酵母菌鉴定试剂盒(比色法)说明书

GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS10016.8 v.A GENMED真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧初级荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧初级荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氯荧光乙酰乙酸盐，在细胞氧化条件下，产生荧光，来定量检测细胞内活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种实验用真菌/酵母菌株细胞内氧化应激活性氧的分析。

可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老和代谢等的研究。

产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定，荧光清晰。

技术背景真菌/酵母细胞是一种低等单细胞真核生物，具有细胞生长快，易于培养，遗传操作简单明了等原核生物的特点。

作为模式生物，它具有比较完备的基因表达调控机制和表达产物的加工修饰能力，在分子遗传学方面认识最早，最先作为外源基因表达的细胞宿主。

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基（hydroxyl radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。

2',7'-二氯荧光乙酰乙酸盐（2',7'-dichlorofluorescein diacetate，DCFH-DA）一种完全自由通过细胞膜的染色剂。

一旦被过氧化氢氧化，便产生荧光。

据此测定细胞内活性氧族的浓度。

产品内容GENMED清理液（Reagent A）毫升GENMED染色液（Reagent B）微升GENMED稀释液（Reagent C）毫升产品说明书1份保存方式保存GENMED染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于真菌/酵母染色的容器载玻片：用于染色观察微型台式离心机：用于沉淀真菌/酵母细胞培养箱或恒温水槽：用于染色孵育比色皿：用于荧光定量分析（共聚焦）荧光显微镜：用于细胞荧光分析细胞流式仪：用于细胞荧光分析荧光分光光度仪：用于细胞荧光定量分析实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液（Reagent B）置入冰槽里融化。

GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS10110.1 v.A GENMED细胞脂质比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED细胞脂质比色法定量检测试剂是一种旨在通过脂溶性偶氮染料油红O特异性地使细胞内中性甘油三脂、脂质以及脂蛋白显示红色或深红色，在分光光度仪上进行比色分析，而获得细胞脂质定量信息的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种呈单细胞层（Monolayer）生长的新鲜人体和动物细胞。

用于成脂细胞定性、细胞病理学分析（脂质细胞瘤；LIPOID）等研究。

产品严格无菌，即到即用，性能稳定，着色清晰。

技术背景脂类物质（LIPIDS）是一类脂溶性（疏水性）的自然分子，包括脂肪酸（FATTY ACID）及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂和磷脂，以及其它固醇类（STEROL）物质，例如胆固醇。

脂类物质在机体中具有能量储存的作用，是膜结构的组成成分和细胞信号分子。

油红O（OIL RED O），又称为27号红色溶剂（SOLVENT RED 27）、苏丹红5B（SUDAN RED 5B），是优于氢醇染料溶剂（HYDROALCOHOLIC DYE SOLVENT）的脂溶性偶氮染料（LYSOCHROME DIAZO DYE）。

其分子式为C26H24N4O，分子量为408.51。

染色显示细胞脂类物质呈红色或深红色。

在分光光度计或酶标仪上（520nm波长）可以进行定量分析脂质含量。

产品内容GENMED清理液（Reagent A）毫升GENMED固着液（Reagent B）毫升GENMED净化液（Reagent C）毫升GENMED染色液（Reagent D）毫升GENMED溶解液（Reagent E） 毫升产品说明书 1份保存方式保存GENMED染色液（Reagent D）在4℃冰箱里，其余的保存在室温下；确保瓶盖密闭。

