PH0311 细菌细胞总蛋白提取试剂盒操作手册

[【生物化学与分子生物学】]细菌总蛋白和膜蛋白提取方法膜蛋白, 细菌膜蛋白, 细菌一、从新鲜样品中提取总蛋白（简易法）1、自配裂解液（pH 8.5-9.0）：50 mM Tris-HCl，2 mM EDTA, 100 mM NaCl，0.5% Triton X-100，调pH值至8.5-9.0备用；用前加入100 μg/ml 溶菌酶，1μl/ml 的蛋白酶抑制剂PMSF。

该裂解液用量为10-50ml 裂解液/1g湿菌体。

2、将40ml 菌液在12000g，4℃下离心15分钟收集菌体，沉淀用PBS悬浮洗涤2遍，沉淀加入1ml裂解液悬浮菌体。

3、超声粉碎，采用300w，10s超声/10s间隔，超声20min，反复冻融超声3次至菌液变清或者变色。

4、1000g离心去掉大碎片，上清可直接变性后PAGE电泳检测，或者用1% SDS溶液透析后冻存。

缺点：Western blotting结果表明，疏水性跨膜蛋白提取效率有限。

二、从Trizol裂解液中分离总蛋白1、Trizol溶解的样品研磨破碎后，加氯仿分层，2-8℃下10000g离心15min，上层水相用于RNA提取，体积约为总体积的60%。

2、用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。

每使用1ml Trizol加入0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3min，2-8℃不超过2000g离心5min。

3、将上清移至新的EP管中，用异丙醇沉淀蛋白质。

每使用1ml Trizol加入1.5ml异丙醇，室温放置10min，2-8℃下12000g离心10min，弃上清。

4、用含有0.3M 盐酸胍的95%乙醇洗涤。

每1ml Trizol加入2ml洗液，室温放置20min，2-8℃下7500g 离心5min，弃上清，重复洗涤2次。

最后加入2ml无水乙醇，涡旋后室温放置20min，2-8℃下7500g离心5min，弃上清。

5、冷冻干燥5-10min，1%SDS溶液溶解，反复吹打，50℃温浴使其完全溶解，2-8℃下10000g离心10min去除不溶物。

蛋白提取实验步骤：1、细胞总蛋白提取A、对于悬浮细胞: 离心收集细胞，每106细胞加250 ul RIPA （在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂），振荡。

如果需要提高蛋白浓度，可以适当减少细胞总蛋白提取试剂体积。

B、对于贴壁细胞:a、用TBS冲洗细胞2-3次。

最后一次彻底吸干残留液。

b、加入适当体积的 RIPA（使用前数分内加入蛋白酶抑制剂）于培养板、瓶内3-5分钟。

期间反复晃动培养板、瓶，使试剂与细胞充分接触。

c、用细胞刮刀将细胞及试剂刮下，收集到1.5ml离心管中。

C、冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。

D、12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。

2、组织蛋白提取：A、组织块用冷TBS洗涤2-3次，去除血污，剪成小块置于匀浆器。

加入10倍组织体积本试剂（使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂）冰上彻底匀浆。

如果需要提高蛋白浓度，可以适量减少该试剂体积。

B、将匀浆液转移至1.5ml离心管中，振荡。

冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。

C、12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。

1、组织尽可能新鲜，若不能及时提蛋白，组织标本应保存在-80℃冰箱，并避免反复冻融。

2、全程必须在冰上进行，避免蛋白降解。

3、蛋白酶抑制剂在水溶液中不稳定，需在RIPA使用前数分钟加入蛋白酶抑制剂。

1 / 24、裂解过程中如有溶液粘稠现象可用移液器（200μl）反复吹打，或再加入适量裂解液以保证充分裂解。

5、总蛋白溶液不稳定（蛋白酶依旧有活性）可在-80℃短时间保存，建议立即加入蛋白上样缓冲液变性后与-20℃保存，避免反复冻融。

-----精心整理，希望对您有所帮助!。

细菌总蛋白和膜蛋白提取方法一、从新鲜样品中提取总蛋白（简易法）1、自配裂解液（pH 8.5-9.0）：50 mM Tris-HCl，2 mM EDTA, 100 mM NaCl，0.5% Triton X-100，调pH值至8.5-9.0备用；用前加入100 μg/ml 溶菌酶，1μl/ml 的蛋白酶抑制剂PMSF。

