葡萄糖氧化酶法

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葡萄糖氧化酶法在生活起居中大部分人可能也没有听闻过，实际上葡萄糖氧化酶法是一种检测病人是不是高血糖，是不是患糖尿病的一种查验方式，一般较为普遍应用与医院门诊，假如高血糖或是是糖尿病人用葡萄糖氧化酶法来检验結果是十分精确的，下边实际详细介绍葡萄糖氧化酶法。

葡萄糖氧化酶法精确测量血糖浓度的详解生产基本原理疫苗葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)运用氧和水将葡萄糖空气氧化为葡萄糖酸，并释放出来双氧水。

乳酸脱氢酶(peroxidase，POD)在色原性氧蛋白激酶存有时将双氧水溶解为水和氧，并使色原性氧蛋白激酶4-羟基安替比林和酚去氢缩合反应为鲜红色醌类化合物，即Trinder反映。

鲜红色醌类化合物的产生量与葡萄糖成分正比。

生产实验试剂疫苗1．0.1mol/L聚磷酸盐缓冲溶液(pH7.0)称量没有水磷酸氢二钠8.67g及没有水磷酸二氢钾5.3g溶解纯净水800ml中，用1mol/L 氢氧化钠溶液(或1mol/L盐酸)调pH至7.0，用纯净水定容至1L。

2．酶实验试剂称量乳酸脱氢酶1 200U，葡萄糖氧化酶1 200U，4-羟基安替比林10Mg，叠氮钠100mg，溶解聚磷酸盐缓冲溶液80Ml中，用1 mol/L NaOH调pH至7.0，用聚磷酸盐缓冲溶液定容至100ml，置4℃储存，可平稳3月。

3．酚水溶液称量重水蒸气蒸馏酚100mg溶解纯净水100ml 中，用深棕色瓶存储。

4．酶酚混和实验试剂酶实验试剂及酚水溶液相等混和，4℃能够储放1月。

5．12mmol/L苯甲酸水溶液融解苯甲酸1.4g于纯净水约800ml 中，升温助溶，制冷后加纯净水定容至l L。

6．100mmol/L葡萄糖标准存储液称量已干躁恒重的无水葡萄糖1.802g，溶解12mmol/L苯甲酸水溶液约70Ml中，以12mmol/L 苯甲酸水溶液定容至100ml。

临床上测定血糖浓度的原理
临床上测定血糖浓度的原理主要有以下几种方法：
1. 葡萄糖氧化-还原法：使用葡萄糖氧化酶（GOD）将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，同时还原辅酶（如辅酶NAD+），导致辅酶的吸收光谱发生变化。

通过测量吸光度变化来确定血液中的葡萄糖浓度。

2. 葡萄糖酸脱氢酶法：使用葡萄糖酸脱氢酶（GDH）将葡萄糖酸还原为葡萄糖，同时将辅酶还原为辅酶NADH。

然后通过测量辅酶NADH的吸收光谱来确定血液中的葡萄糖浓度。

3. 电化学法：将血液型的电极浸入葡萄糖溶液中，根据葡萄糖产生的氧化还原反应，测量电解质浓度来计算葡萄糖浓度。

4. 免疫测定法：利用特定抗体与葡萄糖结合，形成抗原抗体复合物。

然后通过测量复合物的光学、电化学或放射性信号来确定血液中的葡萄糖浓度。

这些方法各有优劣，临床根据需要选择合适的方法来测定血糖浓度。

葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。

过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。

红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。

【试剂】1 ． 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ，用蒸馏水定容至 1L 。

2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 ℃保存，可稳定3 个月。

3 ．酚溶液称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。

4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合， 4 ℃可以存放 1 个月。

5 ． 12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。

6 ． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。

2h 以后方可使用。

7 ． 5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。

【操作步骤】1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。

实验十 血糖的测定血液中的葡萄糖称血糖。

正常人血糖浓度较恒定，维持在3．9mmol ／L ～6．1mmol ／L 之间。

血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一，有着双重实际意义：其一，维持稳定的能源供给，满足机体在各种生理状态下对能量的需求。

