疑难血型鉴定流程

疑难血型检测及混合配血处理流程1. 背景疑难血型检测及混合配血是在某些疑难血型识别或配血过程中的特殊情况下才使用的方法。

这种方法的目的是为了解决无法通过标准血型测试方法得出明确结果的情况。

2. 疑难血型检测流程以下是疑难血型检测的一般流程：1. 收集样本：采集患者的血液样本，并确保样本质量良好，避免污染或血浆过早凝固。

2. 准备试剂：准备用于血型测试的试剂，并确保其有效性和准确性。

3. 进行血型测试：使用适当的实验室技术（如凝集试验、抗体试验等）对血液样本进行血型测试。

4. 结果判断：根据试验结果和已知的血型特性进行判断，确定血型类型。

如果结果无法明确确定，则进行下一步的混合配血处理。

3. 混合配血处理流程以下是混合配血处理的一般流程：1. 确认混合配血需求：确定需要进行混合配血处理的具体情况，并了解患者的血型背景和特殊需求。

2. 寻找合适的供血者：根据患者的血型要求和供血者的血型特性，寻找适合的供血者进行混合配血。

3. 进行混合配血试验：将患者的血液样本与供血者的血液样本进行混合，进行混合配血试验。

这些试验可能包括凝集试验、交叉试验等。

4. 结果评估：根据混合配血试验的结果，评估血液样本的兼容性和相容性。

确定最佳的供血者和血液产品，以满足患者的需求。

5. 安全执行：根据混合配血结果，安全地执行配血程序，并确保血液产品的准确性和质量。

4. 注意事项在进行疑难血型检测及混合配血过程中，需要注意以下事项：- 严格遵循实验室操作规范，确保操作的准确性和安全性。

- 注意样本的质量和储存条件，避免污染或血浆凝固。

- 确保试剂和设备的有效性和准确性，避免误判和错误结果。

- 按照医疗机构的血液管理政策和程序进行操作，确保患者的安全和治疗效果。

5. 结论疑难血型检测及混合配血是在特殊情况下使用的血型测试和配血方法。

通过严格的操作流程和评估，可以获得准确和安全的血型结果以及满足患者需求的血液产品。

为确保操作的准确性和安全性，建议在医疗机构的指导下进行相关操作。

血型的鉴定方法及操作直接法的操作方法如下：1.准备试验盘：将需要鉴定的血型抗原加入不同孔中，每个孔中加入抗原滴度约为2%。

2.加入抗体：在试验盘的每个抗原孔中，滴加不同血型的配血抗体，与待测血浆反应。

3.观察凝集反应：观察试验盘中血型配对抗体与抗原是否发生凝集反应。

如果有凝集，则说明该抗体与抗原相互配对，即该血型为正。

间接法的操作方法如下：1.准备试验通量血浆：将待测血浆与不同抗体混合，分别产生不同血型的配血抗体，形成反应试验通量血浆。

2.准备配血试验：选择待测血型的红细胞和配血抗体，将其混合在试验板中，形成不同孔的配血试剂。

3.筛选血型抗体：通过试验盘中的配血试剂与血型通量血浆反应，筛选出可能的血型。

4.观察试验结果：观察试验盘中血型抗体与反应通量血浆之间是否发生凝集反应。

如果有凝集，则说明该试验盘对应的血型与配血抗体结合，即该试验盘对应的血型为正。

无论是直接法还是间接法，鉴定血型的关键在于观察凝集反应，判断配对是否正常。

需要指出的是，由于血型抗体或抗原具有较高的特异性，因此操作时应严格控制试剂的质量，确保实验结果的准确性。

此外，不同的血型鉴定方法还包括以下几种：1.血凝法：通过向点滴在玻片上的全血滴加试验抗体，观察全血与抗体的凝集反应，判断血型。

2.抗血清法：将待测血浆与不同血型抗血清混合，在洁净盘中观察是否发生凝集反应，推断血型。

3.血型抗原酶法：通过在红细胞表面特定细胞蛋白酶处理下的血型抗原抑制方法判断血型。

总结而言，血型的鉴定方法包括直接法和间接法，两者操作步骤类似但侧重点不同。

在进行血型鉴定操作时，需要严格控制试剂质量，确保实验结果准确可靠。

ABO疑难血型三步分析法在血型分类中没有疑难血型,迄今为止在文献中也查不到“疑难血型”的定义，因为“疑难血型”是1种血型难以检定或判定的“现象”,而不是1种型别。

