MS培养基配方
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ms培养基配方表ms培养基是一种常用的细胞培养基,用于无菌条件下培养哺乳动物细胞,特别是鼠胚胎成纤维细胞(Mouse Embryo Fibroblast,MEF)。
它是由多种有机和无机化合物组成的复杂混合物,可以提供细胞生长所需的必需氨基酸、糖类、维生素和微量元素等营养物质。
同时,它还包含有机缓冲剂和盐类,可以调节培养品的 pH 值和离子浓度,保持培养条件的稳定性。
下面介绍 ms培养基的配方表:MS培养基水相1. 将1L 去离子水(DI水)加入1mol/L NaCl 至5mL2. 加入HEPES缓冲液(1mol/L)27.7g,调节至pH7.2-7.43. 加入葡萄糖25.0g,混合直至葡萄糖完全溶解4. 加入 L-谷氨酸1.42g,细胞培养I 类和 II 类所需濃度5. 加入 L-苏氨酸0.07g,细胞培养所需濃度6. 加入 L-半胱氨酸0.16g7. 加入 L-赖氨酸0.07g8. 加入 L-缬氨酸0.07g9. 加入L-异亮氨酸0.07g10. 加入L-亮氨酸0.14g11. 加入L-丙氨酸0.14g12. 加入L-天冬氨酸0.15g13. 加入L-芸香氨基酸0.42g14. 加入 L-色氨酸0.03g15. 加入 L-酪氨酸0.03g16. 加入 L-精氨酸0.17g17. 加入 L-组氨酸0.03g18. 加入 L-甘氨酸0.10gMS培养基固相1. 加入 NaHCO3(7.5%)4mL,细胞培养所需濃度2. 加入 4-(2-羟乙基)吡啶盐酸盐(HEP)2g,细胞培养所需濃度;过度使用可导致凝块形成3. 加入 MgSO4(7H2O)0.94g,细胞培养所需濃度4. 加入 KH2PO4 0.17g,细胞培养所需濃度5. 加入 NaH2PO4(H2O,2. H2O)0.19g,细胞培养所需濃度6. 加入 Na2HPO4(7H2O)3.05g,细胞培养所需濃度7. 加入次黄嘌呤(NEAA)1mL,必需的非必需氨基酸,促进细胞生长8. 加入乳酸钠2.72g,利用减少氧淤积,促进细胞生长9.加入硫酸铜子(10-5M))1mL,为MEF的细胞类型提供最佳的增生所需注:以上配方根据MS原始文献略作调整,如果在实验中出现差异,请根据实际情况微调。
MS 培养基配方1、配置MS母液母液配置:加热都是用温水浴加热,全部都要避光保存,用装乙醇的棕色瓶来保存在4度即可表2.1大量元素母液药品20x g/L 500ml(20 x)KNO338g 19gNH4NO333 g 16.5gMgSO4•7H2O7.4 g 3.7gCaCl2 6.644g 3.322gKH2PO4 3.4g 1.7g溶于200ml蒸馏水,定容至500ml 需要加热才能完全溶解CaCL2.2H2O 4.4g/L表2.2微量元素母液药品100x g/L 500ml(100x g/L)KIH3BO3MnSO4.4H2OZnSO4.7H2ONa2MoO4.2H2OGuSO4.5H2O CoCl2.6H2O 0.083g0.6222.3 g0.86 g0.025 g0.0025 g0.0025 g0.0415 g0.31 g1.115 g0.43 g0.0125 g0.00125 g0.00125 g溶于100ml蒸馏水,定容至500ml表2.3有机母液药品100x 1L500ml(100x)肌醇10g5g烟酸0.05g0.025gVB60.05g0.025gVB10.1g0.05g甘氨酸0.2g0.1g表2.4铁盐母液药品100x g/L500mlFeSO4•7H2O 2.78g 1.39gNa2-EDTA. 2H2O 3.73g 1.865g铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于100ml蒸馏水中,加热,(很重要)不断搅拌,溶解后,两液混合,加水定容至500ml,置于小口瓶中,贴上标签2、固体MS培养基材料•找到4种母液:大量元素,微量元素,有机微量元素,铁盐母液•蔗糖,琼脂锥形瓶MS培养基配方:母液都稀释至1xMS培养基配方(1L)母液体积或重量(1L) 200ml大量元素20x50mL 10ml铁盐100x 微量100x 10mL 2ml 10mL 2ml有机100x10mL 2ml 蔗糖15g(15g/L)3g琼脂8g(8g/L) 1.6gPH先调至 5.85-5.88,最终灭菌后pH接近5.81)。
