葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法

葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。

过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。

红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。

【试剂】1 ． 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ，用蒸馏水定容至 1L 。

2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 ℃保存，可稳定3 个月。

3 ．酚溶液称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。

4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合， 4 ℃可以存放 1 个月。

5 ． 12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。

6 ． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。

2h 以后方可使用。

7 ． 5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。

【操作步骤】1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。

葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理概述及解释说明1. 引言1.1 概述本文旨在介绍葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，并对其进行详细的解释和说明。

血糖测定是医学和生物科学领域中非常重要的一项实验技术，用于评估人体内的葡萄糖水平以及相关代谢功能的异常情况。

葡萄糖氧化酶法是一种常用的血糖测定方法，其基本原理是利用特定酶对葡萄糖进行氧化反应并与辅助试剂发生显色反应，从而间接地测定血液中的葡萄糖含量。

1.2 文章结构本文将按照以下结构进行展开：首先，介绍葡萄糖氧化酶的简要概况和血糖测定方法的总体概述；其次，详细讲解葡萄糖氧化酶法测定血糖的基本原理；然后，描述实验步骤并给出操作流程；接着，分析实验结果并讨论其中的意义和影响因素；最后，总结实验结论并展望未来该领域的研究意义和发展方向。

1.3 目的本文的目的是全面而清晰地介绍葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，帮助读者了解该方法在实际应用中的作用和意义。

通过本文的阅读，读者可以深入了解葡萄糖氧化酶法的基本理论和操作流程，并对实验结果进行准确而详细的分析与讨论。

同时，本文也旨在提供对该方法局限性和未来发展方向进行探讨，并为相关研究人员提供参考，促进该领域的进一步发展和突破。

2. 葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理：2.1 葡萄糖氧化酶简介：葡萄糖氧化酶是一种存在于细胞内的酶类，在生物体中起到将葡萄糖转化为能量的重要作用。

该酶主要参与细胞内氧化还原反应，并催化葡萄糖与辅酶NAD+之间的反应。

在此过程中，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸，并产生还原型辅酶NADH。

2.2 血糖测定方法概述：血液中的血糖水平是一个重要的生理指标，可以提供人体能量供给的信息。

因此，血糖水平的测定对于诊断和治疗许多代谢性疾病非常重要。

目前，有多种方法用于测定血液中的血糖浓度，其中最常用且最经典的方法就是使用葡萄糖氧化酶法。

2.3 葡萄糖氧化酶法的基本原理：葡萄糖氧化酶法是一种非常敏感和特异性的测定血糖浓度的方法。

该方法基于葡萄糖氧化酶与葡萄糖的特异性反应，通过检测在该反应中生成的还原型辅酶NADH的产生量来间接测定血液中的血糖浓度。

葡萄糖氧化酶的活力测定实验报告葡萄糖氧化酶酶活测定葡萄糖氧化酶酶活测定1 酶活单位与定义pH6.0、30℃的条件下，每分钟能把 1.0μmol 的β-D-葡萄糖氧化成D-葡萄糖酸和H2O2 的酶量为一个单位。

2 测定原理葡萄糖和氧反应，在葡萄糖氧化酶的作用下，生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢和无色的还原型邻联茴香胺在过氧化物酶的作用下，生成水和红色的氧化型邻联茴香胺。

3 试剂和溶液3.1 磷酸盐缓冲液（pH6.0）称取16.61g 磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O ）和35.82g 磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O），溶于无CO2 的水中，稀释到1000ml。

3.2 邻联茴香胺甲醇缓冲液1g 邻联茴香胺加在100ml 甲醇中搅拌溶解备用。

临用时现配，取0.1ml 加入到上述缓冲液12ml 中混匀。

3.3 180g/l 葡萄糖水溶液18g 葡萄糖加适量水溶解，并定容至100ml。

3.4 0.03%辣根过氧化物酶液称取辣根过氧化物酶（HRP,美国Ameresco 公司）10mg，溶于30ml 蒸馏水。

4 仪器设备721-分光光度计、恒温水浴、秒表5 分析步骤5.1 待测酶样品的处理将待测酶样做适当稀释后进行试验，使得测定△A 值在0.25～0.4。

5.2 测定6 结果表示与计算X=[△A÷（11.3×t×0.1）] ×nt—测定时间，min0.1—样品体积，ml11.3—消光系数n—稀释倍数所得结果表示至整数。