检定1份标本是否属“疑难血型”，除了标本本身的特殊性外，还与实验室的设备、技术人员的水平、经验等多种因素有关，例如1份ABO亚型标本,在基层医院血库可能因为正定型与反定型不一致而分析不出原因被认为是“疑难血型”,但在血液中心血型参比实验室该问题可能就易于迎刃而解。

在检定血型时,标本如果受多种因素干扰使结果难以判定,便呈现“疑难血型”现象。

一、干扰ABO血型正确判定的因素（一）生理性因素1.年龄老年人(ABO抗原或ABO抗体减弱),6个月前的婴儿(ABO 抗原或ABO抗体不成熟),可能导致ABO血型误定。

2.ABO亚型包括A(B)型、B(A)型,ABO抗原减弱导致细胞定型(正定型)受干扰,或血清中出现不规则抗体干扰血清定型(反定型)。

3.冷凝集素有些健康人血清中含有冷凝集素,且在<4℃才有活性,不干扰ABO血型检定,如果冷凝集素效价升高,或在室温以上反应,致敏自身红细胞可能干扰ABO正定型,存在于血清可能干扰ABO反定型。

4.“先天性”无ABO抗体近年有“先天性”无ABO抗体的个案报告,原因有待研究。

5.双精子授精红细胞呈嵌合体。

6.个体特异性个别人血清中ABO可溶性血型物质过高,ABO正定型红细胞凝集减弱。

（二）实验技术原因1.标本混淆如采错被检者,红细胞和血清非同一人,记录结果与标本编号不对应。

2.静脉输液处采样ABO抗体被输液稀释,干扰ABO反定型。

3.采样不规范用凝血块洗下红细胞检定血型，其中混有凝集程度不一的红细胞；用血浆做ABO反定型,操作过程中纤维蛋白析出凝集试剂红细胞。

4.试剂质量问题或漏加试剂定型试剂过期失效，未达标准，被污染。

操作中未遵循“先加血清后加细胞”的原则，大批量样本试验时漏加试剂血清或试剂红细胞。

5.实验操作不规范被检红细胞未洗涤,非特异性粘附血浆蛋白,或被检红细胞悬液过浓或过稀。

ABO正、反定型不合疑难血型三步分析法”ABO正反定型不符定义：①ABO正反定型不符，即正定型与反定型提示的血型结果不一致②ABO正反定型相符，但为弱反应，正定型反应强度＜3+，或反定型反应强度＜2+③正定型为O型，反定型与A细胞、B细胞凝集强度差别≥2+凡是遇到ABO正、反定型不合的病人第一步: 排除人为因素／操作失误１，重新采集血样⑴分抗凝，不抗凝两管⑵排除采错人，输血/输液处采样……２，核对试剂，器材仔细阅读试剂效期，说明书，操作方法，注意事项３，规范化操作复检复检ABO 血型仍然正、反定型不合，就确定为疑难血型进入三步法第二步第二步：凡是ABO正、反定型不合的病例按下面方法，分析病人的抗原、抗体是“变多？还是变少？”