不同条件对食用菌酯酶同工酶谱多态性的影响_梁建光
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人乙醛脱氢酶2 (ALDH2)多态性分析页数:50
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药物代谢酶的基因多态性页数:54
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香菇菌丝生长中多酚氧化酶的动态变化
香菇菌丝生长中多酚氧化酶的动态变化
潘迎捷;陈明杰
【期刊名称】《食用菌》
【年(卷),期】1990(000)003
【摘要】香菇菌丝在生长发育中是以分解木质素作为主要碳素营养的。
木质素是一个以芳香族为基本结构的复杂聚合物。
在自然界物质大循环中,它的降解主要是以微生物代谢中产生的多酚氧化酶为催化剂,在常温常压下把复杂的不溶性的聚合物转化为水溶性含有苯环的简单化合物,苯环最后破裂产生简单的有机小分子。
由于香菇等木腐菌具有自身合成多酚氧化酶的能力,因此深入研究香菇多酚氧化酶活性,不仅对开发自然界丰富的木质素资源具有重要意义,而是研究香菇生长发育的主要生理基础。
我们系统地研究了不同碳源、氮源、微量元素和维生素等营养因子对香菇合成多酚氧化酶的影响。
本文报道了香菇菌丝体在生育过程中4种胞内胞外多酚氧化酶活性的动态变化。
【总页数】3页(P4-6)
【作者】潘迎捷;陈明杰
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】S646.120.1
【相关文献】
1.不同基质中香菇菌丝生长期胞外酶活性变化的研究 [J], 王伟科;陆娜;周祖法;袁卫东;宋吉玲;闫静
2.香菇病毒对香菇菌丝生长和漆酶活性的影响 [J], 杨清香;王栋;陈建军;王涛;李学梅
3.香菇病毒对香菇菌丝生长的影响和几种病毒抑制剂的效果试验 [J], 李伶俐;应国华;吕明亮;薛振文
4.香菇L808菌株自交子代在变温培养中菌丝生长速度的分化 [J], 宋春艳;杨晓春;张丹;奚莉萍;章炉军;于海龙;尚晓冬;谭琦
5.香菇菌丝太空诱变效应研究Ⅰ.太空环境对香菇菌丝生长特性的影响 [J], 边银丙;翁曼丽;孙勇
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草菇不同菌株的生物学特性研究
草菇不同菌株的生物学特性研究
张萍;梁建光;杨立红;常斌;蔡德华
【期刊名称】《中国食用菌》
【年(卷),期】2005(024)002
【摘要】本试验选用草菇的六个不同菌株进行了菌株间的拮抗性测定,同时比较了菌丝生长速度、同工酶谱、CMC酶相对活性和抗霉性.已测结果表明:六个不同菌株中,菌株V35与V112亲缘关系最近,其次是V118,但都是不同的菌株;其次,菌株V35、V112与V118菌丝生长速度和CMC酶相对活性也明显的高于其它菌株,其中V112生长速度最快,长势最好,但V35抗霉性和CMC酶相对活性较其它菌株好.【总页数】3页(P17-19)
【作者】张萍;梁建光;杨立红;常斌;蔡德华
【作者单位】烟台师范学院生命科学学院,山东,烟台,264025;烟台师范学院生命科学学院,山东,烟台,264025;烟台师范学院生命科学学院,山东,烟台,264025;烟台师范学院生命科学学院,山东,烟台,264025;烟台师范学院生命科学学院,山东,烟
台,264025
【正文语种】中文
【中图分类】S646.1+3
【相关文献】
1.蛹虫草不同菌株的生物学特性及系统发育研究 [J], 孙军德;房琳琳;王颖;宋思丹;白立红
2.不同草菇菌株的生物学特性比较 [J], 林锋;高永艳;赵妍;颜素雅;陈明杰
3.7个草菇菌株的遗传多样性与生物学特性研究 [J], 张一帆;夏凤娜;黄龙花;陈多杨;王嘉铭;谢意珍;杨小兵
4.草菇不同菌株菌龄及栽培方法的研究 [J], 花春英
5.草菇不同菌株同工酶技术研究初探 [J], 凌霞芬;范苹;严培兰;谭琦;王南;贺冬梅;陈明杰;潘迎捷
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同工酶技术在食用菌育种研究中的应用
1 同工酶的概念原理及其生物学意义