篇二：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶(glucose oxidase ，GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。

过氧化物酶(peroxidase ，POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder 反应。

葡萄糖1.目的规范葡萄糖测定的操作程序，确保葡萄糖测定结果准确。

2.检验方法氧化酶法（两点终点法） 3.检验原理 葡萄糖+O 2+H 2O 葡萄糖酸+H 2O 2H 2O 2+4-AAP+苯酚红色醌亚胺+4H 2O在波长505nm 处比色，计算出GLU 浓度。

4.临床意义临床检测GLU 浓度主要用于糖尿病诊断、昏迷鉴别诊断及糖代谢研究。

血糖增高主要见于：①生理性高血糖：可见于饭后1-2小时或情绪紧张肾上腺分泌增加时;②病理性高血糖：可见于内分泌功能障碍引起的糖尿病、颅外伤、颅内出血、脑膜炎引起的颅内高压、脱水引起的高血糖、急慢性胰腺炎、肝功能障碍等。

血糖降低主要见于：①生理性低血糖：常见于饥饿和剧烈运动后。

②病理性低血糖：可见于高胰岛素血症、非胰性肿瘤、糖原累积症、自身免疫性疾病、半乳糖血症和肾脏疾病等。

5.标本采集及干扰因素 5.1标本要求空腹不抗凝静脉血2~3ml 。

5.2标本保存室温保存，及时送检。

血清ALT 在20-25℃可稳定24小时，在2-8℃储存可稳定7d ，-20℃冰冻保存可稳定30d 。

5.3注意事项推荐选用血清，避免溶血，红细胞中ALT 比血浆高约7倍，溶血时红细胞内ALT 可进入血浆，导致测定结果偏高。

标本应避免溶血、脂血、黄疸。

6.检测仪器日立7180全自动生化分析仪，使用具体要求和校准程序详见《仪器GOPOD操作规程》。

7.试剂 7.1试剂品牌美康生物 7.2包装规格200mL （R1:2×65mL+R2:1×70mL ） 7.3主要组成成分 试剂成分含量（最终反应体系） 试剂1 磷酸盐缓冲液 0.1mol/L 苯酚0.01×10-3mol/L 试剂2葡萄糖氧化酶 16000u/L 过氧化物酶 1000u/L 4-氨基安替比林0.02×10-3mol/L不同批次的试剂不推荐混合使用 7.4储存条件有效期试剂在2-8℃保存可稳定1年，试剂开瓶后于2-8℃可稳定1个月。

葡萄糖测定标准操作规程1.检验原理：（葡萄糖氧化酶法）葡萄糖氧化酶（GOD ）利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放出过氧化氢。

过氧化物酶（POD ）在色原性氧受体4-氨基安替比啉（4-AA ）和对羟基苯甲酸钠去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder 反应。

红色醌类化合物的生成量成正比。

D-葡萄糖+2O +O H 2−−→−GOD 葡萄糖酸+22O H222O H +4-AA+对羟基苯甲酸钠−−→−POD 红色醌类物质+4O H 2 2.试剂组成成分3.样本要求：新鲜无溶血血清或用草酸钾-氟化钠抗凝的血浆。

在22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法：仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6.检验结果的解释：6.1在给定的样本/试剂比例和条件测定时，本试剂线性范围可达25mmol/L。

样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V）的氯化钠溶液稀释样本，最大稀释倍数为10.6.2.单位换算：mg/dl=mmol/L×187.检验方法的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。

7.2若试剂浑浊或以水空白在500nm处吸光度大于0.200时不能使用。

8.试剂性能指标8.1试剂外观：R1：无色或淡红色透明液体，无悬浮物及沉淀；R2无色透明液体，无悬浮物及沉淀。

8.2装量：不低于标识值。

8.3空白吸光度：在500nm处，光径1cm时，空白吸光度A≤0.2008.4线性范围：试剂的线性区间为[2.2-25]mmol/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.9900；b)[2.2-4.7]mmol/L区间内，线性绝对偏差不超过±10U/L；（4.7-25）mmol/L区间内，线性相对偏差不超过±10%。