正、反定型结果判断1，正定型AB, (两种抗原) 抗原变多正定型O, (无抗原) 抗原变少2，反定型O, (两种抗体) 抗体变多反定型AB, (无抗体) 抗体变少3，正定型A, 或B (一种抗原) ①抗原变多;②抗原变少反定型A, 或B (一种抗体) ①抗体变多;②抗体变少★不要过问“真滴变多变少没有”，你依样画葫芦就是了规律很好记，不管是抗原/抗体：两种→肯定是变多没有→肯定是变少；一种→可能是变多，也可能是变少归纳ABO正,反定型不合的“五大类30种原因”知道有个“五大类30种原因”就可以了不要记，书上有这些表，现用现翻书★用排除法（1）红细胞抗原变少7种（2）红细胞抗原变多7种①＜6月,老年（临床）□①自身凝集素（临床诊断）□②白血病（临床诊断）□②红细胞粘附大量蛋白（RBC未洗）□③输异型血（输血史）□③样本含试剂反应物（RBC未洗）□④造血干细胞移植（病史）□④造血干细胞移植（病史）□⑤血型物质↑□⑤获得性B抗原（类B）（临床感染）□⑥急性大失血（临床病史）□⑥B(A)表型□⑦ABO亚型□⑦输异型血（输血史）□注意：每条的临床提示（3）血清抗体变少6种（4）血清抗体变多7种①<6个月/老年（临床）□①自身抗体（临床诊断AIHA）□②ABO亚型□②同种抗体（抗筛）□③低丙种球蛋白血症（化验）□③对试剂反应的物质□④造血干细胞移植（病史）□④血清蛋白异常（化验）□⑤先天性ABO抗体缺失□⑤输异型血浆（输血史）□⑥大量输液（输血史）□⑥造血干细胞移植（病史）□⑦输含血型抗体Ig（输血史）□注意：每条的临床提示5）混合凝集（mf）3种①3个月内输异型血（输血史）□②造血干细胞移植（病史）□③双精子受精/嵌合体（问家系）□注意：每条的临床提示归纳剩下不能排除的原因：第三步: 实验验证针对剩下几种不能排除的原因, 选择针对性实验验证，如何选择针对性实验呢?翻看书本:《输血免疫血液学实验技术》人民卫生出版社,2011 .1; P131。

疑难血型鉴定及交叉配血处理流程一、正反定型不一致1、重复试验（严格正规操作）。

2、重新取血（以纠正污染或弄错标本造成的不符），溶血标本不能用于合血。

3、洗涤红细胞后进行以下试验（正反定型凝集低于2+的，应首先怀疑是由于亚型或抗原抗体活降低引起。

）1）、用自身血清、红细胞做定型对照，检验自身有无完全抗体。

2）、用O型红细胞做反定型对照，确认是否存在ABO系统以外完全抗体。

3）、用抗A、抗AB、抗A1和抗H进行正定型：①A亚型细胞与抗A、抗AB的凝集强度低于A1细胞，但与抗H的凝集强度高于A1细胞（3+以上）；②A亚型（特别是A2中约有1-8%会产生抗A1），与抗A1基本不发生凝集。

