下载文档原格式
新课程标准下中学生物实验常用试剂的配制及计算公式广州市第75中学生物科周文军新课程标准下，中学生物教学中的教师演示实验和学生分组实验，深度和广度扩大，数量增多，实验技术和设备不断改进更新。
对实验成败起至关重要作用的实验试剂配制在不断变化和改进。
下面介绍现阶段中学实验中常用试剂的配制和应用以及在配制过程中常用的计算公式。
一、常用试剂的配制及应用1. 铁醋酸洋红染剂【配制】二种常用配法：（1）冰醋酸90mL混入110mL蒸留水中煮沸，立即加入1g洋红，搅拌，使之迅速冷却并过滤，再加入数滴醋酸铁或氢氧化铁媒染剂的水溶液，至颜色变为红葡萄酒色，即可。
注意铁剂不要加得太多，否则洋红会发生沉淀。
（2）先将200mL45%醋酸水溶液放入锥形瓶中煮沸，移去火苗，然后慢慢地分多次加入1g洋红粉末（注意不能一下倾入，以防溅沸）。
待全部投入后，再煮1-2分钟，并用棉线悬入一颗生锈的小铁钉，过一分钟后取出，或滴入4%的铁明矾液5-10滴，使染色剂染色效果更好。
【应用】常被用作核、染色体的固定和染色剂。
2. 龙胆紫染剂【配制】取0.2g龙胆紫溶于100mL蒸馏水中，现常以结晶紫代替。
必要时可将医用紫药水稀释5倍后代用，它是粗制的1%龙胆紫。
【应用】用于观察植物细胞的有丝分裂实验。
3. 改良苯酚品红染液【配制】甲液：取3g碱性品红溶于100mL70%酒精中，此液可以长期保存。
乙液：取A液10mL加入90mL5%苯酚（即石炭酸）水溶液中（2周内使用，如果呈浑浊状不可再用）。
丙液：取乙液55mL加入6mL的冰醋酸和6mL38%的甲醛（可长期保存）。
配法：取丙液10-20mL，加入80-90mL45%醋酸和1.5g山梨醇。
放置2周后使用，染色效果显著。
【应用】观察植物染色体使用的比较理想的染色剂，使用方便。
可普遍用于植物组织的压片法和涂片法，使用2-3年不会变质。
山梨醇为助渗剂，兼有稳定染色液的作用。
如果没有山梨醇，也能染色，但效果稍差。
实验室常用试剂和缓冲液配方实验室中常用的试剂和缓冲液配方有很多种，下面将介绍一些常用的试剂和缓冲液的配方：一、试剂的配方1. Tris缓冲液：- 3 M Tris-Cl，pH 7.4（准备方法：将121.1 g Tris粉末溶解在800 mL去离子水中，使用HCl调节pH值至7.4，并将溶液体积加至1 L）2.NaCl溶液：-5MNaCl（准备方法：将287.7gNaCl溶解在800mL去离子水中，并将溶液体积加至1L）3.验血试剂：-4%NaOH溶液（准备方法：将40gNaOH溶解在900mL去离子水中，并将溶液体积加至1L）-5%CuSO4溶液（准备方法：将50gCuSO4溶解在900mL去离子水中，并将溶液体积加至1L）-2%K4[Fe(CN)6]溶液（准备方法：将20gK4[Fe(CN)6]溶解在900mL去离子水中，并将溶液体积加至1L）4.PBS缓冲液（磷酸盐缓冲液）：-10×PBS缓冲液（准备方法：将80gNaCl，2gKCl，11.5gNa2HPO4，2gKH2PO4溶解在800mL去离子水中，并将溶液体积加至1L。
pH值可以调节至7.4左右）5. Tris-EDTA缓冲液（TE缓冲液）：- 10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 8.0（准备方法：将12.1 gTris溶解在800 mL去离子水中，然后加入0.37 g EDTA，使用HCl调节pH值至8.0，并将溶液体积加至1 L）二、缓冲液的配方1. Tris-HCl缓冲液：- 50 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1% Triton X-100，pH 7.4（准备方法：将6.05 g Tris，5.8 g NaCl，0.1 g Triton X-100溶解在800mL去离子水中，使用HCl调节pH值至7.4，并将溶液体积加至1 L）2. Tris-Borate缓冲液（TBE缓冲液）：- 89 mM Tris，89 mM boric acid，2 mM EDTA，pH 8.3（准备方法：将10.81 g Tris，5.49 g boric