该裂解液用量为10-50ml 裂解液/1g湿菌体。

2、将40ml 菌液在12000g，4℃下离心15分钟收集菌体，沉淀用PBS悬浮洗涤2遍，沉淀加入1ml裂解液悬浮菌体。

3、超声粉碎，采用300w，10s超声/10s间隔，超声20min，反复冻融超声3次至菌液变清或者变色。

4、1000g离心去掉大碎片，上清可直接变性后PAGE电泳检测，或者用1% SDS溶液透析后冻存。

缺点：Western blotting结果表明，疏水性跨膜蛋白提取效率有限。

二、从Trizol裂解液中分离总蛋白1、Trizol溶解的样品研磨破碎后，加氯仿分层，2-8℃下10000g离心15min，上层水相用于RNA提取，体积约为总体积的60%。

2、用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。

每使用1ml Trizol加入0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3min，2-8℃不超过2000g离心5min。

3、将上清移至新的EP管中，用异丙醇沉淀蛋白质。

每使用1ml Trizol加入1.5ml异丙醇，室温放置10min，2-8℃下12000g离心10min，弃上清。

4、用含有0.3M 盐酸胍的95%乙醇洗涤。

每1ml Trizol加入2ml洗液，室温放置20min， 2-8℃下7500g离心5min，弃上清，重复洗涤2次。

最后加入2ml无水乙醇，涡旋后室温放置20min，2-8℃下7500g离心5min，弃上清。

5、冷冻干燥5-10min，1%SDS溶液溶解，反复吹打，50℃温浴使其完全溶解，2-8℃下10000g 离心10min去除不溶物。

单层贴壁细胞总蛋白的提取1. 倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液（或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走）。

2. 每瓶细胞加3ml 4℃预冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。

平放轻轻摇动1min洗涤细胞，然后弃去洗液。

重复以上操作两次，共洗细胞三次以洗去培养液。

将PBS弃净后把培养瓶置于冰上。

3. 【配制裂解试剂，现用现配制】按1ml RIPA + 25μl PMSF（100mM）+ 110μl Pi（PhosSTOP磷酸酶抑制剂），摇匀置于冰上。

（PMSF要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合。

）4. 每瓶细胞加100 μl的裂解液，用干净的刮棒将细胞刮于培养瓶的一侧（动作要快），于冰上裂解30 min，为使细胞充分裂解培养瓶要经常来回摇动。

5. 裂解完后，然后用枪将细胞碎片和裂解液移至 1.5ml离心管中。

（整个操作尽量在冰上进行）6. 于4℃下12000rpm离心15 min。

（提前开离心机预冷）7. 将离心后的上清分装转移倒0.6ml的离心管中放于-80℃保存。

PhosSTOP磷酸酶抑制剂（stock solution）配制方法：1片PhosSTOP+1ml RIPA，充分溶解后按110ul封装9管。

-20℃保存有效期6月，4℃保存有效期1月。

BCA法测定蛋白浓度检测试剂准备：1．BCA工作液（室温）2． RIPA（1ml）（4℃）3．蛋白工作液（0.5mg/ml）（4℃）4． 96-Well板5．冰盒6．待测样品（4℃）操作步骤：1. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。

2. 标准孔加样3. 待测样品稀释20倍，19μl RIPA + 1μl（待测样品）4. 测定本底，20μl RIPA加3孔，取平均值。

5. 各孔加入200μl BCA工作液，37℃放置20分钟。

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总蛋白提取试剂盒(Total Protein Extraction Kit)P1250: 蛋白抽提试剂盒-I (实体组织和细胞蛋白抽提, 100 extractions)描述: 从组织细胞中提取总蛋白是Western Blot关键步骤。