尽管 Fischer (1895)提出了同工酶概念 ,但一直到 20世纪 50年代前 ,由于人们对酶的认识存在很大的 争议 , 阻 碍 了 人 们 对 同 工 酶 的 研 究 [ 3 ] 。M arkert 和 Moller(1959) [ 4 ]报道乳酸脱氢酶在不同个体以及不同 组织中存在不同形式 ,促进了同工酶的概念的产生 。 现在一般认为 ,同工酶是指同一种酶的多种分子形式 。 这些不同的分子形式具有相同或相似的底物 ,催化相 同的反应 。目前对同工酶分类的多数研究都是依据其 来源和结构的差异 ,并从遗传学的角度将其分为 4类 。 即 :单基因决定的同工酶 、多基因决定的同工酶 、复等 位基因决定的同工酶 、修饰同工酶或次生同工酶 。
同工酶之所以能催化相同的反应 ,是因为其在活
收稿日期 : 2007203227 基金项目 :国家发改委高技术产业化示范工程资助项目 ( [ 2004 ]2077) 。 作者简介 :张红梅 (1981 - ) ,女 ,硕士研究生 ,从事民用非动力核技术及
其应用研究 。 通讯作者 :张军 , E2mail: zhj@ xju. edu. cn。
中图分类号 : Q93; S567. 3 文献标志码 : A 文章编号 : 100124705 (2007) 0720044204
同工酶技术作为分子遗传标记技术之一 ,近年来 已被应用于多种大型食用菌菌株鉴别研究 [ 1, 2 ] 。已有 近百种同工酶用于真菌的分类鉴定 ,遗传育种和种群 分化的研究 ,该技术成为菌株分类鉴定的重要手段 ,同 时 ,也作为亲缘关系和种质鉴定研究的一种途径 。但 对同工酶技术在食用菌研究中的应用 ,很少有系统的 报道 。本文综述了同工酶的概念原理 ,生物学意义及 其在食用菌育种研究中的应用 。
尽管 Fischer (1895)提出了同工酶概念 ,但一直到 20世纪 50年代前 ,由于人们对酶的认识存在很大的 争议 , 阻 碍 了 人 们 对 同 工 酶 的 研 究 [ 3 ] 。M arkert 和 Moller(1959) [ 4 ]报道乳酸脱氢酶在不同个体以及不同 组织中存在不同形式 ,促进了同工酶的概念的产生 。 现在一般认为 ,同工酶是指同一种酶的多种分子形式 。 这些不同的分子形式具有相同或相似的底物 ,催化相 同的反应 。目前对同工酶分类的多数研究都是依据其 来源和结构的差异 ,并从遗传学的角度将其分为 4类 。 即 :单基因决定的同工酶 、多基因决定的同工酶 、复等 位基因决定的同工酶 、修饰同工酶或次生同工酶 。
同工酶之所以能催化相同的反应 ,是因为其在活
收稿日期 : 2007203227 基金项目 :国家发改委高技术产业化示范工程资助项目 ( [ 2004 ]2077) 。 作者简介 :张红梅 (1981 - ) ,女 ,硕士研究生 ,从事民用非动力核技术及
其应用研究 。 通讯作者 :张军 , E2mail: zhj@ xju. edu. cn。
中图分类号 : Q93; S567. 3 文献标志码 : A 文章编号 : 100124705 (2007) 0720044204
同工酶技术作为分子遗传标记技术之一 ,近年来 已被应用于多种大型食用菌菌株鉴别研究 [ 1, 2 ] 。已有 近百种同工酶用于真菌的分类鉴定 ,遗传育种和种群 分化的研究 ,该技术成为菌株分类鉴定的重要手段 ,同 时 ,也作为亲缘关系和种质鉴定研究的一种途径 。但 对同工酶技术在食用菌研究中的应用 ,很少有系统的 报道 。本文综述了同工酶的概念原理 ,生物学意义及 其在食用菌育种研究中的应用 。
与食用菌相关主要酶的研究和应用
（Ｈａｒｓｅｌｅｒ１９８３）。 ２．４ 同功酶 同功酶是指催化同一种化学反应，但其 酶蛋白本身的组成和分子结构有所不同的一组酶。 上世纪 ６０ 年代初，随蛋白质技术发展， 特别是凝胶电 泳技术的应用， 同功酶才可在细胞提取物中分离出 来。这类酶存在于生物的同一种属或同一个体的不 同组织中， 甚至同一组织、同一细 胞 中 。 同 功 酶 的 产 生是基因产物， 是适应环境的结果， 即当一种同工酶 受到抑制或破坏时， 其它的酶仍然起作用， 从而保证 代谢的正常进行， 在我国食用菌同功酶的研究，在二 十世纪 ９０ 年代初期就已有许多报道。多用于菌种分 类。作为遗传与变异的指标，改变了以形态结构为主 （子 实 体 及 孢 子 形 态 、大 小 、颜 色 等 ）的 分 类 方 法 。因 为 同功酶主要由编码各酶带的基因所直接控制， 从蛋 白质角度研究群体间遗传与变异及亲缘关系的重要 依据， 此法简便、快速、灵敏。
摘要： 本文主要阐述了酶作用特点及与食用菌密切 相关的酶 （纤维素酶、漆酶和多酚氧化酶 、蛋白酶 、同 功酶、果胶酶） 的研究与应用情况 。
关键词： 酶； 食用菌 ； 特点 ； 研究和应用 中图分类号： Ｓ６４６ 文献标识码： Ａ 文章编号： １００３－ ８３１０（ ２００６） ０１－ ００４０－ ０２
２ 与食用菌密切相关主要酶的研究和应用
