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ABO疑难血型三步分析法在血型分类中没有疑难血型,迄今为止在文献中也查不到“疑难血型”的定义，因为“疑难血型”是1种血型难以检定或判定的“现象”,而不是1种型别。
检定1份标本是否属“疑难血型”，除了标本本身的特殊性外，还与实验室的设备、技术人员的水平、经验等多种因素有关，例如1份ABO亚型标本,在基层医院血库可能因为正定型与反定型不一致而分析不出原因被认为是“疑难血型”,但在血液中心血型参比实验室该问题可能就易于迎刃而解。
在检定血型时,标本如果受多种因素干扰使结果难以判定,便呈现“疑难血型”现象。
一、干扰ABO血型正确判定的因素（一）生理性因素1.年龄老年人(ABO抗原或ABO抗体减弱),6个月前的婴儿(ABO 抗原或ABO抗体不成熟),可能导致ABO血型误定。
2.ABO亚型包括A(B)型、B(A)型,ABO抗原减弱导致细胞定型(正定型)受干扰,或血清中出现不规则抗体干扰血清定型(反定型)。
3.冷凝集素有些健康人血清中含有冷凝集素,且在<4℃才有活性,不干扰ABO血型检定,如果冷凝集素效价升高,或在室温以上反应,致敏自身红细胞可能干扰ABO正定型,存在于血清可能干扰ABO反定型。
4.“先天性”无ABO抗体近年有“先天性”无ABO抗体的个案报告,原因有待研究。
5.双精子授精红细胞呈嵌合体。
6.个体特异性个别人血清中ABO可溶性血型物质过高,ABO正定型红细胞凝集减弱。
（二）实验技术原因1.标本混淆如采错被检者,红细胞和血清非同一人,记录结果与标本编号不对应。
2.静脉输液处采样ABO抗体被输液稀释,干扰ABO反定型。
3.采样不规范用凝血块洗下红细胞检定血型，其中混有凝集程度不一的红细胞；用血浆做ABO反定型,操作过程中纤维蛋白析出凝集试剂红细胞。
4.试剂质量问题或漏加试剂定型试剂过期失效，未达标准，被污染。
操作中未遵循“先加血清后加细胞”的原则，大批量样本试验时漏加试剂血清或试剂红细胞。
5.实验操作不规范被检红细胞未洗涤,非特异性粘附血浆蛋白,或被检红细胞悬液过浓或过稀。
ABO疑难血型鉴定三步法第一步:复查ABO血型，排除人为因素、操作失误。
重新采集血样、核对试剂和器材。
第二步：将需定型病人归纳进五大类33种原因分类表，“对号入座”，逐一排除，剩下几条不能排除者——第三步：针对剩下的几种不能排除的因素，设计针对性实验来验证。
ABO疑难血型鉴定1 红细胞抗原↓7种(1)年龄小于6个月或老年(临床提示)(2)白血病(临床提示)(3)异型血输注(临床提示输血史)(4)造血干细胞移植(病史)(5)血型物质升高(6)急性大失血(临床病史)(7)ABO亚型2 红细胞抗原额外反应7种(1)自身凝集素(临床提示AIAH)(2)红细胞粘附大量蛋白(红c未洗涤)(3)红细胞未洗涤，与血清试剂反应(4)造血干细胞移植(病史)(5)获得性B抗原(类B)(临床提示感染)(6)B(A)、A(B)表型(7)异型血输注(输血史)无临床提示者，仅三种3 血清抗体↓6种(1)年龄小于6个月或老年(临床提示)(2) 双胞胎嵌合体(家族史)(3)低丙种球蛋白血症(临床提示)(4)造血干细胞移植(病史)(5)先天性ABO抗体缺失(6)大量输液(输液史)4 血清抗体额外反应8种(1)自身抗体(临床提示AIAH)(2)同种抗体(3)对试剂反应的物质(4)血清蛋白异常(临床常为肝病)(5)输异型血浆(输血史)(6)造血干细胞移植(病史)(7)输含血型抗体的免疫球蛋白(输血)(8)ABO亚型无临床提示者，仅四种5 混合凝集5种(1)近期怀孕或输血(病史、输血史)(2)双胞胎嵌合体(家族史)(3)骨髓移植受者(临床提示)(4)造血干细胞移植(病史)(5)白血病(病史)常见几种疑难血型分析：例1：实验中一例A2B亚型的鉴定：临床标本，姓名：张××，标本离心分离血浆，常规操作，制备0.8%、4%红细胞悬液。