实体软组织如脑脊髓富含磷脂, 神经血管含大量结缔组织, 而脂肪则有大量油脂, 常规方法难以有效从这些组织提取蛋白。

本试剂盒为组织或培养细胞总蛋白提取提供完整处理方案。

用裂解-结合缓冲液匀浆裂解实体组织, 或直接用裂解-结合缓冲液重悬培养细胞, 然后加入抽提试剂去除非蛋白成份, 离心、干燥后即可得到总蛋白。

蛋白沉淀溶解后用常规方法进行蛋白定量。

提取过程可在30-60分钟内完成, 可在1.5ml离心管微量提取也可大规模制备, 极为简便高效。

通常一次提取10-100mg组织所取得总蛋白可进行几十到上百次分析如蛋白质电泳、Western Blot、免疫共沉淀。

组成 1. 裂解-结合缓冲液100 ml 2. 抽提试剂100 ml每毫升裂解缓冲液和抽提试剂可提取10-100mg组织或1 ⨯ 107细胞。

试剂盒裂解缓冲液是过量。

适用多种实体软组织(> 1 mg), 如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道组织、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等, 以及多种原代细胞和永生化细胞系。

保留: 室温或4ºC保留2年固体组织蛋白提取1.每10-100mg固体组织剪碎后加入0.5-1 ml裂解液, 放入玻璃匀浆器内上下手动匀浆15次; 或用高速机械匀浆器12,000 rpm 破碎组织。

注意: 初始组织量应在10-100mg范围。

肝肾组织蛋白含量高, 提取时应加较少许组织, 不然形成蛋白膜厚、致密且难溶。

少许小未破碎组织不影响后续抽提。

2.仅取0.5ml组织匀浆液转移到1.5ml离心管, 弃去剩下组织匀浆液。

每0.5ml组织匀浆液加入2倍体积(1 ml)抽提试剂充足混匀。

细菌基因组DNA提取试剂盒目录号：DN12目录编号包装单位DN1201 50次DN1202 100次DN1203 200次❖适用范围：适用于快速提取各种细菌基因组DNA❖试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次细胞核裂解液室温30 ml 60 ml 120 ml蛋白沉淀液室温10 ml 20 ml 40 mlDNA溶解液室温10 ml 15ml 30 mlRNase A(10mg/ml) -20℃150μl250μl400μl本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，轻轻旋摇，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。

2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

❖产品介绍：本试剂盒用于快速的从各种细菌中提取基因组DNA。

细菌样品加入细胞核裂解液(或者通过溶菌酶或者其它一些酶帮助裂解细胞壁后)，首先在强去污剂作用下裂解细胞释放出基因组DNA，接着加入RNase A去除RNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。

❖产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚等试剂。

2.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

3.结果稳定，产量高，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50 kb -150kb，可直接用于构建文库，PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

❖注意事项1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2.用户需自备异丙醇、70％乙醇、0.5M EDTA和Lysozyme（溶菌酶）(用于革兰氏阳性菌)、lysostaphin(用于某些难裂解的革兰氏阳性菌)、水浴箱。

北京索莱宝科技有限公司
第1页，共1页细菌蛋白提取试剂盒
货号：BC3750
规格：50T /100T
有效期：至少1年。

产品说明：
本试剂盒用于大肠杆菌提取可溶性蛋白，试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂，作用较为强烈，可快速获得总蛋白，可用于免疫印迹实验等基础研究实验，由于含有上述的酶抑制剂，不能用于研究蛋白激酶的研究。

本品仅用于科研。

产品内容:名称
50T 100T Storage 裂解液
50ml 100ml 2-8℃蛋白酶抑制剂（100×）
0.5ml 1ml -20℃
PMSF（100×）0.5ml 1ml 操作方法：
1、细菌可溶性蛋白的提取
1)
在1ml 的冷裂解液中各加入10ul 的蛋白酶抑制剂和PMSF；混匀，放置在冰上备用；2)
将菌体湿重称重，然后按照比例（1g：10ml）加入的新配置的裂解液，混匀，过程注意冰上操作；3)将混匀液移入超声仪中，超声；
超声条件：总时间45min，超声时间3s，间隔时间3s，过程为冰浴环境；
超声结束，4度离心，10000rpm/min 20min；
2、吸取上清至新的管中，进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。

（提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。

)
注意事项：
1.实验过程，所有试剂都要需要预冷或者即融，保证操作过程中的低温环境；
2.PSMF（有毒）现用现加，因为PMSF 在水溶液中会快速降解；。

*质粒小量提取试剂盒产品说明：■本产品采用经典的硅胶膜及碱裂法技术，硅胶膜柱可以在高盐、低pH值情况下高效可逆的结合DNA, 而蛋白及其它杂质不被结合而被除去,被结合的核酸在低盐、高pH值情况下可被洗脱出来.该试剂盒具有高效、快速、方便之特点，全套操作只需半个小时便可完成。

