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浅谈食品检测中合成着色剂的测定方法摘要：俗话说“民以食为先，食以安为先”。
随着近些年一些食品安全事故的相继曝光，食品安全成为全社会普遍关注的一个热点话题，食品检测作为把控食品安全的一道重要关卡，它的重要性不言而喻。
在食品监测的诸多项目里，对于食品着色剂的检测是其中的一个重要内容，因为它的安全性直接关乎广大消费者的饮食安全，故而备受重视。
鉴于此种状况，本文作者全面而系统的分析了食品安全检测中关于着色剂的检测方法，希望能对提高食品安全监测有所裨益。
不妥之处，敬请相关专业人士批评指正。
关键词：食品检测；合成着色剂；测定方法食品安全大如天，而与食品安全相对应的则是食品安全危害，它大致可以分为以下几类：物理危害、化学危害和生物危害。
我们目前所接触到的食品安全事故多数是化学危害。
按照我国政府颁布的关于食品添加剂的相关法律规定，对于允许使用的食品添加剂按照规定的使用剂量添加使用，一般是不会对人产生危害的，但是如果使用了在食品添加剂名单之外的其他添加剂，或者是明确禁止使用的添加剂，或者是超过规定剂量使用了允许使用的添加剂，这些措施都会造成食品安全事故危害的发生。
一、何为合成着色剂作为食品添加剂使用的着色剂，它的主要功能就是用来改善食品的色彩，使食品看起来色泽更加艳丽，以达到在视觉上刺激人们食欲的目的，它是一种相对比较传统的食品色彩调节方法。
根据有关机构的市场调查发现，消费者在购买一些无法直接试吃的食品时，一般会首先考虑食品的色、香、味、形等物理特征。
另外，根据一些科研就够的研究显示，食品的色彩对人们食欲的有刺激作用居于其他物理特征之首。
故而，食品生产机构为了增加产品的销量，于是就在食品色彩上大做文章，食品着色剂也就被广泛的应用于各种食品中。
如果人体摄入过多则会产生非常大的危害。
若想对各种各样的食品进行是否含有合成着色剂的安全检测，那么就必须采用恰当的检测方式。
加入食品中的着色剂来源各不相同，有些是天然形成的，有些则是后期经过化学合成的，目前在使用的食品着色剂就包括上述两种。
谷物食品中合成着色剂的测定–碳酸氢钠提取法Determination of synthetic colorant in grain products -Extracted by sodium bicarbonate谷物食品中合成着色剂的测定–碳酸氢钠提取法1 范围本标准规定了玉米渣、玉米片、黑米、颜色挂面、小米、玉米糁子、发糕、彩色馒头、糙米，燕麦（片）等谷物加工品中六种合成着色剂的提取与测定。
本标准适用于淀粉含量高的谷类食物中六种合成着色剂的测定。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的应用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB 5009.35 《食品安全国家标准食品中合成着色剂的测定》3 原理试样用碱性溶液体系提取离心后，阴离子交换柱进行净化，25%氨水甲醇洗脱，制成水溶液,注入高效液相色谱仪,经反相色谱分离,根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。
4 试剂和材料4.1 材料4.1.1 水为GB/T 6682规定的二级水。
4.1.250 mL塑料离心管。
4.1.3 0.22μm亲水相滤膜。
4.1.410mL圆底玻璃管。
4.1.5无针头注射器。
4.1.6Cleanert PWAX 150mg/6mL。
4.1.7100μL、200μL、500μL、1mL和5mL移液器。
4.1.8棕色的玻璃瓶（带螺旋盖），容量5 mL。
4.2 试剂4.2.1甲醇（(CH3OH)：色谱纯。
4.2.2氨水(NH3•H2O)：分析纯。
4.2.3碳酸氢钠(NaHCO3)：优级纯。
4.2.4乙酸铵(CH3COONH4) ：优级纯。
4.2.5甲酸( HCOOH) ：优级纯。
4.3 试剂配制4.3.1乙酸铵溶液(0.02mol/L):称取1.54g乙酸铵,用水溶解后，定容至1000mL,摇匀后经0.45μm微孔滤膜过滤后使用。
4.3.2氨水甲醇（25%）：取250mL氨水，用甲醇定容至1000 mL，摇匀待用。
实习六食品中人工合成色素的测定第一篇：实习六食品中人工合成色素的测定实习六食品中人工合成色素的测定（一）原理聚酰胺是一种高分子化合物，又称“尼龙6”，在酸性条件下可与水容性酸性染料牢固结合；在碱性条件下则可解吸色素，用纸层析法或薄层层析法进行分离鉴别后，再与标准比较予以定性、定量。