对标本进行正反定型，博迅定型试剂卡批号：20081006，反定型试剂批号：20090602，结果如下：正定型反定型抗-A 抗-B 抗-D A1 Bc3+ 3+ 4+ 4+W －分析：标本正定显示为AB型，反定显示为B型，反定该标本血清(血浆)与反定型A1细胞呈现4+W的反应格局(存在混合凝集)，正反定型不符。
ABO正、反定型不合疑难血型三步分析法”ABO正反定型不符定义：①ABO正反定型不符，即正定型与反定型提示的血型结果不一致②ABO正反定型相符，但为弱反应，正定型反应强度＜3+，或反定型反应强度＜2+③正定型为O型，反定型与A细胞、B细胞凝集强度差别≥2+凡是遇到ABO正、反定型不合的病人第一步: 排除人为因素／操作失误１，重新采集血样⑴分抗凝，不抗凝两管⑵排除采错人，输血/输液处采样……２，核对试剂，器材仔细阅读试剂效期，说明书，操作方法，注意事项３，规范化操作复检复检ABO 血型仍然正、反定型不合，就确定为疑难血型进入三步法第二步第二步：凡是ABO正、反定型不合的病例按下面方法，分析病人的抗原、抗体是“变多？还是变少？”正、反定型结果判断1，正定型AB, (两种抗原) 抗原变多正定型O, (无抗原) 抗原变少2，反定型O, (两种抗体) 抗体变多反定型AB, (无抗体) 抗体变少3，正定型A, 或B (一种抗原) ①抗原变多;②抗原变少反定型A, 或B (一种抗体) ①抗体变多;②抗体变少★不要过问“真滴变多变少没有”，你依样画葫芦就是了规律很好记，不管是抗原/抗体：两种→肯定是变多没有→肯定是变少；一种→可能是变多，也可能是变少归纳ABO正,反定型不合的“五大类30种原因”知道有个“五大类30种原因”就可以了不要记，书上有这些表，现用现翻书★用排除法（1）红细胞抗原变少7种（2）红细胞抗原变多7种①＜6月,老年（临床）□①自身凝集素（临床诊断）□②白血病（临床诊断）□②红细胞粘附大量蛋白（RBC未洗）□③输异型血（输血史）□③样本含试剂反应物（RBC未洗）□④造血干细胞移植（病史）□④造血干细胞移植（病史）□⑤血型物质↑□⑤获得性B抗原（类B）（临床感染）□⑥急性大失血（临床病史）□⑥B(A)表型□⑦ABO亚型□⑦输异型血（输血史）□注意：每条的临床提示（3）血清抗体变少6种（4）血清抗体变多7种①<6个月/老年（临床）□①自身抗体（临床诊断AIHA）□②ABO亚型□②同种抗体（抗筛）□③低丙种球蛋白血症（化验）□③对试剂反应的物质□④造血干细胞移植（病史）□④血清蛋白异常（化验）□⑤先天性ABO抗体缺失□⑤输异型血浆（输血史）□⑥大量输液（输血史）□⑥造血干细胞移植（病史）□⑦输含血型抗体Ig（输血史）□注意：每条的临床提示5）混合凝集（mf）3种①3个月内输异型血（输血史）□②造血干细胞移植（病史）□③双精子受精/嵌合体（问家系）□注意：每条的临床提示归纳剩下不能排除的原因：第三步: 实验验证针对剩下几种不能排除的原因, 选择针对性实验验证，如何选择针对性实验呢?翻看书本:《输血免疫血液学实验技术》人民卫生出版社,2011 .1; P131。
疑难血型鉴定,带你认识一下发布时间：2022-11-21T07:36:34.113Z 来源：《中国医学人文》2022年9月9期作者：刘先卉[导读]疑难血型鉴定,带你认识一下刘先卉（自贡市中心血站；四川自贡643000）ABO血型是人类最早发现也是对输血安全影响最大的血型系统。
当发现ABO正反定型不一致时如何查找原因并正确鉴定，患者血型就显得尤为重要。
对ABO正反定型不符的标本进行疑难血型鉴定，探讨其原因与解决办法。
测ABO血型，正反定型不符者需进一步做吸收放散试验、唾液血型物质测定、抗体筛选、亚型检测等试验。
可能会出现额外抗原，出现额外抗体，弱抗原或弱抗体等，所以多种原因可干扰血型测定结果。
应采用正确的辅助方法检测ABO血型，提高血型鉴定的准确性与输血安全性。
一、出现额外抗原1、抗原发生改变：如类B，是一种获得性暂时性抗原。