acid，3.72 g EDTA溶解在800 mL去离子水中，使用NaOH或HCl调节pH值至8.3，并将溶液体积加至1 L）3. Tris-Glycine缓冲液：- 25 mM Tris，192 mM glycine，0.1% SDS，pH 8.3（准备方法：将3.03 g Tris，14.35 g glycine溶解在800 mL去离子水中，使用HCl调节pH值至8.3，并将溶液体积加至1 L）4. Tris-Acetate缓冲液（TAE缓冲液）：- 40 mM Tris，20 mM acetic acid，1 mM EDTA，pH 8.3（准备方法：将4.84 g Tris，1.86 g acetic acid，0.37 g EDTA溶解在800 mL去离子水中，使用NaOH或HCl调节pH值至8.3，并将溶液体积加至1 L）5. Phosphate缓冲液：- 100 mM sodium phosphate，pH 7.0（准备方法：根据目标pH值使用磷酸二氢钠和磷酸氢二钠调节溶液pH至7.0，并将溶液体积加至1 L）以上只是一些常用的试剂和缓冲液的配方，并不是全部。
中学生物实验操作题库附答案实验一：观察离子交换树脂的去除效果
实验目的：通过观察离子交换树脂对溶液中离子的去除效果，了解其在水处理等环境中的应用。
实验器材与试剂：
1. 离子交换树脂
2. 蒸馏水
3. 5种不同离子溶液（如氯化钠溶液、硝酸铵溶液等）
实验步骤：
1. 将5种不同离子溶液分别倒入5个试管中，每个试管中的溶液体积约为10mL。
2. 取适量的离子交换树脂放入每个试管中，轻轻摇匀。
3. 观察每个试管中溶液的变化情况，记录下颜色、浑浊度等观察结果。
实验结果与分析：
1. 钠离子溶液：经离子交换树脂处理后，溶液呈现明显的变清澈。
2. 铵离子溶液：离子交换树脂处理后，溶液仍然保持原先的颜色和浑浊度。
3. 钾离子溶液：经过离子交换树脂处理后，溶液的颜色变得较浅，
但仍保持一定的浑浊度。
4. 镁离子溶液：离子交换树脂处理后，溶液呈现明显的变清澈。
5. 铁离子溶液：经离子交换树脂处理后，溶液的颜色没有明显变化，但浑浊度明显减少。
根据实验结果分析，离子交换树脂能够有效去除溶液中的钠离子和
镁离子，使溶液变得清澈。
然而，对于铵离子、钾离子和铁离子的去
除效果相对较弱，可能需要进行更多的处理步骤或者使用其他材料。
综上所述，离子交换树脂在水处理中有其独特的应用价值。
实验者
可以根据具体情况选择合适的离子交换树脂材料进行处理，以达到某
种特定离子的去除要求。
注意：本实验仅为示范实验，请根据实际情况进行操作。
高中生物实验方法与常用试剂1．实验方法实验方法是整个实验设计的精髓，是做好实验设计的关键所在。
现将与中学实验有关的一些最常见的经典的实验方法汇总如下:（1）化学物质的检测方法:①淀粉-—碘液（蓝色)②还原性糖——斐林试剂、班氏试剂（砖红色)③CO2-—Ca(OH）2溶液(澄清石灰水变浑浊)或酸碱指示剂④乳酸—-pH试纸⑤O2——余烬复燃无O2——火焰熄灭⑥蛋白质——被蛋白酶水解、双缩脲试剂(紫色）⑦脂肪——苏丹Ⅲ染液（橘黄色)、苏丹Ⅳ染液（红色）⑧DNA—-二苯胺（蓝色）⑨染色体——龙胆紫溶液（紫色），醋酸洋红溶液（红色)（2)实验结果的显示方法：①光合速率——O2释放量或CO2吸收量或淀粉产生量◆水生植物可依气泡的产生量或产生速率;◆离体叶片若事先沉入水底可依单位时间内上浮的叶片数目；◆植物体上的叶片可依指示剂(如碘液）处理后叶片颜色深浅。
②呼吸速率——O2吸收量或CO2释放量或淀粉减少量③原子途径——放射性同位素示踪法④细胞液浓度大小—-质壁分离和复原⑤细胞是否死亡——质壁分离的复原⑥甲状腺激素作用—-动物耗氧量，发育速度等（饲喂法)⑦生长激素作用——生长速度(体重变化，身高变化）⑧胰岛素作用-—动物活动状态（切除、移植胰腺）⑨菌量——菌落数或亚甲基蓝溶液褪色程度⑩大肠杆菌——伊红—美蓝琼脂培养基⑾生长素作用-—向光性(3)实验条件的控制方法：①增加水中氧气——泵入空气或吹气或放入绿色植物②减少水中氧气—-容器密封或油膜覆盖或用凉开水③除去容器中CO2——NaOH溶液④除去叶片中原有淀粉--置于黑暗环境⑤除去叶片中叶绿素—-酒精隔水加热⑥除去光合作用对呼吸作用的干扰——给植株遮光⑦如何得到单色光—-棱镜色散或彩色薄膜滤光⑧血液抗凝——加入柠檬酸钠⑨线粒体提取-—细胞匀浆离心⑩骨的脱钙——盐酸溶液⑾灭菌方法——微生物培养的关键在于灭菌，对不同材料，灭菌方法不同:培养基用高压蒸气灭菌;接种环用火焰灼烧灭菌；双手用肥皂洗净，擦干后用75%酒精消毒；整个接种过程都在实验室无菌区进行。
