醋酸纤维素薄膜电泳的注意事项

实验三⾎清蛋⽩醋酸纤维素薄膜电泳实验三⾎清蛋⽩醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素薄膜电泳分析技术是⽬前临床常规测定中应⽤最⼴的⽅法，具有微量、快速、简便、吸附作⽤和电渗作⽤⼩、分离区带清晰、灵敏度及分辨率⾼等特点。

醋酸纤维素薄膜还可进⾏透明化处理，便于照相和扫描计算结果。

⼴泛应⽤于⾎清蛋⽩、⾎红蛋⽩、糖蛋⽩、脂蛋⽩、结合球蛋⽩、同⼯酶的分离和测定。

【⽬的】1.掌握电泳法分离蛋⽩质的原理、操作⽅法。

2.了解电泳法分离蛋⽩质的临床意义。

【原理】带电粒⼦在电场中向与其电性相反的电极泳动的现象称为电泳。

⾎清中各种蛋⽩质的等电点⼤多在pH4.0～7.3之间，在pH8.6的缓冲液中均带负电荷，在电场中都向正极移动。

由于⾎清中各种蛋⽩质的等电点不同，因此在同⼀pH环境中所带负电荷多少不同，⼜由于其分⼦⼤⼩不同，所以在电场中泳动速度也不同。

分⼦⼩⽽带电荷多者，泳动速度较快；反之，则泳动速度较慢。

因此通过电泳可将⾎清蛋⽩质分为5条区带，从正极端依次分为清蛋⽩、α1球蛋⽩、α2球蛋⽩、β-球蛋⽩和γ球蛋⽩等，经染⾊可计算出各蛋⽩质含量的百分数。

【器材】醋酸纤维素薄膜（2cm×8cm）、培养⽫、滤纸、⽆齿镊、剪⼦、加样器（可⽤盖玻⽚或或微量加样器）、直尺、铅笔、玻璃板（8cm×12cm）、试管、试管架、吸管、电泳仪、电泳槽、分光光度计或吸光度扫描计。

【试剂】1. 巴⽐妥缓冲液(pH8.6，0.07mol/L，离⼦强度0.06)称取巴⽐妥钠12.76g、巴⽐妥1.66g，加500毫升蒸馏⽔，加热溶解。

待冷⾄室温后，再加蒸馏⽔⾄1000毫升。

2. 氨基⿊10B染⾊液称取氨基⿊10B 0.5g加⼊冰醋酸10ml、甲醇50ml,混匀，加蒸馏⽔⾄100ml。

3. 漂洗液甲醇45ml、冰醋酸5ml，混匀后加蒸馏⽔⾄100ml。

4. 洗脱液 0.4mol／LNaOH溶液。

5. 透明液称取柠檬酸21g，N-甲基-2-吡咯烷酮150g，以蒸馏⽔溶解并稀释⾄500ml。

血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验结果讨论及注意事项血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验是一种常见的蛋白质分离和分析方法。