解决方法：①观察细胞与抗-A及抗-B的凝集强度，与抗-A的反应要比与抗-B反应强。
②用受检者红细胞与自身血清做试验，血清中的抗-B不凝集自身红细胞上的类B抗原。
③检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物质而无B物质。
④核对患者的诊断，类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆菌感染有关。
2、多凝集现象：红细胞被绝大多数人的正常血清凝集。
可用37℃生理盐水洗涤红细胞、使用非人血清来源的标准定型血清进行正定型。
3、非抗-A及抗-B的抗体成分与相应抗原形成复合体吸附在红细胞表面，引起正定型非特异性凝集。
如抗血清添加剂、抗EDTA 抗体等。
可将红细胞洗涤再进行正定型。
4、自身免疫性溶血性贫血：红细胞表面存在致敏自身抗体，包括冷凝集素和温抗体的作用。
红细胞用45℃生理盐水洗涤去除自身抗体，反定型在37℃进行，并做自身对照。
二、出现额外抗体1、蛋白或血浆不正常引起的缗钱状凝集：血清蛋白浓度异常，球蛋白浓度由于疾病而升高,纤维蛋白原浓度升高等。
应了解患者临床诊断、加适量生理盐水看凝集是否消失或洗涤红细胞、稀释反定型血清。
疑难血型的实验室及临床处理血型定义：血液系统遗传多太性。
但是一般来说，血型指红细胞ABO及Rh血型。
目前，血型主要由红细胞凝集来判断。
有时由于疾病引起红细胞血型抗原表达发生改变或血清中抗体改变，致使血型判断困难或判断错误。
和其他红细胞血型系统相比，ABO系统有其特殊性，即正常人红细胞上缺乏A或B抗原时，其血浆中会出现相应抗体。
因此，检查ABO血型，必须做正反定型，如正反定型吻合，则血型检测无误。
如正反定型不符合，多系技术错误造成，应症先重复试验，再找其原因。
常见的技术错误包括：1）标本、试剂、试管或玻片弄错。
2）红细胞悬液太浓或太淡。
3）记录错误。
4）标本混淆。
5）溶血。
6）未加试剂。
7）未按试剂供应商的要求进行操作。
8）离心机有问题。
9）试剂污染。
10）离心时加热。
某些疾病状态可能使红细胞抗原减弱或产生假抗原，如白血病，何杰金病，10号染色体转位，红细胞系统极度增生如海洋性贫血。
可能出现如下反应格局：正定型反定型表现型抗-A 抗-B 抗AB A1细胞 B细胞A +mf — ++mf — +++B —± + ++++ —红细胞ABO抗原减弱与病程有关，病情缓解时抗原性会增强。
此外，血液中凝集素效价可由于低丙种球蛋白血病而降低，如慢淋、淋巴瘤、免疫缺陷性疾病如先天性低丙种球蛋白血病。
老年人及婴儿凝集素效价也低。
肠梗阻、结肠、直肠癌或其他下消化道疾病时肠壁通盘性啬，细菌多糖入血，使A节型患者出现获性B检验地带网现象。
胃或胰腺恶性肿瘤患者血清中可能含有过多的可溶性血型物质，这些物质中和抗血清从而影响正定型结果。
如出现ABO正反定型不符，不能轻易发血。
首先应重复试验，如仍不符合，应再抽标本并进一步了解病人情况，如诊断、年龄、妊娠史、输血史、用药史、免疫球蛋白平等。
将ABO正反定型不符人为分为4类第一类由抗体减弱或缺乏导致ABO正反定型不符，常见情况如下：1）新生儿2）老年人3）白血病患者合并低丙种球蛋白血症4）淋巴瘤合并低丙种球蛋白血症者5）用免疫抑制剂导致低丙种球蛋白血症者6）先天性无丙种球蛋白血症7）免疫缺陷疾病患者8）骨髓移植患者（由于治疗引起的低丙种球蛋白血症或植入骨髓血型不同）疑难血型的实验室及临床处理处理方法：增强反定型反应----将患者血清与A1或B细胞在室温下孵育15-30分钟，如仍无反应，将混合物质4℃下孵育，注意做自身及O型细胞对照。
疑难血型鉴定与疑难交叉配血1、疑难血型鉴定疑难血型就是一种血型难以检定或判定（正反定型不一致）得现象,多由血型抗原减弱形成亚型、疾病原因引起抗体减弱或部分血型系统罕见表型等原因引起。