GENMED染色液（Reagent D），避免光照，有效保证6月用户自备显微镜：用于观察细胞脂质染色情况平式摇荡仪：用于染色萃取的混匀分光光度仪或酶标仪：用于定量检测细胞脂质含量情况实验步骤1．小心抽掉多孔细胞培养板里的培养液2．轻轻加入适量的GENMED清理液（Reagent A）到每个培养孔里（见下表）多孔培养板容量96 毫升48 毫升24 毫升12 毫升6 毫升3．小心抽去清理液4．小心加入适量的GENMED固着液（Reagent B）到每个培养孔里（见实验步骤2表）5．室温下孵育10分钟6．小心抽去固着液7．小心加入适量的GENMED净化液（Reagent C）到每个培养孔里（见实验步骤2表）8．小心抽去净化液9．小心加入适量的GENMED染色液（Reagent D）到每个培养孔里（见下表）多孔培养板 容量96 微升48 微升24 微升12 毫升6 毫升10．在室温下静置15分钟11．小心抽去染色液12．小心加入适量的GENMED净化液（Reagent C）到每个培养孔里（见实验步骤2表） 13．小心抽去净化液14．重复实验步骤12和13二次，或净化液不再显示粉红色15．（选择步骤）置于一般光学显微镜下观察染色情况：脂滴（LIPID DROPLET）呈现深红色 16．小心加入适量的GENMED溶解液（Reagent E）（见下表）多孔培养板容量96 微升48 微升24 微升12 微升6 毫升17．轻轻摇动培养板，直到GENMED溶解液（Reagent E）均匀分布18．置于平式摇荡仪，在室温下，孵育30分钟，速度为50RPM19．（选择步骤）移入到比色皿20．即刻放进分光光度仪或酶标仪测读，波长为520 nm21．构建细胞脂质定量曲线：横座标（x轴）为细胞浓度（细胞量）；纵坐标（y轴）为样品读数（吸光单位OD值）注意事项1．本产品为20次（24孔板）、50次（48孔板）、100次（96孔板）操作2．操作时须戴手套3．试剂瓶务必密封保存4．GENMED染色液（Reagent D）避免－20℃低温保存，否则出现沉淀5．如果GENMED染色液（Reagent D）出现沉淀，须过滤后再使用6．染色时，避免光照7．细胞染色前后的清洗过程中，小心操作，以免将细胞冲洗掉，而影响定量分析8．如果没有520nm波长的滤波器，可以使用490nm波长替代9．本公司提供系列脂质检测试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定着色清晰使用承诺杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。

一、目的：指导实验人员准确完成酵母样真菌药敏试验（微量稀释法）。

二、适用范围：怀疑酵母样真菌感染患者三、检验原理：ATB FUNGUS 3试条包括16对杯状凹cupules。

第一对不含任何抗真菌剂。

用作阳性生长对照。

另外的15对包含不同稀释度的5种抗真菌剂。

用于测定最小抑菌浓度（MIC）和（或）区分临床敏感性。

将准备好的待测酵母样真菌的悬浮液转移到培养基中，并接种到试条上。

孵育后，我们可以通过肉眼判读，或者应用A TB仪器或miniAPI判读杯状凹中液体的生长情况。

获得MIC(两性霉素B[AMB])，氟康唑[FCA],伊曲康唑[ITR],伏立康唑[VRC],5-氟胞嘧啶[5FC]),将菌株分为敏感、中介或耐药。

四、职责：生物梅里埃实验人员准确完成酵母样真菌药敏试验（微量稀释法）试剂厂家：规格：25测试／盒内含物：-25个独立包装的A TB FUNGUS 3 试条，包括干燥剂-25个孵育盖-25安瓿A TB F2培养基-25张结果记录单-一份说明书五、储存条件及有效期：在包装盒上指示的有效期前，试条和培养基应在2-8℃下存放。

有效期为12个月。

六、工作程序：(一)试验的准备：1、从包装中取出试条2、在试条延长翼上记录下被测酵母菌株的编号（二）接种物的准备：1、打开一个API®0.85%氯化钠培养基安瓿（或API培养悬液）2、采集不超过4天的菌落，制备成浊度相当于2 McFarland的悬浮液3、用McFarland试剂盒的标准浊度管比较，或使用ATB比浊仪DENSIMAT4、此菌悬液必须在准备后立即使用5、使用一移液管转移20ul此悬浮液到一A TB F2培养基的安瓿中（三）试验条的接种：手工接种：1、用ATB电子移液管混匀A TB F2培养基，避免产生气泡2、使用ATB电子移液管在每个杯状凹中加入135ul的ATB F2 培养基（大约3*104酵母菌/毫升或4*103酵母菌/杯状凹）自动接种：参考A TB接种器使用者手册3、盖好试条盖子4、把试条放入一个密封容器或是一个装有吸潮纸的GENbox型广口容器里5、在有氧条件下35℃（+2℃）的环境中，念珠菌属要培养24小时（+2h）,新型隐球菌要培养48小时（+6h）（四）试验结果的计算：检查生长对照孔的生长是否充分，对于念珠菌，如果生长不充分或未在这两孔中生长，则无法阅读结果，需要再培养24h。

酵母阳性克隆快速鉴定试剂盒使用说明书产品编号：SK2420保存条件：-20℃储存，有效期1年。

包装内容：产品内容SK2420-200T 酵母质粒快速提取缓冲液（SK2420-1）5×1mL2×PCR MasterMix（FSL2610）5×1mL说明书1份产品简介：使用本试剂盒能够快速提取的酵母质粒，大幅减少酵母阳性克隆的鉴定时间。