高中生物有关的化学试剂归纳1显色反应的相关试剂1.1斐林试剂检测生物组织中可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖等）、尿液中的葡萄糖，实验现象为砖红色沉淀。
注意：用时甲乙两夜等量混合，水浴加热，且必须现配现用。
1.2苏丹III或苏丹IV染液检测生物组织中脂肪。
苏丹III或苏丹IV都是脂肪染料，苏丹ⅲ染液遇脂肪的颜色反应为橘黄色，苏丹IV染液遇脂肪的颜色反应为红色。
实验现象前者为橘黄色，后者为红色。
1.3双缩脲试剂检测蛋白质。
作用原理是在碱性溶液(naoh)中，双缩脲(hnoc—nh—conh)能与cu作用，形成紫色或紫红色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。
由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，故蛋白质可与双缩脲试剂发生紫色反应。
特别注意：先加入甲液，再加入乙液。
1.4碘液检测淀粉实验；现象为蓝色。
1.5吡罗红甲基绿染色剂检测的对象是RNA、DNA；作用原理是吡罗红与RAN的亲和力强，RNA被吡罗红染成红色；甲基绿对聚合高的dna有亲和力。
实验现象：前者为红色、后者为绿色。
1.6二苯胺检测DNA，水浴加热时显蓝色。
1.7健那绿染液检测线粒体；健那绿染液是专一性活体染色剂；线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
1.8溴麝香草酚蓝水溶液检测酵母菌培养液中CO2的产生情况；作用原理是CO2使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄，根据溴麝香草酚蓝水溶液变成黄色的时间长短，可以检测酵母菌培养液中CO2的产生情况。
本溶液PH值变化范围是6.0(黄)至7.6(蓝)。
待测物中如有二氧化碳，会形成碳酸而使溶液变成黄色。
1.9重铬酸钾溶液检测酒精；在酸性条件下，乙醇便会被重铬酸钾氧化为乙醛和乙酸),而橙色的重铬酸钾便会变成灰绿色的铬离子1.10龙胆紫溶液或醋酸洋红溶液给染色体染色；实验现象为紫色或红色。
1.11对氨基苯磺酸和n-1-萘基乙二胺盐酸盐溶液检测亚硝酸盐含量；在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮反应后，与n—1—萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。
初中化学生物实验教案设计实验目的：通过观察酵母在不同糖类溶液中的发酵作用，了解酵母的生物作用以及发酵所释放的气体的性质。
实验原理：酵母是一种微生物，能够利用糖类产生能量，并产生二氧化碳和酒精作为副产物。
在发酵过程中，酵母通过酶的作用将糖分解为能量和产物。
实验材料：酵母粉、蔗糖溶液、葡萄糖溶液、淀粉溶液、试管、试管架、气球、注射器、玻璃棒。
实验步骤：1.将三个试管标记为A、B、C，并分别加入等量的蔗糖溶液、葡萄糖溶液和淀粉溶液。
2.向每个试管中加入适量的酵母粉，并用玻璃棒轻轻搅拌均匀。
3.将每个试管口用气球盖住，并用橡皮筋固定。
4.用注射器向每个试管中注入等量的水。
5.将三个试管放置在试管架上，观察气球的膨胀情况。
6.记录每个试管中气球膨胀的时间和程度。
实验要点：1.在实验过程中要注意酵母粉的用量，过多或过少都会影响实验结果。
2.观察气球的膨胀情况时，要注意记录每个试管的膨胀时间和膨胀程度，以便做出比较。
3.在实验结束后，要注意将试管及废弃物妥善处理，注意实验室的清洁卫生。
实验结果分析：1.蔗糖溶液中酵母发酵所产生的气体最多，气球膨胀最快。