２．１ 纤 维 素 酶［１］［２］ 纤 维 素 酶 是 降 解 纤 维 素 生 成 葡 萄 糖的一组酶的总称。它不是单种酶， 而是起协调作用 的 多 组 份 酶 系 ， 由 Ｃ１ 酶 、Ｃｘ 酶 和 葡 萄 糖 苷 酶 组 成 。 Ｃ１ 酶是纤维素酶 系 中 的 重 要 组 分， 它 在 天 然 纤 维 素 降解中起主导作用，可将纤维素降解成短链或直链纤 维素。目前采用滤纸糖酶活测定法（ＦＰＡ 法）。Ｃｘ 酶即 β－ １、４ 葡聚糖酶，有外切和内切两种酶产物是纤维糊 精 、纤 维 三 糖 、纤 维 二 糖 和 葡 萄 糖 。 目 前 采 用 ＣＭＣ 测 定 法 。 葡 萄 糖 苷 酶：水 解 纤 维 二 糖 和 短 链 纤 维 寡 糖 生成葡萄糖。
摘要： 本文主要阐述了酶作用特点及与食用菌密切 相关的酶 （纤维素酶、漆酶和多酚氧化酶 、蛋白酶 、同 功酶、果胶酶） 的研究与应用情况 。
关键词： 酶； 食用菌 ； 特点 ； 研究和应用 中图分类号： Ｓ６４６ 文献标识码： Ａ 文章编号： １００３－ ８３１０（ ２００６） ０１－ ００４０－ ０２
２ 与食用菌密切相关主要酶的研究和应用
２．１ 纤 维 素 酶［１］［２］ 纤 维 素 酶 是 降 解 纤 维 素 生 成 葡 萄 糖的一组酶的总称。它不是单种酶， 而是起协调作用 的 多 组 份 酶 系 ， 由 Ｃ１ 酶 、Ｃｘ 酶 和 葡 萄 糖 苷 酶 组 成 。 Ｃ１ 酶是纤维素酶 系 中 的 重 要 组 分， 它 在 天 然 纤 维 素 降解中起主导作用，可将纤维素降解成短链或直链纤 维素。目前采用滤纸糖酶活测定法（ＦＰＡ 法）。Ｃｘ 酶即 β－ １、４ 葡聚糖酶，有外切和内切两种酶产物是纤维糊 精 、纤 维 三 糖 、纤 维 二 糖 和 葡 萄 糖 。 目 前 采 用 ＣＭＣ 测 定 法 。 葡 萄 糖 苷 酶：水 解 纤 维 二 糖 和 短 链 纤 维 寡 糖 生成葡萄糖。
稀土元素对三种平菇的酯酶同工酶谱的影响论文综述
稀土元素对三种平菇的酯酶同工酶谱的影响王正庆（山西师范大学生命科学学院0103班山西临汾041004）摘要：本实验采用聚丙烯酰氨凝胶电泳的方法分别对培养在正常、300ppm、600ppm、900ppm的稀土元素处理的培养基上的三种平菇菌丝体中的酯酶同工酶酶谱进行分析，结果表明：经600ppm的稀土元素处理的A2106、平2一二级酶带总数多于其它对照组，光密度值（OD）值也大于其它处理组。
经300ppm稀土元素处理的C.9.0一二级酶带总数多于其它对照组，光密度值（OD）值也大于其它对照组。
关键词：稀土元素平菇酯酶同工酶光密度值迁移率The effect of rare-erath to three strains of PleurotusOstreator'Estreator isozymeWangzhengqing(Biology Department Shanxi Teacher's university Class 0103 Linfen Shanxi 041004) Abstract: This study use the method of PAGE analyse the effect of rare-earth to three strains of Pleurotus ostreator's estrase isozme (A2106、Ping2 、C.9.0) The Pleurotus ostreators is cultured in normal 、300ppm、600ppm、900ppm rare-earth interbreed. The result show that estrase isozme bands Rf OD of three strains which cultured in different rare-earth interbreed are different.Key words: Rare-earth leurotus Ostereators sterase isozyme The light density value Migration rate1.实验对象：平菇A2106、C.9.0、平22.处理水平：分别用300ppm 600ppm 900ppm的稀土元素溶液加入到培养基中培养（每100ml分别加入30ul 60 ul 90ul）并且设置了对照组（CK）3.影响因素：电泳时的温度电极缓冲液的PH值凝胶的浓度点样量的多少酶液的浓度电泳时的电压染色效果4.：实验指标酶带的光密度值酶带的迁移率酶带的级别一级酶带酶带色深而宽二级酶带酶带色浅而宽三级酶带酶带色极浅而宽一级酶带酶带色深而窄二级酶带酶带色浅而窄三级酶带酶带及浅而窄5实验效应：三种不同的稀土元素溶液所跑的电泳酶带的迁移率、光密度值、酶带的数目（即一级酶带、二级酶带、三级酶带）各个指标均有变化，最适合的浓度各个指标忧于其它对照组稀土元素对三种平菇的酯酶同工酶谱的影响王正庆山西师范大学生命科学学院0103 临汾041004摘要：本文综述了侧耳的细胞学和子实体的形态建成，生理生化方面，遗传育种方面的研究。