这种方法基于蛋白质在电场中的迁移速度差异，可以实现对蛋白质的定性和定量分析。

在进行这种实验时，需要注意一些实验操作步骤和技巧，以确保实验结果的准确性和可靠性。

实验步骤1.准备样品：从血清中提取要分析的蛋白质样品。

可使用丙酮、醋酸等溶液进行样品的处理和稀释。

2.制备凝胶：将醋酸纤维素膜在磁盘上进行切割，将膜放入电泳槽中，加入足够的电泳缓冲液。

3.电泳条件：确定好电泳槽内电泳缓冲液的pH值和离子浓度，根据蛋白质的性质确定最佳的电泳条件，如电场强度、电泳时间等。

4.上样：在预定位置上样，可使用微量注射器将样品滴于凝胶表面。

5.打开电源：连接电极，通电进行电泳。

电泳时间根据分析的需要进行调整。

6.固定凝胶：停止电泳后，将凝胶取出，固定和染色。

7.分析：在透明胶支架上对凝胶进行扫描，记录下蛋白质的电泳迁移图像。

实验结果讨论：1.蛋白质的分离：根据电泳上样区域蛋白质的迁移速率和位置，可以对样品中的蛋白质进行定性和定量分析。

根据蛋白质之间的迁移时间差异，可以推测出它们在电场中的相对电荷、分子大小和电泳迁移速率等信息。

2.蛋白质的鉴定：可以通过与已知蛋白质标准品的电泳迁移对照来鉴定样品中蛋白质的种类和含量。

也可以通过进一步的染色技术，如银染、荧光染色等，增强或显示蛋白质带的清晰度，从而更准确地分析样品中蛋白质的种类和富集。

3.实验重复性和稳定性：为了保证实验结果的可靠性，一般需要对实验进行多次重复操作，计算其平均值和标准差。

同时也需要控制实验条件的稳定性，包括电泳缓冲液的配制、电场强度的控制、电泳时间的准确计时等。

确保实验操作的一致性可以降低测定误差。

注意事项：1.实验操作：操作时需佩戴手套，避免样品受到外界污染，减少实验误差。

仔细熟悉实验步骤和操作要求，确保操作正确。

2.样品制备：样品提取和制备过程中需要严格控制温度、pH值和时间等因素，以保证样品质量的一致性。

实验三血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳一、目的：1、掌握醋酸纤维薄膜电泳的基本原理和操作方法2、学会常用电泳的使用方法3、了解用醋酸纤维薄膜作支持物的优点及使用范围二、原理：由于各种血清蛋白质的等电点不同，因此在pH8.6的缓冲液中，各种血清蛋白质所带电荷量不同，同时由于它们的分子量也不同，造成电泳迁移率不同，所以在醋酸纤维薄膜上，电泳后，可将各种血清蛋白质分离开。

三、器材：醋酸纤维薄膜（2×8cm）、电泳仪、点样器（盖玻片）、培养皿、粗滤纸、玻璃板（载玻片）、镊子等。

四、试剂：巴比妥缓冲液（pH8.6，离子强度0.07。

巴比妥钠12.7g、巴比妥1.66g于蒸馏水中加热溶解后再加水至1000ml）氨基黑染色液（氯基黑10B0.5g、甲醇50ml、冰醋酸10ml、蒸馏水10ml）漂洗液（95％乙醇45ml、冰醋酸5ml、蒸馏水50ml）血清五、操作：1、识别标记：将薄膜切成2.5×8cm的小片。

在薄膜无光泽面(正面)的一端约2cm处用铅笔划一线，以标明点样位置。

2、浸泡：用镊子将薄膜无光泽面向下，漂浮于巴比妥缓冲液面上(缓冲液盛于培养皿中)，使膜条自然浸湿下沉。

大约10min。

3、点样：取出薄膜，用滤纸将表面的明水吸干，然后平铺在载玻片上（无光泽面朝上），将盖玻片先在小培养皿中的血清中沾一下，再在距膜条一端2cm处轻轻地水平落下并随即提起，这样即在膜条上点上了细条状的血清样品。

4、电泳：在电泳槽内加入缓冲液，使两个电极槽内的液面等高，将膜条平悬于电泳槽支架的滤纸桥上（先剪裁尺寸合适的滤纸条，取双层滤纸条附着在电泳槽的支架上，使它的一端与支架的前沿对齐，而另一端浸入电极槽的缓冲溶液内。

用缓冲溶液将滤纸全部润湿并驱除气泡，使滤纸紧贴在支架上，即为滤纸桥）。

点样端靠近负极，盖严电泳室，160V，45min。

5、染色：将膜条取出，放在显色液中显色10min。

6、漂洗：将膜条放在漂洗液中漂洗数次，至底色脱净为止，可得到清晰电泳图谱。

实验一血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳(doc)一、实验目的：了解蛋白质在醋酸纤维素薄膜电泳中的电泳特性，掌握电泳操作技能。

二、实验原理：血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳是一种基于电场作用对蛋白质进行分离的方法。