其二，保证机体不因进食致血糖浓度过高，导致糖的丢失。

因此，血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。

血糖测定按其发展过程及反应原理的不同，大致分三类：氧化还原法 ，缩合法（主要有邻甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。

下边介绍两种方法供选择。

一、葡萄糖氧化酶法【目的】1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能进行血糖测定的操作。

2. 掌握血糖测定的临床意义。

【原理】葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ，GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。

后者在过氧化物酶 (peroxidase ，POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，即 Trinder 反应。

其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在505nm 波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。

反应式如下：2H 2O 2+4-氨基安替比林+酚红色醌类化合物POD2H 2O2H 2O 2O 2葡萄糖+葡萄糖酸+GOD+【器材】试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计 【试剂】1. 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.0）称取无水磷酸氢二钠8.67g 及无水磷酸二氢钾5.3g 溶于800ml 蒸馏水中，用1mol/L 氢氧化钠（或1mol/L 盐酸）调节pH 至7.0，然后用蒸馏水稀释至1L 。

2. 酶试剂称取过氧化物酶1200U ，葡萄糖氧化酶1200U ，4-氨基安替比林10mg ，叠氮钠100mg ，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml 中，用1mol/L NaOH 调pH 至7.0，加磷酸缓冲液至100ml 。

葡萄糖试剂盒（氧化酶法）标准操作程序1. 摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清样本中葡萄糖的含量。

2. 适用范围程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清样本中葡萄糖的含量。

3. 职责使用AU5811自动生化分析仪进行测定葡萄糖浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的葡萄糖试剂盒采用的是氧化酶法(GOD-POD)。

5. 原理葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下与水分子和氧分子反应生成葡萄糖酸和双氧水,最后双氧水在过氧化物酶的催化下与色原底物、4-氨基安替比林和苯酚反应生成红色化合物醌亚胺。

由于醌亚胺在波长500nm 处有吸收峰,所以在一定底物浓度范围内, 500nm 处吸光度的变化值与样本中葡萄糖的含量成正比。

O H O H O H O O H 22222224+−−−→−+-++−−−−→−++醌亚胺苯酚氨基安替比林葡萄糖酸葡萄糖过氧化物酶葡萄糖氧化酶6. 仪器AU5811自动生化分析仪7. 试剂7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2 试剂瓶内主要成分：R1：磷酸盐缓冲液、过氧化物酶、苯酚、防腐剂；R2：磷酸盐缓冲液、葡萄糖氧化酶、4-氨基安替比林、防腐剂；校准品：葡萄糖、防腐剂7.3 试剂稳定性：试剂于2℃-8℃避光保存，有效期为一年。

开瓶后存放在生化分析仪试剂仓中可稳定14天。

8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用科华公司的校准品对自动分析仪进行校准。

按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品：罗氏公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。