平菇过氧化物酶和酯酶同工酶的研究
平菇过氧化物酶和酯酶同工酶的研究
周丽斌
【期刊名称】《食用菌》
【年(卷),期】1989(000)005
【摘要】同工酶的多种形式是由基因决定的,与物种的遗传和变异有直接关系。
食用菌特别是平菇品种较多,很难准确区分,而通过同工酶分析,对研究品种间亲缘关系有一定意义。
本文是笔者对平菇不同品种的过氧化物酶同工酶和酯酶同工酶的研究结果。
【总页数】2页(P23-24)
【作者】周丽斌
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】S646.101
【相关文献】
1.两种为害牧草叶(虫甲)的酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶的比较研究(简报) [J], 张茂新
2.毛茛属两种植物的过氧化物酶同工酶和酯酶同工酶的研究 [J], 徐根娣;刘鹏;钱丽
3.猕猴桃酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶分析及遗传多样性研究 [J], 陈万秋;叶新太;李思光;薛喜文
4.冬青属苦丁茶不同种质材料之过氧化物酶同工酶和酯酶同工酶研究初报 [J], 史学群;刘国民;徐立新;唐碧军;陈圣政
5.蛇足石杉过氧化物酶和酯酶同工酶比较研究 [J], 袁带秀;钟飞;恩特马克.布拉提白
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6个白灵菇菌株酯酶和过氧化酶同工酶分析
取剂时提取效果次之 ，Ｈ 一 氨酸 （Ｈ ８３ 提取 效果最 差。 Ｔｓ 甘 ｐ ．） 说明ｒ ｓ Ｈ １ ｐ ｉ — Ｃ 的 Ｈ值不是越高越好 ， ｆ 而且不论采用哪种 ｐ Ｈ 值效果均明显好于其它提取剂。
３ ２ 过氧化物酶 同工 酶做 为一 种遗传 标 记 ， ． 它们 之间 的差
３ 小 结与 讨 论
３１ 在同一提取条件下 ， ． 利用不 同提取剂提取桦褐 孔菌菌丝 体过氧化物酶 同工 酶 ， 取 效果 明显 不 同。采 用 Ｔｉ—Ｈ １ 提 ｒ ｓ Ｃ
（Ｈ ６ ９做为过氧化物 酶 同工 酶提 取剂时 提取效 果最好 ， ｐ ． ） 在 图谱 中条带丰富， 带型清 晰。采用 Ｔ ｉ—Ｈ １ｐ ． ） ｒ ｓ Ｃ （ Ｈ ８ ８ 做为提
［ ］ ７ 涂志强 ， 姚书文 ， 扬沂铭 金银花不 同提取剂 中绿原酸 的含量测定 ［］ 基层 中药杂志 ， ９ ，１２ ：６ ３ ． Ｊ． １ ７ １（）３ — ７ ９ ［ ］ ８ 王卫 国， 赵永亮 ． 氧化 物酶 同工酶在 真菌分 类上的研究 ［ ］食 过 Ｊ．
６个 白灵菇 菌株 酯 酶和 过 氧化酶
同 工 酶 分 析
冯 改静 李 明 田景花 李 守勉
剂在迁移率为 ０６ 处有一条很 弱的带 ， ．０ Ｆ提取剂 在迁移率 为
０６ ．２处有一条带 ； Ｂ和 Ｄ两种提取剂 提取 效果 亦基本相 同， 酶 带数为 ２条 ； Ｃ提取剂提取效 果最差 ， 出现 ２条酶 带且迁 移 仅 率为 ０７ ．５处酶带极弱。
圈
谱带
共同的特征 ， 又各 自具 有本菌株 的特有 特征。② 白灵 菇菌株 的 酯酶和过氧化物酶 同工 酶谱 比较稳 定 ， 是一 项稳定 的分 子水平 的重要指标 ， 以作为鉴定 白灵菇种类的重要依据 。 可 关键词 白灵菇 同工酶 酯 酶 过 氧化物酶
9个平菇菌株的生长特性与酯酶同工酶活性研究
一
的平菇菌株。
１ ２ 主 要 仪 器设 备 ．
移率。
、 转
冰箱 、 心 机 、 离 电泳 仪 、 泳 槽 等 。 电
１ ３ 试 验 方 法 ．
点 样 孔 到 酶带 之 间 的距 离 岁 一 样 孔 到 溴 酚 蓝 指 示 剂 带 之 间 的 距离 千 点
１３ ３ 菌株 酯酶 酶谱 的 聚 类 分 析 将 电 泳 获 得 的 每 个 菌 株 ．． 将 搜 集 来 的 ９个 平菇 试 管 菌 的 酯 酶 酶谱 用 ｎｓｓ 件 进 行 聚类 分 析 ， 出 聚类 分 析 图。 ｔ 软 ｙ 作
供试的 ９个菌株分 别购 于邯郸市场 ２个规模较大的菌种
