿蛋白电泳法;免疫散射比浊法;尿IgG【作者】陈志;王朝晖;邰宏明【作者单位】江苏省兴化市人民医院检验科 225700;江苏省兴化市人民医院检验科 225700;江苏省兴化市人民医院检验科 225700【正文语种】中文尿中免疫球蛋白G（IgG）增多与肾小球严重病变程度有关，大多是非选择性蛋白尿［1］。

传统的尿IgG检测方法主要有免疫散射比浊法、放射免疫法等。

放射免疫法由于放射性污染及操作者人为因素的干扰，逐渐被淘汰。

近几年非浓缩尿蛋白电泳已作为检测尿蛋白和区别尿蛋白类型较好的方法应用于临床，其优点是操作简便，灵敏度高，干扰少，结果判断清晰、直观，能将尿液中所有的蛋白成分显示出来，并便于保存，能动态观察和对比［2-4］。

作者采用非浓缩尿蛋白电泳法和免疫散射比浊法分别测定尿免疫球蛋白G，进行比较分析，现将结果报道如下。

尿蛋白电泳操作规程一．项目名称尿蛋白电泳（HYＤRAＧEL PROTEINURIＥ)二．检验方法名称SDS-琼脂糖凝胶区带电泳三．方法学原理在含有多量的阴离子去垢剂十二烷基磺酸钠（SＤS）液体中,蛋白质可与其连接，形成ＳＤS—蛋白质复合物。

这种复合物蛋白本身的构造已经破坏，他们都表现出相同的构造和相同的负电荷。

当这种SDS—蛋白质复合物在具有适当筛选功能的介质中电泳时，如在含高浓度琼脂糖的HYDＲＡGEL 5 PROTEＩNURIE凝胶上电泳时,蛋白质按它们的分子量大小进行分离。

在HYＤRAＧEL 5 PRＯTEＩＮＵRIＥ凝胶上能清楚分离来源于肾小管(分子量＜65-7０Kｄa)还是来源于肾小球(分子量>65-70ＫDａ)的蛋白质，因此尿蛋白不仅能被检测到,而且能对蛋白来源进行分类(肾小球,肾小管性和混合性)。

四．方法学溯源自１９3０年由Tiselius发现了移界电泳（moｖinｇ bouｎdarｙeectroｐｈoresiｓ),而后,这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zoｎｅeｌｅｃrrｏpｈoresｉs)所克服,区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。

五．仪器（一）型号:SＥＢIＡ HＹDRASＹS (PN1210)（二）分析和计算参数：1．处理量:约1４个样本／小时2．所需样本量：5uｌ3．检验时间:约5０分钟4．重复性:有良好的批内和批间重复性5．电泳参数：电压０-300Ｖ(可选至3００0V)电流0－５０0mＡ功率0-100Ｗ六．试剂及配套品（一）试剂1．ＨＹDRAGEL ５ PＲOTEＩNURIE试剂盒（1）商标:SEBIＡ（2）包装规格:50测试（3）货号:PN４1152．脱色液（1) 商标：SEBIA(２) 包装规格:Ｐａck foｒ 1０×１０0ｍl（3) 货号：PＮ4５40（４) 成分:柠檬酸３．洗涤液（1）商标：ＳEＢＩＡ（2）包装规格：Ｐａｃk foｒ 1０×8０ml（3）货号：PN4５41（4）成分：叠氮钠（二）配套品尿蛋白质控(1）商标：ＳＥBIA(2）包装规格:Pａck foｒ 5×1ml（３）货号:PＮ4７81七．操作步骤㈠开机,启动电泳仪。