（二）试剂1．聚酰胺粉（尼龙6）200目 2．正丁醇 3．无水乙醇 4． 1%氨溶液5．乙醇-氨液（9：1）6． 20%柠檬酸7．0.1%色素标准贮备液(1mg/ml):精确称取商品色素胭脂红、苋菜红0.1克容于蒸馏水，稀释至100毫升。
8．展开剂（临用现配）正丁醇：无水乙醇：1%氨水（6：2：3）（三）仪器 9．沙氏漏斗-G3 10．抽滤瓶：500ml 11．100 ml，500 ml 12．血红蛋白吸管 13．展开缸14．玻璃水泵15．带塞刻度比色管：10 ml 16．恒温水浴17．量筒：25 ml，50 ml 18．天平19．吹风机20．吸管：1 ml 21．白瓷蒸发皿 22．中速层吸滤纸 23．温度计24．PH试纸 25．玻璃棒 26．滴管(四)操作方法1.样品处理（汽水类样品）：将样品用两个杯子反复倾倒100次除去CO2，精确吸取样品50 ml放入100 ml烧杯中，加热到70℃，备用。
2．吸附去杂质：称取聚酰氨粉1g，加少量水调成糊状后倒入前处理的70℃的样品中，充分搅拌使样液色素全部被吸附，将样液全部移入沙氏-G3漏斗抽滤，用300ml 70℃ PH=4的蒸馏水分多次洗涤沉淀物，至洗液与原蒸馏水PH相同为止（洗涤过程必须充分搅拌，使所用的洗涤液与聚酰氨粉充分接触）。
3.解吸: 用乙醇氨溶液15mlf分三次洗涤色素，解吸过程时时搅拌直至滤出液无色为止并收集全部解吸液。
4．浓缩: 将色素解吸液置于蒸发皿中在80℃水浴上浓缩至0.5-1ml，转入10ml刻度试管中，用少量50%乙醇洗涤蒸发皿，洗液并入并入刻度试管中。
食品中人工合成着色剂的测定解决方案（参考GB/T 5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》）合成色素以苯、甲苯、萘等化工产品为原料，经过磺化、硝化、卤化、偶氮化等一系列有机反应制成合成着色剂，合成着色剂有一定毒性，过多食用会危害人体健康，但由于人工合成着色剂成本低、色泽鲜艳、着色力强、色调多样，故被广泛使用；合成着色剂有严格的控制使用范围和最大使用量，因此食品中合成色素的准确测定具有重要意义。
对于食品中合成着色剂的检测目前可借鉴国标GB/T 5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》，分别采用高效液相色谱法，薄层色谱法，示波极谱法进行定性定量分析，其中高效液相色谱法前处理采用聚酰胺吸附法或液-液分配法进行色素提取。
迪马科技在参考国标的基础上，推出食品中人工合成着色剂的解决方案，该方案前处理采用聚合物基质亲水亲脂平衡反相固相萃取柱ProElut PLS进行色素的提取，比国标方法更简便易行，提取效率更高，净化效果更好；同时对高效液相色谱检测方法进行了改进，分别采用迪马科技Inspire和Diamonsil两款反相色谱柱，梯度洗脱检测食品中人工合成着色剂，分离效果更优异，增加定性定量的准确性。
该方案特别适用于食品中柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红和亮蓝等人工合成着色剂的检测。
以下为迪马科技开发的食品中人工合成着色剂的检测解决方案，供您参考！1 样品准备1.1 可乐样品取1 g可乐(加热超声驱除二氧化碳)，40 μL甲酸于试管中，摇匀，作为上样液待净化。
1.2 红薯粉样品(1) 取2 g样品与20 mL提取剂*混合，涡旋2 min，超声提取10 min，6000 rpm 下离心3 min，收集上清液；(2) 将下层残留物依次用10 mL、10 mL提取剂重复提取两次，合并三次提取上清液；(3) 将上清液在45℃水浴条件下，减压蒸馏至6 mL，再加入80 μL甲酸，混匀，待净化。
提取剂*：氨水+70%乙醇（1+99，体积比）。
实习六食品中人工合成色素的测定（一）原理聚酰胺是一种高分子化合物，又称“尼龙6”，在酸性条件下可与水容性酸性染料牢固结合；在碱性条件下则可解吸色素，用纸层析法或薄层层析法进行分离鉴别后，再与标准比较予以定性、定量。
（二）试剂1．聚酰胺粉（尼龙6）200目2．正丁醇3．无水乙醇4．1%氨溶液5．乙醇-氨液（9：1）6．20%柠檬酸7．0.1%色素标准贮备液(1mg/ml):精确称取商品色素胭脂红、苋菜红0.1克容于蒸馏水，稀释至100毫升。