③用抗AB（O型血清或血浆）是因为它的抗A效价较高，与弱A和弱B抗原亲和力强。

4）、分别用A1型和A2型红细胞反定型检查血清中有无抗A1存在（A亚型中有部份会产生抗A1，能与A1发生凝集，但不与A2凝集。

）5）、询问病史，判断是否是由于病人抗体缺失或减弱引起反定型错误，可延长反应时间，或用灵敏度更高的血型卡做反定型。

6）、被检红细胞做直抗（观察有无被抗体致敏的情况），若为阳性，应将细胞放散至阴性后再定血型。

4、若还不能确定血型，应增加血型物质的检测（如唾液等）。

二、交叉配血不合（一）主侧端不相合1、血型鉴定不正确,重新鉴定血型。

2、病人血清中存在同种抗体，与供血者红细胞上的相应抗原反应。

3、供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗球蛋白试验阳性。

4、病人血清不正常，如白蛋白/球蛋白比例不正常引起缗钱状凝集，血清中存在高分子聚合物的血浆扩容剂引起假阳性。

5、试验系统被污染。

（二）次侧端不相合1、供血者血浆中存在针对病人红细胞抗原的抗体。

2、病人与供血者的ABO血型不相合。

3、病人的红细胞已经包被了抗体，直接抗人球蛋白试验阳性。

4、抗筛阴性，而次侧不合多由自身抗体引起（此是抗人球配血不合，而聚凝胺配血通过可输血）。

（三）配血不合的主要因素1、血型是否正确。

ABO疑难血型的三步分析鉴定法
第一步：排除人为因素或操作失误。

1.重新采集血样重新规范化采集抗凝血和不抗凝血两管。

2.核对试剂，器材核对试剂，仔细阅读试剂说明书和有效期；检查离心机及其他器材
3.复查AB0血型，排除人为因素或操作失误造成的AB0正、反定型不一致。

第二步：查阅临床资料，逐条分析对照可能导致ABO正反定型结果不一致的原因(表一)，或逐条分析排除不可能的原因，然后归纳总结不能排除的原因。

1.患者年龄、性别。

2.家系。

3.临床治疗用药史、输血史、造血干细胞移植史。

4.临床诊断。

第三步：根据逐条分析排除不可能的原因，归纳总结不能排除的原因，或最可能的原因，设计针对性验证实验。

表一ABO正反定型结果不一致的分类。

疑难血型鉴定及交叉配血处理流程一、正反定型不一致1、重复试验（严格正规操作）。

2、重新取血（以纠正污染或弄错标本造成的不符），溶血标本不能用于合血。

3、洗涤红细胞后进行以下试验（正反定型凝集低于2+的，应首先怀疑是由于亚型或抗原抗体活降低引起。

）1）、用自身血清、红细胞做定型对照，检验自身有无完全抗体。

2）、用O型红细胞做反定型对照，确认是否存在ABO系统以外完全抗体。

3）、用抗A、抗AB、抗A1和抗H进行正定型：①A亚型细胞与抗A、抗AB的凝集强度低于A1细胞，但与抗H的凝集强度高于A1细胞（3+以上）；②A亚型（特别是A2中约有1-8%会产生抗A1），与抗A1基本不发生凝集。

③用抗AB（O型血清或血浆）是因为它的抗A效价较高，与弱A和弱B抗原亲和力强。

4）、分别用A1型和A2型红细胞反定型检查血清中有无抗A1存在（A亚型中有部份会产生抗A1，能与A1发生凝集，但不与A2凝集。

）5）、询问病史，判断是否是由于病人抗体缺失或减弱引起反定型错误，可延长反应时间，或用灵敏度更高的血型卡做反定型。

6）、被检红细胞做直抗（观察有无被抗体致敏的情况），若为阳性，应将细胞放散至阴性后再定血型。

4、若还不能确定血型，应增加血型物质的检测（如唾液等）。

二、交叉配血不合（一）主侧端不相合1、血型鉴定不正确,重新鉴定血型。

2、病人血清中存在同种抗体，与供血者红细胞上的相应抗原反应。

3、供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗球蛋白试验阳性。

4、病人血清不正常，如白蛋白/球蛋白比例不正常引起缗钱状凝集，血清中存在高分子聚合物的血浆扩容剂引起假阳性。

5、试验系统被污染。

（二）次侧端不相合1、供血者血浆中存在针对病人红细胞抗原的抗体。

2、病人与供血者的ABO血型不相合。

3、病人的红细胞已经包被了抗体，直接抗人球蛋白试验阳性。

4、抗筛阴性，而次侧不合多由自身抗体引起（此是抗人球配血不合，而聚凝胺配血通过可输血）。

（三）配血不合的主要因素1、血型是否正确。

疑难血型鉴定与疑难交叉配血1、疑难血型鉴定疑难血型就是一种血型难以检定或判定（正反定型不一致）得现象,多由血型抗原减弱形成亚型、疾病原因引起抗体减弱或部分血型系统罕见表型等原因引起。

因此,疑难血型鉴定主要从弱抗原、弱抗体与特殊抗原或抗体检测角度出发，结合血型血清学与分子生物学研究方法对患者样本进行检测。

而对于不规则抗体筛查与鉴定，主要就是对抗体种类与特性进行研究，尤其就是利用吸收/放散试验对同时存在多种同种抗体或自身抗体进行分离鉴定，从而较为准确得分析患者血清抗体得特异性。