临床意义：血管内溶血、行进性血红蛋白尿。
4.porphyrin
δ-氨基酮戊酸、卟胆原
啉
粪卟啉
血红素
尿卟 原卟啉+Fe
卟啉尿是指尿中排出过多的卟啉或者其前
体
测定方法：酸萃取后，紫外线进展检测
临床意义：先天性卟啉病、肝性卟啉病
五、Tamm—Horsfall protein
TH蛋白由Henle袢升支与远曲小管的上皮细胞的高尔 基复合体产生，是一种肾特异性蛋白质。是构成管型 的一种重要蛋白。 检测方法：酶联免疫吸附法、放射免疫法 临床意义：协助诊断上尿路疾患
尿液酶测定时尿液标本的处置方法：
尿液通常为弱酸性，且蛋白质浓度较低，不 利于尿酶活力的保管，因此必需及时测定和 处置。
大部分尿酶活性比血浆酶活性低，在测定时 适当加大标本用量或延伸酶作用时间。
尿液中含有较高浓度的低分子物质，如尿素、 尿酸、肌酐、硫酸盐、磷酸盐等，他们能够 是某些酶的抑制剂，因此必需对尿液标本进 展预处置：超滤法、透析法、凝胶过滤法
1.N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶
(N-acetyl- β –D-glucosaminidase, NAG〕
NAG是一种位于溶酶体内的酸性水解酶， 存在于一切组织中，以前列腺和肾近球肾小管 溶酶体含量最高。
临床运用：
各种肾脏疾病：急慢性肾功能不全、肾病综合 症
肾移植排斥反响：早期诊断
药物性肾损害：
利用单克隆抗体elisaelisa3hemosiderinhemosiderin当发生血管内溶血时大部分血红蛋白随尿排出其当发生血管内溶血时大部分血红蛋白随尿排出其中一部分血红蛋白被肾小管上皮细胞再吸收后在肾小管上中一部分血红蛋白被肾小管上皮细胞再吸收后在肾小管上皮细胞内分解形成血铁黄素再随细胞脱落至尿中排出

1.
结果分析
脐带血：正常只含Hb A和 Hb F，偶见Hb A2 。 3岁以上的全血：含Hb A和 Hb A2两种成份，其中 Hb A2的含量≤3.5%。 α地中海贫血：脐带血出现Hb Bart’s和/或Hb H。 Β地中海贫血： Hb A ↓ ， Hb F 和/或Hb A2↑。 异常血红蛋白病：出现异常血红蛋白。
操作步骤
稀释：20ul稀释液+80ul尿标本(稀释液中含有
SDS和溴酚蓝，后者是一种电泳指示剂)。 加样5ul稀释后标本到琼脂板上的孔中。 电泳。 染色。
结果分析
分子量由小到大(由快到慢)共有以下区带：
β2微球蛋白(12KD)、溶菌酶(15KD)、视黄醇 结合蛋白(21KD)、游离轻链(25KD)、α1微球 蛋白(33KD)、游离轻链二聚体(50KD)、白蛋 白(70KD)、转铁蛋白(80KD)、IgG(160KD)、 IgA(165KD)。
血清蛋白电泳
原理
在pH值为9.2时，血清中的蛋白质都带有负电
荷，在电场中由负极向正极移动，根据每种 蛋白分子所带电荷量的不同，它们的泳动速 度不同。
操作步骤
1、加样：吸取血清10ul加到加样梳中，齿向
上，置湿盒中扩散5分钟。 2、电泳。 3、染色：用氨基黑染色。 4、扫描。
结果分析

临床意义
白蛋白 ①急性炎症 ②慢性炎症 肝硬变 低蛋白血症 营养不良 肾病综合征 高γ 球蛋白血 症 单克隆异常球 蛋白血症 N或↘ N或↘ ↘ ↘ ↘ ↘ ↘ α 1球蛋白 α 2球蛋白 ↗ ↗ N或↘ N或↗ N或↘ N N N或↗ N或↗ N或↘ N或↗ N或↗ ↗ N N或↘ N或↗ N或↗ N β 球蛋白 N N或↘ 联合 N或↗ N或↘ N或↗ ↘ ↗ γ 球蛋白 N ↗