MS 培养基一、大量元素母液1:大量A母液2:大量B母液3:Fe盐注:配制顺序如下1. 称取3.73 g Na2-EDTA•2H2O溶解于200 ml去离子水中,并置于70℃预热(A);2. 称取2.78 g FeSO4•7H2O溶解于200 ml去离子水中(B);3. 将B缓慢倒入A中混合,边倒边搅动,置于70 ℃水浴锅中螯合2 h;4. 冷却后定容至1 L。
二、微量元素母液4:微量三、有机物质母液5:有机(不含肌醇)℃注:配固体培养基可在调pH后加适量Agar或Phytagel;肌醇也可加入有机母液。
四、抗生素和激素母液试剂名称配制方法母液浓度Amp(氨苄青霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌50 mg/ ml Km(卡那霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌50 mg/ ml Str(链霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌50 mg/ ml Cb(羧苄青霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌250 mg/ ml 6-BA (6-苄基嘌呤) 1M NaOH或盐酸溶解,双蒸水定容,高压灭菌 1 mg/ ml NAA(萘乙酸)1M NaOH溶解,双蒸水定容,高压灭菌 1 mg/ ml IAA 95% 乙醇溶解,双蒸水定容,过滤灭菌 1 mg/ ml五、乙酰丁香酮(Acetone-syringone, AS)称取196.2 mg AS用10 ml DMSO溶解,母液浓度100 mM,-20℃避光保存,工作浓度100 ~ 200 μM六、MS溶液的混合5种母液分别依次加入到800 ml蒸馏水中,混匀后加入肌醇、蔗糖和能高压灭菌的激素(6-BA和NAA),定溶至1000 ml,用1M NaOH调pH至5.8。
最后加Phytagel (Sigma)4.4g或Agar 10g。
灭菌完后,在培养基凝固前加入AS或抗生素及不能高压灭菌的激素(IAA)。
植物组织培养MS培养基配方MS培养基主要包括两部分:无机盐和有机物。
无机盐部分的配方如下:1.氮源:氮源通常由硝酸铵(NH4NO3)、硝酸钾(KNO3)和硫酸铵((NH4)2SO4)组成。
氮源的浓度通常为20-30mM。
2.磷酸盐:磷酸盐通常由二氢二钠磷酸盐(NaH2PO4)组成,浓度为10mM。
3.钠盐:MS培养基中含有钠盐,通常由硝酸钠(NaNO3)和硝酸钾(KNO3)组成。
钙盐的浓度为2.0mM,钾盐的浓度为1.0mM。
4.钠盐:MS培养基中含有钠盐,通常由硝酸钠(NaNO3)和硝酸钾(KNO3)组成。
钙盐的浓度为2.0mM,钾盐的浓度为1.0mM。
5.硫酸镁:硫酸镁(MgSO4)的浓度为1.0mM。
6.磷酸铵铁:磷酸铵铁(FeSO4·(NH4)2SO4)的浓度为27.8μM。
7.各种微量元素:包括锌、铜、锰、硼、钼、钴和镍等微量元素。
这些微量元素的浓度通常在微摩尔(μM)级别。
有机物部分的配方如下:1.蔗糖:蔗糖是植物培养基中最常用的碳源,浓度通常为30g/L。
2. 维生素:通常使用的维生素有二硝基地巴泼甲素(2,4-D)和吲哚-3-乙酸(IAA)。
它们的浓度通常在0.1-2.0 mg/L之间。
3. 激素:常用的激素包括植物生长素(BA)和乙烯利(2,4-D)。
它们的浓度通常在1.0-10.0 mg/L之间。
4.混合物:还可以加入一些有机物混合物,如胆固醇、烟酸和核酸酸等。
值得注意的是,这只是MS培养基的一个基本配方,根据具体的研究目的和植物种类的不同,还可以对该配方进行一些调整和优化。
总结起来,MS培养基是一种常用的植物组织培养基,主要用于植物生长和增殖。
其配方包括无机盐和有机物两部分,无机盐包括氮源、磷酸盐、钙盐、镁盐、磷酸铵铁和微量元素等;有机物包括蔗糖、维生素和激素等。
通过适当调整这些配方的浓度和比例,可以实现不同植物的生长和增殖需求。