生 产 公 司 ， 中 ３号 菌 株 和 ６号 菌 株 为 不 同 公 司 出售 的 同 一 其
名 称 的平 菇 菌株 ， 他 菌 株 分 别 为 ２个 公 司 出售 的 不 同 名 称 其
胶电流为 ２ Ａ， ４ｍ 分离胶 电流为 ３ Ａ。用酯酶染色液（ ６ｍ 乙酸 ｌ 一萘酯 、 乙酸 一２一萘酯 ） 处理 胶片 ２ ３ ｉ， 到出现 ０— ０ ｍｎ 直 清 晰 的 酶 带 ， 水 冲 洗 胶 片 ， 照 ， 量 并 计 算 每 条 带 的 迁 用 拍 测
江苏农业 学
２ １ 第 ２期 ０ ０年
－ ２ ５－ — ６ － — － — —
刘贵 巧 ， 翠 绵 ， 庆 彬 ． 张 曹 ９个 平 菇 菌株 的 生长 特 性 与 酯酶 同工 酶 活性 研 究 ［ ］ Ｊ ．江 苏农 业科 学 ．０ ０ ２ ：６ ２ ６ ２ １ （ ）２ ５— ６
９个平菇菌株 的生 长特性与酯酶 同工酶活性研究
２ 结 果 与 分 析 ２ １ 菌 株 茵 丝 的 长速 、 相 结 果 ． 长 ９个 平 菇 菌 株 菌 丝 长 速 长 相 见 表 １ 。 ２ ２ 菌 株 的 酯 酶 同工 酶 测 定 结 果 ． 由表 ２ 图 １ 以看 出 ， 、 可 ９个 平 菇 菌 株 均 含 有 为 ５ ０ ．、
的平菇菌株。
１ ２ 主 要 仪 器设 备 ．
移率。
、 转
冰箱 、 心 机 、 离 电泳 仪 、 泳 槽 等 。 电
１ ３ 试 验 方 法 ．
点 样 孔 到 酶带 之 间 的距 离 岁 一 样 孔 到 溴 酚 蓝 指 示 剂 带 之 间 的 距离 千 点
１３ ３ 菌株 酯酶 酶谱 的 聚 类 分 析 将 电 泳 获 得 的 每 个 菌 株 ．． 将 搜 集 来 的 ９个 平菇 试 管 菌 的 酯 酶 酶谱 用 ｎｓｓ 件 进 行 聚类 分 析 ， 出 聚类 分 析 图。 ｔ 软 ｙ 作
供试的 ９个菌株分 别购 于邯郸市场 ２个规模较大的菌种
生 产 公 司 ， 中 ３号 菌 株 和 ６号 菌 株 为 不 同 公 司 出售 的 同 一 其
名 称 的平 菇 菌株 ， 他 菌 株 分 别 为 ２个 公 司 出售 的 不 同 名 称 其
胶电流为 ２ Ａ， ４ｍ 分离胶 电流为 ３ Ａ。用酯酶染色液（ ６ｍ 乙酸 ｌ 一萘酯 、 乙酸 一２一萘酯 ） 处理 胶片 ２ ３ ｉ， 到出现 ０— ０ ｍｎ 直 清 晰 的 酶 带 ， 水 冲 洗 胶 片 ， 照 ， 量 并 计 算 每 条 带 的 迁 用 拍 测
江苏农业 学
２ １ 第 ２期 ０ ０年
－ ２ ５－ — ６ － — － — —
刘贵 巧 ， 翠 绵 ， 庆 彬 ． 张 曹 ９个 平 菇 菌株 的 生长 特 性 与 酯酶 同工 酶 活性 研 究 ［ ］ Ｊ ．江 苏农 业科 学 ．０ ０ ２ ：６ ２ ６ ２ １ （ ）２ ５— ６
９个平菇菌株 的生 长特性与酯酶 同工酶活性研究
２ 结 果 与 分 析 ２ １ 菌 株 茵 丝 的 长速 、 相 结 果 ． 长 ９个 平 菇 菌 株 菌 丝 长 速 长 相 见 表 １ 。 ２ ２ 菌 株 的 酯 酶 同工 酶 测 定 结 果 ． 由表 ２ 图 １ 以看 出 ， 、 可 ９个 平 菇 菌 株 均 含 有 为 ５ ０ ．、
大学毕业论文：稀土元素对三种平菇的酯酶同工酶谱的影响
编号：山西师范大学毕业论文论文题目：稀土元素对三种平菇的酯酶同工酶谱的影响院（系）：生命科学学院专业：生物技术班级：0103 班学生姓名：王正庆指导教师：张美萍2005 年 6 月18 日目录摘要 (1)引言 (2)1实验材料与方法 (2)1.1实验材料 (2)1.1.1供试菌株 (2)1.1.2 实验试剂 (2)1.1.3实验仪器 (3)1.1.4浓度梯度培养基的配置 (3)1.1.5材料处理 (3)1.2实验方法 (3)1.2.1同工酶电泳 (3)1.2.1.1 样品提取缓冲液筛选 (3)1.2.1.2粗酶液的提取 (4)1.2.1.3样品匀浆上清液的制备 (4)1.2.1.4垂直平板电泳相关试剂配方 (4)1.2.1.5实验操作步骤 (5)1.2.2电泳图谱分析 (6)1.2.3酶带说明 (6)1.2.4数据处理 (7)2.0 结果与分析 (7)2.1样品提取缓冲液筛选 (7)2.2凝胶体系的筛选 (7)2.3电泳结果 (6)2.3.1A2106菌丝体酯酶同工酶谱分析 (6)2.3.2平2菌丝体酯酶同工酶谱分析 (8)2.3.3 C.9.0菌丝体酯酶同工酶谱分析 (11)2.4.0结果分析 (13)3.0 讨论 (14)Abstract (15)参考文献 (16)致谢……………………………………………………………………………………………稀土元素对三种平菇的酯酶同工酶谱的影响王正庆（山西师范大学生命科学学院山西临汾041004）摘要：本实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法分别对培养在0ppm、300ppm、600ppm、900ppm的稀土元素处理的培养基上的三种平菇菌丝体中的酯酶同工酶酶谱进行分析，结果表明：经600ppm的稀土元素处理的A2106、平2一二级酶带总数多于对照组（CK），最大光密度值（MaxOD）值也大于其它处理组。