仅适用于通过PCR扩增的方法鉴定酵母阳性克隆或获得的PCR产物用于测序分析。

如想获得纯度高酵母质粒请选用酵母质粒提取试剂盒（SK2410）。

使用方法:一、酵母质粒提取1.吸取20μL的酵母质粒快速提取缓冲液放入1.5mL的离心管中。

2.用无菌枪头挑取长度1~2mm的酵母菌悬浮在装有缓冲液的离心管中。

3.在95°C的水浴锅或者金属浴中煮5min-10min。

4.冰上放置2min，常温条件下12,000rpm，离心5min，吸取上清移至新的离心管。

得到的质粒可用于PCR分析。

二、PCR扩增目的条带。

建议每10μL PCR反应体系加入1μL提取的酵母质粒，40个PCR循环数。

PCR反应体系:试剂20μl反应体系终浓度2×PCR MasterMix10μl1×Primer F,10µM0.5μl0.25μMPrimer R,10µM0.5μl0.25μMTemplate DNA2μl<1μg/reaction dd H2O up to20μl-PCR反应条件：2×Taq MasterMix反应温度反应条件循环94℃6min194℃30secTM℃30sec40 72℃1kb/min72℃7min14℃+∞1注意事项：1.建议提取酵母质粒前先把酵母克隆在平板上划1cm左右的短线，生长2-3天后，挑取1~2mm的酵母菌用做质粒提取。

2.可根据酵母菌的多少适当增加或减少酵母质粒提取缓冲液的使用量。

Caspase 8 活性检测试剂盒(比色法)产品简介：Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)家族在介导细胞凋亡过程的起着极其重要的作用，其成员包括Caspase1~11等,均属于蛋白酶家族。

Caspase 8又称FLICE、MACH、Mch5、Caspase-8，通常以酶原的形式存在，在细胞凋亡的信号转异过程中被激活，在Fas-receptor和TNFR-1介导的细胞凋亡过程中Caspase 8被激活，形成一个由p18和p10组成的二聚体，进一步激活下游的Caspase 4、Caspase 6、Caspase 9、Caspase 10。

Jimei Caspase 8活性检测试剂盒（比色法）(Caspase 8 Colorimetric A ssay Kit)的检测原理是利用Caspase 8催化特异性底物acetyl- Ile -Glu-Thr-Asp p-nitroanilide(Ac-IETD-pNA)产生黄色的游离硝基笨胺pNA (p-nitroaniline)，通过测定分光光度比色法测定pNA在400~410nm处吸光值，从而间接获得Caspase 8的活性。

自备材料：1、水浴锅或恒温箱2、96孔板3、酶标仪或分光光度操作步骤（仅供参考）：1、制备标准曲线：①按照Caspase Lysis buffer：Assay buffer=1：9的比例配制适量的标准品稀释液。

②用标准品稀释液稀释pNA(10mM)，使pNA分别达到200μM、100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM，另外设置一般不加pNA仅含标准品稀释液作为零管，把以上系列浓度物质作为标准品。

③取pNA浓度分别为200μM、100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、0的标准品各100μl加入至96孔板或取适量体积加入至容量不超过100μl的比色杯，测定405nm处吸光值即A405。

酵母转化试剂盒使用说明书（第二版）储存条件：Carrier DNA-20℃保存，其它组分可室温保存，有效期1年。

产品内容：Components SK2400-200PEG Solution50mlLiAc Solution50mlCarrier DNA2×1ml说明书1份酵母感受态细胞的制备：1.活化菌种。

-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基（YPDA加20g Agar/L）上划线，在30℃培养2-4天。

2.挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5mm的短线，在30℃培养2-4天。

待酵母单菌落长至2mm长时，接种。

3.首先把酵母细胞接种到3ml液体YPDA培养基中，30℃过夜培养。

4.第二天转接到含有30ml液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养，待OD600到0.4-0.5范围内。

收集细胞，1000g，离心5min,去上清。

5.沉淀用30-50ml的无菌的去离子水悬浮。

1000g，离心5min，去上清。

6.沉淀用合适体积的1/10浓度的LiAc悬浮（30ml的酵母菌最多用不超过1mL的1/10浓度的LiAc悬浮，通常100μl的酵母细胞用于转化一个质粒，即一个反应）。