8．展开剂（临用现配）正丁醇：无水乙醇：1%氨水（6：2：3）（三）仪器9．沙氏漏斗-G310．抽滤瓶：500ml11．100 ml， 500 ml12．血红蛋白吸管13．展开缸14．玻璃水泵15．带塞刻度比色管：10 ml16．恒温水浴17．量筒：25 ml， 50 ml18．天平19．吹风机20．吸管：1 ml21．白瓷蒸发皿22．中速层吸滤纸23．温度计24．PH试纸25．玻璃棒26．滴管(四)操作方法1. 样品处理（汽水类样品）：将样品用两个杯子反复倾倒100次除去CO2，精确吸取样品50 ml放入100 ml烧杯中，加热到70℃，备用。
2．吸附去杂质：称取聚酰氨粉1g，加少量水调成糊状后倒入前处理的70℃的样品中，充分搅拌使样液色素全部被吸附，将样液全部移入沙氏-G3漏斗抽滤，用300ml 70℃ PH=4的蒸馏水分多次洗涤沉淀物，至洗液与原蒸馏水PH相同为止（洗涤过程必须充分搅拌，使所用的洗涤液与聚酰氨粉充分接触）。
3. 解吸: 用乙醇氨溶液15mlf分三次洗涤色素，解吸过程时时搅拌直至滤出液无色为止并收集全部解吸液。
4．浓缩: 将色素解吸液置于蒸发皿中在80℃水浴上浓缩至0.5-1ml，转入10ml刻度试管中，用少量50%乙醇洗涤蒸发皿，洗液并入并入刻度试管中。
5纸层析定性:为了判断样品中存在有几种色素以及是什么色素，必须进行纸层析进行鉴定。
经上述浓缩后样品色素溶液于新华中速层析滤纸（8cm*16cm）距底边2cm的基线上点样点样点的直径应不超过2毫米为宜，样点间距离以及左右纸边各距2厘米。
液相色谱法测定食品中合成着色剂作者：***来源：《食品安全导刊·下》2024年第05期摘要：目的：建立一种液相色谱法测定食品中合成着色剂的方法。
方法：用乙醇氨水溶液提取食品中的合成着色剂，经固相萃取柱净化后，用液相色谱仪（配二極管阵列检测器）测定，外标法定量。
结果：11种合成着色剂在0.2～10.0 μg·mL-1线性关系良好，线性相关系数为0.999 4～1.000 0，加标回收率为94.2%～109.6%，相对标准偏差在0.55%～5.52%。
柠檬黄、喹啉黄、日落黄、胭脂红、新红和赤藓红的检出限均为0.5 mg·kg-1，定量限均为1.5 mg·kg-1；苋菜红、诱惑红、亮蓝、酸性红和靛蓝的检出限均为0.3 mg·kg-1，定量限均为1.0 mg·kg-1。
结论：该方法的重复性好、灵敏度高、实用性强，可以同时测定食品中多种合成着色剂的含量。
关键词：合成着色剂；液相色谱法；固相萃取Determination of Synthetic Colorants in Food by Liquid ChromatographyZHU Xiaolei（Guangdong Dongguan Quality Supervision & Testing Center， Dongguan 523000， China）Abstract： Objective： To establish a method for the determination of synthetic colorants in food by liquid chromatography. Method： The synthetic colorants in food were extracted with ethanol ammonia solution， purified by solid phase extraction column， determined by liquid chromatography （ with diode array detector ）， and quantified by external standard method. Result： The linear range of 11 synthetic colorants was 0.2～10.0 μg·mL-1， the linear correlation coefficient was 0.999 4～1.000 0， the recovery rate was 94.2%～109.6%， and the relative standard deviation was 0.55%～5.52%. The detection limits of tartrazine， quinoline yellow， sunset yellow， carmine， new red and erythrosine were 0.5 mg·kg-1， and the limits of quantification were 1.5 