经300ppm稀土元素处理的C.9.0一二级酶带总数多于对照组(CK)，最大光密度值（MaxOD值）也大于对照组(CK)。
食用菌获高产 防绿霉是关键
［］ ７ 黄寿松等 ． 几种植物 中的过氧化物酶同酶分析． 遗传 ，９０２３ ： １８ ，（）７
—
１ Ｏ．
［］ ８ 杨新美 ． 食用菌研究法 ［ ． Ｍ］北京 ： 中国农业出版社 ． ［］ ９ 陈伟群 ， 张天宇 ． 十字花科上的链格孢属真菌同工酶 电 泳分 析［］ Ｊ．
真菌学报 ，９ ４ １ （ ）２ ５ ０ ． １９ ，３ ４ ：９ —３ ２
中国食用菌 ，９ ９ １ （ ） １ —１ ． １９ ，８ ３ ：５ ７
６ 白灵菇菌株 间的过氧化物酶 同工酶相 关数见表 ２ 个 。６ 个 白灵 菇 菌株 的过 氧 化 物 酶 同工 酶相 似 系数 分 布 范 围 是 ０ ２０ ．０ ， ．５ ～１００ 其值越大说 明两菌株 之 间的亲缘关 系越 近 ， 越
与白灵 １ ３之间相似 系数 较 小 ， 明 亲缘关 系较远 。白灵 ５ 、 说
食用菌获高产 防绿霉是 关键
绿霉是食用菌栽 培 中的主要 病害 ， 主要 发生在 没有发 菌
的菌块或未经彻 底消毒 的培养 料 上， 酸性和 湿度较 大的环境
与 白 ２４６ 灵 、、 之间相似系数更小 ， 说明亲缘关系更远 。
自的特征 ， 也反映 出 白灵 菇各 菌株 间的联 系与 区别。试 验证 明， 酯酶和过氧化物 同工 酶指标 的 白灵 菇 亲缘 关系 鉴定 中具
有重 要意义 。
３ ２ 通过对 酯酶 和过氧化物酶 同工 酶谱 的 比较发现 ， ． 白灵菇 的过氧化物酶酶带较少 ， 出现相似性 机率 较大 ； 而酯 酶同工酶 的酶带条数较多 ， 比过氧 化酶谱更 适合 作为 白灵菇不 同菌株 分类 的依据 。 综上所述 ， 同工酶技术可作为 白灵菇 选育菌种 、 鉴定菌种 及研究亲缘关系的重要指标 。对 于 白灵菇来说 酯酶 同工酶 的 分析 比过氧化物酶 同工酶 的分析更能说 明问题 。 参 考 文 献
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第27卷第4期 西 南 农 业 大 学 学 报(自然科学版)V o.l27,No.4 2005年8月J ou r na l o f South w est Ag ricult u r a l University(N atural Science)Aug.2005文章编号:1000-2642(2005)04-0500-05不同条件对食用菌酯酶同工酶谱多态性的影响①梁建光,杨立红,王晓洁,黄清荣,冯培勇,蔡德华,邹志辉(烟台师范学院生命科学学院,山东烟台 264025)摘要:采用聚丙烯酰胺凝胶电泳,以食用菌为材料,分析了不同培养时间和不同培养基种类及不同提取条件对酯酶同工酶酶谱的影响,结果表明:培养时间和培养基组成及提取条件的不同,酯酶同工酶酶谱的酶带呈现不同的多态性。
提示:同工酶在食用菌菌种选育的应用上,应固定分析菌丝的最佳培养时间及固定最适培养基种类和选取适宜的提取方法,才能获得稳定的结果。
关 键 词:酯酶同工酶;培养时间;培养基;提取条件;聚丙烯酰胺凝胶电泳中图分类号:Q516 文献标识码:AEFFECTS OF D I FFERENT COND ITI O NS ON ESTERASE ISOENZY M EOF T HE ED I BLE FUNGUS PL EUROT US OSTREAT USL I ANG Jian-guang,YANG L i-hong,W ANG X i ao-jie,HUANG Q i ng-ron g,FENG P ei-yon g,CA I De-hua,ZO U Z h i-hu i(Co ll ege o f L ife Science,Y an t a i No r m al U niversit y,Y antai,Shandong,264025,Chi na)Ab strac t:Po lyacry la m i de ge l e lectropho