使用本试剂盒可从1～5 ml的过夜培养的菌液中纯化得到1～40μg的高纯度质粒DNA(OD260/OD280 = 1.8～2.0)，此质粒DNA可直接用于DNA序列分析以及各种酶促反应等。

试剂盒组成：产品编号GS001-1 GS001-2 GS001-3试剂盒组成纯化次数50次100次200次RNaseA（10mg/ml）150μl 300μl 600μl溶液Ⅰ15ml 30ml 60ml溶液Ⅱ15ml 30ml 60ml溶液Ⅲ20ml 40ml 80ml溶液PB 30ml 50ml 100ml溶液W 30ml 2×30ml3×40ml溶液Eluent 5ml 10ml 20mlDNA纯化柱50个100个200个溶液W初次使用前用无水乙醇按1：1.5稀释，即含60%乙醇。

用途：提取用于酶切、转化、测序、PCR等试验用质粒。

保存：初次使用本试剂盒时，请将RNase A全部加入到溶液Ⅰ中，均匀混合后4℃保存。

溶液Ⅱ：室温保存，若出现沉淀，请于37℃保温溶解，待恢复至室温后使用。

其他试剂：室温保存。

操作步骤：1.用1.5 ml离心管收集1.5-5ml菌液，12000rpm离心60秒，弃上清。

(应根据所培养的菌液的浓度确定收集的菌液量)2. 加入250µl溶液Ⅰ/RNase A混合液，漩涡振荡使菌液完全重新悬浮。

(菌液重新悬浮对于获得高产量是非常重要的,为使RNA被RNase A充分降解,让悬浮菌液静置1-2分钟3. 250µl溶液Ⅱ，温和反复颠倒混匀4-10次,室温放置1-2分钟,以获得澄清的裂解液。

细菌总蛋白和膜蛋白提取方法一、从新鲜样品中提取总蛋白（简易法）1、自配裂解液（pH 8.5-9.0）：50 mM Tris-HCl，2 mM EDTA, 100 mM NaCl，0.5% Triton X-100，调pH值至8.5-9.0备用；用前加入100 μg/ml 溶菌酶，1μl/ml 的蛋白酶抑制剂PMSF。

该裂解液用量为10-50ml 裂解液/1g湿菌体。

2、将40ml 菌液在12000g，4℃下离心15分钟收集菌体，沉淀用PBS悬浮洗涤2遍，沉淀加入1ml裂解液悬浮菌体。

3、超声粉碎，采用300w，10s超声/10s间隔，超声20min，反复冻融超声3次至菌液变清或者变色。

4、1000g离心去掉大碎片，上清可直接变性后PAGE电泳检测，或者用1% SDS溶液透析后冻存。

缺点：Western blotting结果表明，疏水性跨膜蛋白提取效率有限。

二、从Trizol裂解液中分离总蛋白1、Trizol溶解的样品研磨破碎后，加氯仿分层，2-8℃下10000g离心15min，上层水相用于RNA提取，体积约为总体积的60%。

2、用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。

每使用1ml Trizol加入0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3min，2-8℃不超过2000g离心5min。

3、将上清移至新的EP管中，用异丙醇沉淀蛋白质。

每使用1ml Trizol加入1.5ml异丙醇，室温放置10min，2-8℃下12000g离心10min，弃上清。

4、用含有0.3M 盐酸胍的95%乙醇洗涤。

每1ml Trizol加入2ml洗液，室温放置20min，2-8℃下7500g离心5min，弃上清，重复洗涤2次。

最后加入2ml无水乙醇，涡旋后室温放置20min，2-8℃下7500g离心5min，弃上清。

5、冷冻干燥5-10min，1%SDS溶液溶解，反复吹打，50℃温浴使其完全溶解，2-8℃下10000g 离心10min去除不溶物。

细菌基因组DNA快速提取试剂盒目录号：DN11目录编号包装单位DN1101 50次DN1102 100次DN1103 200次DN1111 50次(带蛋白酶K) DN1112 100次(带蛋白酶K) DN1113 200次(带蛋白酶K)适用范围：适用于快速提取各种细菌基因组DNA试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次平衡液室温 5 ml 10 ml 20 ml 缓冲液RB 室温30 ml 60ml 120 ml 结合液CB 室温11 ml 20 ml 40ml 抑制物去除液IR 室温25 ml 50 ml 100 ml漂洗液WB 室温15 ml 25 ml 2x25 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15 ml 20 ml 40 ml 蛋白酶K粉（可选）20mg/ml-20℃20mg 2×20mg 4×20mg 吸附柱AC 室温50个100个200个收集管（2ml）室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:1.结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2.为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入1毫升灭菌水溶解，因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分装冻存，－20℃保存。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。