mg·kg-1. The limits of detection of amaranth， allura red， brilliant blue， acid red and indigo were 0.3 mg·kg-1， and the limits of quantitation were1.0 mg·kg-1. Conclusion： The method has good repeatability， high sensitivity and strong practicability， and can simultaneously determine the content of various synthetic colorants in food.Keywords： synthetic colorants; liquid chromatography; solid-phase extraction着色剂在食品加工过程中可以改善食品的口感和外观，但过量使用会对人们的健康造成不良影响。
食品中合成着色剂的测定摘要:食品中合成着色剂高效液相色谱的测定。
方法采用c18(10?%em,4.6mm??50mm)不锈钢色谱柱，流动相为乙酸铵+甲醇，流速1.0ml/min，检测波长254nm，柱温设为23℃，进样量20?%el。
本检测方法对gb/t5009.35-2003食品中合成着色剂的测定进一步细化，使用着色剂小柱代替gb/t5009.35-2003食品中合成着色剂的测定中色素提取，检测时间缩短，检测结果精确度提高，具有一定的实践指导作用。
关键词:食品合成着色剂1、前言食品中合成着色剂是一种已知的有害物质，其随食物被摄入人体内后,很快被肠道吸收。
由于着色剂在人体中具有累积作用,长期过量摄入直接危害到人们的健康特别是对少年儿童的健康危害更为严重，孩子的肝脏解毒和代谢功能都比较脆弱，如果摄入过多的人工合成色素，会加重肝脏及胃肠道的负担，干扰体内正常的代谢反应，出现不同程度的食欲不振、消化不良、腹痛、腹泻等症状2、原理样品经水溶解，通过活化的着色剂小柱吸附色素，用洗脱试剂洗脱，用高效液相色谱分离，紫外检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。
3、试验部分3.1所用试剂3.1.1水：符合gb/t6682规定的一级水要求3.1.2 甲醇：色谱纯。
3.1.3 氨水：分析纯3.1.4乙酸铵溶液（0.02mol/l）：称取1.54g乙酸铵加水至1000ml 溶解，经0.45?%em滤膜过滤3.1.5标准品：柠檬黄、日落黄、胭脂红、苋菜红、亮蓝3.1.6氨化甲醇5%：95ml甲醇加5ml氨水3.2仪器与设备3.2.1高效液相色谱仪3.2.2色谱工作站3.2.3紫外检测器3.2.4 c18(10?%em,4.6mm??50mm)不锈钢色谱柱3.2.5固相萃取装置3.2.6着色剂小柱3.2.7氮吹仪3.2.8漩涡混合器3.2.9高速离心机3.3方法3.3.1合成着色剂标准溶液浓度的配制准确称取标准品着色剂各100mg,置于100 ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,该贮备液浓度1mg/ml。
色素的提取试剂及原理
木质纤维素着色素提取试剂是一种含C_18H_31Cl_2O_2分子量371.00的无色晶体，
它可用于提取木质纤维素中的着色物质，以表示木质纤维素材料中的着色素含量。
提取原理：木质纤维素着色素提取试剂是一种有机提取剂，它能够选择性地与木质纤
维素材料中的着色物质形成稳定的疏水络合物，从而实现着色物质的提取。
由于木质纤维
素着色素提取试剂是一种有机溶剂，它能吸收着色物质并将其转化为水溶性色素，从而为
木质纤维素着色素提取提供了可行的方法。
提取方法：在提取着色物质之前，需要先将木质纤维素材料粉碎成米粒大小或更小，
以便于有机提取剂与材料表面相互作用。
然后将木质纤维素着色素提取试剂加入适量水中，搅拌均匀，将粉碎后的木质纤维素逐渐加入搅拌成的溶液中，再加入助搅剂搅拌均匀，使
木质纤维素被有机提取剂完全包覆，溶液中的木质纤维素着色物质最终被有机提取剂吸收。
最后，过滤出的懒毒液可以用来测定木质纤维素材料中的着色素含量。
着色物质提取的速率与提取温度、提取时间、木质纤维素着色素提取试剂浓度及木质
纤维素材料粒径等有关，这些参数必须优化以获得最大提取效率。