每日在测定前做一次质控加试剂后做一次质控。

该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。

葡萄糖氧化酶生产工艺研究在生命科学领域中，糖代谢是一个至关重要的过程。

而葡萄糖氧化酶作为一种酶类蛋白质，在糖代谢过程中的作用是将葡萄糖分解为二氧化碳和水，并释放出能量。

随着对葡萄糖氧化酶工艺的研究越来越深入，其在医药、生物、食品、环境等多个领域中的应用也变得越来越广泛。

一、葡萄糖氧化酶的生产工艺目前，葡萄糖氧化酶的主要生产工艺分为两种：一种是发酵法，另一种是生物反应器法。

在发酵法中，产生葡萄糖氧化酶的微生物主要为真菌，如青霉菌、曲霉菌和放线菌等。

而生物反应器法则是利用生物反应器进行生产的一种方法。

1. 发酵法发酵法生产葡萄糖氧化酶主要分为固态发酵法和液体发酵法两种。

固态发酵法主要是指将菌种和培养基混合后放入团状的基质中进行，通常采用大豆蛋白、小麦胚芽、玉米芯或麸皮等为基质。

液体发酵法则是指将培养基和微生物混合后进行液态发酵，通常采用淀粉、碳水化合物、蛋白质等为培养基。

此外，根据产生葡萄糖氧化酶的不同微生物，发酵法还可以分为青霉菌法、曲霉菌法、放线菌法等不同的类型。

2. 生物反应器法生物反应器法是指利用生物反应器进行生产。

由于生物反应器有良好的控制、操作方便等特点，因而目前越来越多的葡萄糖氧化酶也采用生物反应器法进行生产。

在生物反应器中，通常会将微生物和培养基投入反应器中进行培养，其中培养基中含有葡萄糖、氮源、磷酸等营养物质。

二、葡萄糖氧化酶生产工艺的优化为了提高葡萄糖氧化酶生产工艺的效率和产出量，工艺优化就显得尤为重要。

其中，影响葡萄糖氧化酶生成的因素包括生物反应器、微生物、培养基等多个方面。

1. 生物反应器生物反应器的反应时间、反应温度、pH值等参数对葡萄糖氧化酶的产量有很大影响。

现在的研究表明，通过优化反应器中的这些参数，能够明显提高葡萄糖氧化酶的产量。

例如，通过调整反应器内氧气浓度和液体搅拌速度，可以有效提高生产葡萄糖氧化酶的微生物的代谢水平。

2. 微生物微生物是生产葡萄糖氧化酶的最主要来源之一，在选择微生物时应根据生产的应用场景、目标产量等进行选择。

血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法）血糖是指血液中葡萄糖的含量。

葡萄糖是人体主要的能量来源，血糖的测定是检查人体内部能量代谢状态的重要项目之一。

这篇文章将介绍血糖定量测定的实验原理、方法以及实验注意事项。

一、实验原理血糖的定量测定方法主要是利用葡萄糖氧化酶将血液中的葡萄糖在催化反应下转化为过氧化氢和D-酮糖酸，利用过氧化氢的比色法来测定血糖的含量。

具体反应式为：(1)葡萄糖+O2+H2O→葡萄糖氧化酶 D-酮糖酸+H2O2(2)2H2O2+Fe2+→2H2O+Fe3++O2(3)Fe3++TSC(三硝基苯胺)→FeTSC3（红色化合物）其中，TSC（三硝基苯胺）为过氧化氢的比色试剂，用Fe2+作催化剂促进反应进行，所生成的红色化合物FeTSC3与过氧化氢的浓度呈线性关系。

二、实验材料1.血糖标准品：10mmol/L2.葡萄糖氧化酶3.三硝基苯胺（TSC）、醋酸钠、乙二胺四醋酸盐二水合物（EDTA•2H2O）、氢氧化钠（NaOH）4.0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.5）5.准确量杯、试管、离心管、吸光度计、恒温水浴器、移液管三、实验步骤1.制备血清样品：将血液放置静置后离心取血清，制成5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L的葡萄糖标准品。

2.实验组织：3个组别，每组3个试管。

A组：加1mL的10mmol/L葡萄糖标准品；B 组：加1mL的血清标本；C组：加入1mL的磷酸盐缓冲液作为对照组。

注意，每组要做三个平行实验。

3.反应体系准备：①将实验组织中的标准品、血清样本和磷酸盐缓冲液分别加入3毫升离心管中。

②分别加入1mL葡萄糖氧化酶。

③分别加入1mL EDTA全部气泡排除。

⑤每组混合后放置在37℃下反应20分钟。

⑥在上述反应过程中，加入2毫升0.1mol/L的NaOH溶液使溶液呈碱性，使催化反应更为稳定。

4.吸光测定：将反应充分混合后，吸取适量的样品，放到吸光度计槽，设定波长为505nm，用对照组值进行比较，计算出各组的吸光度，并根据标准曲线计算出各样本的葡萄糖含量。