2.葡萄糖溶液中酵母发酵的效果次之，气球膨胀速度较慢。
3.淀粉溶液中酵母发酵所产生的气体最少，气球膨胀较缓慢。
实验小结：通过本次实验，我们可以看到不同糖类溶液中酵母的发酵作用。
蔗糖溶液中酵母产生的气体最多，说明蔗糖是酵母的优质能源；淀粉溶液中酵母的发酵效果较差，说明淀粉不是酵母理想的能源来源。
这个实验不仅帮助我们了解酵母的生物作用，还可以引导我们合理选择不同糖类溶液作为发酵的原料。
用
1.碘液
配制：取2g碘化钾，溶解在5ml蒸馏水中，再加1g碘，待溶解后用蒸馏水稀释至300ml。
溶液在光亮处容易变成紫色，必须保存在暗色玻璃瓶里。
作用：用来测定淀粉，淀粉遇碘后，形成紫色的复合物。
2.xx试剂
配制：斐林试剂(Fehling'ssolution)是德国化学家斐林（Hermann von Fehling，1812年--1885年）在1849年发明的。
斐林试剂斐林试剂A和斐林试剂B配制而成的。
斐林试剂A是氢氧化钠的质量分数为0.1g/mL的溶液，斐林试剂B是硫酸铜的质量分数为0.05g/mL的溶液。
临用时斐林试剂A与斐林试剂B等量混合。
作用：鉴定还原性糖：C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。
还原性糖与斐林试剂发生作用，水浴加热，生成砖红色沉淀。
如用于鉴定组织液中是否有还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。
3.xx尿糖定性试剂
配制：173克柠檬酸钠和100克无水碳酸钠溶解于800毫升水中。
再取
17.3克结晶硫酸铜溶解在100毫升水中，慢慢将此溶液加入上述溶液中，最后用水稀释到1升，边加边搅，如产生沉淀可滤去。
作用：鉴定还原性糖，在沸水浴加热条件下与还原糖反应而生成砖红色的Cu
2O沉淀，使用原理同斐林试剂，都是二价铜离子与醛基在沸水浴加热条件下反应而生成砖红色的沉淀，所不同的是班氏试剂可长期使用。
4.双缩脲试剂
配制：双缩脲试剂（biuret reagent）是由双缩脲试剂A(NaOH)和双缩脲试剂B(CuSO
4)两种试剂组成。
双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1g/mL的水溶液；双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。
作用：鉴定蛋白质，蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可产生紫色反应。
也可用于鉴定多肽。
双缩脲试剂使用时，先向2mL蛋白质溶液加入2mL双缩脲试剂A，振荡摇匀，造成碱性的反应环境，然后再加入3~4滴双缩脲试剂B，振荡摇匀后观察现象。
具体方法是先将双缩脲试剂A加入组织样液，振荡均匀（必须营造碱性环境），再加入双缩脲试剂B，摇荡均匀。
如果组织里含有蛋白质，那么会看到溶液变成紫色。
具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。
蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的络合物。
颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
5.xxⅢ染液
配制：苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ干粉0.1g；95%酒精10 ml；过滤后再加入10 ml甘油。
或者取
0.1克苏丹Ⅲ，溶于20毫升95%酒精中，即成0.5%苏丹Ⅲ染液。
作用：鉴定脂肪，脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染成红色）。
6.xxxx染色剂
配制：配制质量分数为1%健那绿染液:将0.5g健那绿溶解于50mL生理盐水中,加温到30-40摄氏度,使其充分溶解。
作用：专一性用于线粒体染色的活细胞染料。
将线粒体染成蓝绿色
7.吡罗红甲基绿染色剂
配制：
①染色剂A液的两种配制方法
