食品中色素讲义的测定

分光光度法测量溶液中色素含量一、引言（实验背景）在物质检测分析领域，对样品测试时往往直接采用化学方法，或先采用化学方法预处理后再采用物理方法进行测试分析，这样都要采用化学试剂，对环境造成二次污染。

而纯物理方法在整个测量过程没有化学反应，更多依赖于物理手段和数学处理来解决问题，符合环境友好型社会的发展需求，受到国家的重视和社会各界的欢迎。

随着测试方法的转变，人才需求也随之发生转变。

以往利用化学分析方法进行物质检测分析，需要大批量化学、生物相关专业人才。

而随着物理测试方法的广泛采用，光学、光电专业人才需求越来越大。

为了顺应社会需求，适应形势变化，光学、光电专业学生不仅要掌握制造分光光度计的技术，还要创新使用方法，通过实验训练积累知识和经验，以便达到社会人才需求标准，为推动社会的技术进步和发展作贡献。

二、实验目的与内容食品中常添加色素使外观好看而吸引消费者，特别是食品饮料中常常使用人工色素配制成各种颜色。

而毒理学证明化学合成色素有不同程度的毒性，有的甚至可致癌。

各国相继制订了法规，对食品中合成色素的使用做了限量规定。

本实验目的就是要采用光学方法测出溶液中常用的色素含量。

溶液中常使用三种色素显示黄色、橙色或红色：柠檬黄、日落黄和胭脂红，本实验要求：（1）实验前一周进行预习查资料，设计出使用分光光度计同时测出溶液中柠檬黄、日落黄和胭脂红的含量的实验方案，实验方案包括：1）实验所需条件，包括仪器设备、材料试剂、工具器材等；2）配制哪些溶液？测量哪些数据？并设计好记录数据的表格以及主要实验步骤（注：分光光度计输出的数据量较大，每个样品的测量结果以文件形式保存，请先拟好文件名，填入表格，以免搞错）；3）由实验数据计算柠檬黄、日落黄和胭脂红的含量的方法，并说明所需使用的软件或拟编写的程序。

实验设计方案至少提前一天（需要特殊材料的方案须提前一周）交给任课老师审阅，通过审阅后方可进行实验。

(2)实验时，按照所设计实验方案，配制所需溶液，并使用分光光度计测出相应的光谱数据；数据记录单须交老师审查签字。

食品颜色的测定测定食品颜色时的注意事项凡液体食品或有透明感的食品，在用光照射时，不仅有反射光，还有一部分为透射光。

因此，使用仪器的测定值往往与眼睛的判断产生差异。

在测定固体食品时，往往颜色并不均匀，眼睛的观察往往是总体印象。

用仪器测定时，往往只限于被测点的较小面积，所以要注意到仪器测值与目测颜色印象的差异。

测定颜色的方法不同，或使用仪器不同，都可能造成颜色值的不同。

试样的制作对于固体食品，测定时要尽量使表面平整。

在可能条件下，最好把表面压平。

对于糊状食品，最好采用适当的方法，使食品中各成分混合均匀。

这样眼睛观察值和仪器测定值就比较一致。

例如对果蔬酱、汤汁、调味汁之类，可以在不使其变质前提下适当均质处处理。

颗粒食品测定时，尽量使颗粒大小一致。

为此，可采用过筛或适当破碎其中大块的方法处理。

颗粒大小一致可减少测定值的偏差。

测定粉末食品时，可以把测定表面压平。

果汁类相当透明液体颜色的测定，应使试样面积大于光照射面积，否则光会散射出去。

当测定透过色光时，应尽量将试样中的悬浮颗粒用过滤或离心分离的方法除去。

对颜色不均匀的平面或混有颜色不同颗粒的食品，可以使试样在测定时旋转，以达到混色效果。

颜色的测定（1）比色分析法指应用单色性较差的光（即波长范围较宽）与被测物质作用而建立的分析方法。

只在可见光区域内使用，可分为目视比色法、光电比色法。

目视比色法目视比色法指用眼观察比较溶液颜色深浅来确定物质含量或溶液浓度的方法。

常用的是标准系列法，有标准色卡对照法和标准液比较法等。

测定时要注意观察的位置和光源、试样的摆放位置。

图为一部分测定图例。

中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载体，致力于搭建产研结合的桥梁。

以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。

标准色卡对照法国际上出版的标准色卡，一般都是根据色彩图制定的。

常见的有孟塞尔色图、匀色空间色、麦里与鲍尔色典和日本的标准色卡（CC5000）等。

实验八色素的分离(层析法)一、目的要求1．掌握薄层板的制备及薄层层析的操作方法。

2．掌握吸附剂活度测定的原理及方法。

3. 掌握偶氮苯和苏丹红（III）的分离方法二、实验原理薄层层析是将吸附剂或者支持剂（有时加入固化剂）均匀地铺在一块玻璃上，形成薄层。

把欲分离的样品点在薄层板的一端，然后将点样端浸入适宜的展开剂中, 在密闭的层析缸中展开，使混合物得以分离的方法。

由于层析在薄层上进行故而得名。

薄层层析是一种微量、快速的层析方法。

它不仅可以用于纯物质的鉴定，也可用于混合物的分离、提纯及含量的测定，还可以通过薄层层析来摸索和确定柱层析时的洗脱条件。

薄层层析根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素、硅胶、硅藻土)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。