它是将样品蛋白质通过电泳方式在薄膜上进行分离，通过比较蛋白质的电泳迁移率来判断不同蛋白质的分子量大小。

血清蛋白质主要是血清白蛋白、球蛋白和纤维蛋白，分子量范围从14 kDa到850 kDa 不等。

在醋酸纤维素薄膜电泳中，蛋白质受到电场力的作用下，向电极方向迁移，带电的蛋白质分子在电场力和阻力的作用下进行不断运动，大分子运动缓慢，小分子运动快，不同分子量的蛋白质在电泳中迁移率不同，可以根据迁移率区分出不同的蛋白质成分并计算其分子量。

三、实验步骤：1.制备0.9%琼脂糖凝胶电泳缓冲液：取700ml去离子水，加入1.68g粉末琼脂糖，微弱的加热搅拌至完全溶解后添加1ml 1M Tris-HCl（pH6.8），0.2ml 10%（w/v）SDS，0.1 ml 10%（w/v）溴酚蓝溶液，搅拌均匀，得到电泳缓冲液。

2.制备凝胶：取0.9%琼脂糖凝胶电泳缓冲液120ml，加入3ml 10%（w/v）APS和0.2ml TEMED，充分混合，倒入成型板中，插入2个酯化的平板梳子，待凝胶完全固化后去除梳子。

3.制备血清样品：血清样品先离心5min，将上清离心液保存备用，调整浓度至3mg/ml，加入适量的样品缓冲液，并加入0.1%（w/v）溴酚蓝染料，离心去除蛋白质沉淀，取上清液。

4.醋酸纤维素薄膜电泳：将凝胶放入电泳槽中，加入电泳缓冲液至凝胶表面，将样品用枪头均匀加到凝胶的对侧。

将电泳槽封好，接上电源，电压保持在120 V，电泳时间约为1.5小时。

电泳完成后取出凝胶。

5.染色：将凝胶放入染色液中，室温下摇晃染色1h，去除染色液，在清水中冲洗几次，静置清水中至少30min。

6.成像：将凝胶放在扫描仪上进行成像，选择合适的波长进行成像。

醋酸纤维素薄膜电泳的注意事项一、实验前的准备1.1 仪器设备的检查与准备在进行醋酸纤维素薄膜电泳实验前，需要检查仪器设备是否完好，包括电泳仪、电源、恒温槽等。

同时，需要根据实验要求选择适当的试剂和材料，并对其进行准备。

1.2 实验环境的准备为确保实验结果的可靠性和精确性，需要在干净整洁、无尘无噪的实验室环境中进行实验。

此外，还需要注意保持适宜的温度和湿度条件。

二、样品制备2.1 样品的选择醋酸纤维素薄膜电泳可以用于分离和检测各种生物大分子，如DNA、RNA、蛋白质等。

在进行样品制备前，需要根据实验要求选择合适的样品，并对其进行处理。

2.2 样品制备方法样品制备方法应根据不同的生物大分子类型和目的来确定。

例如，在进行DNA电泳时，需要将DNA片段加入到琼脂糖溶液中并混匀；在进行蛋白质电泳时，则需要将蛋白质样品加入到聚丙烯酰胺凝胶中。

三、电泳条件的设置3.1 电泳缓冲液的配制不同类型的生物大分子需要使用不同的电泳缓冲液。

在进行电泳实验前，需要根据样品类型和实验要求配制适当的缓冲液，并调整其pH 值和离子浓度。

3.2 电泳条件的设置在进行醋酸纤维素薄膜电泳实验前，需要根据样品类型和实验要求设置合适的电泳条件，包括电场强度、运行时间、温度等。

此外，还需要注意保持恒定的温度和湿度条件。

四、实验操作4.1 样品加载在进行样品加载时，需要注意避免气泡产生，并确保样品均匀地分布在凝胶中。

同时，还需要根据实验要求调整加载量和位置。

4.2 实验过程中的观察与记录在进行醋酸纤维素薄膜电泳实验时，需要及时观察和记录凝胶上分离带的出现情况，并根据结果进行进一步分析。

五、实验后处理5.1 凝胶染色在进行凝胶染色时，需要根据实验要求选择适当的染料，并按照说明书进行操作。

此外，还需要注意避免染料过度渗透和过度染色。

5.2 分析结果的处理在进行分析结果的处理时，需要根据实验要求选择合适的方法，并对数据进行统计和分析。

此外，还需要注意避免误差和偏差的产生。

实验一血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳(共享)一、实验目的本实验旨在掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作的技能，通过血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳分析，了解蛋白质电泳分析中常用的方法和技术，并且能够初步理解血清蛋白质电泳图谱的含义和影响因素。