细菌基因组DNA快速提取试剂盒DN1101 50次DN1102 100次DN1103 200次DN1111 50次(带蛋白酶K) DN1112 100次(带蛋白酶K) DN1113 200次(带蛋白酶K)❖适用范围：适用于快速提取各种细菌基因组DNA❖试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次平衡液室温 5 ml 10 ml 20 ml 缓冲液RB 室温30 ml 60ml 120 ml 结合液CB 室温11 ml 20 ml 40ml 抑制物去除液IR 室温25 ml 50 ml 100 ml漂洗液WB 室温15 ml 25 ml 2x25 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15 ml 20 ml 40 ml 蛋白酶K粉（可选）20mg/ml-20℃20mg 2×20mg 4×20mg 吸附柱AC 室温50个100个200个收集管（2ml）室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:1.结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2.为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入1毫升灭菌水溶解，因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分装冻存，－20℃保存。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

❖产品介绍：独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

❖产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。

细胞蛋白质提取实验步骤咱今天就来说说细胞蛋白质提取实验步骤这事儿哈！你想想，细胞就像一个小小的世界，里面藏着好多宝贝呢，蛋白质就是其中特别重要的一个。

要把它提取出来，那可得有点门道。

首先，得把细胞给弄碎喽。

这就好比拆一个小礼物，得先把包装给撕开。

咱得用合适的方法，让细胞乖乖地把里面的蛋白质交出来。

然后呢，就该让蛋白质从细胞的其他成分里分离出来啦。

这就像是在一堆杂物里找出你最想要的那个宝贝，得有点耐心和技巧。

接着呀，就是把蛋白质给纯化啦。

这就像给宝贝洗个澡，把它身上的脏东西都洗掉，让它干干净净、漂漂亮亮的。

再之后呢，还得对蛋白质进行浓缩。

这就好像把一大碗水变成一小杯精华，让蛋白质更集中，更有“力量”。

在这个过程中，可不能粗心大意哟！每一步都得小心翼翼的，就像走钢丝一样，稍微有点偏差，可能就得不到你想要的结果啦。

你说，这是不是挺有意思的？就像一场小小的冒险，要去探索细胞里的秘密。

而且啊，做这个实验还得注意好多细节呢。

比如说，温度不能太高也不能太低，不然蛋白质可能就“不开心”啦，不好好表现了。

还有啊，所用的试剂也得选对，就像给宝贝找合适的“衣服”一样。

你看，这细胞蛋白质提取实验步骤，是不是挺像一个精心编排的舞蹈呀，每一步都要恰到好处，才能跳出最美的舞姿，得到最棒的结果。

总之呢，要做好这个实验，就得认真对待，就像对待你最珍贵的东西一样。

只有这样，才能从细胞这个小小的世界里，成功地把蛋白质这个大宝贝给请出来！可别小瞧了这每一步哦，它们可都有着大学问呢！。

细菌dna试剂盒提取的基本流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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细胞蛋白提取实验步骤嘿，朋友们！今天咱就来讲讲细胞蛋白提取实验步骤，这可是个超级有趣的事儿呢！咱先得准备好各种东西呀，就像战士上战场得拿好自己的武器一样。