薄层层析中以吸附薄层为多用，吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶（氧化铝的活化温度为150℃－160℃，硅胶的活化温度为105℃－110℃）。

吸附薄层主要是利用吸附剂对样品中各成分吸附能力不同，及展开剂对它们的解吸附能力的不同，使各成分达到分离。

分配薄层层析在展开过程中，各成分在固定相和流动相之间作连续不断的分配，由于各成分在两相间的分配系数不同，因而可以达到相互分离的目的。

薄层层析选择展开剂视被分离物的极性及支持剂的性质而定。

如果薄层层析所用的支持剂是吸附剂，在同一吸附剂上，不同化合物的吸附性质有如下规律：1.饱和碳氢化合物不易被吸附；2.不饱和碳氢化合物易被吸附，分子中双键愈多，则吸附得愈紧密；3.当碳氢化合物被一个功能基取代后，吸附性增大。

吸附性较大的化合物，一般需用极性较大的溶剂才能推动它。

选择展开剂的另一个依据是溶剂的极性大小。

极性大的化合物需用极性大的展开剂，极性小的化合物需用极性小的展开剂。

一般情况下，先选用单一展开剂如苯、氯仿、乙醇等，如发现样品个组分的R值较大，可改用或加入适量极性小的展开剂如石油醚等。

标题：食用色素（亮兰、苋菜红、柠檬黄）检验规程
分发部门：总经理室、质量技术部、行政部（存档）
食用色素（亮兰、苋菜红、柠檬黄）检验规程
一目的
本规程的制定是为了规范食用色素的检验，确保检验结果的准确、可靠。

二范围
本标准规定了食用色素的检测方法和操作要求；检测项目根据天平牌果味维C含片中相关食用色素的原料标准制定。

QC检验员对本规程实施负责，QA负责监督。

三规程
感官检测
打开产品包装，通过外观检查判定：
亮兰蓝紫色粉末。

柠檬黄橙黄色粉末。

苋菜红红褐色至暗红色粉末。

食品中合成着色剂的测定方法食品中合成着色剂主要是以人工方法进行化学合成的有机色素类，按其化学结构不同可分为偶氮类色素和非偶氮类色素，偶氮类色素按溶解性不同又可分为油溶性和水溶性两类。

合成类色素中还包括色淀。

食品中合成着色剂的种类很多，国际上允许使用的有30余种，我国允许使用的主要有苋菜红、胭脂红、赤藓红、新红、玫瑰红、柠檬黄、日落黄、亮蓝、靛蓝、牢固绿等。

6.1高效液相色谱法1)原理食品中的合成着色剂经聚酰胺吸附法或液一液分配法提取后，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。

利用高效液相色谱法测定食品中合成着色剂的最小检出量为：新红5ng、柠檬黄4ng、苋菜红6ng、胭脂红8ng、日落黄7ng、赤藓红18ng、亮蓝26ng。

当进样量为0.025g样品时，最低检出浓度分别为0.2、0.16、0.24、0.32、0.28、0.72、1.04mg／kg。

2)仪器和试剂(1)仪器高效液相色谱仪，带紫外检测器。

(2)试剂⑴正己烷。

分析纯。

⑵盐酸。

分析纯。

⑶乙酸。

⑷甲醇：经滤膜(0.45μm)过滤。

⑸聚酰胺粉(尼龙6)：过200目筛。

⑹乙酸铵溶液(0.02mol／L)：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经滤膜(0.45μm)过滤。

⑺氨水：量取氨水2mL，加水至100mL，混匀。

⑻甲醇一甲酸(6+4)溶液：量取甲醇60mL，甲酸40mL，混匀。

⑼柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸(C6H8O7•H2O)，加水至100mL，溶解混匀。

⑽无水乙醇一氨水一水(7+2+1)溶液：量取无水乙醇70mL、氨水20mL、水10mL，混匀。

⑾三正辛胺正丁醇溶液(5％)：量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL，混匀。

⑿饱和硫酸钠溶液。

⒀pH6的水：水加柠檬酸溶液调pH到6。

⒁合成着色剂标准溶液：准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝各0.1000g，置100mL容量瓶中，加pH6的水到刻度。