食用合成色素的测定核心提示：天然食品及食品原料多数本身具有特有的色泽和香味，人们在长期的生活习惯中也认识了各种食品应有的色泽，食品的色泽已经成为食品天然食品及食品原料多数本身具有特有的色泽和香味，人们在长期的生活习惯中也认识了各种食品应有的色泽，食品的色泽已经成为食品的一个重要感官指标。
然而，食品在保存及加工过程中，其色泽往往会有不同程度的变化，为了改善食品的色泽，使食品尽可能恢复原来的颜色，除采取一定护色措施外，往往还得添加一定量的食用色素，进行着色。
食用色素就来源可分成两大类：天然色素和合成色素天然色素的优缺点：1、优点：⑴其色素是从一些动物、植物组织中提取出来；⑵安全性高；2、缺点：⑴稳定性差（对光、热、酸、碱等条件敏感）；⑵着色能力差；⑶难以调出任意的色泽；⑷资源短缺，不能满足食品工业的需求；⑸价格昂贵。
合成色素优缺点：1、优点：⑴资源十分丰富（来自于煤焦油及其副产品）；⑵稳定性好、色泽鲜艳、着色力强、能调出任意颜色；⑶价格低廉；⑷应用广泛；2、缺点：⑴毒性较大（因为属合成所以毒性大，有的甚至致癌）；⑵食用剂量加以限制。
对合成色素在测定时采用的几大步骤如下：样品前处理→提纯→分离→鉴别（何种色素）→定量（此色素含量是否超标）⑴前处理方法有：前处理不外乎是将样品打浆或者将着色部分用刀刮下，定容、吸附、解吸等方法处理；⑵提纯的方法（1）羊毛染色法：此法应用较广泛，主要是简单，材料容易弄到，操作也方便。
缺点为：要在热的酸性条件下吸附色素，用氨溶液解吸色素时，往往色素起变化。
当溶液中含量低时（色素含量低），用羊毛染色法吸附色素不完全，回收率低；（2）聚酰胺粉法：此法是分离两种以上的色素，是目前比较理想的方法，因为食品中大多数使用拼色。
聚酰胺粉在酸性溶液中能与人工合成色素牢固地结合，并能在很稀的溶液中吸附色素，但对天然色素的吸附不紧密，能被甲醇-甲酸洗脱下来；中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载体，致力于搭建产研结合的桥梁。
食品中人工合成着色剂的测定摘要：在日常试验用HPLC测定食品品中人工合成着色剂的国家标准GB/T5009.35- 2003时，我们发现该方法测定高蛋白质油脂等固态样品的前处理方法以及梯度洗脱程序存在一定的不足，因此，对该方法的前处理以及梯度洗脱程序加以改进，使得样品前处理简便快捷，六种色素回收率均在90%以上，而且延长了色谱柱的寿命。
关键词：人工合成着色剂 HPLC 食品前处理Through daily test with HPLC determination food products in the artificial synthesis colors agent of national standard GB/T5009.35-2003， we found law determination high protein oil，solid samples of processing method and gradient wash program exists must of insufficient， therefore， on the method of processing and gradient wash program be improved， makes samples processing easy shortcut， six kind of pigment recovery are in 90% above， and extended the spectrum column of life人工合成着色剂作为一种添加剂广泛用于食品中，GB2760-2011对其使用有明确的限量标准，但在市场上却时有发现这些人工合成着色剂被滥用，如染色馒头，所以对它的检测监管是相当重要的，测定这些人工合成着色剂方法有高效液相色谱法、薄层色谱法等[1] ，但无论哪一种方法都涉及样品前处理。
国标法第一法是用HPLC测定合成着色剂，将食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和峰面积比较进行定量[1] 。
浅谈食品检测中合成着色剂的测定方法俗话说“人是铁，饭是钢，一顿不吃饿得慌”，可见食品对于人类的重要性。
随着全球经济的高速发展，食品安全成了民众关心的大事，如何才能确保食品安全则成为热点问题，其中作为食品安全的一种监控手段，食品检测的重要性就在过程中凸显出来了。
食品中的着色剂的检测是食品检测中的一项重要检测项目，受到了相关部门的高度关注。
鉴于此，作者全面分析了食品检测中合成着色剂的检测方法，以期提高食品检测的效率，保障食品安全。