那得有新鲜的细胞样本，这可是咱的宝贝原料哦。

还有各种试剂，就像调料一样，缺了可不行。

然后呢，就开始操作啦！把细胞样本放进合适的容器里，这就好比给它们找了个家。

接着加入裂解液，这裂解液就像是一把钥匙，能把细胞的大门打开，让蛋白跑出来。

然后就晃呀晃呀，让它们好好地混合均匀。

这时候，你就想象一下，细胞们在里面被晃得晕头转向的，蛋白就趁机跑出来啦。

接下来，把这混合物放到冰上冷静冷静，让蛋白们也冷静一下，别乱跑。

之后呢，就是离心啦！把它们放到离心机里，离心机就像个大力士，呼呼地转起来，把蛋白和其他杂质分开。

这就像是在挑拣宝贝，把好的留下，不好的甩出去。

离心完了，取上清液，这上清液里可就有咱要的蛋白啦！就像在一堆沙子里找到了金子一样让人开心。

再接下来，可能得根据需要进行一些处理，比如浓缩呀或者纯化呀。

这就像是给蛋白们打扮打扮，让它们更漂亮更纯净。

你说这细胞蛋白提取实验像不像一场奇妙的冒险？每一步都充满了惊喜和挑战。

要是哪一步不小心出错了，哎呀，那可就麻烦啦，就像走在路上摔了一跤一样。

所以咱得小心翼翼地，认真对待每一个步骤。

在这个过程中，可不能马虎哦！要像爱护自己的宝贝一样爱护这些实验用品和样本。

要是不小心把试剂弄洒了，或者把样本搞坏了，那可就得不偿失啦。

而且呀，做实验的时候得有耐心，不能着急。

就像炖一锅好汤，得慢慢炖才能出味道。

这细胞蛋白提取实验也是，一步一步慢慢来，才能得到好结果。

总之呢，细胞蛋白提取实验步骤虽然有点复杂，但只要咱认真去做，肯定能成功的！加油吧，朋友们，让我们在这个奇妙的实验世界里畅游，发现更多的秘密和惊喜！。

细菌细胞总蛋白提取试剂盒细菌细胞总蛋白提取试剂盒目录号：ZD404试剂盒内容：试剂盒组成ZD404-1（50次）ZD404-2（100次）细菌细胞蛋白裂解液 50ml 100 ml细菌细胞漂洗液 120 ml 2×120 ml溶菌酶贮存液 3ml 6ml100×蛋白酶抑制剂 0.6ml 1.2ml50% 甘油 10ml 20ml说明书 1份 1份储存条件：本试剂在室温干燥条件下，可保存6个月。

溶菌酶贮存液、100×蛋白酶抑制剂和50% 甘油2-8℃保存。

产品简介1、 总论：经典的细胞蛋白质分离流程由下述主要步骤组成：清洗组织或细胞；裂解细胞；离心去沉淀获得可溶性蛋白质粗提物（可依据目标蛋白质的理化特性特别的调配裂解缓冲液）；通过有机溶剂或盐析等沉淀离心、层析、电泳等方法进一步纯化，得到目的产物蛋白。

2、本试剂使用温和的非离子型去污剂，适用于大肠杆菌表达的重组蛋白的蛋白提取。

本产品可应用于从细菌裂解液中提取可溶性蛋白。

所提取的蛋白保持了生物学活性，可进行IP，Western Blot，蛋白纯化等下游操作。

注意事项：<请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项>1)若目的蛋白不稳定，冰浴中孵育时间可以减少甚至取消，裂解液内加入0.2倍体积50%甘油也可以稳定目的蛋白。

本试剂4℃保存操作步骤：1、离心收集细菌细胞, 按照每克湿菌取用5-6ml 细菌细胞漂洗液的比例，于20℃～37℃将细胞悬浮起来后，4℃，12000g，1-2min离心除去细菌细胞漂洗液，漂洗2次。

（离心只是收集细胞，转速、时间可自行调整。

）如果细菌细胞漂洗液不够，也可以用TE buffer（H=7.4 --7.6）代替。

2、离心除去细菌细胞漂洗液后, 按每克湿菌细胞，加入5ml细菌细胞蛋白裂解液，250ul溶菌酶贮存液和50ul 100×蛋白酶抑制剂，混悬细菌细胞样品。

3、混旋或颠倒试管几次后，20℃～37℃温育10～20分钟，同时轻轻摇动。

胞质和线粒体蛋白质提取试剂盒使用说明产品编号：C7610包装规格：50Assays产品组成:胞质提取Buffer55mL线粒体溶解Buffer5mL蛋白酶抑制剂60μL磷酸酶抑制剂300μLDTT60μL产品简介胞质和线粒体蛋白质提取试剂盒提供独特的组份可以提取动物细胞及组织中的胞质蛋白和线粒体蛋白。