1/10浓度的LiAc稀释方法：100μl LiAc Solution+900μl无菌水。

7.把酵母细胞的悬浮液分装到1.5ml的离心管中，每管分装100μl，用于转化一个质粒即一个反应。

1000g，离心5min，去上清。

制备好的感受态细胞备用。

酵母转化：1.配制预混液，每转化一个质粒即一个反应需要360μl的预混液。

PEG Solution240μlLiAc Solution36μlCarrier DNA10μl质粒（大约200ng/μl）5μl（根据质粒的浓度加入相应的体积）总体积360μl（不足体积用ddH2O补充）2.吸取360μl的预混液加入到感受态细胞中，用枪头反复吹吸沉淀，使离心管底的酵母细胞彻底地悬浮在含有PEG的预混液中。

产品编号
CAT：RY8001
保存条件
-20 ℃保存，有效期1年
产品组分
产品概述
本试剂盒含有绿色染料，可在反应结束后直接进行电泳，能够快速扩增酵母中重组质粒目的基因片段，省时省力。

Yeast lysis buffer用于破坏酵母的细胞壁；2×Yeast PCR mix含PCR buffer，dNTPs，MgCl2，热启动快速Taq酶，客户只需加入引物和模板/酵母菌落即可进行扩增，减少移液操作，提高了稳定性，且2×Yeast PCR mix中含有保护剂，反复冻融后仍可保持稳定性。

PCR产物的3’端带有A，可直接用于TA克隆。

实验流程
1、吸取3-3.5 μl Yeast lysis buffer到PCR管中，用无菌枪头或牙签蘸取适量酵母菌至PCR管中。

2、吸打（搅拌）混匀后，置于98 ℃反应10-20 min。

3、再准备一支无菌PCR管，按下表配制反应体系。

PCR反应体系：
* 步骤2的反应液短暂离心,混匀后吸取1 μl作为模板，为佳
PCR反应条件：
* 该退火温度根据引物的Tm值进行调整，一般设置Tm -5 ℃
案例：
图注：从SD/-Leu-Trp-His-Ade培养基中挑取酵母菌落直接进行酵母菌落PCR
南京瑞源生物技术有限公司坐落于南京市栖霞区生命科技园，专注于基因组高通量研究领域，致力于生物高科技研发，目前产品的技术水平已达到省级实验水平，瑞源生物立足于生命科学，为基础研究领域科学工作者提供生物学技术服务，自2019年创立以来，全体员工致力于利用酵母系统研发新药物靶点，专注于生物学研究，长期与全国各大农林/医药院校在大型科研技术研发上紧密合作。

酿酒酵母的检测方法1、设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下。

1.1恒温培养箱：28℃士1℃。

1.2冰箱：2℃～5℃。

1.3天平：感量为0.1g。

1.4均质器及无菌均质袋、均质杯。

1.5振荡器。

1.6无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。

1.7无菌锥形瓶：容量250mL、500mL。

1.8无菌培养皿：直径90mm。

1.9显微镜：10倍～100倍。

1.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。

2、培养基和试剂2.1 孟加拉红琼脂培养基2.1.1 孟加拉红琼脂培养基成分蛋白胨5.0g 葡萄糖10.0g 磷酸氢二钾1.0g 硫酸镁0.5g 琼脂20.0g 孟加拉0.033g 氯霉素0.1g 蒸馏水1000mL 2.1.2制法将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，补足蒸馏水至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min，避光保存备用。

2.2 麦芽汁液体培养基2.2.1 麦芽汁液体培养基成分麦芽浸粉130.0g 氯霉素0.1g 蒸馏水1000mL2.2.2制法将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，补足蒸馏水至1000mL，于25℃时调节pH至5.6±0.2，分装于适宜容器中，121℃灭菌30min。

2.3无菌生理盐水2.3.1成分氯化钠8.5g 蒸馏水1000mL2.3.2制法称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。

2.4酵母菌生化鉴定试剂盒。

3检验程序酿酒酵母检验程序见图1。

4操作步骤4.1样品制备4.1.1固体和半固体样品称取25g样品，置于225mL生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min制成1：10的样品匀液；或置于盛有225mL灭菌生理盐水的无菌均质杯中，8000r/min～10000r/min均质1min～2min制成1：10的样品匀液。

4.1.2液体样品应先将其充分摇匀后，以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分振摇，制成1：10的样品匀液。