二、实验原理1. 蛋白质分离原理蛋白质分离是利用蛋白质之间在电场中的运动迁移率的不同分离的。

蛋白质在电场中的运动迁移率取决于蛋白质分子的大小、形状、电荷性质等的不同。

2. 醋酸纤维素薄膜电泳原理醋酸纤维素薄膜电泳是一种以醋酸纤维素膜为电泳区间的蛋白质电泳方法。

其原理为，蛋白质在正常向电场中发生运动，随着蛋白质运动迁移，逐渐进入膜孔中，受到膜孔的限制，蛋白质停止迁移。

大分子的蛋白质分子无法进入膜孔，小分子的蛋白质可以进入膜孔，分子大小的差异导致了蛋白质的分离。

醋酸纤维素膜孔的大小通常小于3纳米，蛋白质要进入膜孔需要满足一定的条件，如形状、电荷、大小等，因此通过醋酸纤维素膜孔的筛选效果，可以将蛋白质分离出不同性质和大小的蛋白质组分。

三、实验步骤1. 操作前准备：① 气泡清除：取适量蒸馏水，通入空气，将水搅动形成气泡，并将其排出，重复多次，以去除气泡。

② 涂膜：取新的醋酸纤维素膜，利用毛刷刷上适量真空脱泡机中的真空润湿液，边刷边使薄膜平铺，直至全部涂膜结束。

2. 样品制备① 取0.5 mL 的实验样品，放入1.5 mL 的离心管中，室温下放置5 min，使蛋白质沉淀和分散。

② 在超净工作台或洁净室内操作，将样品香磨匀，取样板，向上转移液体吸头轻轻吸取一下，将液体加入样品槽中。

3. 电泳操作① 将准备好的醋酸纤维素膜，贴在电泳仪的隔板上，并将隔板安装在电泳槽内。

② 将电泳槽中的电泳缓冲液（TGE）加热并耗尽气泡之后，轻轻将样品槽放入电泳槽中，注意不能与电泳膜接触，最后慢慢加入样品针头的样品。

③ 大致运行5-10min 后，可观察到样品在膜上积累。

④ 电泳完成后，将电泳槽内的醋酸纤维素膜取出，将其在甲醇以及蒸馏水中洗涤3次，最后在蒸馏水中洗涤一次。

实验目的掌握醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和方法。

二、实验原理蛋白质是两性电解质。

在pH值小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH值大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。

血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利用电泳法将它们分离。

血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。

由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0，所以在pH8.6的缓冲液中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。

蛋白质名称等电点相对分子质量白蛋白 4.88 69000α1-球蛋白 5.06 200000α2-球蛋白 5.06 300000β-球蛋白 5.12 90000~150000γ-球蛋白 6.85~7.50 156000~300000在一定范围内，蛋白质的含量与结合的染料量成正比，故可将蛋白质区带剪下，分别用0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。

也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，测定其相对含量。

肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。

肾病时α1、α2、β球蛋白升高，γ-球蛋白降低。

肝硬化时α2、β-球蛋白降低，而α1、γ-球蛋白升高。

三、实验器材1、醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）2、人血清；3、烧杯及培养皿数只；4、点样器；5、竹镊子；6、玻璃棒；7、电吹风；8、试管六只；9、恒温水浴锅；10、电泳槽；11、直流稳压电泳仪；12、剪刀四、实验试剂1. 电极缓冲液: 巴比妥-巴比妥钠缓冲液（可重复使用，隔一星期过滤一次）：，分别称取巴比妥钠12.76g和巴比妥1.66g溶解于1000ml蒸馏水中。

2. 染色液（可重复使用，使用后回收）：取氨基黑10B 0.5g溶于100ml SDS-PAGE 电泳脱色液中。