该方法先将完整的有活性的线粒体和胞质蛋白分离，再处理后获得高纯度的有活性胞质蛋白和变性的线粒体蛋白，不需要超速度离心，方法简单，可靠，快速。

可用于1D，2D电泳，Western Blot，Elisa等蛋白质实验。

提取的完整线粒体也可以经过活性溶解液处理，再用于免疫共沉淀，凋亡，细胞信号传导，能量代谢等生理学研究，或进行线粒体DNA提取，用于基因组学后续研究。

本试剂盒可以每次从1×107个培养细胞或200mg组织中提取所需要的蛋白质，可以使用50次。

产品特点1.整个实验过程大约只需要1小时左右。

2.可以从50×107个培养细胞或50×200mg组织中提取所需要的蛋白质或活性线粒体。

3.活性线粒体的提取量高，高效线粒体溶解Buffer提取的蛋白质，可以用于线粒体蛋白质组学研究。

4.不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。

运输和保存条件常温下运输，收到后将线粒体溶解Buffer、DTT和蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂于-20℃保存，胞质提取Buffer于2-8℃保存，保质期1年。

操作步骤1.收集不少于1×107细胞，用冷PBS（pH7.4）洗涤细胞两次，每次3000rpm（800g）离心5min；组织样本（200mg）尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，于冰上剪碎，再用冷PBS（pH7.4）洗涤三次。

2.在上述细胞或组织样本中加入1mL胞质提取Buffer（使用前每mL胞质提取Buffer加入1μL蛋白酶抑制剂，5μL磷酸酶抑制剂和1μL DTT），置玻璃匀浆器冰上均质30～50次，置于冰上冷却。

.细胞总蛋白提取方法一、溶液配制1.100mM NaF (NaF MW=41.99) 10ml称取 NaF 41.99mg，超纯水 8ml 溶解后定容至 10ml。

2.100 mM PMSF3.RIPA 溶液 100ml成分分子量终浓度Tris121.140.6 g 5.0 mM (pH 7.4)NaCl58.440.87 g150 mMEDTA372.2437.22 mg 1 mMNP-40 1 ml1%SDS0.1 g0.1%脱氧胆酸钠0.5 g0.5%溶解于 80 ml 超纯水中，待溶解后加入 HCl 调 pH 值至 7.4，定容至 100 ml。

※使用前加入成分储存浓度加入量终浓度PMSF100 mM10μl/1ml 1 mMNaF100 mM10μl/1ml 1 mM Aprotinin10μg/ μl0.2μl/1ml2μg/ μlLeupetin10μg/ μl0.2μl/1ml2μg/ μl二、方法1.细胞收取1)细胞传代至 60mm 培养皿中，待细胞融合约 100%，收集细胞2)弃培养基，加入 PBS 2ml 清洗培养皿一次，弃 PBS。

3)加入 0.05%胰酶 2ml，37℃温育 1min。

4)待细胞变形后，将细胞吹下转移至一个 1.5mlependorf 管中， 10,000rpm×3min，4℃分两次将细胞收至一个5)弃上清， 1ml 预冷的 PBS 清洗沉淀， 10,000rpm ×3min，4℃6)重复 PBS 清洗一次1 / 2.7)弃上清， -80℃冻存待裂解2.蛋白提取1)向细胞沉淀中加入 200μl RIPA 缓冲液 (含 1mM PMS 、1mM NaF、2μg/ml Aprotinin 、2μg/ml Leupetin)，混匀后冰上放置 40mins2)10,000rpm ×15min，4℃将上清转移至一个新的 ependorf 管中（约 250μl）加入缓冲液前先将细胞沉淀敲散，加2 / 2。

细胞可溶性总蛋白质制备试剂盒产品说明书（中文版）主要用途细胞可溶性总蛋白质制备试剂是一种旨在使用化学方法快速充分裂解细胞，并在蛋白酶抑制混合剂的帮助下，通过超速离心，收集所有细胞内可溶性蛋白质的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种细胞（动物、人体）等样品。