在工作中遇到此类情况时，应按照以下步骤进行分析与处理：(１)分析可能存在得原因先排除人为操作因素,再通过了解患者临床资料分析可能得原因，主要包括抗原类影响因素与抗体类影响因素，抗原类影响因素一般包括ABO亚型、血液病、骨髓移植等,抗体类影响因素一般包括不规则抗体、药物抗体、先天抗体缺失、丙种球蛋白过低、冷凝集素等。

（2）设计实验进行验证疑难血型鉴定流程见流程图1。

流程图1 疑难血型鉴定流程2014年１月，在工作中发现正反定型结果不符样本一例,经一系列血清学试验确证该患者为P１Pｋ血型系统得ｐ表型，经分子生物学基因测序,初步推断Ａ4GALT 基因第3外显子得９０3Ｃ＞G突变就是患者p表型形成得分子生物学基础,该研究成果从不同角度与深度撰写论文,先后发表《临床军医杂志》与《中国输血杂志》论文各一篇，并由此逐步展开疑难血型鉴定。

在此之后得工作中，通过阅读文献自修学习,鉴定出Am、Bm、B３等血型亚型，形成了一套相对完整得疑难血型鉴定思路与流程。

２014年2月与2015年10月，在工作中分别遇到一例反复进行输血治疗得患者,经一系列血清学试验，确证此两例患者均因多次输血治疗而产生多种不规则抗体，该研究成果先后以论文形式发表于《临床军医杂志》。

在后期工作中，通过对解放军174医院住院患者不规则抗体筛查与鉴定结果进行分析，对厦门地区住院患者不规则抗体得分布特征有了较为清晰得了解，该研究成果以论文形式发表于《国际医药卫生导报》,并形成了一套相对完整得不规则抗体筛查与鉴定流程。

疑难血型鉴定和疑难交叉配血1.疑难血型鉴定疑难血型是一种血型难以检定或判定（正反定型不一致）的现象，多由血型抗原减弱形成亚型、疾病原因引起抗体减弱或部分血型系统罕见表型等原因引起。

因此，疑难血型鉴定主要从弱抗原、弱抗体和特殊抗原或抗体检测角度出发，结合血型血清学和分子生物学研究方法对患者样本进行检测。

而对于不规则抗体筛查和鉴定，主要是对抗体种类和特性进行研究，尤其是利用吸收/放散试验对同时存在多种同种抗体或自身抗体进行分离鉴定，从而较为准确的分析患者血清抗体的特异性。

在工作中遇到此类情况时，应按照以下步骤进行分析和处理：（1）分析可能存在的原因先排除人为操作因素，再通过了解患者临床资料分析可能的原因，主要包括抗原类影响因素和抗体类影响因素，抗原类影响因素一般包括ABO亚型、血液病、骨髓移植等，抗体类影响因素一般包括不规则抗体、药物抗体、先天抗体缺失、丙种球蛋白过低、冷凝集素等。

（2）设计实验进行验证疑难血型鉴定流程见流程图1。

流程图1 疑难血型鉴定流程2014年1月，在工作中发现正反定型结果不符样本一例，经一系列血清学试验确证该患者为P1Pk血型系统的p表型，经分子生物学基因测序，初步推断A4GALT 基因第3外显子的903C＞G突变是患者p表型形成的分子生物学基础，该研究成果从不同角度和深度撰写论文，先后发表《临床军医杂志》和《中国输血杂志》论文各一篇，并由此逐步展开疑难血型鉴定。

在此之后的工作中，通过阅读文献自修学习，鉴定出Am、Bm、B3等血型亚型，形成了一套相对完整的疑难血型鉴定思路和流程。

2014年2月和2015年10月，在工作中分别遇到一例反复进行输血治疗的患者，经一系列血清学试验，确证此两例患者均因多次输血治疗而产生多种不规则抗体，该研究成果先后以论文形式发表于《临床军医杂志》。

在后期工作中，通过对解放军174医院住院患者不规则抗体筛查和鉴定结果进行分析，对厦门地区住院患者不规则抗体的分布特征有了较为清晰的了解，该研究成果以论文形式发表于《国际医药卫生导报》，并形成了一套相对完整的不规则抗体筛查和鉴定流程。