8.5准确度：使用参考物质测定时，当浓度≤4.16mmol/L，实测值与标识值偏差应不超过±0.833mmol/L，当浓度＞4.16mmol/L，实测值与标识值偏差应在±20%范围内。

生化实验室糖Glu葡萄糖氧化酶法作业指导书1、前言试验名称：葡萄糖测定，英文名称：Glu，方法：葡萄糖氧化酶法。

本文件适用于安阳鼎城糖尿病医院检验科生化实验室，目的是指导工作人员正确的在OLYMPUS－AU400全自动生化分析仪上测定血清、血浆样本中的葡萄糖浓度，以保证测定结果的准确可靠。

本试验用体外定量测定人血清或血浆样本中葡萄糖的浓度。

葡萄糖的准确测定对于诊断和治疗高血糖症和低血糖症是十分重要的，高血糖症可发生于糖尿病、静脉输入含葡萄糖液体、严重应激状态、脑血管意外，低血糖症可见于胰岛瘤、胰岛素用药，先天性碳水化合物代谢障碍和禁食。

通常在研究这些病症时，还将葡萄糖测定与各种耐量试验和剌激试验一同进行。

2、测定原理本试验采用改良的Trinder氏方法，其反应原理：葡萄糖+O2+H2O GOD葡萄糖酸+H2O2H2O2+AAP+HBA POD醌亚胺色素+H2O上式中AAP为4-氨基安替比林HBA为4-羟基苯甲酸GOD为葡萄糖氧化酶POD为辣根过氧化物酶在上述反应中，红色醌亚胺色素的生成量与样本中葡萄的浓度成正比，通过在520nm波长处测定吸光度的变化值，从而计算出样本中葡萄糖的浓度。

3、试剂试剂生产商：长海科华生物工程股份有限公司。

剂型：液体双试剂。

包装量：R1：4*30ml R2：4*15ml注册号：沪食药监械（准）字2010第2401171号。

生产许可证号：沪药管械生产许20030916号。

基本成份：试剂1：过氧化物酶375u/l4-羟基苯甲酸15mmol/l4-氨基安替比林0.75mmol/l磷酸盐缓冲液110mmol/l试剂2：磷酸盐缓冲液110mmol/l葡萄糖氧化酶6000u/l储存条件和有效期：试剂避光储存于2―8℃可稳定12个月。

启用后2―10℃可稳定30天，若试剂混浊，或空白在520nm下吸光度值高于0.4A时，则不能使用。

4、标准品：使用试剂盒附带标准品5、质控品：生产商：英国Randox公司。

目录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂与校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理在葡萄糖氧化酶的作用下，β-D-葡萄糖氧化生成过氧化氢和葡萄糖酸。

过氧化氢在过氧化物酶的存在下与苯酚、4-氨基安替比林氧化缩合成红色醌式染料。

此染料在500nm处有最大吸收峰，其吸光度值与葡萄糖含量成正比。

GODβ-D-葡萄糖 + H2O + O2 ----------- H2O2 + D-葡萄糖酸PODH2O2 + 4-氨基安替比林 + 苯酚 ---------- 醌亚胺（红色）+ H2O2．标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。

体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。

注意有无应用影响测试项目的药物。

此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。

应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

有些药物长期应用，可使患者糖代谢发生障碍，引起血糖增高，因而应当在使用这些药物期间定期监测血糖，避免引起高血糖。

常用药物中可致血糖增高的有以下几类。

糖皮质激素：糖皮质激素药物如强的松、氢化可的松、抗炎松等，临床应用广泛。

糖皮质激素可通过三条途径影响糖代谢：（1）增强糖元分解；（2）使糖异生途径活动；（3）减少外周组织对葡萄糖的作用，因而血糖升高。

如果大剂量或长期使用糖皮质激素治疗，应密切监测血糖，根据情况适当减少剂量或配合降糖药物应用。

甲状腺制剂：甲状腺激素（甲碘胺、甲状腺素、甲状腺球蛋白），可以促进葡萄糖的吸收，加速糖元分解及糖异生，使血糖增高。

因而应用甲状腺制剂时应严密观察，特别是糖尿病病人需用甲状腺制剂时应慎重给药。