ID 32 C 酵母菌鉴定系统操作说明ID 32 C是由标准化、微量化的生化试验与相应的数据库组成的适于酵母菌的鉴定系统。

本系统鉴定的所有酵母菌列表于使用说明后的菌名表。

鉴定试条可由ATB Express仪或微型API仪自动进行标准化的菌悬液的制备、接种、培养、读取结果、判定鉴定结果，也可人工进行。

原理ID 32 C鉴定试条包括32个小孔，每一孔中含有一种脱水的碳水化合物底物。

一种化学纯的无机半固体微量培养基与待测菌悬液一起被接种到小孔中，培养24 - 48小时后由ATB Express仪或微型API仪测定结果，或人工读取结果，然后根据鉴定软件得到鉴定结果。

试剂一个ID 32 C试剂盒包括：- 25条ID 32 C鉴定试条；- 25个培养用的盒子；- 25个装有C培养基的安瓿；- 50份结果报告；- 1份使用说明。

另需以下产品（不包括在试剂盒内）：- 悬浮液2ml(#70 700)；- 吸液管或PSI吸液管(#70 250)；- ATB电子加样器(#99 040)或接种器(#15 740)和Tip头(#15 710)；- 比浊仪：比浊计（#99 234）或ATB比浊仪或2麦氏单位的标准浊度管（#70 900）；- ATB Express仪或微型API仪和鉴定软件；- RAT培养基(#41 794)；- 安瓿管架（#70 200）；- 密封罐或厌氧罐（如需要）。

需配备的实验室设备：- 30℃培养箱- 冰箱- 本生灯或酒精灯- 记号笔。

底物名称缩写及中英文对照0.0 SOR 山梨醇 1.0 GAL 半乳糖0.1 XYL D-木糖 1.1 ACT 放线酮0.2 RIB 核糖 1.2 SAC 蔗糖0.3 GLY 甘油 1.3 NAG N-乙酰葡萄糖胺0.4 RHA 鼠李糖 1.4 LAT DL-乳酸盐0.5 PLE PaLatinosE 1.5 ARA L-阿拉伯糖0.6 ERY 赤藓醇 1.6 CEL 纤维二糖0.7 MEL 蜜二糖 1.7 RAF 棉子糖0.8 GRT 葡萄糖醛酸 1.8 MAL 麦芽糖0.9 MLZ 松三糖 1.9 TRE 海藻糖0.A GNT 葡萄糖酸盐 1.A 2KG 2-酮基葡萄糖酸盐0.B LVT 乙酰丙酸盐 1.B MDG α-甲基-D-葡萄糖苷0.C GLU 葡萄糖 1.CMAN 甘露醇0.D SBE 山梨糖 1.D LAC乳糖0.E GLN 葡萄糖胺 1.E INO肌醇0.F ESC 七叶灵 1.F 0 对照注：编号即为鉴定试条上所标数字培养基的成份悬浮液 2ml蒸馏水C培养基 7ml(NH4)2SO4 5.0gKH2PO4 0.31gK2HPO4 0.45gNa2HPO4 0.92gNaCL 0.1gMgSO4 0.2gCaCL2 0.05g组氨酸 0.005g色氨酸 0.02g蛋氨酸 0.02 g琼脂 0.5g维生素溶液 1ml微量元素 10ml蒸馏水 qsp 1000mlPH:6.4-6.8注:尽管C培养基含有琼脂,但不需加热就能象液体培养基一样易于吸起。

GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS60014.2 v.A GENMED真菌/酵母细胞可溶性总核蛋白制备试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED真菌/酵母细胞可溶性总核蛋白制备试剂是一种旨在使用生物、化学和物理方法相结合，有效去除酵母细胞壁，进一步快速且充分裂解酵母细胞，并在蛋白酶抑制混合剂的帮助下，充分溶解细胞核，然后通过超速离心，分离并收集所有细胞核内可溶性蛋白质的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