学号姓名食品中山梨酸、苯甲酸的测定一、实验目的1、学会检测食品中添加剂的原理方法。

2、了解高效液相色谱分析的基本原理。

3、掌握采用高效液相色谱法进行定量的基本方法。

二、基本原理食品试样加温除去二氧化碳和乙醇，调节pH至中性，过滤后进高效液相色谱仪，可以检测其中的山梨酸与苯甲酸含量。

高效液相色谱根据所使用的固定相和分离机理一般可以分为分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱和空间排阻色谱等。

在分配色谱中组分在色谱柱上的保留程度取决于它在固定相和流动相之间的分配系数K：K 组分在固定相中的浓度组分在流动相中的浓度显然，K值越大，组分在固定相中的保留时间越长，固定相与流动相的极性相差也越大。

根据所使用的固定相和流动相，又分为正相液相色谱和反相液相色谱。

其中，反相液相色谱的分离是以样品的疏水结构的差异为基础的。

样品的极性越大，保留值越小。

由于在一定的实验条件下，组分的保留值保持恒定并且峰面积与组分的浓度成正比。

因此在相同的色谱条件下，测定组分在色谱图上的保留时间t R和峰面积A，即可直接用t R和A进行定性定量。

三、仪器与试剂1、Agilent 1100高效液相色谱仪；2、色谱柱：ODS C18柱250×4.6 mm；3、流动相：甲醇: 0.02 mol/L乙酸胺=5: 95；4、进样器：25 μL；5、50 mm的0.45 µm 油膜和水膜滤膜，0.45 µm水膜一次性过滤头；6、色谱纯甲醇、乙酸铵、氨水（1：1）、苯甲酸、山梨酸、醋酸、碳酸氢钠、Apple贵妃醋爽、雪碧；7、10 mL容量瓶20个；25 mL容量瓶20个；苯甲酸：山梨酸：CH3-CH=CH-CH=CH-COOH四、实验步骤1、储备液的配置① 20 g/L碳酸氢钠溶液：称取2 g碳酸氢钠（优级纯），加水至100 mL，振摇溶解；②苯甲酸标准储备液：准确称取0.1000 g苯甲酸，加20 g/L碳酸氢钠溶液5mL，加热溶解，转入100 mL容量瓶中，加水定容至100 mL，苯甲酸含量为1 mg/mL作为储备液；为什么要加碳酸氢钠？碳酸氢钠呈弱碱性，而进液相的样品不能过酸或过碱。

食品中红曲色素的测定中华人民共和国国家标准G B／T5009．150—2003代替G B／T17336--19982003—08-11发布食品中红曲色素的测定D e t e r m i n a t i o n o f m o n a s c a s c o l o u r s i11f o o d s2004—01·01实施中国国家标准化管理委员会本标准代替G B／T1’7336一。

1998((食品中红曲色素的测定》。

本标准按照G B／T20001．4—2001((标准编写规则第4部分：了修改。

本标准由中华人民共和围卫生部提出并归口。

本标准起草单位；中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究国药品生物制品检定所。

本标准主要起草人：李严巍、王梅、鲁雁飞、杨祖英、刘宝灵。

原标准于1998年首次发布，本次为第一次修订。

G B／T5009．150—2003红曲色素作为食品着色剂已经列入G B2760--1996~-品添加剂使用卫生标准》，按正常需要量加入。

1范围食品中红曲色素的测定本标准规定了用薄层层析方法测定食品中红曲色素。

本标准适用于食品中红曲色素的测定。

G B I T5009．150—20032原理试样中红曲色素经提取，净化后，T L C分离，与标准T L C板比较定性，选用分配系数在两相中不同而达到分离的目的。

3试剂3．1硅胶：柱层析用，120目～180目。

3．2硅胶：G F254。

3．3甲醇。

3．4正己烷+乙酸乙酯+甲醇(5+3+2)。

3．5三氯甲烷+甲醇(8+3)。

3．6海砂：先用1+10盐酸煮沸15r a i n，用水洗至中性，再于105℃干燥，贮于具塞的玻璃瓶中，备用·3．7石油醚：沸程60"C～90℃。

3．8红曲色素的标准溶液：取1g红曲色素，加入30m L甲醇溶解，然后加入5g硅胶，拌匀，装入50g硅胶层析柱中(湿法装柱)。

将拌有硅胶的红曲色素装在柱顶，后用甲醇洗脱；直至洗脱下来的甲醇无色为止，然后减压浓缩至膏状，于60℃～70℃烘箱中烘干，约剩下0．89g的红曲色素作为薄层分析用标准品。