因此,疑难血型鉴定主要从弱抗原、弱抗体与特殊抗原或抗体检测角度出发，结合血型血清学与分子生物学研究方法对患者样本进行检测。
而对于不规则抗体筛查与鉴定，主要就是对抗体种类与特性进行研究，尤其就是利用吸收/放散试验对同时存在多种同种抗体或自身抗体进行分离鉴定，从而较为准确得分析患者血清抗体得特异性。
在工作中遇到此类情况时，应按照以下步骤进行分析与处理：(１)分析可能存在得原因先排除人为操作因素,再通过了解患者临床资料分析可能得原因，主要包括抗原类影响因素与抗体类影响因素，抗原类影响因素一般包括ABO亚型、血液病、骨髓移植等,抗体类影响因素一般包括不规则抗体、药物抗体、先天抗体缺失、丙种球蛋白过低、冷凝集素等。
（2）设计实验进行验证疑难血型鉴定流程见流程图1。
流程图1 疑难血型鉴定流程2014年１月，在工作中发现正反定型结果不符样本一例,经一系列血清学试验确证该患者为P１Pｋ血型系统得ｐ表型，经分子生物学基因测序,初步推断Ａ4GALT 基因第3外显子得９０3Ｃ＞G突变就是患者p表型形成得分子生物学基础,该研究成果从不同角度与深度撰写论文,先后发表《临床军医杂志》与《中国输血杂志》论文各一篇，并由此逐步展开疑难血型鉴定。
在此之后得工作中，通过阅读文献自修学习,鉴定出Am、Bm、B３等血型亚型，形成了一套相对完整得疑难血型鉴定思路与流程。
２014年2月与2015年10月，在工作中分别遇到一例反复进行输血治疗得患者,经一系列血清学试验，确证此两例患者均因多次输血治疗而产生多种不规则抗体，该研究成果先后以论文形式发表于《临床军医杂志》。
在后期工作中，通过对解放军174医院住院患者不规则抗体筛查与鉴定结果进行分析，对厦门地区住院患者不规则抗体得分布特征有了较为清晰得了解，该研究成果以论文形式发表于《国际医药卫生导报》,并形成了一套相对完整得不规则抗体筛查与鉴定流程。
疑难血型鉴定和疑难交叉配血1.疑难血型鉴定疑难血型是一种血型难以检定或判定（正反定型不一致）的现象，多由血型抗原减弱形成亚型、疾病原因引起抗体减弱或部分血型系统罕见表型等原因引起。
因此，疑难血型鉴定主要从弱抗原、弱抗体和特殊抗原或抗体检测角度出发，结合血型血清学和分子生物学研究方法对患者样本进行检测。
而对于不规则抗体筛查和鉴定，主要是对抗体种类和特性进行研究，尤其是利用吸收/放散试验对同时存在多种同种抗体或自身抗体进行分离鉴定，从而较为准确的分析患者血清抗体的特异性。
在工作中遇到此类情况时，应按照以下步骤进行分析和处理：（1）分析可能存在的原因先排除人为操作因素，再通过了解患者临床资料分析可能的原因，主要包括抗原类影响因素和抗体类影响因素，抗原类影响因素一般包括ABO亚型、血液病、骨髓移植等，抗体类影响因素一般包括不规则抗体、药物抗体、先天抗体缺失、丙种球蛋白过低、冷凝集素等。
（2）设计实验进行验证疑难血型鉴定流程见流程图1。
流程图1 疑难血型鉴定流程2014年1月，在工作中发现正反定型结果不符样本一例，经一系列血清学试验确证该患者为P1Pk血型系统的p表型，经分子生物学基因测序，初步推断A4GALT 基因第3外显子的903C＞G突变是患者p表型形成的分子生物学基础，该研究成果从不同角度和深度撰写论文，先后发表《临床军医杂志》和《中国输血杂志》论文各一篇，并由此逐步展开疑难血型鉴定。
在此之后的工作中，通过阅读文献自修学习，鉴定出Am、Bm、B3等血型亚型，形成了一套相对完整的疑难血型鉴定思路和流程。
2014年2月和2015年10月，在工作中分别遇到一例反复进行输血治疗的患者，经一系列血清学试验，确证此两例患者均因多次输血治疗而产生多种不规则抗体，该研究成果先后以论文形式发表于《临床军医杂志》。
在后期工作中，通过对解放军174医院住院患者不规则抗体筛查和鉴定结果进行分析，对厦门地区住院患者不规则抗体的分布特征有了较为清晰的了解，该研究成果以论文形式发表于《国际医药卫生导报》，并形成了一套相对完整的不规则抗体筛查和鉴定流程。