可直接用于转录因子动态监测、核酸蛋白结合凝胶迁移电泳分析（EMSA）、特定核蛋白后续纯化、蛋白电泳、西方杂交、免疫抗体和质谱分析等。

产品即到即用，性能稳定，操作便捷，萃取产量和纯度皆佳。

技术背景通过多种特殊裂解系统和蛋白酶抑制混合剂可以防止裂解后细胞内各种活性蛋白成分遭到活化内源性蛋白酶的破坏，充分保留细胞核内蛋白质的免疫和生物学活性。

产品内容GENMED清理液（Reagent A）毫升GENMED平衡液（Reagent B）毫升GENMED酶解液（Reagent C）毫升GENMED裂解液（Reagent D）毫升GENEMD强化液（Reagent E）毫升GENMED溶解液（Reagent F）毫升GENMED活性液（Reagent G）微升产品说明书1份保存方式保存GENMED酶解液（Reagent C）和GENMED活性液（Reagent G）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备50毫升锥形离心管：用于酵母细胞操作的容器1.5毫升离心管：用于酵母细胞蛋白操作的容器4℃台式离心机：用于细胞和蛋白收集以及去除杂质4℃微型台式离心机：用于细胞和蛋白收集以及去除杂质恒温水槽：用于孵育细胞反应组织匀浆器：用于裂解酵母细胞4℃摇床：用于细胞核裂解孵育实验步骤实验开始前，将试剂盒里的GENMED活性液（Reagent G）从－20℃的冰箱里取出，置入冰槽里冻融，然后移出微升GENMED溶解液（Reagent F）到1.5毫升离心管，加入微升GENMED活性液（Reagent G），充分混匀，置于冰槽里，标记为GENMED溶解工作液。

1.酵母质粒提取参考天根公司酵母小题试剂盒说明书步骤:1)柱平衡步骤:向吸附柱CPZ中(吸附柱放入收集管中)加入500ul的平衡液BL，12000rpm离心1min，弃掉收集管中废液，将吸附柱重新放回收集管中（使用当天处理的柱子）。

2)取1-5ml酵母培养物，12000rpm离心lmin，尽量吸除上清。

3)破除酵母细胞壁:向菌液中加入300ul山梨醇buffer，加入大约50U Lyticase，充分混匀，并在摇床上220 rpm，30℃处理lh。

4000rpm离心10min，弃上清，收集沉淀。

加入250ul 溶液YP1(已加RNaseA)，重悬沉淀。

4)向管中加入250ul YP2溶液，温和地上下翻转6-8次，使菌体充分混匀，室温静置5-10min。

5)向管中加入350ul YP3 溶液，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，出现白色絮状沉淀。

12000rpm离心20min。

6)小心地将上清液加入吸附柱CP2中，12000rpm离心1min，弃废液。

7)向吸附柱CP2中加入500ul缓冲液PD，12000rpm离心1min，弃废液。

8)向吸附柱CP2中加入600ul漂洗液PW(己加无水乙醇)，12000rpm离心1min，弃废液。

9)重复步骤8。

10)将吸附柱CP2放入收集管中，12000rpm离心2min，去除吸附柱中残余的漂洗液。

11)将吸附柱CP2置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50-100ul洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12000rpm离心2min，收集质粒，-20℃保存。

提取的酵母质粒浓度低很难凝胶电泳监测，可将其转入感受态DH5a，若转化成功即可认为质粒抽提合格，送交测序。

2. 酵母质粒DNA的提取1. 挑取经过酵母选择/诱导培养基初步鉴定的酵母单菌落，接种于5.0-10.0ml SD/-Trp液体培养基，30℃恒温，250rpm振荡培养20hr。