resis(PAG E)w as perfor m ed t o ana l y ze the effects of culture ti m e,cult ure mediu m and extracti on cond itions on the e ste rase is oenzy m e of P l eurotus ostr ea t us my ce lia.The resu lts sho w ed t hat t he nu mber and sta i nab ilit y o f the enz ym e bands varied w it h t he cult ure conditi ons,suggesting t ha t fixed cult ure ti me and cu lture mediu m should be app lied i n t he proce ss of breed-ing prog ram s of edible f ung.iK ey word s:e sterase isoenzym e;cult ure ti m e;m ed i u m;ex tracti on conditions;PAG E 同工酶分析作为分子遗传标记技术之一,被应用于真菌的分类鉴定中。
它是在属内种间及品种之间的分类鉴定中有效的方法[1]之一。
同工酶酶谱的差异一方面是由编码同工酶的基因所决定的,但酶谱不能直接反映DNA水平上的差异,另一方面还受试验条件和生物生长发育时期等影响表达水平的因素的影响。
所以,不同的提取方法也直接影响酶谱的多态型,因而,在食用菌菌种选育的应用上固定最佳培养时间及固定最适培养基种类和选取适宜的提取方法,对于保证同工酶作为较稳定的遗传标记是非常必要的。
本文以食用菌为材料研究不同条件对其酯酶同工酶多态型的影响。
1 材料与方法1.1 材 料1.1.1 平菇72(P leurotus ostre a t u s)由烟台师范学院食用菌研究所提供。
不同培养时间的平菇营养菌丝,分别编号如表1。
1.1.2 4种培养基的配方①收稿日期:2004-10-24基金项目:山东省科技厅资助项目《食用菌优良品种选育与产业化开发》鲁家澳门字[2001]500号作者简介:梁建光(1966-),男,山东省莱阳人,烟台师范学院讲师,从事微生物学教学与研究。
培养基Ⅰ:可溶性淀粉3%～6%,蔗糖1%,磷酸二氢钾0.3%,硫酸镁0.15%,酵母膏0.1%,p H6。
培养基Ⅱ:葡萄糖50g,硝酸钙0.5g,硝酸钾2g,氯化钠0.1g,磷酸二氢钾0.5g,硫酸镁0.5g,硫酸亚铁2mg,维生素B12mg,水1000m L,pH5。
培养基Ⅲ:马铃薯20%,蛋白胨0.2%,葡萄糖2%,磷酸二氢钾0.05%,硫酸镁0.05%,氯化钠0.01%,p H自然。
培养基Ⅳ:玉米粉3%,蔗糖1%,磷酸二氢钾0.3%,硫酸镁0.15%,pH自然。
1.2 方 法1.2.1 样品制备 分别取一定量各表编号的材料2 g,放入预冷的研钵中,加入适量的稀释10倍的浓缩胶(pH6.7)缓冲液[2],再加入少许石英砂,在冰浴中研磨10m in,然后在4℃下16000r/m in的高速冷冻离心机离心5m in(Z323K),吸取上清液置于-18℃的冰箱中保存备用。
1.2.2 电 泳 采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳法[3]。
分离胶浓度为7%,p H8.9,浓缩胶浓度为2.5%,p H6.7;点样量150μg(双缩尿法测定蛋白含量[4]),电极缓冲液为Tris-G l y系统p H8.3,起始电流10mA,约1h后,将电流升至48mA,恒流约4h,待溴酚蓝指示剂迁移至下端约0.5c m处停止电泳。
电泳完毕后,酯酶同工酶用醋酸α—萘酯、醋酸β—萘酯和坚牢蓝配制的染液于37℃染色10～15 m in[5],待显出清晰酶带后取出,用蒸馏水漂洗几次,直接照相。
1.2.3 结果分析方法迁移率(R f)=原点至条带中心点的距离/原点的距离至指示剂距离酶含量和活性:酶带愈宽,含量愈多,染色愈深,活性愈强。
1级带A酶带色深而宽,1级带B酶带色深而窄,2级带A酶带色浅而宽,2级带B酶带色浅而窄, 3级带A酶带色极浅而宽,3级带B酶带色浅而窄。
表1 不同培养时间营养菌丝Tab l e1 H ypH ae i n d iff erent cu lt u re ti m e菌 株S trai n编 号Nu m ber培养时间/d C u lt u re ti m e711141720平菇P l eur o t us ost reatus A A7A11A14A17A20 2 结 果2.1 不同培养基培养的菌丝体酯酶同工酶酶谱分析平菇不同培养基酯酶同工酶酶谱分析,结果见表1和图1。