可直接用于核酸蛋白结合凝胶迁移电泳分析（EMSA ）、DNA 足迹法检测、特定蛋白后续纯化、蛋白一维或二维电泳、西方杂交、免疫抗体和质谱分析等等。

产品即到即用，性能稳定，操作便捷，收集效果好。

技术背景通过特殊裂解液和蛋白酶抑制混合剂可以防止裂解后细胞内各种活性蛋白成分遭到活化的内源性蛋白酶的破坏，充分保留细胞内蛋白质的免疫和生物学活性。

产品内容清理液（Reagent A ） 毫升 裂解液（Reagent B ） 毫升 活性液（Reagent C ） 微升 产品说明书1份保存方式保存活性液（Reagent C ）在-20℃冰箱里, 其余的保存在4℃冰箱里, 有效保证12月用户自备细胞刮脱棒：用于脱离贴壁细胞15毫升锥形离心管：用于细胞收集后离心 1.5毫升离心管：用于样品操作4℃台式离心机：用于细胞收集和去除杂质 4℃微型台式离心机：用于收集蛋白实验步骤实验开始前，将试剂盒里的从 ℃的冰箱里取出，放进冰槽里冻融，然后移出 微升到 毫升离心管，加入 微升，充分混匀，放进冰槽里，标记为。

然后进行下列操作。

活性液（Reagent C）裂解液（Reagent B）活性液（Reagent C）裂解工作液方法一：贴壁细胞可溶性总蛋白质制备1． 准备 个 cm 2细胞培养瓶的细胞（ 细胞） 2． 小心抽去 cm 2细胞培养瓶里的培养液3． 加入 毫升，清洗生长中的细胞表面 4． 小心抽去 毫升5． 加入 微升含有和GENMED 活性液（Reagent C）的，确保铺满整个培养平面 6． 即刻使用细胞刮脱棒刮脱细胞7． 用 微升枪头移出细胞液到预冷的无菌 毫升离心管 8． 强力涡旋震荡 秒9． 放进冰槽里孵育 分钟，期间每 分钟强力涡旋震荡 秒一次 10．（选择步骤）如暂时停止，放进 ℃冰箱里储存备用 11．（选择步骤）如继续操作，放进冰槽里继续12．即刻放进 ℃微型台式离心机离心 分钟，速度为 g （或 RPM ，例如eppendorf 5415D ） 13．小心移取上清液到新的 毫升离心管 14．放进 ℃的冰箱里备用15．或放进冰槽里，继续后续（西方杂交、免疫沉淀等）操作方法二：悬浮细胞可溶性总蛋白质制备1． 移入待测的悬浮细胞液（ 细胞）到 毫升锥形离心管 2． 放进 ℃台式离心机离心 分钟，速度为 g 3． 小心抽去上清液4． 加入 毫升，用移液管混匀细胞颗粒群 5． 放进 ℃台式离心机离心 分钟，速度为 g 6． 小心抽去上清液7． 加入 微升含有和的 8． 强力涡旋震荡 秒，充分混匀9． 放进冰槽里孵育 分钟，期间每 分钟强力涡旋震荡 秒一次 10．用 微升枪头移出细胞液到无菌的 毫升离心管 11．（选择步骤）如暂时停止，放进 ℃冰箱里储存备用 12．（选择步骤）如继续操作，放进冰槽里继续13．即刻放进 ℃微型台式离心机离心 分钟，速度为 g （或 RPM ，例如eppendorf 5415D ） 14．小心移取上清液到新的 毫升离心管 15．放进 ℃的冰箱里备用16．或放进冰槽里，继续后续（西方杂交、免疫沉淀等）操作注意事项1． 本产品为20次操作2． 待测细胞样品为5 X 106细胞，约100毫克细胞重量 3． 根据细胞量的不同，按比例调整试剂用量 4． 所有操作均须在无菌和4℃状态下进行清理液（Reagent A）清理液（Reagent A）裂解液（Reagent B）裂解工作液清理液（Reagent A）裂解液（Reagent B）活性液（Reagent C）裂解工作液5．可以使用胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液处理贴壁细胞，然后按照方法二继续6．有利于特异性反应，最大限度地减低非特异性信号 裂解液（Reagent B）7． 5 X 106细胞通常可获得10毫克可溶性总蛋白8．如果放在－70℃冰箱里储存备用，避免反复冻融9．本公司提供系列蛋白制备试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能长期稳定2．本产品经鉴定无蛋白酶污染。