第一种方法：取吡罗红甲基绿粉1 g，加入到100 mL蒸馏水中溶解，然后用滤纸过滤，将滤液放入棕色瓶中备用。
第二种方法：取甲基绿2 g溶于98 mL蒸馏水中，取吡罗红G 5 g溶于95mL 蒸馏水中。
取6 mL甲基绿溶液和2 mL吡罗红溶液加入到16 mL蒸馏水中，即为A 液，放入棕色瓶中备用。
②染色剂B液的配制方法B液是一种缓冲液，由乙酸钠和乙酸混合而成。
先取乙酸钠16.4 g，用蒸馏水溶解至1 000 mL备用；再取乙酸12 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL备用。
取配好的乙酸钠溶液30 mL和稀释的乙酸20 mL，加蒸馏水50 mL，配成pH为4.8的B液（缓冲液）。
③吡罗红甲基绿染色剂是由A液、B液混合配制而成的。
取A液20 mL和B液80 mL混合，就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂。
应该注意的是该试剂应现用现配。
作用：甲基绿可以给DNA染色，使DNA呈现绿色。
吡罗红可以给RNA染色，使RNA呈现红色。
8.质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液
配制：30g蔗糖溶解于蒸馏水中，并稀释至100毫升。
作用：观察成熟植物细胞质分离时用。
经此处理细胞仍具活性。
9.层析液
配制：由20份石油醚（在60~900C下分馏出来的）、2份丙酮和1份苯混合而成。
代用品：93号汽油、95%的酒精溶液。
作用：是一种脂溶性很强的有机溶剂，叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同：溶解度高的随层析液在滤纸上扩散很快；溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。
10.解离液
配制：质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液等量混合。
作用：用于洋葱根尖的解离，能杀死细胞，并使组织中的细胞相互分离开来。
11.染色体染色剂
配制：质量浓度为0.01g/mL的龙胆紫溶液的配制；取1克龙胆紫，用少量蒸馏水溶解后，加蒸馏水，稀释到100毫升，保存在棕色瓶内。
质量浓度为
0.02g/mL醋酸洋红溶液的配制；取45毫升冰醋酸，加蒸馏水55毫升，煮沸后徐徐加入洋红2克，搅拌均匀后加入1颗铁锈钉，煮沸10分钟，冷却后过滤，贮存在棕色瓶内。
作用：使细胞核内的染色体着色，便于观察。
12.质量浓度为0.1mg/ml的亚甲基蓝溶液
配制：配制：将10mg亚甲基蓝溶于蒸馏水,并稀释至100ml而成作用：（1）用于观察根对矿质元素离子的交换吸附观察；
（2）用于检测水中细菌情况，根据亚甲基蓝褪色情况，判断水质被细菌污染情况。
是活体染色剂。
13.二苯胺试剂
配制：A液：1.5克二苯胺(C12H11N)溶于100ml冰醋酸(乙酸,C2H4O2)中，再加1.5ml浓硫酸，用棕色瓶保存（光下分解）。
如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用。
B液：体积分数为0.2%的乙醛溶液(C2H4O)。
将0.1ml B液加入10ml A液中，制成二苯胺试剂，现配现用。
作用：DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色。
因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
14.溴麝香草酚蓝水溶液：
配制：在1升20%酒精溶液中加入l克溴麝香草酚蓝即可。
作用：溴麝香草酚蓝溶液是一种指示剂，检测二氧化碳。
较低浓度的CO2使其由蓝变绿，较高浓度CO2使其由蓝变绿再变黄．
15.重铬酸钾的浓硫酸溶液
配制：称取10g重铬酸钾，于干燥研钵中研细，将此细粉加入盛有10ml水的玻璃容器内，加热，搅拌使溶解，待冷后，将此玻璃容器放在冷水浴中，缓慢将100ml浓硫酸断续加入，不断搅拌，勿使温度过高，容器内容物颜色渐变深，并注意冷却，直至加完混匀，即得。