2. 室温离心5000xg×1min，弃上清，收菌。

酵母菌表面展示操作步骤之载体选择与构建酵母菌表面展示是一种重要的生物工程技术，在生物学研究、抗原制备和疫苗研发等领域有广泛应用。

在进行酵母菌表面展示实验前，我们需要选择适合的载体并进行构建，以实现目标蛋白的表面展示。

本文将介绍酵母菌表面展示实验的载体选择与构建步骤。

一、载体选择在酵母菌表面展示实验中，常用的载体有质粒和整合载体两类。

质粒载体是通过直接瞬时表达目标蛋白来实现表面展示的，而整合载体则是通过将目标蛋白融合到约束表面展示区域的酵母细胞膜蛋白上，以实现表面展示。

根据实验要求和目标蛋白的特性，我们可以选择适合的载体进行后续实验。

二、质粒载体构建1. 提取质粒：选择适合的质粒载体并进行提取，一般可使用常见的质粒提取试剂盒进行操作，并按照试剂盒说明书进行操作。

2. 构建质粒：将提取的载体与目标蛋白基因进行连接。

可以选择PCR扩增、酶切和连接等方法进行操作。

在连接时注意选择合适的连接酶，避免不必要的损失和错误连接。

3. 转化酵母细胞：将构建好的质粒导入酵母细胞内。

可以采用电穿孔、化学转化等方法进行转化。

转化后，将转化后的细胞分别接种于含有适当选择压力的培养基上，筛选出含有目标质粒的酵母菌株。

三、整合载体构建1. 目标蛋白选择：根据实验需要选择合适的约束表面展示区域的酵母细胞膜蛋白，并设计引物进行PCR扩增。

2. 构建整合载体：将扩增得到的目标蛋白基因与整合载体中相应的表达位点进行连接，常用的有插入杂交、连接酶法等。

连接后的整合载体经测序确认无误后，可继续进行后续实验。

3. 酵母细胞转化：通过适当的方法，将构建好的整合载体导入酵母细胞内，使其整合到酵母细胞染色体上。

4. 酵母菌培养与筛选：将转化后的酵母菌培养在选择性培养基上，筛选出能够稳定表达目标蛋白的酵母菌株。

四、确认载体构建效果1. PCR鉴定：通过PCR方法对含有目标蛋白基因的质粒或整合载体进行鉴定。

根据目标蛋白的特异性引物，可以进行PCR扩增，并通过电泳分析判断目标蛋白基因的连接情况。

（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）Elabscience®总氧化状态(TOS)比色法测试盒Total Oxidant Status (TOS) Colorimetric Assay Kit产品货号：E-BC-K802-M产品规格：48T(32 samples)/96T(80 samples)检测仪器：酶标仪(580-590 nm)使用前请仔细阅读说明书。

如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话131****6790具体保质期请见试剂盒外包装标签。

请在保质期内使用试剂盒。

联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。

用途本试剂盒适用于检测细胞、组织样本及血清等液体样本中的总氧化状态。

检测原理在酸性条件下，样本中的氧化性物质可将Fe2+氧化为Fe3+，后者与二甲酚橙高度结合产生一种蓝紫色的复合物。

在溶液pH为2-3的范围内时，其最大吸收波长在590 nm附近，且颜色深浅程度在一定浓度、一定时间内与氧化性物质的含量成正比，从而间接测定样本的总氧化状态。

本试剂盒检测组织或细胞样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用本公司BCA试剂盒(货号E-BC-K318-M)进行测定。

提供试剂和物品说明：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同测试盒中的试剂不能混用。

对于体积较少的试剂，使用前请先离心，以免量取不到足够量的试剂。

所需自备物品仪器：酶标仪(580-590 nm，最佳检测波长590 nm) 试剂准备①检测前，试剂平衡至室温。

②不同浓度标准品的稀释：样本准备①样本处理血清样本：可直接测定。

组织或细胞样本：组织样本处理的匀浆介质为PBS(0.01 mol/L，pH 7.4)或生理盐水(0.9% NaCl)。

②样本的稀释在正式检测前，需选择2-3个预期差异大的样本稀释成不同浓度进行预实验，根据预实验的结果，结合本试剂盒的线性范围：2.5-100 μmol H2O2 Equiv./L，可参考下表进行稀释(仅供参考)：注：稀释液为PBS(0.01 mol/L，pH 7.4)或生理盐水(0.9% NaCl)。

酵母质粒提取试剂盒操作步骤及注意事项货号：D1160规格：50T/100T保存：室温（15℃-25℃）干燥保存，复检期为12个月。

2℃-8℃保存时间更长。

试剂盒组成D1160-50T D1160-100TRNase A300ul500ul酵母破壁酶 1.25ml 1.25ml×2山梨醇Buffer25ml50mlβ-巯基乙醇300ul600ul溶液YP115ml30ml溶液YP215ml30ml溶液YP320ml40ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液15ml30ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份注意：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。

YP1在使用前先加入RNaseA（将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。

如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

产品简介：酵母质粒提取试剂盒采用酶法破碎酵母细胞壁和碱裂解法裂解酵母细胞来提取酵母质粒DNA。

所采用的酵母破壁酶能有效地破坏酵母细胞壁，提高酵母质粒DNA的产量。

吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白质及细胞中其他有机化合物。

使用酵母质粒提取试剂盒提取的酵母质粒DNA可适用于各种常规的分子生物学实验，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

本试剂盒无需使用酚、氯仿等有毒试剂，操作安全。

操作步骤：1、取1-5ml酵母培养物（不超过5×107cells），12000rpm离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。

2、酵母细胞壁的破除：A、酶法：向酵母菌体中加入470ul山梨醇Buffer，充分悬浮菌体，加入25ul酵母破壁酶和5ulβ-巯基乙醇，充分混匀，30℃处理1-2h，期间可颠倒离心管混匀数次。