标签：食品检测；合成着色剂；测定方法与食品安全相对的就是食品安全危害，食品安全危害可以大致分为生物危害、化学危害和物理危害。
食品添加剂就是化学危害的一个重要来源。
按照国家食品添加剂的管理规定，对允许使用的添加剂按照规定量添加使用不会对人产生危害，但是对于在食品添加剂名单上明确规定不可以添加或是超量添加允许添加的添加剂，都会产生食品安全危害。
合成着色剂目前的使用范围广、用量大，长期过量摄入会对人体产生很大的危害。
但是要想对为数繁多的食品进行是否含有合成着色剂的检测，则需要采取适宜的测定方法，方可提高检测效率，提高监管力度和监管的有效性，从而打击违法添加有害物质的行为，保障人民的生命安全。
1 合成着色剂概述着色剂作为食品添加剂使用的主要作用就是改变食品的色彩，是一种相对传统的食品色彩调节方法。
根据市场调查分析，消费者在购买食品时，一般会考虑食品的色、香、味、形情况，同时，根据研究显示，食品的色彩对于人的食欲有刺激作用，可以勾起消费者的购买欲。
因此，食品生产商为了所生产食品的销量，在食品色彩上大下功夫，着色剂也就被广泛的应用开来。
近年来，国际国内的食品安全事故频发，其中不乏着色剂的滥用导致的食品安全事故。
事故频发导致了民众对于着色剂产生了怀疑与强力排斥，同时也受到了国家相关部门的关注与大力监督治理，在消费者的排斥与国家部门的监管下，着色剂滥用的情况得到了一定的遏制。
但是一些不法商家为了经济利益，不惜冒着触犯法律的风险，试图通过食品检测的漏洞来避免不法行径被发现。
食品中合成着色剂的测定方法︱食品中合成着色剂的检测分析方法1、主题内容与适用范围本标准规定了食品中合成着色剂的测定方法。
本标准适用于食品中合成着色剂的测定。
第一篇高效液相色谱法(第一法)2、食品中合成着色剂的测定原理食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液－液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。
最小检出量，新红5ng、柠檬黄4ng、苋菜红6ng、胭脂红8ng、日落黄7ng、赤藓红18ng、亮蓝26ng，当进样量相当0.025g时最低检出浓度分别为0.2mg//k；0.16mg/kg；0.24mg/kg；0.32mg/kg；0.28mg/k；0.72mg/k；1.04mg/k。
3、食品中合成着色剂的测定试剂3.1 正己烷。
3.2 盐酸。
3.3 乙酸。
3.4 甲醇：经滤膜(0.5?m)过滤。
3.5 聚酰胺粉(尼龙6)：过200目筛。
3.6 乙酸铵溶液(0.02mol/L)：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经滤膜(0.45?m)过滤。
3.7 氨水：量取氨水2mL，加水至100mL，混匀。
3.8 氨水－乙酸铵溶液(0.02mol/L)：量取氨水0.5mL，加乙酸铵溶液(0.02mol/L)至1000mL，混习。
3.9 甲醇－甲酸(6＋4)溶液：量取甲醇60mL，甲酸40mL，混匀。
3.10 柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸(C6H8O7·H2O)，加水至100mL，溶解混匀。
3.11 无水乙醇－氨水－水(7＋2＋1)溶液：量取无水乙醇70mL、氨水20mL、水10mL，混匀。
3.12 三正辛胺正丁醇溶液(5%)：量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL，混匀。
3.13 饱和硫酸钠溶液。
3.14 硫酸钠溶液(2g/L)。
3.15 pH6的水：水加柠檬酸溶液调pH值到6。
3.16 合成着色剂标准溶液：准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝各0.100g，置100mL容量瓶中，加pH6水到刻度。