501第27卷第4期 梁建光等 不同条件对食用菌酯酶同工酶谱多态性的影响表2 平菇不同培养基酯酶同工酶酶带的迁移率(R f) Table2 The Rf of esterase is oenzy m e band of P le u r ot u s ost re a t u s in d ifferent cu lt u rem edi um谱带号En z y m e band材料编号Num berAⅠAⅡAⅢAⅣ10.02620.0590.0590.05930.1250.1250.1250.12540.17950.20160.23570.5030.50380.5160.5160.5160.51690.5710.5710.5710.571100.7090.709110.860120.883 培养基Ⅱ的酯酶同工酶酶谱比培养基Ⅰ增加R f 0.495和R f0.709的酶带,且R f0.026的透明带消失;培养基Ⅲ的酶谱比培养基Ⅱ增加R f为0.179, 0.201,0.235,0.503,0.860,0.883的6条酶带;培养基Ⅳ只有3条酶带。
相比较下,培养基Ⅲ的酶谱酶带最多,显色最深。
2.2 不同培养时间酯酶同工酶酶谱分析平菇不同培养时间酯酶同工酶酶谱分析结果见表2和图2。
表3 平菇不同培养时间酯酶同工酶酶带的迁移率(R f)Table3 The Rf of esterase is oenzy m e band of P le u r ot u s ost re a t u s in d ifferent ti me谱带号Enzy m e band材料编号Num berA7A11A14A17A2010.0980.0980.0980.0980.098 20.1420.1420.1420.1420.142 30.1750.1750.1750.1750.175 40.2080.2080.2080.2080.208 50.2400.2400.2400.2400.240 60.5300.5300.5300.5300.530 70.5630.5630.5630.5630.563 80.58990.6170.6170.6170.6170.617 100.6410.6410.6410.641 110.6690.6690.6690.669 120.718130.7490.7490.7490.7490.749 140.785150.9020.9020.9020.9020.902 表1和图1表明,培养7d的平菇菌丝体酯酶同工酶的酶谱中有10条酶带;当培养时间延长至11d 时,10条酶带的染色加深,并且增加了R f为0.641, 0.669,0.718,0.785,0.931的5条酶带;培养14d 时,R f为0.718和0.785的酶带消失,R f为0.641, 0.669和0.931的酶带显色加深;培养17d时,增加R f0.589的酶带;培养20d时,R f0.589和R f0.931的酶带消失。
相比较下,培养11d的酯酶同工酶酶谱酶带最多,显色最深,表明多肽性好及活性高。
2.3 不同提取条件对酶活性的影响2.3.1 不同研磨时间对酶活性的影响 不同研磨时间对酶活性的影响结果见表3和图3。
由图3和表3的结果可知:提取时间为25m in 和30m in的酶谱其酶带无明显差异,均有8条,酶带清晰,活性高。
因此可以确定平菇脂酶同工酶的最佳样品研磨时间为25m in。
长时间的研磨能使菌丝的细胞得以充分的破壁,使酶溶解释放,因而酶含量增多。
2.3.2 不同静置提取时间对酶活性的影响表4 不同研磨时间酯酶同工酶的谱带特征Tab le4 The character of esterase isoen z y m e band in d ifferentm illi ng ti m e酶 谱Enzy m e band时间/m i n T i m e51015202530 1级带AF irst leve lb and A2222级带AS econd l evel band A011111 3级带ATh ird l evel band A100000 1级带BF irst level band B000022 2级带BS econd leve l band B022211 3级带BTh ird l evel band B322212总带数Tot a lb and677788 由图4和表4的结果可知:静提6h的酶带分离效果最好。