12000rpm 离心1min，弃上清，收集沉淀。

向沉淀中加入250ulYP1（请先检查是否已加入RNaseA），充分悬浮沉淀。

酵母转化试剂盒使用说明书（第二版）储存条件：Carrier DNA-20℃保存，其它组分可室温保存，有效期1年。

产品内容：Components SK2400-200PEG Solution50mlLiAc Solution50mlCarrier DNA2×1ml说明书1份酵母感受态细胞的制备：1.活化菌种。

-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基（YPDA加20g Agar/L）上划线，在30℃培养2-4天。

2.挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5mm的短线，在30℃培养2-4天。

待酵母单菌落长至2mm长时，接种。

3.首先把酵母细胞接种到3ml液体YPDA培养基中，30℃过夜培养。

4.第二天转接到含有30ml液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养，待OD600到0.4-0.5范围内。

收集细胞，1000g，离心5min,去上清。

5.沉淀用30-50ml的无菌的去离子水悬浮。

1000g，离心5min，去上清。

6.沉淀用合适体积的1/10浓度的LiAc悬浮（30ml的酵母菌最多用不超过1mL的1/10浓度的LiAc悬浮，通常100μl的酵母细胞用于转化一个质粒，即一个反应）。

1/10浓度的LiAc稀释方法：100μl LiAc Solution+900μl无菌水。

7.把酵母细胞的悬浮液分装到1.5ml的离心管中，每管分装100μl，用于转化一个质粒即一个反应。

1000g，离心5min，去上清。

制备好的感受态细胞备用。

酵母转化：1.配制预混液，每转化一个质粒即一个反应需要360μl的预混液。

PEG Solution240μlLiAc Solution36μlCarrier DNA10μl质粒（大约200ng/μl）5μl（根据质粒的浓度加入相应的体积）总体积360μl（不足体积用ddH2O补充）2.吸取360μl的预混液加入到感受态细胞中，用枪头反复吹吸沉淀，使离心管底的酵母细胞彻底地悬浮在含有PEG的预混液中。

第一部分：酵母筛选收集一．土样中酵母的分离：1．土壤的采集处理采用五点取样法从葡萄地土壤中取样。

由于土壤中的微生物一般在5-25cm的土层里，所以先用灭菌铲除去土壤的表皮，然后采取土壤200-300g，至于无菌塑料袋内，并标明采取地点、日期。

将其运回实验室后至于冰箱中保存，备用。

将采回的样品用四分法获取样品20-30g，将其置于研钵中研磨均匀。

2. 土壤中菌种的分离：称取1 g土壤，置于液体培养基灭菌葡萄汁，经28 ℃，12 h，180 rpm摇床富集培养。

取1 ml富集培养液，分别进行五个梯度稀释（1:1000、1:5000、1:10000、1:50000、1:100000），再用移液枪分别从每一稀释度各取0.1ml稀释液，注入平板上，利用涂布棒将样品均匀的涂在培养基表面（注意不能使培养基表面破裂），将培养皿盖好，再把培养皿倒置，于适宜温度（一般为25℃或28℃）的恒温箱中培养，每个梯度做三个重复。

观察培养基，直到菌种形成清晰易辩的菌落为止。

为了在筛选过程中排除细菌的干扰，在培养基中加30ug/ml 的链霉素或者100mg/L的氯霉素。

观察并记录菌落颜色与形态，然后在显微观察记录细胞大小、形态，进行分析和初步的归类。

二．葡萄果表酵母的分离:1. 葡萄的采集：葡萄成熟时，在葡萄果皮、果梗上都有大量的酵母菌存在，因此在采收葡萄时，将果梗与葡萄一起采收。

由于酵母菌在稍微破裂的葡萄果实中大量存在，采收时可以选取有裂纹的葡萄，但是，将完整无损的葡萄与有裂纹的分开装袋。

运回实验室置于冰箱中保存，备用。

2. 菌种分离步骤：将腐败变质的葡萄及杂质从果实中挑选出来。

随机选取并称量约10g成熟葡萄，放入盛有90ml 无菌水的三角瓶，分别按30ug/ml添加链霉素，然后振荡培养30min后静置，制成菌悬液，吸取50µl 放入YEPD固体培养基，三个重复，以无菌刮铲刮匀，25℃培养24～48h。

观察菌落的大小及生长状况。