食品安全国家标准食品中合成着色剂的测定1范围本标准规定了饮料㊁配制酒㊁硬糖㊁蜜饯㊁淀粉软糖㊁巧克力豆及着色糖衣制品中合成着色剂(不含铝色锭)的测定方法㊂本标准适用于饮料㊁配制酒㊁硬糖㊁蜜饯㊁淀粉软糖㊁巧克力豆及着色糖衣制品中合成着色剂(不含铝色锭)的测定㊂2原理食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取,制成水溶液,注入高效液相色谱仪,经反相色谱分离,根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量㊂3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的一级水㊂3.1试剂3.1.1甲醇(C H3O H):色谱纯㊂3.1.2正己烷(C6H14)㊂3.1.3盐酸(H C l)㊂3.1.4冰醋酸(C H3C O OH)㊂3.1.5甲酸(H C O O H)㊂3.1.6乙酸铵(C H3C O O N H4)㊂3.1.7柠檬酸(C6H8O7㊃H2O)㊂3.1.8硫酸钠(N a2S O4)㊂3.1.9正丁醇(C4H10O)㊂3.1.10三正辛胺(C24H51N)㊂3.1.11无水乙醇(C H3C H2O H)㊂3.1.12氨水(N H3㊃H2O):含量20%~25%㊂3.1.13聚酰胺粉(尼龙6):过200μm(目)筛㊂3.2试剂配制3.2.1乙酸铵溶液(0.02m o l/L):称取1.54g乙酸铵,加水至1000m L,溶解,经0.45μm微孔滤膜过滤㊂3.2.2氨水溶液:量取氨水2m L,加水至100m L,混匀㊂3.2.3甲醇-甲酸溶液(6+4,体积比):量取甲醇60m L,甲酸40m L,混匀㊂3.2.4柠檬酸溶液:称取20g柠檬酸,加水至100m L,溶解混匀㊂3.2.5无水乙醇-氨水-水溶液(7+2+1,体积比):量取无水乙醇70m L㊁氨水溶液(3.2.2)20m L㊁水10m L,混匀㊂3.2.6三正辛胺-正丁醇溶液(5%):量取三正辛胺5m L,加正丁醇至100m L,混匀㊂3.2.7饱和硫酸钠溶液㊂3.2.8p H6的水:水加柠檬酸溶液调p H到6㊂3.2.9p H4的水:水加柠檬酸溶液调p H到4㊂3.3标准品3.3.1柠檬黄(C A S:1934-21-0)㊂3.3.2新红(C A S:220658-76-4)㊂3.3.3苋菜红(C A S:915-67-3)㊂3.3.4胭脂红(C A S:2611-82-7)㊂3.3.5日落黄(C A S:2783-94-0)㊂3.3.6亮蓝(C A S:3844-45-9)㊂3.3.7赤藓红(C A S:16423-68-0)㊂3.4标准溶液配制3.4.1合成着色剂标准贮备液(1m g/m L):准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄㊁日落黄㊁苋菜红㊁胭脂红㊁新红㊁赤藓红㊁亮蓝各0.1g(精确至0.0001g),置100m L容量瓶中,加p H6的水到刻度㊂配成水溶液(1.00m g/m L)㊂3.4.2合成着色剂标准使用液(50μg/m L):临用时将标准贮备液加水稀释20倍,经0.45μm微孔滤膜过滤㊂配成每毫升相当50.0μg的合成着色剂㊂4仪器和设备4.1高效液相色谱仪,带二极管阵列或紫外检测器㊂4.2天平:感量为0.001g和0.0001g㊂4.3恒温水浴锅㊂4.4 G3垂融漏斗㊂5分析步骤5.1试样制备5.1.1果汁饮料及果汁㊁果味碳酸饮料等:称取20g~40g(精确至0.001g),放入100m L烧杯中㊂含二氧化碳样品加热或超声驱除二氧化碳㊂5.1.2配制酒类:称取20g~40g(精确至0.001g),放入100m L烧杯中,加小碎瓷片数片,加热驱除乙醇㊂5.1.3硬糖㊁蜜饯类㊁淀粉软糖等:称取5g~10g(精确至0.001g)粉碎样品,放入100m L小烧杯中,加水30m L,温热溶解,若样品溶液p H较高,用柠檬酸溶液调p H到6左右㊂5.1.4巧克力豆及着色糖衣制品:称取5g~10g(精确至0.001g),放入100m L小烧杯中,用水反复洗涤色素,到巧克力豆无色素为止,合并色素漂洗液为样品溶液㊂5.2色素提取5.2.1聚酰胺吸附法:样品溶液加柠檬酸溶液调p H到6,加热至60ħ,将1g聚酰胺粉加少许水调成粥状,倒入样品溶液中,搅拌片刻,以G3垂融漏斗抽滤,用60ħp H为4的水洗涤3次~5次,然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3次~5次(含赤藓红的样品用5.2.2法处理),再用水洗至中性,用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3次~5次,直至色素完全解吸,收集解吸液,加乙酸中和,蒸发至近干,加水溶解,定容至5m L㊂经0.45μm微孔滤膜过滤,进高效液相色谱仪分析㊂5.2.2液-液分配法(适用于含赤藓红的样品):将制备好的样品溶液放入分液漏斗中,加2m L盐酸㊁三正辛胺-正丁醇溶液(5%)10m L~20m L,振摇提取,分取有机相,重复提取,直至有机相无色,合并有机相,用饱和硫酸钠溶液洗2次,每次10m L,分取有机相,放蒸发皿中,水浴加热浓缩至10m L,转移至分液漏斗中,加10m L正己烷,混匀,加氨水溶液提取2次~3次,每次5m L,合并氨水溶液层(含水溶性酸性色素),用正己烷洗2次,氨水层加乙酸调成中性,水浴加热蒸发至近干,加水定容至5m L㊂经0.45μm微孔滤膜过滤,进高效液相色谱仪分析㊂5.3仪器参考条件5.3.1色谱柱:C18柱,4.6mmˑ250mm,5μm㊂5.3.2进样量:10μL㊂5.3.3柱温:35ħ㊂5.3.4二极管阵列检测器波长范围:400n m~800n m,或紫外检测器检测波长:254n m㊂5.3.5梯度洗脱表见表1㊂表1梯度洗脱表时间m i n流速m L/m i n0.02m o l/L乙酸铵溶液%甲醇%01.095531.0653571.00100101.0010010.11.0955211.09555.4测定将样品提取液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪,根据保留时间定性,外标峰面积法定量㊂6分析结果的表述试样中着色剂含量按式(1)计算:X=cˑVˑ1000mˑ1000ˑ1000(1)式中:X 试样中着色剂的含量,单位为克每千克(g/k g);c 进样液中着色剂的浓度,单位为微克每毫升(μg/m L);V 试样稀释总体积,单位为毫升(m L);m 试样质量,单位为克(g);1000 换算系数㊂计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留两位有效数字㊂7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂8其他方法检出限:柠檬黄㊁新红㊁苋菜红㊁胭脂红㊁日落黄均为0.5m g/k g,亮蓝㊁赤藓红均为0.2m g/k g (检测波长254n m时亮蓝检出限为1.0m g/k g,赤藓红检出限为0.5m g/k g)㊂。
食品中着色剂的测定一、目的与要求：1、明确测定各类色素的原理与方法。
2、通过此实验掌握纸层析定性法与提纯色素的定量法。
二、原理：聚酰胺是具有二极性的化合物，水溶性酸性染料在酸性条件下被聚酰胺吸附，而在碱性条件下解吸附，再用纸色谱法或薄层色谱法进行分离后与标准比较定性、定量。
三、试剂：1、聚酰胺粉(尼龙6)2、硫酸1：1 03、甲醇—甲酸溶液：6：44、甲醇5、20％柠檬酸溶液6、10％钨酸钠溶液7、石油醚：沸程60-90℃8、海砂：先用l：10盐酸煮沸15min，用水洗中性，再用5％氢氧化钠溶液煮沸15min，再于105℃干燥，贮于具玻璃塞的瓶中，备用。
9、乙醇-氨溶液：取1毫升氨水，加70％乙醇至100毫升。
10、50％乙醇溶液11、硅胶G。
12、PH6的水：用20％柠檬酸调节至PH 6。
13、盐酸: 1：1014、5％氢氧钠溶液15、碎瓷片：处理方法同海砂16、展开剂a、正丁醇-无水乙醇-1％氨水(6：2：3)：供纸色谱用。
b、正丁醇-吡啶-1％氨水(6：3：4)：供纸色谱用。
c、甲乙酮-丙酮-水(7：3：3)：供纸色谱用。
d、甲醇-乙二胺-氨水(10：3：2)：供薄层色谱用。
e、甲醇-氨水-乙醇(5：1：10)：供薄层色谱用。
f、2.5％柠檬酸钠-氨水-乙醇(8：1：2)供薄层色谱用。
17、色素标准溶液{以下商品作为标准以100％计。
胭脂红：纯度60％；苋菜红：纯度60％；柠檬黄：纯度60%；靛蓝：纯度40％；日落黄：纯度60％，亮蓝；纯度60％。
精密称取上述色素各0.100克，用PH6的水溶解，移入100毫升容量瓶中并稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于1毫克商品色素。
靛蓝溶液需在暗处保存。
18、色素标准使用液：用时吸取色素标准溶液各5.0毫升，分别置于50毫升容量瓶中，加PH6的水稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于0.1毫克商品色素。
四、仪器：1、分光光度计2、微量注射器或色素吸管3、展开槽，25 X 6 x 4cm4、层析缸5、滤纸、中速滤纸，纸色谱用6、薄层板：5 X 20em7、电吹风机8、水泵五、操作方法：1、样品处理A、果味水、果子露、汽水：吸取50.0毫升样品于100毫升烧杯中，汽水需加热驱除二氧化碳。
